Введение к работе
Актуальность темпі Анализ эпизоотической ситуации проведенный в последние годы как в нашей стране, так и за рубежом, свидетельствует о широком распространений листериоза; сельскохозяйственных животных в различных регионах (Бакулов И. А., 1967: Селиванов А. В*. Котылев 0. А». 1983? Burden Pat.. 1990: Ralovich В.. 1989:. TerplanG. .1939: West6 A.. FteU'rz M..1992: Beumer R.R.. Giffell M.C, eL all, 1992).
ущерб причиняемый этой инфекцией как экономике нашей страны, так. и других стран очень значителен (Казаков А. В.. 1939: Бакулов И.А.. 1983: Dominguer. Lucus F.1985: Bteumer R.R.,1992: Fuch R.C.. Strvas S.,1S91: Jonson.J. Dovle H.1938: Michalskl M., Rola J.G.,1994: AlbrechL,M.iS9l: Bemezet P.A. Dela Osa.1331).
. Одной из основных причин широкого распространения листериоза является способность возбудителя длительное время сохраняться, а в ряде случаев и размножаться в окружающей среде СKava Murezzun .Schmidt Udo,iS3l: Lver Т.. Varna P.. 1934; Славчеа Георги. Милашки СтеФан.ІЗЗД: Fianders К., Глг.єііу С. ,1994: KhaLtab АА. Hachraond М. A.. Letodv Ahl.,1993: Burning V., Grawforrt.1936). Кроме того, больше количество серологических типов листерйй затрудняет, диагностику листериоза. (Mclauchlln's J.. Shah S. 1992: Garcia D.> DonlnHuez L..1990: Rocourt Joceivne, Seellger Heinz.1935).
Следует отметить, что суиестаупциз бактериологические, биохимические, серологические СРСК и РА)-метод, и конъгкти-
вальная проба не полностью позволяют своевременно и точно диагностировать листериоз. В последний голы как отечественные, так и ззрубежные исследователи для диагностики инфекционных болезней и типизации выделенных возбудителей- начали использовать современные штодыСИФА. РИА. гибридизация нуклеиновых кислот и полимеразная цепная реашия). В отношении лис-териоза имеются только отпельные сообщения по использованию имунноФерментного анализа.СМсіагеп J. Samuel D. . l939:Cantoni С. d'Aubert S.,1994; ArLachs.V.. Van . Kuvhn С Ash.M.. 1983: Соті G. Cantonl С,1990: Noah Charles W.. Ramos Nora. C. 1331: Russell E.1989: Bemer N.. Brinkman Е..193Э) и подимеразной цепной реакции С ПНР) (Border P. .Hovonl J.. 1990: Battcarl А.. Bsal Noda, 1991: Jaton К.. Sahll R., 1992: Holrolrom Kim, Rossen . Lone. 1992: Ермолаева С, A... Зигангирова H.A. и ДР.1994).
Для совершенствования диагностики и наиболее полной расшифровки патогенеза листериоза важны исследования биохимической характеристики структурных компонентов клеток различных серологических типов лис^ерий. Кроме того, для оптимизации условий культивирования снижения себестоимости производимых диагностических и профі ;актических средств, применяющихся при листериозе существе! чое значение имеет усовершенствование питательных сред для получения биомассы в достаточном количестве.
Цель: Усовершенствовать диагностику и идентификацию возбудителя листериоза на основе биохимического анализа клеток листеоий. Для выполнения этой цели были поставлены следушие задачи,
I) оптимизировать питательную среду и режим культизиро-
вания листерий..
-
фракционировать клеточные стенки и цитоплазматичес-кии Фракции листерий различный штаммов и определить их поли--пептидный состав,
-
изучить биохимическую характеристику и гиперхромный эффект ДНК листерий.
4) получить антиген из листерий длл иммуноФйрмєнтного
анализа,
5) изучить выживаемость листерий в мясе.
Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований БНИВИ по заданию 48.01-Поддерхать и. изучить молеку-лярно-гене~чческие характеристики музейных, производственных, вакцинных и эпизоотических штаммов возбудителей инфекционных болезней ЖИВОТНЫХ. С N. ГОС. регистрации 01970002407,инв. N 02970001632)
Научная новизна: механической дезинтеграцией клеток с последующим дифференциальным центрифугированием Фракционированы клеточные стенки и цитоплазматические Фракции разным серог-рупп листерий и изучен их полипептидный состав методом электрофореза в полиакриламидном геле. Установлены определенные отличия в полипептидном составе клеточных стенок и цитоплаз-матических фракций в зависимости от вирулентных и антигенных свойств листєрмсі. Выделена ДНК различных штаммов листерий и изучен ее гиперхромный эффект. Усовершенствована питательная среда для культивирования листерий и разгаботан способ получения антигена для иммуноФерментного анализа, которые признана рационализаторскими предложениями ? и 162-9? ).Показано, что листерий длительное время сохраняются в мясе ,
ЧТО НеОбХОДИМО УЧИТЫВатЬ ПРИ Проведении ПКГОІіЗОЛИСТЄПИ' -ІККХ
мероприятий.Установлено.что ДНК-Д1К гибридизация обеспечивает ускоренное выявление листерий в мясе не зависимо от присутствия в нем посторонней микрофлоры.
Теоретическая и практическая ценность работы: Полученные данные по полипептидному составу, пшерхромному эйСькту ДНК и антигенным свойствам клеточных стенок. иитоплазматичгК-ких Фракций и экстрактов листерий расширяет существующие представления по их биологии. Результаты исследований могут использоваться для серологической дифференциации листерий. Усовершенствованная питательная среда может применяться при наработке биомассы листерий С рац.пред.Ы 162-9?).Антиген, получаемый по разработанному способу Срац.прад.м 161-97),может быть использован для иммуноФерментного анализа.
Основные положения, выносише на защиту:
- Оптимизация питательной среды для культивирования лис
терий.
- Сравнительная биохимическая характеристика клеточных
стенок, цитоплазматическин Фр :шй и ДНК различных штаммов
возбудителя листериоза.
Фракционирование антиге а из листерий и оценка его эффективности для иммуіюоерментного анализа при листериозе.
Изучение выживаемости листерий в мясе при различных условиях хранения.
Апробация работы: Материалы диссертации изложены на 2
НауЧНО-ПРОИЗВОДСТВеННЫН КОНфереНЦИЯХ СКГАБМ 1933.19:47,
199SP.5. годовых отчетах О НИР С1995, 193S. 1997 г. г.) и н:
расширенном- заседании сотрудников кафедр микробиологии, вирусологии, биохимии, ветсанэкспертизы. эпизоотологии, ОВД Казанской государственной академии ветеринарной медицины и лаборатории биохимии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.
структура и обгем диссертации. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования (материалы и методы, результаты исследований), обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 4 таблицами.ю рисунками. Указатель литературы включает 186 источника, из них 132 на иностранных языках.
Похожие диссертации на Биохимические характеристики различных штаммов листерий
