Содержание к диссертации
Введение
I Обзор литературы 8
1.1 Комплекс респираторных болезней свиней 8
1.2 Этиология гемофилезного полисерозита 15
1.3 Эпизоотологические особенности и патогенез гемофилезного полисерозита18
1.4 Клинические признаки и патологоанатомическая картина гемофилезного полисерозита 22
1.5 Профилактика и лечение 24
1.6 Применение аэрозольной дезинфекции 29
II Материалы и методы 35
III Результаты исследований 41
3.1 Мониторинг инфекционных болезней свиней на территории Удмуртской Республики 41
3.2 Патоморфологические изменения при гемофилезном полисерозите 43
3.3 Результаты бактериологических исследований на гемофилезный полисерозит 54
3.4 Общий анализ крови у поросят с признаками гемофилезного полисерозита 57
3.5 Иммунобиохимические показатели у поросят при ассоциативной форме гемофилезного полисерозита 65
3.6 Аэрозольная санация животноводческого помещения 74
3.7 Получение и испытание опытной гипериммунной сыворотки при ассоциативной форме гемофилезного полисерозита 79
IV Обсуждения 83
Выводы 106
Практические предложения 107
Список литературы 111
Приложения 133
- Комплекс респираторных болезней свиней
- Применение аэрозольной дезинфекции
- Общий анализ крови у поросят с признаками гемофилезного полисерозита
- Получение и испытание опытной гипериммунной сыворотки при ассоциативной форме гемофилезного полисерозита
Введение к работе
Актуальность темы. Обеспечение благополучия свиноводства в отношении инфекционных болезней является одной из наиболее ответственных задач ветеринарной службы страны. Инфекционные болезни молодняка свиней в большинстве случаев характеризуются чрезвычайно быстрым распространением, сложной, часто смешанной этиологической структурой, наличием возбудителей бактериальной и вирусной природы (Гречухин А.Н., 2000; Рубинский И.А., 2005). Успешная борьба с инфекционными болезнями невозможна без объективной оценки эпизоотической ситуации и определения этиологического значения выделяющихся микроорганизмов (Гаффаров Х.З., 1993; Шахов А.Г., 2002; Куриленко А.Н., 2005).
В условиях интенсивного ведения свиноводства увеличивается риск возникновения как моно -, так и смешанных инфекций среди свиней различных возрастных групп, вызываемых вирусами и бактериями на фоне многочисленных нарушений технологии содержания и кормления, а также стрессовых ситуаций (Гаффаров Х.З., 2003; Бригадиров Ю.Н., 2011; Крысенко Ю.Г., 2011).
Необходимо отметить, что из респираторных болезней свиней бактериальной и вирусной этиологии наиболее проблемные – легочные пастереллезы, гемофилезная плевропневмония, энзоотическая пневмония, респираторно-репродуктивный синдром и гемофилезный полисерозит (Щербаков А.В., 2003;Ширяев Ф.А. с соавт., 2005; Шахов А.Г., 2007; Орлянкин Б.Г., 2007). На сегодняшний день гемофилезный полисерозит распространен повсеместно и является основной вторичной инфекцией при цирковирусной инфекции свиней (Кузьмин В.А. с соавт., 2009).
Несмотря на имеющиеся определенные успехи по изучению отдельных вирусных и бактериальных инфекций, поражающих респираторный тракт, вопросы эпизоотологии, клинико-патоморфологических особенностей и патогенеза, при которых гемофилезный полисерозит выступает одним из основных агентов при респираторных инфекциях свиней, изучены недостаточно.
Цели и задачи исследований. Изучить роль гемофилезного полисерозита при смешанных респираторных болезнях в промышленном свиноводстве на территории Удмуртской Республики и разработать эффективные методы его профилактики.
Для достижения целей были поставлены следующие задачи:
- проанализировать эпизоотическую ситуацию по инфекционным заболеваниям с респираторной патологией, в условиях промышленного ведения свиноводства;
- выделить возбудителя гемофилезного полисерозита из патологического материала, изучить его морфологические, биохимические и патогенные свойства, провести серотипизацию и определить чувствительность к антибиотикам;
- определить патоморфологические изменения во внутренних паренхиматозных органах;
- выявить изменения в морфологических и иммунобиохимических показателях крови;
- изучить эффективность трех групп дезинфектантов при аэрозольном способе обработки помещения в присутствии животных;
- разработать оптимальную схему получения гипериммунной сыворотки и определить ее эффективность при гемофилезном полисерозите свиней.
Научная новизна. Впервые определена эпизоотическая ситуация по гемофилезному полисерозиту свиней в ряде хозяйств Удмуртской Республики. Изучены морфологические, биохимические свойства и степень патогенности выделенных культур возбудителя, проведена их типизация. Проанализированы клинико-эпизоотологические особенности проявления гемофилеза свиней в условиях промышленного свиноводства. Установлен характер влияния гемофилеза на морфологические и биохимические показатели крови, на гистологические структуры в паренхиматозных органах заболевших животных.
Предложена и определена сравнительная эффективность аэрозольной санации помещения в присутствии животных с применением современных экологически безопасных дезинфицирующих средств.
Показана эффективность опытно-производственной серии биопрепарата - гипериммунной сыворотки для профилактики и лечения гемофилезного полисерозита в ассоциации с цирковирусной инфекцией и репродуктивно-респираторным синдромом свиней в сравнении со стандартной схемой лечения.
По результатам исследований зарегистрирована заявка на получение патента РФ «Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилезного полисерозита свиней, цирковирусной инфекции и репродуктивно-респираторного синдрома» №2012117465(026316) от 26.04.2012 года.
Теоретическая и практическая значимость работы. Определение типовой принадлежности возбудителя гемофилезного полисерозита свиней позволяет проводить специфическую профилактику данного заболевания, которое занимает доминирующее место в респираторной патологии. Установленные объективные отклонения морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови у больных поросят в сравнении со здоровыми показывают глубину патологического процесса. Внедрение в технологический цикл производства научно-обоснованного способа аэрозольной санации помещения в присутствии животныхспособствует значительному сокращению затратна другие химиотерапевтические препараты. Разработаны и утверждены нормативно-технические документы по изготовлению и применению гипериммунной сыворотки при ассоциативной форме гемофилезного полисерозита.
Результаты научных исследований и разработанные способы профилактики гемофилезного полисерозита используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами, при изучении дисциплины «Ветеринарная микробиология», слушателями ФПК и ветеринарными специалистами свинокомплексов Удмуртской Республики.
Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных всероссийских научно-практических конференциях в ФГБОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия» в 2010-2013 гг. и на других международных, всероссийских, межвузовских конференциях в гг. Ижевске, Казани, Новосибирске.
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 14 научных работ в научных журналах и материалах сборников Международных и Всероссийских научно-практических конференций, из них 5 публикаций в изданиях из Перечня ведущих рецензируемых научных журналов ВАК РФ.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 154 страницах и включает: общую характеристику работы, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы. Работа иллюстрирована 25 рисунками, 15 таблицами. Список литературы включает 213 источников, в том числе 101 иностранных.
Комплекс респираторных болезней свиней
Комплекс респираторных болезней свиней (PRDC - porcine respiratory disease complex) это условный описательный термин, объединивший в себе массовое проявление респираторного синдрома у поросят групп доращивания и откорма со следующими клиническими признаками: кашель, длительные пневмонии, часто переходящие в хроническую форму, замедление или прекращение роста поросят, снижение потребляемости кормов (Волков И., 2008; Кукушкин С.А., 2008).
PRDC проявляется у свиней на стадиях доращивания и откорма, однако, возраст, при котором это комплексное заболевание имеет место, сильно варьирует. В США об этом заболевании в основном сообщают у свиней в возрасте от 14 до 20 недель жизни. В странах Европы проблема часто возникает на этапе доращивания (8-Ю недель) или на раннем этапе откорма (10-15 недель). В России респираторный симптомокомплекс наблюдают, начиная с 35-го дня жизни поросят и вплоть до середины откорма (Волков И., 2008).
По данным обследований, проведенным сотрудниками Всероссийского научно-исследовательского института защиты животных (ВНИИЗЖ), НАРВАК и представительством компании Пфайзер (США) в 36 свиноводческих хозяйствах различных регионов России, респираторные болезни свиней встречаются повсеместно и наносят огромный экономический ущерб, обусловленный падежом (до 30%) и выбраковкой животных, а также недополучением продукции из-за снижения их темпов роста и привесов. Переболевает до 70% поголовья, причем наиболее часто и тяжело страдают поросята в возрасте 27-90 дней. Ведущую роль в этиологии респираторных болезней свиней играют бактерии - они не только вызывают тяжелые поражения респираторного тракта, но также осложняют течение вирусных инфекций и паразитарных инвазий, что часто определяет их исход. Результаты лабораторных исследований патологического материала и сыворотки крови свиней с респираторным синдромом показали, что в хозяйствах наиболее распространены следующие патогенные бактерии: Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis, Pasterella multocida и Mycoplasma hyop-neumoniae, часто находящиеся в ассоциации друг с другом и вирусами (Тетерин И.А., 2007).
Ряд исследователей (Thacker E.L., 2001; Segales J.,2004; Madsen M.,2006) считают, что ведущую роль в этой патологии играют Mycoplasma hyopneumoniae и вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней, другие ученые (Kim J., 2003; Kohne К.,2006; Thacker В.,2000; Timina A.M., 2005) также сообщают о значительной роли в этой патологии цирковируса свиней типа 2 (ЦВС-2).
Все вирусные респираторные патогены в зависимости от способности вызывать заболевание подразделяют на три группы (Ilalbur P.G., 1998). В первую входят основные, или первичные, патогены, индуцирующие клинические признаки и поражения легких. К этой группе относят вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней (РРСС), цирковирус свиней типа 2 (ЦВС-2), вирус гриппа свиней (ВГС), вирус болезни Ауески (ВБА) и респираторный коронавирус свиней (РКВС).
Во вторую группу входит цитомегаловирус свиней, который циркулирует практически во всех свиноводческих хозяйствах, однако патогенное действие он проявляет только у поросят с низким иммунным статусом и при инфицировании их вирусами или бактериями.
Третья группа включает вирусы, редко обнаруживаемые при респираторных болезнях и играющие второстепенную роль в патологии респираторного тракта. В эту группу входят парамиксовирус, парвовирус, аденовирус, реовирус и вирус эн-цефаломиокардита свиней.
Наиболее широко в хозяйствах циркулируют вирусы РРСС и ЦВС-2. Они играют главную роль в развитии респираторных болезней. Вирус РРСС впервые изолирован голландскими исследователями в 1991 г. (Wensvoort G., 1991). Выделенные в дальнейшем в различных странах мира штаммы вируса РРСС отличались разной вирулентностью, антигенной структурой и последовательностью нуклеотидов в геномной РНК. Обнаружены два генотипа вируса РРСС - европейский и американский; первый циркулирует в странах Европы, а второй - в странах Северной Америки и Азии. Однако недавно европейский генотип вируса был изолирован от свиней в США, Канаде и Таиланде, а американский - в Словакии (Yoon К J., 2003; Thanawongnuwech R. et al., 2004).
Вирус РРСС длительно персистирует в организме свиней. Его обнаруживают в крови в течение 35-56 дней после заражения, в сперме - 92, в миндалинах - 251 дня (Madsen K.G. et. al., 1998; Wills R.W.et al, 2003).
В 2006-2008 гг. в ряде стран мира (Китай, Вьетнам, Таиланд, Филиппины) наблюдали массовые вспышки атипичного РРСС, сопровождавшиеся высокой лихорадкой, анорексией, респираторными расстройствами, диареей, абортами, рождением мертвых и слабых поросят. Заболеваемость поросят в периоды доращивания и откорма составляла 50-100%, летальность - 20-100%. В Китае погибло более 1 млн и отбраковано около 20 млн голов свиней различного возраста. От заболевших животных выделено более 50 высокопатогенных изолятов вируса РРСС. Все они относятся к американскому генотипу, но в отличие от прототипного штамма VR-2332 имеют две делеции длиной 3 и 87 нуклеотидов в гене неструктурного белка 2 (Tong G.Z., 2007).
Вспышки атипичного РРСС в центральном регионе США в 2007 г. сопровождались очень высокой летальностью: 50-100%) среди поросят и 10-20%) среди свиноматок. Выделенный высокопатогенный штамм вируса РРСС отличается от китайских изолятов (Орлянкин Б.Г., 2005).
В России первая вспышка атипичного РРСС установлена в августе 2007 г. в Иркутской области (Кукушкин С.А., 2008). Заболевание сопровождалось массовыми абортами и рождением мертвых поросят. Впервые в Канаде в 1991 г. установили новую болезнь поросят послеотъемно-го периода, она характеризовалась отставанием в росте, истощением, одышкой, диареей, бледностью или желтушностыо кожи (Дрю Т., 2006 и др.). В связи с поражением различных систем организма заболевание назвали синдромом после-отъемного мультисистемного истощения (СПМИ). В первые 10 лет после установления СПМИ его зарегистрировали в США, Германии, Испании, Италии, Голландии, Франции, Дании, Австрии, Бельгии, Северной Ирландии, Швейцарии, Великобритании, Венгрии, Литве, Китае, Корее, Японии, Южно-Африканской Республике, Чили, Мексике (Ellis J. et al., 1998).
В естественных условиях СПМИ отмечают у 2-5-недельных поросят. В разных хозяйствах заболеваемость молодняка; обычно составляет 5-20 % (иногда 50-70%), летальность - 80-100 %. Частота заболевания находится в прямой зависимости от численности свиней в хозяйстве. При серологических исследованиях, проведенных в странах Европы и Северной Америки, специфические антитела обнаружили у свиней во многих обследованных хозяйствах, число серопозитивных животных иногда достигало 100 % (Allan G. М. et al., 1995; Krakowka S. et al., 2000, 2001). Возбудителем СПМИ является цирковирус свиней второго типа.
ЦВС-2 широко распространен практически во всех странах мира. Впервые он был изолирован из тканей поросят в 1998 г. (Allan G. М., 1998; Ellis J. et al., 1998; Meehan В. et al., 1998). ЦВС-2 активно размножается в клетках иммунной системы поросят: макрофагах, Т- и В-лимфоцитах селезенки, тимуса и лимфатических узлов. Интенсивное размножение вируса в клетках иммунной системы приводит их к гибели и развитию иммунодефицитного состояния. У таких животных создаются условия для возникновения вторичных инфекций, вызываемых условно-патогенными микробами (Segales J., 2004).
Ретроспективными исследованиями также показана широкая циркуляция вирусных и бактериальных респираторных патогенов у свиней. У поросят старше 6-недельного возраста и ремонтных свинок специфические антитела в сыворотке кро 12 ви обнаружены к 10 вирусным и бактериальным патогенам в 16-92 % случаев (Nagel G., Bilkei G.5 2003; Vargas F.D. et al., 2004).
Все бактериальные респираторные патогены в зависимости от способности вызывать заболевание подразделяют также на три группы (Stevenson G.W., 1998). В первую входят основные (первичные) вдыхаемые бактериальные патогены, при введении которых в трахею поросятам развивается пневмония. Они имеют факторы вирулентности, преодолевающие естественную защиту в легких. К этой группе относят М. hyopneumoniae, Actinobacilus pleuropneumoniae, Bordetella bronchoseptica.
Вторая группа включает второстепенные (вторичные) вдыхаемые патогены, при введении которых в трахею поросятам не развивается пневмония. Для ее развития требуются повреждения легких, обусловленные пневмотропными вирусами или микоплазмами. В эту группу входят Pasterella multocida, Heamophilus parasuis, Streptococcus suis, Mycoplasma hyorhinis.
К третьей группе относят бактериальные патогены, переносимые кровью при развитии септицемии. Это Salmonella choleraesuis, Actinobacillus suis, Actinomyces pyogenes (Arcanobacterium pyogenes) (Крысенко Ю.Г., 2011 и др).
Традиционная концепция патогенеза исходит из того, что респираторные вирусы способны размножаться в клетках респираторного тракта животного (альвеолярные макрофаги, клетки реснитчатого эпителия). В дальнейшем это приводит к местной иммуносупрессии респираторного тракта и к снижению общей иммунобиологической резистентности организма, что обуславливает развитие се-кундарной микрофлоры в респираторном тракте животного. Другими словами вирусная респираторная инфекция прокладывает дорогу для колонизации и распространения респираторных бактериальных патогенов. Это приводит к острому генерализованному проявлению респираторного симптомокомплекса свиней с высокой летальностью.
Применение аэрозольной дезинфекции
Современные методы борьбы с респираторными инфекциями достаточно разнообразны. Они включают использование антибиотиков, препаратов, губительно действующих на микрофлору в самом организме и дезинфицирующих средств, позволяющих уничтожать возбудителя во внешней среде. Многие препараты и дезинфицирующие средства рекомендованы к применению в форме аэрозолей, что обеспечивает ряд преимуществ: возможность групповой обработки, снижает расход препаратов, повышает производительность труда, обеспечивает одновременное обеззараживание воздуха, поверхностей помещения и санацию дыхательного тракта животных (Бурдов Г. Н, 2005).
В настоящее время весьма активно осуществляются разработки и испытания средств специфической профилактики комплекса респираторных болезней свиней как в нашей стране, так и за рубежом. На сегодняшний день, одним из основных и важных элементов в борьбе с инфекционными болезнями свиней является дезинфекция. Как известно, дезинфектанты снижают численность колониеобразующих микроорганизмов в несколько раз, с их помощью в короткие сроки можно свести к минимуму бактериальное давление и создать благоприятные условия для выращивания свиней (Меньшиков А.В., Крысенко Ю.Г. и др. 2010).
Содержание в одном корпусе большого количества поголовья животных создает благоприятную среду для обитания инфекционного агента. Старые дезсредства с одним действующим веществом уже не могут отвечать всем современным требованиям (Меньшиков А.В., 2010), предъявляемым к препаратам данной группы. Прежде всего, препарат должен обладать широким спектром антимикробного воздействия. Важно, чтобы экспозиция воздействия препарата была кратчайшей. Современное дезинфицирующее средство не должно вызывать коррозии металлов и повреждать другие материалы (резина, пластик), сохранять активность в присутствии органических веществ, не оказывать токсического и аллергического воздействия на животных и персонал. Эффективность применения дезинфектантов обусловлена, кроме того, простотой применения, хорошей растворимостью в воде, длительностью срока хранения, экологической безопасностью (Вашков В.И, 1956; Худяков А.А., 2011).
При этом важно, чтобы новые дезинфицирующие препараты «на отлично» выполняли свои прямые функции - снижение бактериального давления в помещениях и профилактика заболеваний, но при этом не оказывали отрицательного действия на экономические показатели и качество продукции, то есть в полной мере проявляли заботу о биобезопасности хозяйства (Краснобаев Ю.В., 2011).
Современная дезинфектология - это использование дезинфектантов, многокомпонентных по составу рецептуры с полифункциональными свойствами. Наиболее эффективными являются комбинированные дезсредства, показавшие при испытани 31 ях ряд преимуществ перед традиционно применяемым формальдегидом. Кроме того, при правильном применении комбинированных дезсредств опасность возникновения устойчивости микроорганизмов к ним является крайне низкой по сравнению с препаратами, содержащими одно действующее вещество (Банников В.Ы., 2005).
В воздушной среде закрытых свиноводческих помещений содержится большое количество разнообразных микроорганизмов, а также грибов, среди которых встречаются безвредные, условно-патогенные и патогенные виды, которые могут негативно влиять на состояние здоровья животных (Васильев В.Ф., 2010).
Наиболее эффективными являются комбинированные дезсредства, показавшие при испытаниях ряд преимуществ перед традиционно применяемым формальдегидом и хлорсодержащими соединениями, это отсутствие иммуносупрессивного действия, низкая токсичность для животных и людей, лучшая биодеградация, широкая возможность применения реагентов.
Комбинированные дезинфицирующие препараты исключают возникновение устойчивости микроорганизмов, по сравнению с препаратами содержащих одно действующее вещество. Примером современного комбинированного дезсредства служит хорошо сбалансированный препарат «Вироцид»: сочетание спирта, четвертично - аммониевых соединений (ЧАС) и глютарового альдегида (производитель Бельгия). При инактивации бактерий изопропиловый спирт способствует удалению жира и органических веществ из стенки клетки, после чего четвертично - аммониевое соединение легче проникает через бактериальную стенку, открывая путь неканцерогенному глютаровому альдегиду, который, попав в клетку, разрушает ядро (Крысенко Ю.Г., Меньшиков А.В. и др. 2010). ЧАС с производным терпентина обеспечивают хорошую смачиваемость, прекрасную пенообразующую способность, адсорбируются с анионными поверхностями почвы.
Еще одной полезной особенностью вироцида является создаваемая им буферная среда, необходимая для защиты активных компонентов от агрессивных факторов внешней среды, таких как органические загрязнения, ультрафиолетовое излучение, присутствие солей жесткости в воде или на поверхностях (Худяков А.А., 2011).
Микроорганизмы попадают в воздушную среду помещений частицами почвы, пылью, кормами, инвентарем, загрязненными веществами, с каплями слизи, мокроты, естественными выделениями животных и т.д. Общая обсемененность свиновод-ческих помещений варьирует от десятков до сотен тысяч микроорганизмов в 1м . Для обеззараживания воздушной среды используют в основном аэрозоли (Васильев В.Ф.,2010).
Аэрозоль из дезинфицирующих средств применяют для профилактической и вынужденной дезинфекции свиноводческих, подсобных помещений и оборудования, а также для санации воздуха и верхних дыхательных путей животных. Сущность дезинфекции аэрозолями заключается в том, что водные растворы химических препаратов с помощью специальных генераторов распыляются до туманообразного состояния - аэрозоля (Васильев В.Ф., 2010).
Аэрозольный метод дает возможность обрабатывать помещения без значительных затрат рабочей силы. При этом сокращается расход препаратов в несколько раз на курс терапии по сравнению с традиционными способами введения, снижается трудоемкость обработки. Затраты связанные с расходом препаратов на создание аэрозолей, полностью окупаются за счет увеличения сохранности, прироста (Бессара-бов Б.Ф., 2006). Общеизвестно, что ингаляционный путь введения препаратов, по быстроте наступления лечебного эффекта соизмерим с внутривенным путем, а в некоторых экстренных ситуациях является единственно возможным (Ахмерова Н.М, Папуниди К.Х., Мухутдинова Д.М., 2006).
Применение аэрозолей дезинфицирующих средств на основе галогенов, альдегидов в течение ряда лет привело к формированию патогенной и условно-патогенной микрофлоры с повышенной устойчивостью к дезинфектантам, а применение их в возрастающих концентрациях может усугублять экологическую обстановку и нести угрозу здоровью работающему персоналу. Актуальной задачей явля 33 ется изыскание и внедрение новых экологически безопасных и высокоэффективных технологий, обеспечивающих дезинфекцию производственных помещений. Ведущая роль отводится подбору дезинфицирующих средств, которые должны обладать широкой микробоцидной активностью, обеспечивающей в низких концентрациях подавление спор, бактерий, вирусов, грибов, короткой экспозицией, отсутствием разрушающего действия на конструкции, иметь низкую стоимость рабочих растворов, быть безопасными для людей и окружающей среды. С целью повышения качества дезинфекции в свиноводстве проводятся профилактические обработки многими современными противомикробными средствами (Трошин Е.И., Бочкаре-ваЛ.А.,2012).
Важным аспектом определяющим эффективность дезсредства является многообразие применения. Вироцид можно использовать путем распыления в виде пены (для этого необходим пенообразователь). Методом газации (как холодного так и горячего тумана). Для применения, при помощи генератора горячего тумана, обычным дезсредствам требуется внесение в рабочий раствор специального носителя, что повышает вероятность человеческой ошибки при его добавлении в требуемом количестве Вироцид готов к использованию уже с первой минуты без дополнительных реагентов. Это средство позволяет проводить дезинфекцию высокого уровня, по эффективности приближенную к стерилизации. Вироцид уже в течение длительного времени применяется в мировой практике дезобработок. Он эффективен против аспер-гиллеза, вирусов Марека, Гамборо, реовируса, Ныокаслской болезни, гриппа птиц и свиней. Вироцид является единственным в мире дезиифектантом, разрешенным Агентством по защите окружающей среды США для инактивации цирковируса свиней в разведении 1:200 (0,5 %). Цирковирус свиней - это один из наиболее устойчивых к действию дезсредств вирусов имеющих сходство с вирусом анемии птиц (Га-лыкин В.А., Заикина Н.А., 2008).
Общий анализ крови у поросят с признаками гемофилезного полисерозита
Были сформированы две группы поросят (п=20) по принципу аналогов: клинически здоровые и клинически больные с признаками кашля, одышки, отставания в росте и развитии. При сравнительном анализе крови у опытных животных на морфологические показатели отмечали достоверное уменьшение абсолютного числа эритроцитов, количества гемоглобина, объема гематокрита и возрастание скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Полученные данные отражены в таблице 4.
У животных первой опытной группы в возрасте 45 суток уровень эритроцитов со-ставил 4,72±0,4 х10 7л (Р 0,05), что достоверно ниже на 24,8% относительно показателя группы контроля 6,28±0,42 х1012/л. В возрасте 60 суток и 90 суток снижение показателя был на 41,3% и 32,6% соответственно и составило 4,08±0,81 х1012/л (Р 0,05) и 4,65±0,45 х1012/л(Р 0,01).
Показатели гемоглобина объективно снижались на втором и третьем этапе исследования. Так в возрасте 45 суток у опытных животных отмечено снижение до 85,4±6,7 г/л, что на 16,5% меньше показателя группы контроля 102,3±7,2 г/л. Во второй опытной группе наблюдалось статистически достоверное снижение уровня гемоглобина до на 18,7% и составило 89,38±7,4 г/л (Р 0,05). В возрасте 90 суток у животных опытной группы уровень гемоглобина был на уровне 83,9± 8,2 г/ л (Р 0,01), что ниже на 21,6%), по отношению к показателю контроля.
В крови опытных животных уровень гематокрита статистически достоверно снижался на всех этапах исследований. Так у животных в возрасте 45 суток он составил 26,36±1,8% (Р 0,001), что ниже на 33,6%), во второй опытной группе в возрасте 60 суток уменьшение составило на 41,9%, и составлял 22,38±1,62 % (Р 0,001). У животных опытной группы в возрасте 90 суток снижение показателя установлено до 21,87±2,06% (Р 0,001), что на 48,0% ниже относительно показателей группы контроля.
Показатель СОЭ имеет противоположную тенденцию в сторону увеличения у животных опытных групп по отношению к контрольной группы. В первой опытной группе рост показателя было до 6,04±0,17 мм/ч (больше на 26,3%), относительно показателя группы контроля 4,78±0,82 мм/ч, что является недостоверным. В возрасте 60 суток увеличение показателя было на 76,9%) и равнялось 7,52±1,25 (Р 0,05), относительно группы контроля 4,25±0,8 мм/ч. В 90 суточном возрасте показатель СОЭ повысился на 66,8% и составил 8,04±0,85 мм/ч, что достоверно больше значения показателя контрольной группы 4,82±0,3 мм/ч.
Таким образом, у животных опытных групп выявлено достоверное снижение количества эритроцитов, величины гематокрита на протяжении всех этапов исследований. Отмечено повышения уровня СОЭ в 60 и 90 суточном возрасте.
Сравнительный анализ морфологических показателей крови при ассоциированном течении гемофилезного полисерозита у опытных и контрольных животных в возрастном аспекте представлена на рис. 14,15,16, 17
Кроме определения морфологических показателей крови вьшодили лейкофор-мулу. При этом в крови больных поросят вначале исследований установлен лейкоцитоз, затем по мере развития инфекционного процесса отмечено снижение числа лейкоцитов, лимфоцитов и эозинофилов. Содержание моноцитов, нейтрофилов (юных, палочкоядерных и сегментоядерных) увеличилось. Результаты анализа приведены в таблице 5.
У опытной группы поросят в возрасте 45 суток отмечалось достоверное увеличение количества лейкоцитов на 19,0% и составляло 9,82±0,65 х10% (Р 0,05), тогда как в контрольной группе показатель был на уровне 7,95±0,45 х109/л. В возрасте 60 суток наблюдали уменьшение их числа в опытной группе 8,53±0,80 х109/л (Р 0,001), что достоверно ниже на 31,3% к показателю контрольной группы 12,41±0,47 хЮ /л, в возрасте 90 суток содержание лейкоцитов снизилось на 47,6% в опытной группе и составило 6,96±0,59 х109/л (Р 0,001), в контрольной группе данный показатель был равен 13,29±1,46 х109/л. Содержание эозинофилов уменьшилось на всех этапах исследований в 45, 60 и 90 суток в опытных группах соответственно на 21,5%, 21,0% и 35,0% в сравнении с аналогичными контрольными группами, при чем достоверность была только на последнем этапе.
В возрасте 60 и 90 суток обнаружены юные нейтрофилы на уровне 2,83%) и 3,21%) соответственно. Количество палочкоядерных нейтрофилов в возрасте 45 суток повысилось на 41,2%о и составило в опытной группе 12,50±1,04%, в контрольной группе показатель равнялся 8,85±1,94%.
В возрасте 60 суток число палочкоядерных нейтрофилов достоверно увеличилось в опытной группе на 49,1% относительно контрольной и составило 15,45±1,64 (Р 0,001). В 90 суточном возрасте количество палочкоядерных нейтрофилов достоверно повысилось на 97,3% и составило 17,9±1,23 (Р 0,001), тогда как в контрольной группе показатель был равен 9,07±1,31%.
Повышение числа сегментоядерных нейтрофилов в опытных группах достоверно на всем этапе исследований. Так в 45 суток увеличение составило на 39,4% при 42,61±2,65% (Р 0,01), в 60 суток показатель был равен 44,75±2,32% (Р 0,01), что больше относительно показателей контрольной группы на 40,1% . В 90 суточном возрасте уровень возрос на 62,7% и составило 46,7±4,51% (Р 0,01), при содержании в контрольной группе было 28,7±3,27% .
Показания моноцитов в 45 суток у опытных животных увеличились на 17,5%, в 60 суток - на 33,2% и в 90 суток - на 29,9%, что было недостоверно на протяжении всего периода исследований. Наблюдалось достоверное истощение лимфоцитов в возрастном аспекте в 45, 60 и 90 суток в опытных группах 28,46±2,12% (Р 0,05), 26,25±3,52% (Р 0,05), и 23,4±4,45% (Р 0,01), что ниже на 21,9%, 33,3% и 45,5%, относительно контрольных групп 36,45±2,71% , 39,36±4,74% и 42,93±4,32% соответственно. Содержание базофилов в крови поросят контрольных и опытных групп не выявлено.
Рассматривая динамику уровня нейтрофилов в возрастном аспекте (рис. 18) можно отметить, что увеличение палочкоядерных нейтрофилов у опытных животных в воз 63 расте 90 суток составило на 43,2%, тогда как в контроле увеличение показателя составило в 90 суток на 2,5% по сравнению с животными в возрасте 45 суток. Увеличение сегментоядерных нейтрофилов в возрасте 90 суток составило на 9,6% по сравнению с данным показателем в 45 суточном возрасте у опытной группы животных. Также в возрасте 60 суток у опытных животных выявлены юные нейтрофилы на уровне 2,8%, и к 90 суточному возрасту 90 суток их уровень повысился на 14,6%.
Анализируя динамику уровня лейкоцитов, наблюдали тенденцию к снижению данного показателя у животных опытной группы. Так в возрасте 90 суток снижение уровня лейкоцитов составило на 12,4% по сравнению со значением в 45 суточном возрасте. Уровень эозинофилов также имел тенденцию к уменьшению на всем периоде исследований, и к 90 суточному возрасту у опытных животных снижение показателя составило на 35% (рис. 19). %
Таким образом, при клинически выраженной форме заболевания поросят при ассоциативном течении гемофилезного полисерозита установлено объективное снижение абсолютного количества лейкоцитов, лимфоцитов, эозинофилов. Отмечено увеличение числа палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, что указывает на развитие воспалительных процессов в организме. Показано снижение содержания эритроцитов и гемоглобина, наблюдается умеренное повышение СОЭ.
Наступление лейкопении после непродолжительного лейкоцитоза, свидетельствует о снижении иммунной сопротивляемости организма, вследствие тяжело протекающего инфекционного процесса. Дальнейшее развитие лейкопении является также показателем пониженной реактивности организма, за счет угнетения функции кроветворения. Увеличение числа моноцитов в крови служит показателем развития иммунных процессов в организме, что свидетельствует о раздражении ретикулогистио-цитарной системы, а не о преодолении болезни.
Получение и испытание опытной гипериммунной сыворотки при ассоциативной форме гемофилезного полисерозита
С целью повышения эффективности профилактических и лечебных мероприятий, нами разработана схема получения и порядок применения гипериммунной сыворотки против гемофилезного полисерозита, ЦВИС и РРСС изготовленной в учебно-научной лаборатории биотехнологии ФГБОУ ВПО Ижевской ГСХА.
Для гипериммунизации животных была сформирована группа свинок, состоящая из 10 голов, принадлежащих ООО «Кипун» Шарканского района. Животных, предназначенных для гипериммунизации, подвергали карантинированию, проводили серологические исследования против инфекционных заболеваний согласно действующей инструкции о порядке заготовки и санитарной обработки животных, используемых для производства биопрепаратов. Гипериммунизацию свиней-продуцентов осуществляли в нарастающих дозах по разработанной схеме (табл. 13). Параллельно вводили иммуностимулятор гамавит в дозе 10 мл на голову. Интервал между введениями составлял 7 дней.
Предлагаемая схема гипериммунизации свиней-продуцентов позволяет получить высокоэффективную лечебно-профилактическую сыворотку с высокими титрами антител: в РА на ГПС - 1:512, в ИФА на ЦВИС-2 - 1:12800 и РРСС -1:25600.
Изготовление сыворотки крови осуществляли по общепринятой технологии, соблюдая правила асептики и антисептики. В лабораторных условиях проводили контроль качества готового препарата на стерильность, безвредность, апирогенность, биоактивность. Стерильность сыворотки проверяли посредством высева на питательные среды, на безвредность - путем подкожного введения испытуемой сыворотки белым мышам в дозе 0,5 см . Биоактивность сыворотки проверяли на лабораторных животных.
С целью определения иммунногенноЙ активности препарата по принципу аналогов были сформированы группы животных в возрасте 70-75 дней по 25 голов, в среднем масса тела составляла 24-26 кг. При клиническом исследовании поросят установлено отставание в росте, истощение, пониженный аппетит, кашель, взъерошениость щетины, повышение температуры тела.
С профилактической целью сыворотку применяли в дозе по 5 мл/гол внутримышечно. Повторное введение сыворотки осуществляли через 10 дней, всего до 5 инъекций. При определении экономической эффективности проведенных мероприятий, в каждой группе учитывали заболеваемость, прирост живой массы, затраты на медикаменты. Производственные показатели сравнительной эффективности применения гипериммунной сыворотки с профилактической целью приведены в таблице 14.
Анализ данных таблицы 14 показывает, что при применении опытной гипериммунной сыворотки с профилактической целью позволяет сократить заболеваемость респираторными болезнями в опытной группы была ниже на 16,0%, чем в контрольной и составила 20%. При этом повысилась сохранность до 96,0%, что на 16,0% выше, чем в контрольной группе. Среднесуточный прирост в опыте повысился на 22,7 г, относительно группы контроля.
Проводили исследования сравнительной эффективности применения гипериммунной сыворотки с лечебной целью в дозе 5 и 10 мл, результаты применения данного препарата приведены в таблице 15.
Животные первой группы служили контролем, где применяли стандартную схему лечения, применяемую в хозяйстве для больных поросят с респираторным синдромом -ветримоксии, тромексин, тетравит согласно инструкции. Вторая и третья группы были опытные, с добавлением в схему лечения гипериммунной сыворотки в лечебных целях в дозе 5 и 10 мл/гол. Повторное введение сыворотки осуществляли с лечебной целью через 48 ч., всего до 5 инъекций. Продолжительность наблюдения за животными 50 дней до перевода на откорм.
Наиболее эффективный метод лечения по результатам исследований достигнут с применением гипериммушюй сыворотки крови в дозе 10 мл. Продолжительность пере-болевания животных с применением сыворотки крови сократилась на 5 дней. Сохранность животных повысилась на 12% и составила во второй опытной группе 92%), тогда как в контрольной группе данный показатель был равен 80%). Применение гипериммунной сыворотки с лечебной целью в дозе 5 мл/гол. Оказалась менее эффективным, чем в контрольной группе.
Применение гипериммунной сыворотки с лечебно-профилактической целью позволяет снизить фактический ущерб от потери прироста живой массы на 41,14 руб. на 1 голову. Экономическая эффективность лечения на 1 руб. затрат с применением сыворотки крови в сравнении со стандартной схемой лечения повысилась на 4,16 руб. и составила 7,66 руб., с профилактической целью стала равна 8,92 руб., что на 5,42 руб. больше, тогда как в контрольной группе данный показатель был равен 3,50 руб.
Таким образом, использование гипериммунной сыворотки в производственных условиях позволяет добиваться высокой экономической эффективности при лечении и профилактике ассоциативного течения гемофилезного полисерозита, цирковирус-ной инфекции свиней и репродуктивно-респираторного синдрома.
