Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 15
1.1.. Эпизоотологическая ситуация по микозам в пчеловодстве в историческом развитии и на современном этапе 15
1.2. Характеристика возбудителей микозов медоносных пчел 21
1.3.Действие физико-химических факторов на возбудителей ' заболеваний пчел микозной этиологии 28
1.4. Роль клеща Варроа, восковой моли и других беспозвоночных паразитов пчелиной семьи в распространении инфекционных болезней пчел 39
1.5.Биологически активные добавки и стимуляторы развития пчелиных семей в комплексе мер борьбы с заболеваниями пчел 41
1.6.Экономический ущерб в пчеловодстве от заболеваний пчел и расплода микозной этиологии 42
Собственные исследования 47
2. Материалы и методы исследований 47
3. Результаты собственных исследований 66
3.1. Эпизоотологическая ситуация по микозам пчел на пасеках регионов Приволжского федерального округа 66
3.2.1. Культурально - морфологические свойства гриба
Aspergillus niger, выделенного с неблагополучных пасек 70
3.2.2. Патогенность для пчел штаммов аспергилл, выделенных из кормов 72
3.2.3. Устойчивость грибов рода Aspergillus и Ascosphaera apis к текучему пару 74
3.2.4. Адгезия конидий Aspergillus niger в кишечнике и на поверхности личинок пчел 75
3.3.1. ДНК из культур грибов рода Aspergillus и патологического материала 76
3.3.2. Выбор и компьютерный дизайн праймеров, специфичных ' определенным участкам геномов возбудителей аспергиллеза 78
3.4.1 Фунгицидная активность электроактивированных растворов в отношении возбудителей аспергиллеза, аскосфероза, меланоза и кандидамикоза пчел 81
3.4.2. Чувствительность производственных штаммов грибов Aspergillus niger и Ascosphaera apis к противогрибковым препаратам 89
3.5.1. Терапевтическая эффективность препарата йодохлорин при аспергиллезе пчел 93
3.6.1.Влияние препарата йодохлорин на продолжительность жизни пчел 98
3.6.2. Влияние йодохлорина на основные биохимические показатели пчел 101
3.6.3. Стимулирующее действие йодохлорина на силу, летную активность, медовую продуктивность семей пчел и репродуктивную способность маток 108
3.6.4. Остаточные количества элементов распада йодохлорина в продуктах пчеловодства, полученных от опытных семей пчел... 116
3.7.1.Фунгистатические и фунгицидные свойства четвертично-аммониевых соединений в отношении возбудителей аспергиллеза и аскосфероза пчел 119
3.7.2. Изыскание новых дезинфицирующих средств на основе четвертично-аммониевых соединений, их физико-химические свойства 122
3.7.3. Токсичность препаратов глуфар и натамин для теплокровных животных 124
3.7.4. Влияния различных видов загрязнений, встречающихся на объектах пчеловодства, на обеззараживающий эффект 129
3.7.5. Результаты лабораторных опытов изучения дезинфицирующих свойств препаратов йодохлорин (0,6 - 1,8 %), глуфар
инатамин 134
3.7.6. Продолжительность жизни пчел в садках, после их обеззараживания йодохлорином, глуфаром и натамином 142
3.7.7. Остаточные количества дезинфектантов в меде 145
3.7.8. Производственные испытания дезинфицирующих препаратов: йодохлорин, натамин и глуфар 145
3.8.1. Способ и режимы дезинфекции ульев и соторамок газом бромистым метилом под полиамидной пленкой ГЖ-4 153
3.8.2. Остаточные количества бромидов в сотах и меде после обработки ульев и соторамок газом бромистым метилом под полиамидной пленкой ПК-4 157
3.9.1 Роль уховерток и муравьев в распространении грибковых болезней пчел 160
3.9.2. Заболевание пчел аспергиллезом на фоне варроозной инвазии... 162
3.10.1.Влияние препарата ВЭСП и ферментативной молочной сыворотки (СГОЛ-1-40) на резистентность и гигиеническую активность пчел 164
3.11.1.Интегрированная система профилактики и борьбы с основными микозами пчел 170
3.11.2. Экономическая эффективность интегрированной системы профилактики и борьбы с основными микозами пчел 178
Обсуждение результатов исследований 182
Выводы 203
Практические предложения 206
Список литературы
- Эпизоотологическая ситуация по микозам в пчеловодстве в историческом развитии и на современном этапе
- Роль клеща Варроа, восковой моли и других беспозвоночных паразитов пчелиной семьи в распространении инфекционных болезней пчел
- Эпизоотологическая ситуация по микозам пчел на пасеках регионов Приволжского федерального округа
- Фунгицидная активность электроактивированных растворов в отношении возбудителей аспергиллеза, аскосфероза, меланоза и кандидамикоза пчел
Введение к работе
Пчеловодство играет чрезвычайно важную роль в охране природы и среды обитания человека. Эта роль определяется тем, что пчелы производят ценнейший продукт питания - мед и незаменимое для многих отраслей промышленности сырье - воск натуральный, а также биологически активные продукты: пыльцу, прополис, пчелиный яд, маточное молочко, являющиеся сырьем для производства лекарственных средств. Медоносные пчелы опыляют энтомофильные сельскохозяйственные культуры, повышают их урожайность, улучшают качество плодов и семян, а так же опыляют дикорастущие травянистые, кустарниковые и древесные энтомофильные растения, способствуя устойчивому сохранению естественно сформировавшихся биоценозов.
Со времен Петра I, который даже освободил пчеловодов от уплаты налогов, Россия всегда считалась медовой державой. Да и сейчас наша страна входит в первую пятерку стран с развитым пчеловодством и занимает второе место в мире по количеству пчелиных семей. (Н.И. Кривцов и сотр., 2001).
Однако, по мнению авторов, в последние годы в связи с вхождением сельскохозяйственного производства в рыночную экономику в отрасли наметились определенные негативные тенденции. Так за 1993-1998 гг. численность пчелиных семей уменьшилась более чем на 25 % (с 4,7 до 3,5 млн.) и этот процесс продолжается. По данным Госкомстата (В. А. Род нова, 2002, 2004.) если численность пчелиных семей в Российской Федерации по состоянию на 1.01.2002 г. составила 3441,4 тыс., что на 56,1 тыс. меньше, чем в 2001 году, то на 01.01 2004 данный показатель составлял уже 3298,8 тыс.
В личных хозяйствах населения страны (по состоянию на 1.01.2002 г.) содержалось 2914,9 тыс. (84,7%) пчелиных семей, число которых сократилось по сравнению с 2001 годом на 27,1 тыс., а на 1.01.2004 мы имеем в приватном секторе уже 2901 тыс. семей. Производство продовольственного меда до недавнего времени, на протяжении последних десяти лет поддерживалось
7 на уровне около 50 тыс.т. в год, но в последние два года наблюдается существенное снижение данного показателя.
Так, если в 2001 году в целом по Российской Федерации произведено 52659 т. товарного меда, в то время как в 2000 году - 53922 т. (В.А. Роднова, 2002,2004), то уже в 2002 году получено только 49395 т. товарного меда, а в 2003-48048,2 т.
При обращении к международной статистике (Apiservices, 2002) численность пчелиных семей остается наиболее выигрышным показателем для России, уступающей по нему лишь Китаю (6300 тыс.). Остальные показатели состояния пчеловодства на фоне мирового уровня выглядят куда скромнее (А.Г. Николенко, 2003).
В первую очередь, по мнению автора, следует отметить значительное снижение производства товарного меда в России: как абсолютном количестве, так и его доли в мировом производстве. По данному показателю Россия занимает только пятое место в мире, уступая Китаю (140 тыс. т.), США (100 тыс.т), Аргентине (70 тыс.т) и Мексике (57 тыс.т).
Не менее наглядным показателем состояния пчеловодства является количество товарного меда, получаемое на год за одну семью. По данным А.Г. Николенко (2003) страны, лидирующие по валовому производству меда можно разделить на три группы. Страны первой группы (Канада, Аргентина, Германия) основной акцент в производстве меда делают на современные технологии. Продуктивность пчелиной семьи в этих странах составляет 40-60 кг меда в год. Вторая группа стран (Россия, Бразилия, Румыния) характеризуется главным образом экстенсивным подходом, добиваясь высокого суммарного производства товарного меда исключительно за счет количества пчелиных семей. При этом средняя продуктивность пчелиной семьи редко превышает 15 кг меда в год. Третья группа стран лидирующих в производстве меда (Китай, США, Мексика) при среднегодовой продуктивности 25-30 кг сочетает оба направления.
Как следствие, мы имеем среднегодовое потребление меда в России на уровне 350-400 г на человека, в то время как в развитых странах - 2-3 кг.
Медовый запас Российской Федерации оценивается по предварительным оценкам в 3-4 млн. т., что позволяет довести численность пчелиных семей до 10 млн. (Н.И. Кривцов и сотр., 2001).
Завершая краткий анализ состояния отечественного пчеловодства, следует отметить, что Россия оказалась практически полностью оттесненной от экспорта меда, довольствуясь категорией «отдельные случаи поставок» (А.Г. Николенко, 2003).
Как сообщил директор НИИ пчеловодства, член-корреспондент РАСХН Н.И. Кривцов на совещании в Совете Федерации РФ (февраль, 2006) в настоящее время полностью ликвидирована структура управления отраслью, а вместе с нею и система зоотехнического и ветеринарного обслуживания. В России так и не был принят федеральный закон «О пчеловодстве» (Н.Никоноров 2006)
Таким образом, приведенные данные наглядно демонстрируют существенное снижение мировых позиций российского пчеловодства, вызванное общим кризисом отрасли. К главным факторам подобного положения дел наряду с общими экономическими проблемами страны: высокой инфляцией, снижения реальных доходов населения, низкой эластичности продовольственного рынка, нарушения ценовых пропорций между продукцией сельского хозяйства и материально - техническими ресурсами АПК, можно отнести проблему ветеринарно-санитарного и зоогигиенического обслуживания пчеловодства.
Медоносная пчела, как и любой живой организм, подвержена различным заболеваниям, которые наносят серьезный ущерб пчеловодству, что проявляется в снижении опылительной активности и продуктивности пчелиных семей, а в дальнейшем зачастую приводят и к их гибели. Успешное развитие пчеловодства не представляется возможным без глубокого и всестороннего изучения патологии медоносной пчелы.
К числу наиболее опасных инфекционных заболеваний пчел, причины, возникновения которых напрямую связаны с несоблюдением норм содержания, неполноценным кормлением, а также с недостаточным количеством эффективных ветеринарно-санитарных мер борьбы, относятся микозы - грибковые заболевания.
Расширение ареала распространения микозов на пасеках страны в последние несколько лет, по мнению большинства исследователей, связано с нарушением равновесия нормальной микрофлоры в пчелиной семье, вызванным бесконтрольным применением антибиотиков и других химиотерапевти-ческих препаратов. Предрасполагающими факторами в развитии заболеваний являются резкие колебания температуры и повышенная влажность воздуха в гнездах пчел (A.M. Смирнов и сотр., 2000).
Как показывает практика пчеловодства, успех лечения, профилактики инфекционных болезней пчел, наряду с грамотным, научно-обоснованным применением лекарственных препаратов, а чаще в большей степени зависит от санитарного состояния ульев, сотов, инвентаря, пасечных построек и самой территории пасеки (A.M. Смирнов, 1980). Особый интерес представляет более глубокое изучение биологии, этологии беспозвоночных - обитателей пчелиных гнезд, как паразитов, так и комменсаллов именно в контексте рассмотрения последних, как переносчиков возбудителей инфекционных заболеваний пчел в целом, и микозов в частности.
В связи с вышеизложенным очевидно, что особую актуальность на современном этапе приобретают вопросы диагностики, всестороннего изучения культурально-морфологических свойств возбудителей микозов пчел, путей их распространения, а так же изыскания эффективных, экологически безопасных средств борьбы и профилактики. Только такое комплексное решение указанных проблем может обеспечить надлежащую профилактику инфекционных заболеваний пчел, позволит успешно проводить оздоровительные мероприятия на неблагополучных пасеках, повысить продуктив-
10 ность пчелиных семей и получать продукты пчеловодства высокого санитарного качества.
Целью настоящей работы явилось решение ряда теоретических и прикладных вопросов разработки интегрированной системы профилактики и борьбы с основными микозами пчел: аскосфероза, аспергиллеза, меланоза и кандидамикоза, которая включает следующие основные элементы: - диагностика, комплекс ветеринарно-санитарных мер, система лечебных мероприятий.
В задачи исследований входило:
Изучить биологические особенности возбудителей основных микозов пчел: аскосфероза, аспергиллеза, определить чувствительность выделенных штаммов к фунгицидным препаратам, применяемым в пчеловодстве.
Разработать способы ускоренной диагностики микозов пчел методом ПЦР.
Испытать и изучить фунгицидные свойства препаратов из различных классов химических соединений и отобрать эффективные при микозах пчел.
Изыскать и разработать средства и режимы дезинфекции ульев, сотора-мок, пчеловодного инвентаря и оборудования при грибковых заболеваниях пчел.
Изучить токсичность предложенных препаратов на организм пчел и теплокровных животных.
Изучить роль паразитов медоносных пчел в распространении возбудителей микозов.
Изучить влияние биологически активных добавок и стимуляторов на физиологическое состояние и резистентность пчел в комплексе противоми-козных мероприятий.
Апробировать интегрированную систему мер борьбы с аскосферозом и аспергиллезом пчел в производственных условиях.
Научная новизна. Научно обоснована и внедрена в практику пчеловодства интегрированная система мер профилактики и борьбы с микозами пчел.
Проведен и теоретически обоснован комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий на пасеках при микозах пчел с применением современных, высокопроизводительных, экономически выгодных способов дезинфекции ульев, сотов, инвентаря и оборудования.
Внедрена система применения лечебных и стимулирующих для развития пчел препаратов, позволяющих вести профилактику грибковых болезней.
Впервые разработана методика ускоренной индикации и идентификации возбудителей аспергиллеза пчел методом ГЩР с выделением ДНК и компьютерным дизайном праймеров специфичных определенным участкам геномов возбудителей.
Установлена высокая фунгицидная и дезинфицирующая активность электрохимически активированных растворов (препарат йодохлорин) и препаратов глуфар и натамин в отношении возбудителей микозов пчел.
Эффективность препарата йодохлорин подтверждена электронно-микроскопическими исследованиями структуры конидий возбудителей микозов.
Изучена и установлена высокая эффективность применения биологически активных добавок (препарат ВЭСП) для повышения резистентности пчел в комплексе ветеринарно-санитарных мероприятий при микозах.
Впервые установлено, что уховертки и муравьи могут являться механическими переносчиками возбудителей микозов. Показано сапрофитиче-ское взаимоотношение гриба Ascosphaera apis в организме уховерток и муравьев, что свидетельствует о резервуарной роли этих насекомых.
Новизна прикладных разработок подкрепляется тем, что три предложения по способу получения и изучению фунгицидных и фунгистатических свойств ряда четвертично - аммониевых соединений защищены тремя патен-
12 тами РФ на изобретение (в соавторстве): - № 2216535 от 20.11.2003; № 2221773 от 20.01.2004; № 2221776 от 20.01.2004 (см. приложения).
Практическая ценность. Данные, полученные в результате проведенных исследований, легли в основу разработки комплексной интегрированной системы профилактики и борьбы с грибковыми заболеваниями пчел: - аско-сферозом, аспергиллезом, меланозом и кандидамикозом, позволяющей обеспечивать эпизоотологическое благополучие по микозам пчел на пасеках.
Для проведения лечебно-профилактических мероприятий предложены препараты йодохлорин, натамин и глуфар, разработаны режимы и технологии их применения.
Для повышения резистентности, гигиенической способности и стимуляции развития пчелиных семей в комплексе противомикозных мероприятий предложен препарат ВЭСП. Разработаны способ и режимы применения данного препарата (в соавторстве). Апробация работы
Материалы диссертации доложены на 37 Международном конгрессе Апимондия - 2001 (Дурбан ЮАР, 2001); Международной конференции ветеринарных фармакологов и токсикологов посвященной 125 - летию Н.А. Со-шественского (Казань, 2001); Всероссийской конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); научно-практической конференции по актуальным проблемам АПК (Казань, 2003); 38 Международном конгрессе Апимондия 2003 (Любляна, Словения, 2003); 5 Международной научно - практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветеринарно - санитарного контроля и биологической безопасности» посвященной 75 - летию МГУПБ (Москва, 2004); XI научно -практической конференции «Апитерапия - XXI век» (Рыбное, 2004); Международной научно - практической конференции «Состояние и проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве» (Чебоксары, 2004); научно - практической конференции «Экологические аспекты производства, переработки и использования продуктов пчеловодства» (Рыбное,
13 2004); VI республиканской научной конференции «Актуальные экологические проблемы Республики Татарстан» (Казань, 2004); 39 Международном конгрессе Апимондия - 2005 (Дублин, Ирландия, 2005); Международной научно - практической конференции «70 лет на службе охраны здоровья населения и животных», посвященной 70-летию ГНУ ВНИИВСГЭ. Публикации
Основные материалы диссертации изложены в 32 печатных работах, в том числе в 9 публикациях в изданиях, определенных перечнем ВАК РФ. Проведенные исследования и полученные результаты позволяют вынести на защиту следующие основные положения диссертационной работы:
Культурально-морфологические свойства культур грибов рода Aspergillus, адгезия конидий гриба в кишечнике и на поверхности ли-
чинок пчел.
Диагностика микозов пчел с использованием полимеразной цепной реакции.
Лечебно - профилактические и дезинфицирующие свойства препаратов йодохлорин, глуфар и натамин при микозах пчел, электронная микроскопия конидий возбудителя аспергиллеза при воздействии йо-дохлорина.
Токсикологическая характеристика предложенных препаратов.
Стимулирующее действие йодохлорина на организм пчел и влияние
его на основные полезно - хозяйственные показатели семей пчел.
Роль паразитов пчелиных семей (уховертки, муравьи) в распространении возбудителей микозов.
Эффективность применения биологически активной добавки ВЭСП для повышения резистентности и гигиенической активности семей пчел при микозах.
Ветеринарно-санитарная оценка продуктов пчеловодства, полученных от опытных семей пчел.
14 Интегрированная система мер профилактики и борьбы с основными
микозами пчел. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 264 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Работа содержит 40 таблицы, 22 рисунка и 6 диаграмм. Список литературы включает 376 источников, из них 144 иностранных.
Эпизоотологическая ситуация по микозам в пчеловодстве в историческом развитии и на современном этапе
В начале XXI века, в связи с неуклонным ростом населения на Земле развитие пчеловодства имеет большое значение. Оно определяется тем, что пчеловодство дает незаменимые ценнейшие продукты питания и сырье. Вместе с тем пчелы играют активную роль как опылители сельскохозяйственных культур, являясь неотъемлемым элементом в биоценозах экосистем.
Пчеловодство - одна из древнейших отраслей хозяйственной деятельности человека. От раннего палеолита до современной эпохи он стремился максимально использовать медоносную пчелу. При случайном обнаружении гнезд, организованной охоте за медом, содержанием пчел в бортях, колодах, различных типах ульев человек сталкивался с болезнями и гибелью этих полезных насекомых, что нашло отражение в различных сказаниях, мифах, разнообразных письменных источниках Древней Греции и Рима (О.Ф. Гробов и сотр., 1992).
Серьезным барьером на пути развития современного пчеловодства являются инфекционные и инвазионные заболевания пчел, в частности аспер-гиллез и аскосфероз пчел (А.А. Жуков 1995, Л.Ф. Соловьева, 1997). Кроме указанных заболеваний определенную роль в патологии пчел играют меланоз и кандидамикоз.
Аскосфероз (перицистомикоз, известковый расплод, меловой расплод) - инфекционное микотическое заболевание семей пчел, сопровождающееся гибелью пчелиных и трутневых личинок с последующим мумифицированием.
Первые сообщения об этом заболевании появилось в 1878 году в Чехословакии (A. Samsinakova et. al., 1977).
Позднее, в 1913 году немецкий исследователь A. Maassen опубликовал свои первые наблюдения известкового расплода. (R.Morse, 1997).
В течение последних 20 лет аскосфероз широко распространился на пасеках ряда стран (Л.Ф.Соловьева, 1997), хотя вспышки заболевания расплода медоносных пчел аскосферозом регистрировались в Европе включая Британские острова в течение многих лет (A. Maassen, 1913; A. D. Betts, 1919,1932, 1951; Е. Zander, 1919; J. Anderson, 1934 ,1938; A. Maurizio, 1934; К. Dreher, 1938; A. Deans, 1940; О. Morgenthaler, 1944; О. Tabarly et al., 1961; A. Giauffret et al., 1967; B. Barthel, 1971; E. Lunder, 1972; F. Matus, I. Sarbak, 1974).
По сообщениям P. Carrera (1987) появление известкового расплода за последние пять лет вызвало большую тревогу у пчеловодов Италии. D.J. Layitte (1988) отмечает, что во Франции из всех случаев грибковых заболеваний расплода пчел на долю аскосфероза приходиться 80%. О массовой вспышке известкового расплода пчел в Израиле сообщается в работе В. Yakobson nD.Elad (1991).
В Болгарии, в южной ее части в 1988 году наблюдалось спонтанное заболевание пчел аскосферозом, охватившее до 70% пчелиных семей со степенью поражения расплода 20 - 45% (К.Гургулова, К. Кънчев, 1988).
Расширение заболеваний пчелиного расплода, а в последние годы в особенности аскосфероза сильно осложняют жизнь пчеловодов Словакии (И. Сокол, И. Кубинец 1996). L. Heath (1985) сообщил о появлении и распространении известкового расплода в Швейцарии, Польше, Франции, СССР, Чехословакии, Греции, Норвегии, Англии, Шотландии.
По мнению L.Korgos (1977), известковый расплод вызывает большие потери в Венгрии. J. Canadija (1978), D. Sulimanovic (1982, 1983), И.Томас и сотр. (1983) обращают внимание на широкое распространение аскосфероза в Югославии.
В Латвийской республике по данным Р.Стафецкого (1996) аскосфероз и аспергиллез за последние 5 лет (1990-1994 г.г.) выделен у 54 пчелосемей.
D.A. Seal (1957) зафиксировал известковый расплод в Новой Зеландии. Furuya et al. (1981) и К. Takatori, I. Tanaka (1982) идентифицировали аско сфероз в Японии. С. Rossi и М. Carranza (1980) зарегистрировали первый случай аскосфероза в Аргентине, а М. Del Ноуо (1995) и N.I. Репа et al. (2001) сообщают уже о широком распространении данного микоза в большинстве аргентинских провинций с развитым пчеловодством.
Известковый расплод пчел распространен также в Азии, включая страны Среднего Востока и страны к востоку от индийского полуострова (A.G. Matheson, 1993).
G.M. Baker, P. Torchio (1968) описали первый случай аскосфероза в Соединенных Штатах Америки. Позднее, G. М. Thomas, A. Luce (1972) обнаружили возбудителя известкового расплода в Калифорнии, а к 1974 году данное заболевание было зарегистрировано в ряде штатах (D. De Jong, 1976).
Т.A. Gochnauer (1972) сообщил о первом случае аскосфероза в Канаде в провинции Британская Колумбия. В 1976 году аскосфероз зарегистрирован уже в 33 штатах США и 6 провинциях Канады. К 80-м годам это заболевание зарегистрировано также в Новой Зеландии и Японии.(О.М. Thomas, A. Luce 1972; I.D. Hitchcock, М. Christensen, 1972; P.A. Willians, 1976; D.M. Menapase, W.T. Wilson 1976; M.Gilliam, 1978; W. Stephen, 1978; J. Hirose et al.,1980).
На территории бывшего СССР аскосфероз распространен на Украине, в Центрально - Черноземном регионе, в Сибири, на Дальнем Востоке и в регионе Средней Азии (Э.З. Коваль, 1974; В.И. Скосырских и сотр., 1985; Горин, 1983,1992). А.А.Жуков (1995) сообщает о сезонной пораженности расплода пчел аскосферозом с наибольшим распространением в апреле, мае и июне в Кабардино-Балкарской Республике.
Роль клеща Варроа, восковой моли и других беспозвоночных паразитов пчелиной семьи в распространении инфекционных болезней пчел
В процессе эволюции между медоносной пчелой и другими членистоногими: клещами, насекомыми сложились разнообразные взаимоотношения.
Анализ акарофауны гнезд медоносной пчелы, проведенный О.Ф. Гробовым (1991), показывает, что наряду с 5,8 % специфичных для этих насекомых видов, 16,5% клещей обитает на растениях. Многие из них, кроме того, что сами наносят значительный вред пчелам, являются переносчиками возбудителей опасных инфекционных заболеваний.
О распространении возбудителей гнильцовых заболеваний восковой молью, муравьями, уховертками, браулами сообщали В.И. Полтев и сотр., (1977), Е.И. Скрыпник и сотр., (1970), М.Шабанов (1975); возбудителя нозематоза - красноклопами, муравьями, шмелями, мухами, кобылками, осами, уховертками, восковой молью - О.Ф. Гробов (1969); возбудителя гафниоза -клещами Varroa jacobsoni - Ю.М. Куценко (1975), P.M. Салимов и сотр., (1975).
По мнению О.Ф. Гробова (1991), возбудитель акарапидоза - клещ Acarapis woodi способствует увеличению микрофлоры в просвете пораженной трахеи и вероятно способен инокулировать некоторых возбудителей инфекционных заболеваний пчел.
Н.М. Кокорев и сотр. (2002) считает, что самки клеща Varroa jacobsoni, питаясь гемолимфой личинок, травмируют кожные покровы и не только ослабляют их, но и способствуют проникновению спор гриба через ранки на покровах личинки.
В экспериментальных условиях клещ легко передает возбудителей американского гнильца (A.M. Смирнов и сотр., 1977), колибактериоза (Л.Н. Гузева, 1981), септицемии (A.M. Смирнов и сотр., 1985). H.Horn (1984) так же указывает на взаимосвязь появления бактериозов пчел на фоне варрооза.
Исследования, проведенные B.V.Bali (1989) показали, что клещ варроа может действовать «проводником» ряда вирусов. В пораженных варроатозом семьях был обнаружен вирус, который ранее не был описан, а именно вирус искаженного крыла (DWV) (L.Baily et al., 1991, B.V.Bali et al. 1997). Дальнейшие исследования в национальном масштабе Великобритании доказывают, что вирус DWV является самой распространенной инфекцией связанной с клещом варроа. (N.L.Carrek et al. 2002)
Наблюдения О.Ф. Гробова и сотр., (1993) показывают, что в неблагополучных по варроозу семьях пчел, очевидно в силу снижения их устойчивости увеличивается возможность возникновения аскосфероза.
М.М. Сычев (1995) одним из основных факторов переноса спор возбудителей микозов считает паразитов и вредителей пчел (восковая моль, клещи, муравьи и др.).
Попытки передать патогенный штамм Aspergillus flavus от пораженных пчел к здоровым, с помощью клеща Varroa не дали положительного результата (О.Ф. Гробов 1991), в то же время в Австрии на неблагополучных по варрозу пасеках отмечено появление аспергиллеза (J.Bretschko., 1983).
Е.В. Руденко (1997) отмечает, что высокая интенсивность варроатозной инвазии (до 30%) в период максимального развития пчелиных семей способствует возникновению аскосфероза пчел, что согласуется с результатами исследований W. Ritter (1985,1993,1994), С. Стоянова (1995), Г.Н. Михальцевич и сотр. (1996), которые подтверждают возможность влияние клеща Varroa на распространение аскосфероза в семье, поэтому лечение от варрооза должно способствовать оздоровлению семей пчел и от аскосфероза.
Серьезный ущерб пчеловодству наносят большая (Galleria mellonella L.) и малая (Achroea grisella F.) восковая моль - серые ночные бабочки из семейства огневок. Личинки этих насекомых, питаясь воском, разрушают соты, повреждают пчелиный расплод, участвуют в распространении возбудителей гнильцовых и грибковых болезней (Г.В. Кашина и сотр., 1992).
Возникновение и развитие инфекционных заболеваний пчел различной этиологии обусловлено комплексным действием различных факторов: нарушением правил содержания, кормления и разведения, необоснованным и бесконтрольным применением антибиотиков и других медикаментов, хроническими токсикозами пчел от применения пестицидов в растениеводстве и ухудшающейся экологической обстановкой (О.Ф. Гробов и сотр., 1998).
Сложившаяся ситуация определила направление исследований специа-листов в области патологии пчел на поиск эффективных и безопасных биологических добавок и стимуляторов развития пчелиных семей.
Результаты исследований В.В. Баньковского и сотр., (2001) показали высокую эффективность имунно-лечебного стимулятора полизин.
P.M. Полковников и сотр., (2001) рекомендуют при аскосферозе в качестве белковой подкормки препарат полисот, созданный на основе цветочной пыльцы, нистатина и белкового компонента ПАН, содержащего аминокислоты, ферменты, витамины и микроэлементы. Применение этого препарата стимулирует увеличение массы тела суточных пчел (в 1,3 раза) и яйценос-кость маток (в 3 раза).
Широкое применение в последние годы в качестве лечебно профилактического средства при микозах, варроозе и других заболеваниях пчел нашел препарат «Пчелка», действующим веществом которого является композиция фитонцидов: хвойного экстракта и сока чеснока. Результаты исследований В.Р. Туктарова (2001) демонстрируют стимулирующее действие препарата на развитие пчелиных семей, увеличение на 17% репродуктивной активности маток и повышение важных физиологических и биохимических показателей организма пчел. Дальнейшие испытания препарата «Пчелка» М.И. Горжельняк (2001), Т.В. Богдановой (2001), Е.Д. Дмитриева (2005), подтверждают терапевтический и стимулирующий эффект этого препарата.
Эпизоотологическая ситуация по микозам пчел на пасеках регионов Приволжского федерального округа
Учитывая важность знания эпизоотологической ситуации, являющейся неотъемлемым звеном пчеловодства как отрасли и дающей представление о масштабе распространения очагов заболеваний, были проведены исследования и мониторинг по группе наиболее опасных микозов пчел: аскосфероз, аспергиллез, меланоз и кандидамикоз.
Исследования были проведены в период 1998-2006 г.г. на стационарных пасеках районов республик Татарстан, Башкортостан, Удмуртия, Марий Эл, а также Кировской области. Объектом исследований являлись выборочные пробы патологического материала: пораженный расплод, мумифицированные личинки, подмор, участки сотов, изученные общепринятыми методами (О.Ф. Гробов и сотр., 1987).
Анализ полученных данных показал, что наибольшее распространение на пасеках обследованных районов получили аскосфероз и аспергиллез пчел. Результаты представлены в диаграммах 1 и 2.
На исследованных пасеках Кировской области процент пораженных ас-косферозом пчелосемей находился в среднем на уровне 28 %, аспергиллезом - 5% с незначительными колебаниями. Более неблагополучная ситуация в этом отношении в Удмуртии, где уровень пораженности аскосферозом на пасеках республики достигал 30% (1999, 2003). На эти же годы, по нашим данным приходятся и максимальные значения по аспергиллезу.
В Республике Татарстан степень поражения семей аскосферозом в течение контрольного периода на пасеках, подвергшихся исследованиям, находилась на уровне 15-20%, аспергиллеза - 3-5% соответственно, пики заболеваемости приходились на 1998,1999 и 2003 годы.
Стабильный уровень заболеваемости микозами наблюдался на пасеках республик Башкортостан и Марий Эл. Степень поражения аскосферозом семей пчел в этих регионах составляет в среднем 14%, при этом в основном диагностировался аскосфероз, на долю аспергиллеза приходилось не более 3% семей.
Меланоз и кандидамикоз экспериментальным путем диагностировался в ряде случаев на пасеках Республики Татарстан (Верхнеуслонский и Апастов-ский районы), Кировской области (Малмыжский район) и Республики Башкортостан (Аскинский район). В других регионах отмечаются спорадические случаи этого заболевания маток на основании данных анкетирования пчеловодов и ветеринарных специалистов.
Полученные результаты по оценке эпизоотологической ситуации в целом коррелируют со статистическими данными государственных республиканских и областных лабораторий. Однако в ряде регионов (Башкортостан, Татарстан и др.) в документах ветеринарной отчетности среди микозов пчел фигурирует исключительно аскосфероз, что не всегда дает объективную оценку ветеринарно-санитарного состояния отрасли, учитывая сходство первичных клинических признаков последнего с аспергиллезом.
Таким образом, на основании анализа эпизоотологической ситуации на исследованных пасеках регионов Поволжья очевидно, что распространение заболеваний пчел микозной этиологии пчел находится на достаточно высоком уровне и носит угрожающий характер.
Следует отметить, что микозы представлены различными возбудителями, в основном аскосферозом и аспергиллезом, следовательно, изыскание средств лечения и профилактики, а также разработка режимов их применения должны быть четко дифференцированы в зависимости от видовой принадлежности возбудителей.
В ходе микологических и микроскопических исследований нами из патологического материала (рис. 1,2), отобранного из семей пчел, имеющих признаки заболеваний грибковой этиологии, был выделен и идентифицирован штамм гриба Aspergillus niger Tieghem, являющийся одним из основных возбудителей аспергиллеза пчел (Гробов О.Ф. и сотр., 1987).
Родовую и видовую принадлежность данного возбудителя подтверждают следующие показатели - на агаре Чапека колонии гриба появились на 3-й сутки культивирования, диаметр которых составил в среднем 2,5-3 см; цвет субстратного мицелия - белый. В дальнейшем на 7-8-е сутки колонии приобрели черновато-коричневую окраску.
Высота конидиеносцев варьировла от 1,5 до 3 мм, ширина - 13-20 мкм с гладкими оболочками толщиной 2-2,5 мкм.
Цвет конидиеносцев в нижней части желтоватый, в верхней - коричневый. Апикальное расширение шаровидное, диаметр его в среднем составил 55-75 мкм. Стеригмы, в основном, двухярусные, размеры базального яруса 30-40 х 5-6 мкм, второго яруса - 6-9 х 3-3,5 мкм.
Конидии - шаровидные, диаметром 3-6 мкм, темно-коричневого цвета: поверхность их как гладкая, так и шероховатая или шиповатая с четкими полосами пигмента.
Отбор и исследования проб патологического материала с других неблагополучных по аспергиллезу пасек показал преобладание возбудителей, обладающих аналогичными культурально-морфологическими свойствами.
Таким образом, на основании результатов, проведенных исследований, выделенный и идентифицированный штамм гриба Aspergillus niger Tieghem был использован нами в дальнейшей работе по изысканию дезинфицирующих, лечебно-профилактических средств борьбы с микозами пчел.
Фунгицидная активность электроактивированных растворов в отношении возбудителей аспергиллеза, аскосфероза, меланоза и кандидамикоза пчел
Учеными Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (А.З Равилов, В.С.Угрюмова и др.) в течение ряда лет проводились исследования по изучению биологической активности электроактивированных растворов (А.С. СССР 230699; А.С. СССР 1467814; А.С. СССР 321943). В результате исследований разработан эффективный препарат йодохлорин, нашедший широкое применение при дезинфекции и санации объектов животноводства и птицеводства в хозяйствах Республики Татарстан.
Первичный отбор препаратов, относящихся к электроактивированным растворам солей и их смеси, был проведен с использованием тест-микроорганизма - гриба Aspergillus niger.
Электроактивированные растворы (хлорида натрия, хлорида калия) - в виде анолита и католита, а также электроактивированные растворы, изготовленные из смеси солей хлорида натрия и йодида калия, в различных соотношениях. Электроактивированные растворы были получены в электроактиваторах мембранного и безмембранного типов. Перечень препаратов, использованных для первичных испытаний, приведен в таблице 3.
Из представленных в таблице 3 данных видно, что электроактивированные растворы хлорида натрия и хлорида калия с содержанием исходных концентраций солей 0,8%, имеющих рН-показатели 3,2 (анолит) и 11,2 (католит), обладают фунгицидным действием.
Однако фунгицидность электроактивированных растворов, полученных из смеси солей йодида калия и хлорида натрия (препарат йодохлорин), зависит от содержания исходных концентраций вышеназванных солей. Так, при исходном содержании солей йодида калия и хлорида натрия 0,1-0,2 % и 0,2-0,6 % соответственно при получении препарата йодохлорин, имеющего рН - показатели 2,2-3,0, не оказывают фунгицидного действия, в то время как увеличение содержания солей до 0,3-0,9 %, 0,6 %-1,8 % 1,2-3,6 % обнаруживает фунгицидное действие. При этом усиление фунгицидной активности происходит на фоне повышения рН-показателей, которые достигают уровня 5,5.
Фунгицидные свойства католита с содержанием тех же исходных концентраций солей проявляются в тех же параметрах, однако рН-показатели увеличиваются резко в щелочную сторону (10,2-11,8). Таблица З
Перечень препаратов, использованных для первичного испытания фунгицидной активности в отношении гриба Aspergillus niger
Название или шифр препарата Исходные концентрации(%) рнраствора Результаты исследований опыт контроль
Электроактивированныерастворы с содержаниемсолей:Хлорид натрияАнолитКатолитХлорид калияАнолитКатолит 0,8 0,8 3,2 11,23,2 11,2 - ++++ Иодид калия и хлорид натрия (полученные на электроактиваторе бездиа-фрагмального типа) 0,1-0,2 0,2-0,6 0,3-0,9 0,6-1,8 1,2-3,6 9,29,49,810,010,0 + + + ++ + +
Иодид калия и хлорид натрия (полученные на электроактиваторе диафраг-мального типа) анолит (препарат йодохлорин) 0,1-0,2 0,2-0,6 0,3-0,9 0,6-1,8 1,2-3,6 2,93,03,055,55,5 + + + + + + + Католит 0,1-0,2 0,2-0,6 0,3-0,9 0,6-1,8 1,2-3,6 9,810,010,211,811,8 + + + + + + +
Примечание: «+» - обильный рост исходной культуры; «-» - отсутствие роста исходной культуры. Аналогичные данные были получены и при исследовании электроактивированных солей йодида калия и хлорида натрия, полученных на электроактиваторе бездиафрагмального типа.
В процессе первичного испытания был отобран ряд перспективных препаратов, которые в дальнейшем были изучены по фунгицидной активности в зависимости от минимальных концентраций и сроков экспозиции в от-ношениии различных штаммов возбудителей микозов: Ascosphaera apis, Aspergillus niger, Aureobasidium pullulans и Candida albicans.
Согласно данных, представленных в таблицах 4 и 5, в результате исследований фунгицидности препаратов, полученных на электроактиваторе диафрагмального типа установлено, что наиболее активными в отношении возбудителей аспергиллеза, аскосфероза, кандидамикоза и меланоза пчел являются анолиты электроактивированных растворов (препарат йодохлорин), содержащие в исходном составе 0,3 - 0,9 % и 0,6 -1,8 % йодида калия и хлорида натрия соответственно.
Агрегатное состояние - прозрачная темно-коричневая жидкость с характерным запахом йода, содержащий в своем составе свободные ионы йода и хлора, а так же соли йодноватистой и хлорноватистой кислот, рН раствора в пределах 2,9 -5,5.
Фунгицидная активность данных ЭАР для грибов Aspergillus niger и Candida albicans проявлялась при экспозиции 30 и 10 минут соответственно. Грибы Ascosphaera apis и Aureobasidium pullulans проявили более низкую устойчивость в отношении раствора 0,3-0,9 %, минимальная фунгицидная экспозиция составляла 15 мин.
При исследовании анолита электроактивированного раствора с содержанием в исходном составе 1,2 % йодида калия и 3,6 % хлорида натрия были получены результаты, идентичные препарату, содержащему 0,6 % йодида калия и 1,8 % хлорида натрия. Дальнейшее повышение концентрации солей в растворе не вызывает усиление фунгицидной активности препарата, что, по всей видимости, связано с разложением их в процессе электролиза.
