Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор житерлтуры
1.1. Распространение и специфическая пройилактика коли-бактериоза и болезни Ауески поросят 8
1.2. Современное состояние вопроса одновременной иммунизации человека и животных против нескольких инйекционных болезней 12
1.3. Иммуногенез у животных в поствакциопальном периоде 20
1.4. Анализ данных литературы 27
2. Собственные исследования
2.1. Материал и методы исследований 29
2.2. Иммуногеиез при одновременной вакцинации поросят против колибактери за и болезни Ауески 40
2.2.1.Реактогенность вакцин против колибактериоза и болезни Ауески поросят при одновременном их применении 40
2.2.2.Гематологические изменения при одновременной и раздельной вакцинации поросят против кол1бакте риоза и болезни Ауески 42
2.2.3.Фагоцитарная активность лейкоцитов у поросят при одновременной и раздельной вакцинации против колибаютериоза и болезни Ауески 51
2.2.4. Общий белок и белковые фракции сыворотки крови у поросят при одновременном и раздельном введении вакцин против колибактериоза и болезни Ауески ... 55
2.2.5.Титры специфических антител у поросят, вакцинированных одновременно и раздельно против колибактериоза и болезни Ауески 60
2.2.6.Превентивные свойства сыворотки крови по отношению к возбудителю колибактериоза поросят, иммуни зированных одновременно против колибактериоза и болезни Ауески
2.2.7. Иммуноморфологические и электронномикроскопиче ские изменения в органах иммунной системы поросят при одновременной и раздельной вакцинации против колибактериоза и болезни Ауесіш 71
2.2.8. Испытание напряженности иммунитета к болезни Ауесіш при одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Луески путем заражения вирусом болезни Ауески 100
2.2.9. Влияние разных доз вакцины против колибактериоза на напряженность иммунитета к колибактериозу при одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауесіш 103
2.2.10.Экономическая эсТзозективность одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни
3. Заключение 116
4. Выводы 130
5. Практические шщдшшб. 132
6. Список литературы
- Современное состояние вопроса одновременной иммунизации человека и животных против нескольких инйекционных болезней
- Иммуногеиез при одновременной вакцинации поросят против колибактери за и болезни Ауески
- Общий белок и белковые фракции сыворотки крови у поросят при одновременном и раздельном введении вакцин против колибактериоза и болезни Ауески
- Испытание напряженности иммунитета к болезни Ауесіш при одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Луески путем заражения вирусом болезни Ауески
Современное состояние вопроса одновременной иммунизации человека и животных против нескольких инйекционных болезней
Увеличение титров антител, нейтрализующих вирус болезни Ауески, наблвдали у свиней П.И.Притулин, А.А.Конопатиш, Г.Д.Су-ер (I97I)- при одновременной вакцинации против болезни Ауески, чумы и рожи, М.А.Антюков (1974), М.А.Антюков, У.Е.Стародубцева (1974) - при одновременной вакцинации против болезни Ауески,саль-монеллеза и пастреллеза, А.В.Зубехин (1972) - при одновременной вакцинации против рожи, лептоспироза и болезни Ауески, Д.Д.Бутьянов, В.В.Максимович (1983) - при одновременной вакцинации против болезни Ауески и сальмонеляеза.
Антитела, содержащиеся в сыворотке крови вакцинированных животных, обеспечивают ее превентивные свойства.
Рядом авторов установлено, что сыворотка крови свиней при одновременной вакцинации их против нескольких инфекционных бо -лезней обладает такими же превентивными свойствами, как и у жи -вотных, вакцинированных моновакцинами (В.П.Рыженко, 1967; В.Л. Колосовский, 1968; А.В.Бояхчян, К.С.Гогорян, 1970; Д.Д.Бутьянов, 1970; К.С.Гогорян, 1970; В.Ф.Петров, Н.С.Безбородкин, 1970; В.Ф. Петров, В.В.Максимович, 1972 и др.).
Большое значение в формировании иммунитета имеет фагоцитоз. Фагоциты не только уничтожают бактерии в организме, но и участвуют в образовании гуморального иммунитета. Д.Д.Бутьянов (1958, I960), Л.С.Герман (1958), Л.В.Орвидас (I96I) считают, что фагоцитарную активность лейкоцитов можно использовать как тест для изучения противорожистых вакцин. Ряд исследователей установил усиление фагоцитарной активности лейкоцитов крови как после введения моновакцин, так и при одновременных прививках (В.Ф.Петров, 1954; А.А.Шпаковский, 1957, I960; Д.Д.Бутьянов, 1958, 1967, 1969; В.П.Зеленский, 1965; В.Ф. Петров, Н.С.Безбородкин, 1966; В.Ф.Петров, А.А.Солонеко, 1966; А.С.Михальченков, 1967; П.И.Притулин, А.А.Конопаткин, 1970; В.В. Максимович, I97I, 1973; А.А.Конопаткин, I97I; В.Ф.Петров, М.А. Антюков, I97I; Н.Д.Биркан, В.Ф.Петров, 1973; В.Д.Чернигов, 1973 и др.).
В настоящее время большое внимание уделяется изучению мор -фологии иммунного ответа, развивающегося после введения в орга -низм животного различных вакцин. Благодаря этому стало возможным объективно оценивать иммуногенные и реактогенные свойства применяемых вакцин.
В ветеринарной литературе имеются работы, посвященные изучению иммуноморфологических реакций в органах иммунной системы свиней при раздельной и одновременной вакцинации против колибактери-оза, сальмонеллеза, пастереллеза, лептоспироза, рожи, чумы, бо -лезни Ауески и других инфекционных болезней.
М.Т.Коняев (I96I), применяя живые вакцины против рожи свиней, находил в селезенке и лимфатических узлах гиперплазию лимфоидных фолликулов, микро- и макрофагальную реакцию.
Н.И.Архипов и Л.М.Пичугин (1967) у свиней, вакцинированных против чумы, обнаружили в регионарных лимфатических узлах увеличение в размере лимфоидных фолликулов и расширение их зародыше -вых центров. В мякотных шнурах отмечалась плазмоцитарная реакция. В селезенке были сходные изменения. В костном мозге увеличивалось количество молодых клеток лимфоидного, плазмоцитарного и миелоид-ного рядов. Иммуноморфологические изменения при вакцинации АСВ вы 24 являлись через 2 суток, максимума достигали к 8 суткам.
А.И.Кривутенко (1969) при вакцинации поросят против сальмо-неллеза отмечал в лимфоузлах увеличение количества плазмобластов через 1-2 суток, незрелых плазмоцитов через 5-6 суток и зрелых плазмоцитов через 6-7 суток после вакцинации. Плазмоцитарная ре -акция сильнее выражена в регионарных лимфоузлах и развивалась параллельно с увеличением титра агглютининов и количества в крови гамма-глобулинов.
Л.П.Вель (1970) выявил у свиней, вакцинированных против рожи, в регионарных лимфоузлах и селезенке на 2-4 дни гиперплазию лимфоидных фолликулов, пролиферацию бластов и повышение в них содержания Р1Ж; на 8 день - накопление большого количества незрелых плазматических клеток. При повторном введении вакцины иммуномор-фологические изменения были выражены значительно сильнее, при этом среди плазматических клеток преобладали зрелые плазмоциты.
В.В.Вантеев (1980), В.С.Прудников (1980) изучали иммуномор -фогенез у поросят, привитых вакциной против сальмонеллеза. По их данным, в регионарных лимфоузлах и селезенке развивается микро-и макрофагальная реакция, увеличивается количество В-лимфоцитов, плазматических клеток, вторичных лимфоидных фолликулов, антитело-синтезирующйх плазмоцитов.
Л.М.Ерохина, Н.И.Архипов, В.И.Бурцев, Н.А.Изотова и А.Т.Куш-нИр (1980) у свиней, вакцинированных аэрозольно против болезни Ауески, находили в бронхиальных и средостенных лимфоузлах ярко выраженную плазмоцитарную реакцию. Максимального развития она достигала на 6-Ю день после вакцинации.
Иммуногеиез при одновременной вакцинации поросят против колибактери за и болезни Ауески
Иммуноморфологические и электронномикроскопические изменения в органах иммунной системы поросят при одновременной и раздельной вакцинации против колибак-териоза и болезни Ауески
Иммуноморфологические изменения в подчелюстных лимфатических узлах, регионарных введению вакцины против колибактериоза, при одновременной вакцинации против коли-бактериоза и болезни Ауески и при введении моновакцины против колибактериоза
В корковом слое подчелюстных лимфатических уз -лов на 10 день после первой одновременной вакцинации против колибактериоза и болезни Ауески и введении одной вакцины против колибактериоза увеличивалось количество гиперплазированных вторичных лимфоидных фолликулов, причем достоверных различий между обеими подопытными группами не отмечалось. Вторичные лимфоидные фюлли -кулы имели выраженные реактивные центры с высоким содержанием бластов, макрофагов и клеток в состоянии митозов. Ядрышки и цитоплазма бластов содержали большое количество РЖ. По периферии фолликулов в виде ободка располагались В-лимфоциты, в этой зоне в клетках выявлялась высокая активность щелочной фосфатазы.
На 10 и 20 день после второго введения вакцин в лимфоузлах увеличивалось число вторичных лимфоидных фолликулов (рис. 8). К концу исследований соотношение первичных и вторичных лимфоидных фолликулов равнялось 3:7 как у поросят, одновременно иммунизированными двумя вакцинами, так и у животных, которым вводилась моновакцина против колибактериоза. Резче проявлялась гиперплазия фолликулов, в них повышалось содержание бластов, а также число митозов. Паракортикальняя зона лимфатических узлов неширокая, без резких границ переходит в зону мозговых тяжей. Клеточная реакция незначительная, блаоты располагались преимущественно на границе с В-зависимыми зонами. В поствакцинальный период количество бластов тимусного происхождения снижалось. Большее уменьшение их происходило у поросят, одновременно иммунизированных против колибактериоза и болезни Ауески. Так, количество их на 10 день после второй вакцинации снижалось до 118,6+6,21, при введении моновакцины против колибактериоза - до 146,0+16,24, в то время как у контрольных поросят равнялось 162,0+13,9 (табл.13, 14).
Количество митозов в обеих подопытных группах поросят после первой и второй иммунизации было выше, чем у животных контроль -ной группы. В клетках паракортикальной зоны лимфатических узлов выявлялась высокая активность кислой фосфатазы в течение всего опыта.
Мозговые тяжи регионарных лимфатических узлов хорошо выступали, клеточные элементы располагались равномерно, встречались небольшие очаги опустошения лимфоидной ткани. Отмечалось утолщение стенок сосудов, их разрыхление, отечность перивас-кулярной ткани, набухание и слущивание отдельных эндотелиальных клеток. Эти изменения были выражены в одинаковой степени после введения моновакцины против колибактериоза и двух вакцин одновременно .
После одновременного введения вакцин против колибактериоза и болезни Ауески в мозговых тяжах лимфатических узлов, регионарных введению колибактериозного антигена, резко нарастало количество бластов с 92,6+6,38 до 213,0+15,08 на 10 день после первой шлглунизации и до 237,3+17,60 при втором введении антигенов (Р 0,001). На двадцатый день после второго введения вакцин количество бластов снижалось до 149,0+15,66. Параллельно происходило и нарастание числа клеток в состоянии митозов как после первой,так и второй вакцинации. К 20 дню после второй иммунизации количество митозов снизилось до 23,0+0,58, но этот показатель был выше, чем у контрольных животных (17,3+1,36). При иммунизации поросят моновакциной против колибактериоза наблюдали такую же закономерность в развитии бластной реакции и митозов.
В мозговых тяжах развивалась резко выраженная плазмоцитарная реакция (рис. 9, 10). Незрелые и зрелые плазматические клетки располагались преимущественно вокруг сосудов и по ходу синусов. На 10 день после первой одновременной иммунизации против обеих болезней преобладали незрелые клетки - плазмобласты и незрелые плазмоциты, а в дальнейшем нарастание клеточных элементов шло за счет незрелых и зрелых плазматических клеток. На 10 день после первой иммунизации общее количество плазмоцитов увеличивалось с 124,3+14,60 до 212,9+22,33, а к концу опыта число их достигало 453,3+12,56 (Р 0,001). Уровень плазмоцитарной реакции при одновременном введении вакцин против колибактериоза и болезни Ауески существенно не отличался от такового при иммунизации одной вакциной против колибактериоза (табл. 13,14).
Среди плазмоцитов выявлялись клетки, синтезирующие антитела к колибактериозному антигену (табл. 15, рис. II). Количество их возрастало на протяжении всего опыта и на 20 день после второго одновременного введения вакцин против колибактериоза и болезни Ауески равнялось 76,0+4,3, что было несколько ниже, чем при иммунизации одной вакциной против колибактериоза (91,7+2,0).
Общий белок и белковые фракции сыворотки крови у поросят при одновременном и раздельном введении вакцин против колибактериоза и болезни Ауески
Болезнь продолжалась в течение 7-8 дней, после чего животные выздоровели. При вскрытии трупа поросенка установлены патологоанатомические изменения, свойственные болезни Ауески. Диагноз подтвержден биопробой на кролике.
В третьем опыте часть поросят, одновременно вакцинированных против колибактериоза и болезни Ауески, в 2,5-месячном возрасте была вакцинирована против чумы и рожи. В 160-дневном возрасте 4 подопытных и 2 контрольных поросенка были заражены вирусом болезни Ауески. Установлено, что все поросята, вакцинированные одновременно против указанных инфекций, болезнью Ауески не заболели (табл. 26). У них сохранялся аппетит, общее состояние оставалось в норме. Наблюдали за поросятами в течение 10 дней после заражения (срок наблюдения).
Контрольные поросята заболели болезнью Ауески с характерными клиническими признаками (шаткая походка, приступы судорог, искривление шеи и др.), температура тела доходила до 41,5. Заболевание продолжалось 7 дней, после чего поросята выздоровели.
Результаты испытания иммунитета к болезни Ауески у поросят при одновременной вакцинации против колибактериоза и болезни Ауески через 4 месяца после второй вакцинации Вакцинированы : Количество: : поросят : Результаты заражения заболело не заболело Одновременно против колибактериоза и болезни АуескиКонтроль 4 2 0 2 4 0 Влияние разных доз вакцины против колибактериоза на напряженность иммунитета к колибактериозу при одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески
Влияние разных доз вакцины против колибактериоза на напряженность иммунитета к этой инфекции при одновременной и раздельной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески изучали на 665 поросятах в трех опытах: в первом опыте на 15 5оросятах I, П и 1У групп, во втором опыте на 600 поросятах всех четырех групп и в третьем опыте на 50 поросятах 1,ЇЇ,Ш,1У и У1 групп.
В первом опыте поросятам вакцину против колибактериоза вводили в дозах согласно наставлению - 1,5 см при первой и 2 см при второй вакцинации. Исследования титров антител и фагоцитарной активности лейкоцитов по отношению к возбудителю колибактериоза показали недостаточно интенсивную, на наш взгляд, иммунную перестройку организма поросят в поствакцинальный период к коли 104 бактериозному антигену (табл. 27,28). Титры антител к возбудителю колибактериоза при одновременной вакцинации поросят против ко-либактериоза и болезни Ауески через 7 дней после первого введения вакцин составляли 1,0+0,4 logg (исходное 0,6+0,2;log2 ), через 14 дней - 1,4+0,2, через 21 день - 2,0+0,6 logg . Через 7 дней после второй вакцинации они равнялись 4,4+0,6 logg, через 14 дней - 4,8+0,6 и через 21 день - 5,4+0,6 log2 .
При введении одной вакцины против колибактериоза титры антител были аналогичными (табл. 27).
Из таблицы 28 видно, что фагоцитарный индекс через 7 дней после одновременной вакцинации поросят составлял 1,99+0,27 (ис -ходное 0,86+0,15), через 14 дней - 2,54+0,44. Через 7 дней после второй вакцинации он равнялся 3,73+0,38, через 14 дней - 5,0+ +0,19 и через 21 день - 4,94+0,24. После введения одной вакцины против колибактериоза фагоцитарный индекс увеличивался приблизительно в таких же размерах.
В последующих опытах нами проведены исследования по определению оптимальных доз вакцины против колибактериоза при ее раздельном и одновременном применении с вирусвакциной против болезни Ауески. Результаты опытов показали, что при увеличении доз вакцины против колибактериоза как при ее раздельном, так и при одновременном применении с вирусвакциной против болезни Ауески, им -мунная перестройка организма поросят протекала гораздо интенсивнее. Так, после введения одной вакцины против колибактериоза (опыт 2) в дозах 1,5 см трехкратно (I группа), а также в дозах 2 и 4 см двукратно (П группа) и в дозах 2,4 и 4 см трехкратно с интервалом 10 дней (Ш группа) наибольший подъем титров специфических антител отмечался у поросят П и Ш групп, которым вводили вакцину в увеличенных дозах (табл. 29).
Испытание напряженности иммунитета к болезни Ауесіш при одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Луески путем заражения вирусом болезни Ауески
Опыты показали, что в процессе иммуногенеза при одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески в органах иммунной системы происходит сложная структурная перестройка, в основе которой лежат изменения тканевого метаболизма, выражающиеся в цитохимических изменениях.
Одним из наиболее объективных тестов по определению наличия поствакцинального иммунитета является экспериментальное заражение иммунизированных животных соответствующими возбудителями болезни. В наших опытах экспериментальным заражением поросят вирусом болезни Ауески через 21 день после второй вакцинации удалось установить наличие прочного иммунитета к этой инфекции как у животных, привитых одновременно против колибактериоза и болезни Ауески, так и у поросят, привитых моновакциной против болезни Ауески. Часть поросят, вакцинированных одновременно против ука -занных инфекций, была подвергнута экспериментальному заражению в 160-дневном возрасте, через 4 мес. после второй вакцинации. При этом у них было установлено наличие прочного иммунитета к болезни Ауески. Контрольные поросята заболели болезнью Ауески с характерными клиническими признаками.
Таким образом, анализ данных изучения иммуногенеза при одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески, результатов определения превентивных свойств сыворотки крови по отношению к возбудителю колибактериоза и экспериментального заражения вирусом болезни Ауески дает основание сделать вывод, что при двукратной с интервалом 20 дней одновременной вакцинации против указанных болезней у животных формируется иммунитет против обеих инфекций такой же напряженности, как и после введения соответствующих моновакцин.
Анализ результатов первого опыта по одновременной вакцина ции поросят против колибактериоза и болезни Ауески показал недостаточно эффективную, на наш взгляд, иммунную перестройку организма поросят на колибактериозный антиген. Исходя из этого, нами были проведены исследования по изучению возможности создания более прочного иммунитета к колибактериозу у поросят путем применения увеличенных доз вакцины против колибактериоза.
Исследования показали, что при увеличении дозы вакцины против колибактериоза как при ее раздельном, так и при одновременном применении с вирусвакциной против болезни Ауески, иммунная перестройка организма поросят протекает гораздо активнее. У таких поросят отмечалось более интенсивное накопление в сыворотке крови специфических антител к колибактериозному антигену, более высо -кая фагоцитарная активность лейкоцитов и превентивная активность сыворотки крови по сравнению с поросятами, которым вакцина вводилась в меньших дозах.
Нами установлено, что введение вакцины против колибактериоза в дозах 2 см при первой и 3 см при второй вакцинации, а также 2 см при первой и 4 см при второй вакцинации обеспечивало более интенсивную иммунную перестройку организма поросят по сравнению с введением вакцины в дозах 1,5 см при первой и 2 см при второй вакцинации, а также после введения ее в дозах 2 см при первой и 2 см при второй вакцинации. Третье введение вакцины против колибактериоза не вызывало усиления иммунного ответа у поросят .
Исходя из того, что введение вакцины против колибактериоза в дозах 2 и 3 см , а также 2 и 4 см обеспечивало одинаковый иммунный ответ у поросят, вакцинированных одновременно против колибактериоза и болезни Ауески и только против колибактериоза, указанную вакцину можно рекомендовать для практического применения в дозах 2 см при первой и 3 см при второй вакцинации.
Метод одновременной вакцинации поросят против колибактерио-за и болезни Ауески испытан наш в учхозе "Подберезье" на 1500 поросятах и в совхозе-комбинате "Лучеса" Витебского района на 1200 поросятах. Осложнений и заболеваний колибактериозом и болезнью Ауески у вакцинированных поросят не наблюдалось.
Экономический эффект одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески, по нашим расчетам, составляет 26793 руб. на 1000 поросят, а экономическая эффективность - 10 руб. 55 коп. на рубль затрат.
Результаты исследований по одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески рассмотрены и одобрены секцией животноводства и ветеринарии МСХ БССР в феврале 1985 г. Метод одновременной вакцинации поросят рекомендован для произ -водственного испытания. Предложенный метод одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески одобрен Управлением сельского хозяйства Витебского облисполкома и внедрен в двух хозяйствах области. На основании материалов исследований Витебским центром научно-технической информации и пропаганды в 1985 г. издан информационный листок "Метод одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески",
По результатам нашей работы Витебским ветеринарным институтом принято к внедрению два рационализаторских предложения: "Метод одновременной вакцинации поросят против колибактериоза и болезни Ауески" и "Получение эритроцитарного коли-диагностикума с помощью амидола".
