Содержание к диссертации
Введение
2 Обзор литературы.. 7
2.1 Функция яичников 7
2.2 Гипофункция яичников у коров 12
2.2.1 Сущность заболевания и его распространение 12
2.2.2 Этиология 15
2.2.3 Патогенез 18
2.2.4 Симптомы и диагностика гипофункции яичников у коров 20
2.2.5 Лечение гипофункции яичников у коров 25
2.2.6 Профилактика гипофункции яичников у коров 35
2.3 Препараты из плаценты и их применение в ветеринарной практике 38
2.4 Заключение по обзору литературы 43
3 Собственные исследования 46
3.1 Материалы и методы исследования 46
3.2 Результаты собственных исследований 57
3.2.1 Распространение и структура гинекологической патологии у коров в хозяйствах Свердловской области 57
3.2.2 Характеристика препарата из плаценты «Пребиостим» 60
3.2.2.1 Технология получения препарата «Пребиостим» 60
3.2.2.2 Физико-химические свойства «Пребиостима» 62
3.2.2.3 Иммунотропные свойства препарата «Пребиостим» 64
3.2.3 Терапевтическая эффективность препарата «Пребиостим» при гипофункции яичников у коров 74
3.2.4 Эффективность препарата «Пребиостим» в комплексных схемах лечения коров с гипофункцией яичников 80
3.2.5 Эффективность препаратов из плаценты при лечении сочетан-ных функциональных расстройств репродуктивных органов у коров.. 86
3.2.6 Профилактика гипофункции яичников у коров с использованием «Пребиостима» и препаратов-аналогов гонадолиберинов 92
3.3 Расчет экономической эффективности 97
4 Анализ результатов собственных исследований 100
5 Выводы 117
6 Предложения производству 119
7 Библиографический список 120
- Сущность заболевания и его распространение
- Распространение и структура гинекологической патологии у коров в хозяйствах Свердловской области
- Терапевтическая эффективность препарата «Пребиостим» при гипофункции яичников у коров
- Профилактика гипофункции яичников у коров с использованием «Пребиостима» и препаратов-аналогов гонадолиберинов
Введение к работе
Актуальность темы. Проблемы, связанные с воспроизводством сельскохозяйственных животных, особенно высокопродуктивного молочного скота, продолжают оставаться наиболее актуальными в области ветеринарии. Снижение плодовитости крупного рогатого скота многие исследователи связывают с функциональными расстройствами органов репродуктивной системы, в том числе с нарушениями функциональной деятельности яичников, проявляющимися в форме их гипофункции (Черемисинов Г.А., 1986; Осетров А.А., 1988; Попов Л.К., Попова М.К., 1994; Медведев Г.Ф., Долина Д.С., 1994; Чомаев A.M., 1998; Шириев В.М., 2001; Нежданов А.Г., Мисайлов В.Д., Шахов А.Г., 2005; Турченко А.Н., Коба И.С., Горпинченко Е.А., 2006).
В исследованиях последних лет показано, что фолликулярный рост происходит в волнах, при этом во время каждого полового цикла проявляется две или три последовательные волны роста фолликулов, что необходимо учитывать при коррекции дисфункций яичников (Ginther О.J., Kastelic J.P., Knopf L., 1989; Ginther О.J., Wiltbank M.C., Fricke P.M. et al., 1996; Богданова H.E., 2006). Кроме того, доказана тесная интеграция иммунной, нервной и эндокринной систем (Крыжановский Г.Н., Мачаева СВ., Макаров СВ., 1997; Воронин Е.С, Петров A.M., Серых М.М., 2002).
С учетом этого, перспективным направлением повышения эффективности профилактики и лечения функциональных расстройств репродуктивной системы маточного поголовья является использование иммунокорригирующей терапии, приоритет при этом отдается препаратам природного происхождения, характеризующимся безвредностью и безопасностью в экологическом отношении (Дервишов Д.А., 2000; Гулянский А.К., Леонов К.В., 2000; Беляев В.И., Нежданов А.Г., Лободин К.А., 2002; Востроилова Г.А., Шабанов И.Е., 2004; Шахов А.Г., Бригадиров Ю.Н., Ануфриев А.И. и др., 2005). В связи с этим, клиническое изучение новых средств с иммуномодулирующим действием остается актуальной задачей ветеринарной науки. Дальнейшего исследования требуют и многие аспекты оценки состояния иммунного статуса высокопродуктивных животных, что позволит более обоснованно и эффективно проводить лечение и профилактику гинекологических заболеваний у коров. Вышеизложенное послужило основанием для постановки цели и формирования задач данной работы.
Цель и задачи исследований. Целью нашей работы было изучение эффективности применения препарата «Пребиостим» для лечения и профилактики гипофункции яичников у коров.
Для достижения цели поставлены следующие задачи:
- изучить распространение и структуру гинекологической патологии у коров в базовых хозяйствах Свердловской области;
- определить особенности клинического течения, гормональный и иммунный статус при гипофункции яичников у коров разного возраста и дать обоснование использования препарата «Пребиостим» при лечении и профилактике данной патологии;
- провести экспериментальную оценку препарата «Пребиостим» по иммунотропным свойствам;
- оценить терапевтическую эффективность препарата «Пребиостим» при гипофункции яичников у коров;
- определить профилактическую эффективность препарата «Пребиостим» из плаценты при гипофункции яичников у коров.
Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Уральской ГСХА по теме: «Разработка системы диагностики, терапии и групповой профилактики патологии беременности, родов и послеродового периода у коров в хозяйствах Свердловской области», № госрегистрации 01200211816. Научная новизна работы. Проведено экспериментальное изучение иммунотропных свойств нового препарата из плодных оболочек крупного рогатого скота «Пребиостим». Предложены новые способы использования препарата для лечения и профилактики гипофункции яичников у коров. По результатам исследований подана заявка на патент РФ №2005121359/13(024081).
Практическая значимость и реализация результатов исследований. На основании теоретических разработок предложены схемы применения препарата из плаценты «Пребиостим» для лечения и профилактики гинекологических заболеваний и повышения воспроизводительной функции коров. Значимость исследований подтверждается результатами внедрения препарата «Пребиостим» в ветеринарную практику хозяйств Свердловской области.
Результаты исследований вошли в рекомендации «Применение препаратов из плаценты при акушерских и гинекологических болезнях коров» (Екатеринбург, 2005), утвержденные НТС Министерства сельского хозяйства и продовольствия Свердловской области.
Теоретические разработки диссертации используются в качестве информационного материала в учебной работе кафедр Уральской и Пермской государственных сельскохозяйственных академий.
Апробация работы. Практические результаты доложены на научной конференции молодых ученых Уральской ГСХА «Молодежь и наука» (2004); международной научно-практической конференции «Научные основы профилактики и лечения болезней животных» (Екатеринбург, 2005); международной научно-практической конференции «Наука и образование -аграрному производству» (Екатеринбург, 2005); II Всероссийской конференции молодых ученых и специалистов аграрных образовательных и научных учреждений «Инновации молодых ученых - сельскому хозяйству России» (Москва, 2005); международной научно-производственной
б
конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» (Воронеж, 2006); конференции молодых ученых Уральской ГСХА «Молодежь и наука» (Екатеринбург, 2006).
Публикации. Результаты исследований, изложенные в диссертации, опубликованы в 9 печатных работах, в том числе одна работа в издании, рекомендованном ВАКом РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, анализа полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического списка (244 источника, в том числе 27 зарубежных). Работа иллюстрирована 29 таблицами, 19 рисунками.
На защиту выносятся следующие положения:
- препарат из плодных оболочек крупного рогатого скота «Пребиостим» обладает иммунотропными свойствами и может быть использован для коррекции иммунного статуса коров при функциональных расстройствах органов репродуктивной системы;
- применение препарата «Пребиостим» в качестве средства иммунокорригирующей терапии при гипофункции яичников позволяет повысить эффективность лечения и оптимизировать показатели репродуктивной функции коров;
- включение препарата «Пребиостим» в комплексную терапию и профилактику гинекологических заболеваний у коров, позволяет добиться высокого клинического эффекта и сохранить репродуктивную функцию маточного поголовья. 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Функция яичников
Быстрое развитие эндокринологии в 70-80-х годах двадцатого века значительно расширило представления о репродуктивной физиологии и позволило разработать и внедрить в практику животноводства метрды направленной регуляции воспроизводства и коррекции нарушений функции размножения (Хантер Р.Х., 1984; Прокофьев М.И., 1984; Гордон А., 1988; Остин К., Шорт Р., 1988; Теппермен Дж., Теппермен X., 1989; Сергиенко А.И., Си-нагурский Д.И., Везденко О.С., 1991; Сысоев А.А., 1978). В приведенных монографиях и обзорах освещены основные достижения эндокринологии репродукции и их практическое значение. Наиболее полно современное представление о нейрогуморальной регуляции репродуктивной функции крупного рогатого скота изложено в работах Нежданова А.Г. (2003).
Репродуктивная система характеризуется присущей только ей функцией - обеспечением репродуктивного процесса. Она состоит из совокупности конкретных структурных элементов - аркуатных ядер гипоталамуса, гонадо-трофов гипофиза, гонад, органов-мишеней (яйцепроводы, матка, влагалище и др.), обеспечивающих реализацию функции воспроизводства потомства. Элементы репродуктивной системы связаны между собой информационными сигналами, позволяющими функционировать ей как единое целое. Схематично нейрогуморальную регуляцию репродуктивных процессов можно представить четырьмя уровнями: гипоталамус, гипофиз, яичники, матка. Их взаимодействие позволяет поддерживать гормональный баланс и циклическую активность яичников.
В мировой литературе к настоящему времени накоплен объем данных, достаточный для характеристики основных компонентов репродуктивной системы, функциональных связей между ними, а также связей между этой системой и другими системами организма.
Центральным органом репродуктивной системы являются половые железы, у самок - яичники. Структура и функция гонад подробно приводятся в фундаментальных работах (Равен X., 1964; Айзенштадт Т.Б., 1984; Хэм А., Кормак Д., 1983; Хантер Р.Х., 1984; Прокофьев М.И., 1984; Гордон А., 1988; Остин К., Шорт Р., 1988), а также уточняются и дополняются в современных исследованиях (Буянов А.А., 1994; Черемисинов Г.А., 1994; Еремин СП., 2002, 2004; Лободин К.А., 2003). В данном обзоре эти вопросы будут освещены схематично.
Яичники выполняют две функции: генеративную (герминативную), включающую фолликулогенез и овогенез; гормональную, состоящую в сте-роидогенезе - образовании гормонов стероидной природы.
Овогенез представляет собой совокупность последовательных процессов развития женской половой клетки от первичной половой клетки до зрелой яйцеклетки. Он включает периоды размножения, роста и созревания.
В период размножения путем митоза увеличивается количество диплоидных половых клеток - овогоний. Происходит это на начальных этапах онтогенеза.
После прекращения митозов овогоний вступают в период роста и называются овоцитами I порядка. В начале периода роста (фаза медленного роста) овоцит увеличивается незначительно. В его ядре происходит конъюгация гомологичных хромосом и кроссинговер. Эта фаза длится годами. Затем наступает фаза быстрого роста. В эту фазу объем овоцита увеличивается в сотни, а иногда в тысячи раз, в основном за счет накопления желтка и рибосом.
Непосредственно перед овуляцией наступает период созревания, овоцит I порядка претерпевает первое деление мейозом - образуется небольшое полярное (направительное) тельце и крупный овоцит II порядка. На этой стадии происходит выход овоцита при овуляции. Второе деление мейозом происходит во время оплодотворения. Из овоцита II порядка выделяется второе направительное тельце и образуется зрелая яйцеклетка с гаплоидным набо 9
ром хромосом.
Это высокоспециализированная клетка, она имеет две вторичные оболочки - лучистый венец и прозрачную оболочку; первичную - желточную оболочку; ядро с гаплоидным набором хромосом и содержит питательные вещества, необходимые для развития зародыша. Диаметр яйцеклеток млекопитающих (без оболочек) от 50 мкм (мышь) до 180 мкм (овца) (Равен X., 1964; АйзенштадтТ.Б., 1984; Токин Б.П., 1987).
Развитие фолликула происходит по схеме: примордиальный фолликул - первичный - вторичный - третичный (граафов пузырек).
Примордиальные фолликулы образуются на ранних стадиях онтогенеза. Ко времени полового созревания у телки количество их составляет около 75 тыс. Примордиальный фолликул состоит из овоцита, который покрыт одним слоем фолликулярного эпителия и окружен базальной мембраной. Около 98% примордиальных фолликуллов в течение репродуктивного периода погибает, около 2% достигает стадии первичного и вторичного фолликулов и только несколько десятков развивается в граафов пузырек и подвергается овуляции. Все начавшие развитие, но не достигшие овуляции фолликулы подвергаются атрезии.
Первичный фолликул характеризуется пролиферацией фолликулярного эпителия, из однослойного он становится многослойным, превращается в так называемую гранулезу, или зернистую оболочку. Вторичные фолликулы характеризуется дальнейшим ростом, появляется доминантный фолликул. Это один из фолликулов, опережающий в росте остальные. У него формируется оболочка тэка, состоящая из внутреннего слоя (theca interna) и наружной соединительнотканной оболочки (theca externa). Между клетками гранулезы появляются полости. Фолликулы, которые достигают антральной стадии, то есть содержат жидкость в своей полости, могут увеличиваться до стадии граафова пузырька и овуляции.
В третичных фолликулах отдельные пространства между клетками гранулезы сливаются, образуется единая полость, заполненная фолликулярной жидкостью. Яйцеклетка оттесняется к стенке фолликула. Клетки гранулезы, окружающие овоцит, называются лучистым венцом (corona radiata). Скопление клеток гранулезы, на которых расположена яйцеклетка называется яйценосным холмиком. Перед овуляцией яйцеклетка отрывается от яйценосного холмика и свободно плавает в фолликулярной жидкости. Третичные фолликулы (граафовы пузырьки) - это крупные образования, величина их достигает у коров -1-2 см.
Репродуктивные ткани у коров, включая овариальные фолликулы и желтое тело — одни из наиболее быстро растущих тканей у взрослых коров, а также являются одними из немногих тканей взрослого организма с проявлением периодического и динамического роста и регрессии. До недавнего времени было мало известно о временных связях между растущими и регрессирующими фолликулами во время полового цикла из-за трудностей изучения быстро растущих и регрессирующих тканей in vitro. Использование трансректального ультразвукового исследования способствовало разъяснению природы антрального фолликулярного развития у крупного рогатого скота (Ginther О.J., Kastelic J.P., Knopf L., 1989; Ginther O.J., Wiltbank M.C., Fricke P.M. et al., 1996). Использование ультразвука является средством измерения овариальных фолликулов, вне зависимости от глубины их нахождения в яичниках, при этом удается выявить фолликулы, начиная с трех миллиметров.
Исследования с использованием ультразвука показали, что фолликулярный рост происходит в волнах, при этом кульминацией каждой волны является формирование доминантного фолликула. Фолликулярная волна начинается с появления группы малых антральных фолликулов непосредственно перед днем овуляции. В течение следующих нескольких дней один из фолликулов данной группы продолжает расти и становится доминирующим, сдерживая, тем самым, появление новой фолликулярной волны. По мере роста доминирующего фолликула рост оставшихся фолликулов в данной группе
и
приостанавливается или замедляется и эти второстепенные фолликулы, по всей видимости, переживают атрезию. Вторая волна роста происходит примерно на 10-й день после овуляции а циклы третьей дополнительной волны появляются на 16-й день. Для циклов второй и третьей волны третичный фолликул возникает от последней волны. Продолжительность волны и максимальный размер доминирующего фолликула во время первой волны являются сходными для циклов второй и третьей волны. Продолжительность волны короче и доминирующий фолликул меньше во время второй волны цикла с тремя волнами, по сравнению с первой волной.
Первые результаты после использования ультразвука показали, что количество фолликулярных волн в цикле коров варьирует. У некоторых животных во время каждого полового цикла проявляется 2 волны, в то время как у других — 3 последовательные волны фолликулярного роста (Ginther O.J., Kastelic J.P., Knopf L., 1989).
На месте овулировавшего фолликула образуется новая железа внутренней секреции - желтое тело. Если яйцеклетка, вышедшая из фолликула, оплодотворится, то желтое тело будет функционировать дальше и будет называться желтым телом беременности, если беременность не наступит, то желтое тело претерпевает обратное развитие и, в этом случае, будет называться желтым телом цикла (Токин Б.П., 1987; Буянов А.А., 1994; Черемисинов Г.А., 1994; Валькович Э.И., 2003; Еремин СП., 2002, 2004).
Второй функцией яичников является гормональная. Она заключается в образовании половых гормонов стероидной природы. В структурах яичников образуются эстрогены и прогестерон. Стероидогенез происходит по общей схеме: холестерин - прегненолон - прогестерон - андрогены - эстрогены. Синтез до андрогенов идет во внутреннем слое тэки (theca interna), конверсия в эстрогены - в гранулезе. В клетках желтого тела стероидогенез идет до прогестерона (Хантер Р.Х., 1984; Прокофьев М.И., 1983; Гордон А., 1988; Остин К., Шорт Р., 1988).
Сущность заболевания и его распространение
Результаты многочисленных исследований показывают, что весомая роль в недополучении приплода отводится симптоматическому бесплодию, в основе которого лежат гинекологические заболевания (Зверева Г.В., Хомин СП., 1976; Студенцов А.П., Шипилов B.C. и др., 1987; Шишлов B.C., Чирков В.А., 1987; Варганов А.И., 2000; Гончаров В.П., Карпов В.А., 1991; Ми-сайлов В.Д., Нежданов А.Г., Иноземцев В.П., 2000 и др.).
К наиболее распространенным гинекологическим заболеваниям у коров относится гипофункция яичников. До настоящего времени это название не отражает полной сути расстройства и имеет собирательный смысл.
Можно выделить два основных подхода к определению этой патологии. По первому под гипофункцией понимают такое состояние яичников, когда на них отсутствуют желтые тела и фолликулы, однако явления атрофии при этом не наблюдается и клинически регистрируют анафродизию (Буянов А.А., 1984; Гончаров В.П., Карпов В.А., 1991).
Близкое определение патологии дают Чомаев A.M., Клинский Ю.Д. (2000), Шириев В.М. с соавтор. (2000). Гипофункция яичников является обратимым эндокринным заболеванием, которое проявляется отсутствием половой цикличности. При пальпации яичники мелкие, однородной плотной консистенции, с гладкой или шероховатой поверхностью, лишенной фолликулов и желтых тел. При этом авторы выделяют три степени развития патологии. Во втором подходе гипофункция яичников трактуется шире (Валюш-кин К.Д., Медведев Г.Ф., 1997). По мнению авторов, сущность данной патологии заключается в том, что у яичников снижаются генеративная и гормональная функции: это проявляется ановуляторными половыми циклами, а в наиболее выраженных случаях - анафродизией.
При этом авторы рассматривают гипофункцию половых желез как но зологическую форму в группе дисфункций. Такой же точки зрения придерживался Полянцев Н.И. (1989, 1990, 1991), но в последних своих работах он приближается к первой концепции (Полянцев Н.И., 2002).
Мисайлов В.Д., Нежданов А.Г., Иноземцев В.П. (2000) еще расширяют понятие гипофункции яичников. Ученые считают, что эта нозологическая форма характеризуется нарушением развития и созревания фолликулов, их овуляции и формирования желтого тела. Данная патология может проявиться в виде персистенции фолликула и задержки овуляции, ановуляторного полового цикла, гипоплазии и недостаточной функции желтого тела, образующегося на месте овулировавшего фолликула, или полной депрессии функции половых желез и длительной анафродизии.
Выработка единого подхода к определению нозологической формы с учетом ее патогенетических особенностей могла бы облегчить практическую работу по ее диагностике и лечению. В структуре гинекологической патологии у коров гипофункция яичников занимает ведущее место. Процент заболеваемости варьирует в зависимости от сезона, климатической зоны, экологического благополучия территории, продуктивности стада, возраста животных, методики подсчета (от числа бесплодных или числа растелившихся коров), но всегда имеет высокий уровень.
Черемисинов Г.А. (1986) отмечает, что в хозяйствах с промышленной технологией производства молока эта патология регистрируется у 4-15% растелившихся коров. В исследованиях Шейкина В.Н., Клинского Ю.Д. (1994) выявлено, что в высокопродуктивных стадах гипофункция яичников обнаруживается у 16-28% растелившихся коров.
По данным Осетрова А.А. (1988) в зимние месяцы гипофункция яичников наблюдается у 34,9 %, а летом у 19,19 % бесплодных коров. В исследованиях Шириева В.М. (2001) установлено, что в условиях Башкирии процент коров с гипофункцией гонад составляет около 50. Попов Л.К., Попова М.К. (1994) в разные сезоны года диагностировали гипофункцию яичников у 5,8-28,6% обследованных бесплодных коров; Те-решенков А.С. (1994) - у 38,2-41,1%. Наиболее часто неактивные яичники диагностируются у молодых животных между 48-м и 60-м днями после отела: в 27-71 % случаев гипофункцию выявляют по первой и второй лактации, в 2- 3 % - по третьей (Шириев В.М., Лопарев В.И., Титова В.А., 2000).
По данным Грига Э.Н. (1997) в Ставропольском крае в разных агроклиматических зонах гипофункция яичников регистрируется у 21,9-34,6% коров.
В условиях техногенно-загрязненных территорий Среднего Урала в структуре гинекологической патологии во всех обследованных стадах ведущее место занимают гипофункция и дисфункции половых желез (36,4-52,7%), при этом наиболее высокий уровень данной патологии регистрируется у первотелок. В этой возрастной группе гипофункция яичников диагностирована у 68,2-80,4% исследованных животных. У коров выявлены кисты ." яичников, ановуляторные половые циклы, широко распространена задержка овуляции (Колчина А.Ф., Шкуратова И.А., 1998; Колчина А.Ф., 1999, 2000; Семенова Н.Н., 1999; Таранова Л.А., 2000; Зуев А.А., 2000; Головырских В.А., 2002).
Таким образом, в определении гипофункции яичников существует две основные концепции. Согласно первой, заболевание проявляется отсутствием половой цикличности; согласно второй, данная патология включает также и неполноценные половые циклы. Высокий уровень гипофункции яичников в молочных стадах свидетельствует об актуальности темы и необходимости дальнейшего ее изучения.
Распространение и структура гинекологической патологии у коров в хозяйствах Свердловской области
Для выяснения распространения заболеваний органов репродуктивной системы в базовых хозяйствах Свердловской области было проведено статистическое исследование первичной ветеринарной документации.
В агрофирме «Уральская» анализ заболеваемости коров, проведенный на основании учетной и отчетной документации, показал, что в хозяйстве в общей структуре акушерской и гинекологической патологии значительный процент составляют послеродовые эндометриты (21,9%), субинволюция матки (42,42%), задержание последа (14,2%), кисты яичников (12,5%).
В совхозе «Богословский» среди коров отмечается значительное распространение заболеваний родов и послеродового периода. Задержание последа по стаду составило за анализируемый период 13,30%), субинволюция матки - 27,41%о, эндометриты - 39,21%. Среди гинекологических заболеваний ЧаСТО регистрируется ГИПОфуНКЦИЯ ЯИЧНИКОВ (11,23%)), кисты яичников (5,78% ), хронические эндометриты (11,01 % ).
Анализ заболеваний репродуктивной системы коров в учхозе «Уралец» по данным учетной и отчетной документации показывает, что значительный процент в структуре патологии приходится на долю задержаний последа (23,50%), субинволюции матки (27,62%), эндометритов (31,26%). Среди гинекологической патологии распространены гипофункция яичников (10,14%), кисты (3,04 %), хронические эндометриты (6,5 %). Результаты этого этапа нашей работы показывают, что заболевания репродуктивной системы у маточного поголовья в хозяйствах Свердловской области имеют широкое распространение.
Структура гинекологической патологии в хозяйстве изучалась на основании результатов гинекологической диспансеризации, которой подвергались коровы, не осемененные более 40-50 дней после родов или осемененные, но не оплодотворившиеся.
По результатам гинекологической диспансеризации животные делились на три группы. В первую группу включались коровы с неспецифическими воспалениями половых органов: хронические эндометриты, пара- и периметриты, сальпингиты, оварииты. Вторую группу составляли животные с функциональными расстройствами яичников - гипофункцией, фолликулярными и лютеиновыми кистами, ановуляторными половыми циклами, перси-стентным желтым телом, а также с дисфункциями матки. В третью группу вошли коровы, у которых при клиническом исследовании патологии половых органов обнаружено не было.
Гинекологической диспансеризации в агрофирме «Уральской» было подвергнуто 179 коров. Установлено, что уровень гинекологической патологии составляет 55,9%, преимущественно встречаются нарушения функционального характера (45,8%), хронические воспалительные заболевания регистрируются реже (10,1%) (таблица 2). В совхозе «Богословский» заболевания репродуктивных органов выявлены у 47,68% обследованных бесплодных коров: в 31,31 % случаев - хронические воспалительные заболевания, в 27,57% - дисфункции яичников.
При проведении гинекологической диспансеризации в учхозе «Уралец» диагностированы хронические воспалительные заболевания (преимущественно хронический эндометрит) у 27,27%) животных, дисфункции яичников и матки у 38,97%о. У остальных животных патологии репродуктивных органов не выявлено. Как было отмечено в обзоре литературы, в генезе функциональных расстройств яичников лежит нарушение неирогуморальнои регуляции, одной из главных причин которого является воздействие неблагоприятных факторов среды, в первую очередь, качественной неполноценности рационов. Высокий процент животных в третьей группе, где клинически выраженных изменений в половых органах не установлено, свидетельствует о погрешностях в организации или технологии искусственного осеменения коров.
В соответствии с задачами исследования отдельно был проведен анализ структуры дисфункций репродуктивной системы (таблица 3).
Полученные результаты показывают, что ведущее место в структуре занимают гипофункциональные состояния половых желез и сочетанное проявление гипофункции яичников с хронической субинволюцией (атонией) матки. При этом сочетанное клиническое проявление дисфункций отмечалось преимущественно у коров старших возрастных групп, а у коров-первотелок при гипофункции яичников патология матки не диагностировалась.
Таким образом, эти данные подтверждают актуальность проблемы и необходимость дальнейших исследований по повышению эффективности терапии и профилактики гипофункции яичников у коров.
Препарат «Пребиостим» для лабораторных исследований и клинических испытаний готовили в лабораторных условиях на базе производственного отдела Свердловской областной ветеринарной лаборатории. При приготовлении препарата «Пребиостим» за основу была взята технология изготовления тканевого препарата из плодных оболочек коров «Био-стимульгина-СВЧ» (патент на изобретение РФ № 2138273 «Способ получения биостимулятора из плаценты коров»). Сырьём для изготовления препарата служили плодные оболочки 4-5-месячных плодов крупного рогатого скота, не имеющие патологических изменений тканей, полученные от убойных животных на Екатеринбургском мясокомбинате.
Оболочки погружали в чистую стеклянную банку, плотно закрывали и выдерживали в течение 2 суток при температуре 2-4 С, после чего подвергали обработке микроволновым излучением. Для получения микроволновой энергии в наших исследованиях использовали СВЧ-печь, изготовленную в акционерном обществе «Титан». Потребляемая мощность установки 1400 Вт, активная мощность рабочей камеры 850 Вт. Печь работает на частоте 2450±0 МГц. Микроволновый прогрев производили циклами по 15-20 мин., выделившуюся за цикл жидкую фракцию сливали, объединяли и использовали все слитые фракции.
Жидкую составляющую отделяли самотёком. Использовали пароварку с перфорированным дном, которая изготовлена из стекла, пропускающего без поглощения и изменения микроволны. Объём загружаемых тканей, установленный опытным путем, не должен превышать 1,5-2 кг для максимального отделения жидкости.
Терапевтическая эффективность препарата «Пребиостим» при гипофункции яичников у коров
В соответствии с задачами исследований научно-производственный опыт по изучению терапевтической эффективности препарата «Пребиостим» при гипофункции яичников был проведен на коровах-первотелках на селекционной ферме агрофирмы «Уральская». При формировании групп учитывали данные о течении у животных родов и послеродового периода, а также продуктивность. Животные были подвергнуты гинекологическому исследованию с целью диагностики гипофункции яичников, изучения особенностей клинического течения заболевания и определения факторов риска в развитии патологии. Характеристика коров опытной и контрольной групп представлена в таблице 13. Анализ течения родов и послеродового периода показал, что родовспоможение в связи со слабыми схватками и потугами оказывалось 22,22% коров контрольной группы и 27,78% животных опытной группы; третий период родов у всех животных протекал физиологически, средняя продолжительность последового периода составила 4,58-5,10 часов. Послеродовые заболевания у опытных коров диагностировались в 27,78-33,33% случаев.
Среднесуточная продуктивность коров в первый месяц лактации составила 27,6-28,2 кг, а на начало опыта - 30,2-30,8 кг молока. Эти данные позволяют считать, что одним из факторов риска в отношении развития гипофункции яичников является высокая молочная продуктивность. В частности, срыв компенсаторных механизмов в связи с лактационным стрессом вызвать соче-танную патологию эндокринной и иммунной систем. При проведении трансректального исследования опытных животных было обнаружено, что состояние половых органов варьирует в незначительных пределах. У всех животные завершилась послеродовая инволюция матки, размеры, симметричность, тонус рогов матки преимущественно соответствуют физиологической норме. Следует отметить, что уменьшение размеров матки и смещение ее в каудальную часть тазовой полости было выявлено только у двух животных. Половые железы уменьшены в объеме (0,5-0,8x2-2,5 см), плотной консистенции с гладкой поверхностью, фолликулы и желтые тела в них не пальпируются. Для подтверждения диагноза шести коров каждой группы были проведены исследования по определению прогестерона и эстрадиола в сыворотке крови методом твердофазного гетерогенного ИФА (таблица 14). Приведенные в таблице показатели подтверждают гипофункциональ-ное состояние половых желез у обследованных животных. Так, снижение уровня эндогенного прогестерона является одним из характерных признаков гипофункции.
При этом необходимо отметить, что уровень прогестерона менее 0,5 нг/мл (1,59 нмоль/л), можно расценивать как показатель глубоких нарушений функции гонад. При изучении иммунного статуса коров с гипофункцией яичников использовалась группа сравнения, которая включала 12 клинически здоровых животных (таблица 15). Изучение функционального состояния В и А звеньев иммунитета на системном уровне показало, что у коров с гипофункциональными расстройствами яичников было снижено количество лейкоцитов, Т- лимфоцитов, повышено содержание в сыворотке ЦИК, кроме того был снижен ответ нейтро-филов на стимуляцию зимозаном и резерв их функциональной активности. В целом направленность изменений в иммунном статусе свидетельствует об иммунодефицитном состоянии у коров при данной патологии, требующем коррекции. После проведенных диагностических исследований по принципу аналогов было сформировано две группы коров-первотелок по 18 голов в каждой. Всем животным в течение курса лечения внутримышечно вводили тетравит 2 раза по 7,0 мл на голову и проводили трансректальный массаж внутренних половых органов. Животным опытной группы дополнительно подкожно трехкратно вводили «Пребиостим» в дозе 20,0 мл. Главным показателем эффективности лечения считали нормализацию клинических параметров. Включение иммуномодулирующего препарата в комплексную терапию гипофункции яичников, протекающей в сочетании с вторичной иммунной недостаточностью, позволило добиться высокого клинического эффекта. В первую очередь на это указывают сроки восстановления половой цикличности. К концу курса лечения улучшение клинических показателей отмечено у животных обеих групп. Изучение динамики восстановления функции яичников у коров опытных и контрольной групп показало, что к тридцатому дню после начала лечения в опытной группе клинические признаки стадии возбуждения проявили 94,4% животных, в контрольной группе - только 66,67%.
В первые десять дней после обработки пришли в охоту 38,89 коров в группе, где в качестве неспецифической стимулирующей терапии использовался «Пребиостим»; в контрольной группе в этот срок проявили охоту 11,11 коров. С 10-го по 20-й дни было осеменено в опытной группе - 33,33%, в контрольной - 22,22% коров. С 20-го по 30-й дни в опытной группе возобновились половые циклы еще у 22,22% животных, в контрольной - у 33,33%. К сороковому дню в опытной группе были осеменены все животные. Данные, представленные на рисунке 14, наглядно отражают смещение сроков клини ческого проявления признаков стадии возбуждения у коров после применения «Пребиостима» в сторону снижения. Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что применение «Пребиостима» повышает результативность стимуляции функции яичников. Результаты иммунологического исследования крови коров через 2 недели после курса лечения приведены в таблице 16. Из полученных результатов следует, что у коров опытной группы после применения препарата «Пребиостим» отмечена тенденция к повышению количества лейкоцитов, достоверное увеличение абсолютного количества лимфоцитов, процента Т- лимфоцитов, снижение уровня циркулирующих иммунных комплексов. Кроме того, установлено повышение функциональной активности нейтрофилов в спонтанном НСТ-тесте и повышение ответа нейтрофилов на нагрузку в индуцированном НСТ-тесте.
Профилактика гипофункции яичников у коров с использованием «Пребиостима» и препаратов-аналогов гонадолиберинов
Это подтверждают и количественные показатели - сроки восстановления половой цикличности и оплодотворяемость животных от первого осеменения, которые представлены в таблице 25. При оценке этих показателей установлено, что период от отела до восстановления полового цикла у коров первой и второй опытных групп был короче, чем у интактных животных на 14,17 и 21,93 дня соответственно. Более высокая оплодотворяемость от первого осеменения также была у коров второй опытной группы. Таким образом, проведенные нами исследования показали высокую профилактическую эффективность при гипофункции яичников препарата-аналога гонадолиберинов «Фертагила» и сочетанного применения этого препарата с иммуномодулятором из плаценты коров «Пребиостим». Результаты исследований в ООО «Совхоз Богословский». В данном научно-производственном опыте использовался препарат «Пребиостим» и препарат-аналог гонадолиберинов «Сурфагон» производства фирмы «Мосагро-ген». Исследования выполнены на трех группах коров-аналогов по 18 голов в каждой. Формирование групп проводили аналогично первому опыту. Коровам первой опытной группы на 10-12 день после отела вводили препарат «Сурфагон» 4,0 мл на голову. Животным второй опытной группы дополнительно подкожно двукратно вводили «Пребиостим» в дозе 20,0 мл. Контрольным животным профилактическая обработка не проводилась. Динамика восстановления функции яичников после родов у коров опытных и контрольной групп имела такие же тенденции, как и в первом опыте, но с меньшими колебаниями показателей между группами. Так, к сороковому дню после отела в группе, где применяли сочетанную обработку препаратами «Сурфагон» и «Пребиостим» половые циклы возобновились у 83,3% животных; в группе, где применяли «Сурфагон», к этому сроку возобновились половые циклы у 72,2% коров; в контрольной группе эффективность профилактики была равна 44,4%. Трансректальное исследование половых органов у животных с не восстановившимися половыми циклами, выполненное на 40-й день после родов, подтвердило гипофункциональное состоянии половых желез у 66,7%. Полученные в этом опыте результаты показывают, что применение отечественного препарата-аналога гонадолиберинов «Сурфагон» в сочетании с «Пребиостимом» в послеродовой период эффективно профилактирует развитии гипофункции яичников. На это указывают и количественные параметры - сроки восстановления половой цикличности и ошюдотворяемость животных от первого осеменения, которые представлены в таблице 26. При оценке этих показателей, установлено, что период от отела до восстановления полового цикла у коров первой и второй опытных групп был короче, чем у контрольных животных на 7,99 и 12,07 дня соответственно. Оп-лодотворяемость от первого осеменения у коров второй опытной группы также была выше - в 1,5 раза по сравнению с контролем и в 1,2 раза по сравнению с первой опытной группой. Результаты сравнительного анализа данных, полученных в научно-производственных опытах в агрофирме «Уральская» и в ООО «Совхоз Богословский», представлены на рисунках 18 и 19. Они наглядно отражают, что профилактическая эффективность при гипофункции яичников препаратов-аналогов гонадолиберинов «Фертагил» и «Сурфагон», а также их сочетанного применения с иммуномодулятором из плаценты коров «Пребиостимом» вполне сопоставима.
