Введение к работе
Актуальность темы. Микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae, являющиеся обитателями желудочно-кишечного биотопа практически всех видов млекопитающих, птиц, рыб, земноводных, моллюсков, насекомых, насчитывают в соответствии с «Bergy' s manual. ..1984-1989» более 30 родов и более 100 видов. Из многочисленных представителей семейства в этиологии болезней сельскохозяйственных животных участвуют патогенные бактерии родов Salmonella, Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Proteus, Morganella, Providencia, Yersinia (Каврук Л.С, 1983, 1994, 2008; Тугаринов O.A., 1987, 1999; Пирожков М.К., 1988, 2002; Дворкин Г.Л., 1989; Гутковский А.А., 1989, 2004; Апатенко В.М., 1990; Сидоров М.А., 1991; Бритова СВ., 1997; Девришов Д.А. и соавт., 1998; Субботин В.В., 1999; Ленченко Е.М., 2000; Иванов Ю.В., 2000; Моргунова В.И., 2001; Жуков И.В., 2001; Гаффаров Х.З., 2002, 2004; Карева Э.П. и соавт., 2002; Сулейманов СМ., Слободяник B.C., 2002; Шахов А.Г., 2002, 2008; Ковальчук Н.М., Лезова А.А., 2003; 2006; Корочкин Р.Б., 2003; Щербаков А.В. и соавт., 2003; Кононенко А.Б. и соавт., 2004; Коломыцев А.А. и соавт., 2005; Конев А.В., Коткова Н.В., 2007; Kirchiner А., 1981; Sellwood R., 1982; Olssen Е.Е., 1984; Jayappa H.G., 1985; Ljesevic Z., 1987; Gyles C.L., 1994; Souza da Silva A., 2001; Wong Lo Fo et al., 2002;SimonovaJ.,2008).
При идентификации энтеробактерий родов Proteus, Citrobacter, Klebsiella, а также Escherichia, Morganella, не имеющих адгезивные антигены и не типируемых по О-антигену используют биологическую пробу, хотя не выявлено корреляции при сопоставлении результатов воспроизведения болезни на лабораторных и естественно восприимчивых животных (Каврук Л.С. и соавт., 2001). Кроме того, отсутствует корреляция между серологической группой и токсигенностью, поэтому необходимо выявлять либо адгезины, либо энтеротоксины (Скородумов Д.И. и соавт., 2005). Помимо сложностей воспроизведения и чрезвычайной продолжительности по времени исполнения с использованием различных экспериментальных моделей, основные трудности сопряжены с дифференциацией энтеробактерий, так как ферменты микроорганизмов весьма многообразны и универсальны, часто встречаются у представителей разных видов семейства. В данном аспекте при определении рода и, или, вида энтеробактерий перспективным является применение хромогенных сред (Сасова В.А., Залеских КВ., 2007; Сиволодский Е.П., 2008). Комплексных исследований по обоснованию применения хромогенных сред для индикации энтеробактерий, выделенных из патологического материала и feces поросят, для оценки эпизоотической ситуации в свиноводческих хозяйствах в доступной литературе не обнаружено, что и определило актуальность темы диссертационной работы.
Цель исследований: на основе сравнительной оценки и подбора эффективных хромогенных сред для индикации энтеробактерий оценить эпизоотическую ситуацию в свиноводческом хозяйстве.
Задачи исследований:
- изучить характеристику дифференциально-диагностических сред в
опытах с референтными штаммами энтеробактерий;
- определить эффективность хромогенных сред для индикации
микроорганизмов Е. coli на лабораторных моделях;
- мониторинг желудочно-кишечных болезней животных в свиноводческом
комплексе с применением хромогенных сред для индикации энтеробактерий;
- определить количественный и видовой состав энтеробактерий,
доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных
болезнях поросят;
изучить адгезивные, гемолитические, токсигенные свойства, чувствительность к антибиотикам и гормональным препаратам энтеробактерий, доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях поросят;
- изучить динамику гематологических и иммунологических показателей
крови и сыворотки крови при изменении количественного и видового состава
энтеробактерий в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных
болезнях поросят.
Научная новизна. Теоретически и экспериментально обоснована эффективность хромогенной среды «Chromocult Coliform agar» для количественного учета (КОЕ) и индекса колонизации (РЖ) эшерихий при экспериментальном моделировании инфекционного процесса на лабораторных моделях. Установлено, что при желудочно-кишечных болезнях поросят в микробиоценозах кишечника доминируют патогенные энтеробактерий, гематологические и иммунологические показатели характеризуются повышением гематокрита, фагоцитарной активности и общей окислительно-восстановительной способности лейкоцитов крови, уровня С-реактивного белка сыворотки крови.
Практическая значимость работы. Установлено, что для оценки эпизоотической ситуации в свиноводческих хозяйствах при индикации возбудителя эшерихиоза применение хромогенной среды «Chromocult Coliform agar» позволяет при подтверждении «теста на индол» в течение 24 ч идентифицировать и дифференцировать микроорганизмы Е. coli от таксономически сходных видов бактерий. На основе экспериментальных данных модифицирована методика подготовки препаратов для оптической и электронной микроскопии и разработаны «Методические рекомендации по подготовке препаратов для микроскопического изучения адгезивной активности микроорганизмов и фагоцитарной активности клеток крови», утвержденные академиком-секретарем отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии Смирновым А.М. (протокол № 8 от 22 июня 2010 года).
Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры инфекционные и паразитарные болезни МГУПБ (Москва, 2007-2010 гг.); на VI Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые
системы и биологическая безопасность населения» (М., 2007 г.); на VII Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М., 2008 г.); на Международной научно-практической конференции «Современные средства и методы диагностики, профилактики и лечения инфекционных, протозойних и микотических болезней сельскохозяйственных и промысловых животных, рыб и пчел» (М., 2009 г.).
Основные положения, выносимые на защиту:
эффективность хромогенной среды для индикации микроорганизмов Е. coli при экспериментальном воспроизведении инфекционного процесса на лабораторных моделях;
результаты мониторинга по желудочно-кишечным болезням свиней с применением хромогенних сред для индикации энтеробактерий;
количественный и видовой состав энтеробактерий, доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях поросят;
динамика гематологических и иммунологических показателей при изменении количественного и видового состава энтеробактерий в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях поросят.
Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 4 научных статьи, в т.ч. одна в журнале, рекомендованном ВАК Минобрнауки РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, выводов, библиографии, приложения. Работа изложена на 140 страницах компьютерного текста, содержит 15 таблиц, 10 рисунков и 1 приложение. Библиографический список включает 230 источников, из них 80 иностранных авторов.
