Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературных данных 10-55
1.1 Направления селекции перца 10-35
1.1 АСоздание салатных для свежего потребления сортов и гибридов F) 13-16
1.1.2 Пригодных для консервирования, различных сроков созревания 17-18
1.1.3 Дружно созревающих, предназначенных для безрассадной культуры и механизированной уборки 19-22
1.1.4 С улучшенным биохимическим составом плодов. 23-26
1.1.5 Выносливых и устойчивых к различным заболеваниям 27-32
1.1.6 Толерантных к неблагоприятным факторам внешней среды 33-35
1.2 Каротиноиды перца их значение, качественный и количественный состав 36-48
1.2.1 Значение каротиноидов 36-37
1.2.2 Качественный и количественный состав каротиноидов 38-44
1.2.3 Экспрессия признака «высокое содержание fi-каротина» в варьирующих условиях среды 45-46
1.2.4 Наследование признака «высокое содержание fi-каротина» в плодах 47-48
1.3 Мужская стерильность в Capsicum 49-55
2. Методика, условия проведения исследований и исходный материал 56-70
2.1 Методика 56-59
2.2 Условия исследований 60-66
2.3 Исходный материал 67-70
3. Результаты исследований 71-114
3.1 Оценка генофонда С. аппиит var. аппиит по содержанию fi-каротина 71-75
3.2 Накопления витаминов в плодах различной спелости. 76-78
3.3 Пластичность и стабильность признака «высокое содержание -каротина» в плодах 79-82
3.4 Разработка экспресс-метода определения -каротина в плодах на ранних этапах развития растений. 83-88
3.5 Создание стерильных линий с повышенным содержанием каротина с комплексом хозяйственно-ценных показателей 89-94
3.6 Наследование содержания fi-каротина и устойчивости к вертициллезному увяданию у гибридов F} 95-105
3.7 Оценка комбинационной способности по хозяйственно-ценным признакам стерильных линий сладкого перца 106-113
3.8 Экономическая эффективность использования стерильной линии Л-61/1
при получении семян гибрида Fj «Витамин» 114
Выводы 115-116
Рекомендации 117
Библиографический список. 118-131
Приложения 132-139
- Направления селекции перца
- Толерантных к неблагоприятным факторам внешней среды
- Оценка генофонда С. аппиит var. аппиит по содержанию fi-каротина
- Пластичность и стабильность признака «высокое содержание -каротина» в плодах
Введение к работе
Родина перца - Южная Мексика и Центральная Америка, где туземное
население массово выращивало его задолго до открытия Нового Света
Европейцами. Овощной перец, относящийся к виду Capsicum annuura L., в
настоящее время широко распространился из центров происхождения и
возделывается с учетом защищенного грунта практически повсеместно, и в
мировом объеме производства овощей занимает около 16 % (Тимина,
Ильенко, 1990; Лудилов и др., 1999).
Распространение перца обусловлено отличными вкусовыми,
диетическими и питательными качествами (Даскалов, 1958). Как показал
химический анализ плодов, перец практически не отличается по основным
*
химическим веществам (клетчатка, жир, белок) от других овощей. Однако по
* содержанию пектинов и витаминов перец занимает одно из ведущих мест.
Плоды содержат С, РР, В, Е, D витамины, а также (3-каротин и другие биологически активные вещества (Филов, 1956; Гикало, 1974; Лудилов и др., 1999; Osuna-Gareia, et al., 1996).
В биологически зрелом перце присутствуют три вида основных Сахаров: глюкоза, фруктоза и сахароза. Причем моносахара составляют основную часть, а на сахарозу приходится от 5 до 20 % в зависимости от
^ сорта. Поэтому перец можно отнести в разряд диетических продуктов
(Филов, 1956).
В последнее десятилетие не прекращаются экологические катастрофы антропогенного происхождения, отмечаются и нередко природные катаклизмы, а также остается сложным экономическое состояние в Российской Федерации. Вся эта совокупность факторов, способствуя развитию стрессов, отрицательно влияет на иммунную систему человека, снижая ее защитный барьер. Поэтому все больше внимания обращается на модулирование иммунитета человека с помощью витаминов-антиоксидантов
t А, С, Е и различных пищевых добавок. Считается, что они продлевают
жизнь, задерживая старение, повышают иммунитет человека и оказывают
'* антистрессовое действие. Последние данные экспериментальных и
і клинических исследований свидетельствуют, что наиболее эффективно
комплексное использование в пищевом рационе витаминов-антиоксидантов (Сухолинский и др., 1991,1995; Потапович и др., 2001).
Потребность организма в этих витаминах определяется рядом факторов: сбалансированностью питания, физической нагрузкой, состоянием здоровья и возрастом человека.
По различным данным суточная потребность в витамине А в норме составляет 5000 ME или 1,5 мг в сутки, а витамина С примерно 75-100 мг для взрослого человека (Романовский, Синькова, 2000). Однако окончательно вопрос о нормах потребления не решен, особенно в случаях различных патологий, и до сих пор остается дискуссионным. Отмечаются и случаи
* гипервитаминозов, особенно, когда используемый витамин А имеет
животное происхождение или принимается в виде таблеток в больших дозах. Считается, что растительные каротины можно употреблять в пищу без ограничений, т.к. они усваиваются всего на 40% от потребляемого количества. Аналогичная ситуация наблюдается и с витамином С. Если принять его слишком много в виде порошков и таблеток, то в 30% случаев отмечается аллергическая реакция и возможны кровотечения. Избыток его в течение суток выводится с мочой. Некоторая же часть сохраняется в почках, откуда поступает в обмен веществ (Обербайль, 1997).
і Учитывая значимость сладкого перца как источника комплексного
содержания натуральных витаминов-антиоксидантов для населения и перерабатывающей промышленности, объем его использования на качественно новом уровне должен возрасти. И первостепенное значение в этом принадлежит селекции.
Актуальность исследований На современном этапе развития селекции сельскохозяйственных культур определены пять наиболее приоритетных направлений: селекция на раннеспелость, на адаптивность к неблагоприятным факторам среды, на устойчивость к болезням и вредителям, на более эффективное использование ФАР, а также, биохимическая селекция (Жученко, 1998, 2001), что, несомненно, подчеркивает актуальность выбранной темы.
( Витамины относятся к классу биологически активных веществ, способных
модулировать физиологическое состояние человека. Особенно эффективно
воздействие на обмен веществ группы витаминов-антиоксидантов: А, С, Е. Считается, что они в комплексе продлевают жизнь, задерживая старение, повышают иммунитет человека к заболеваниям различной этиологии, в том числе и к канцерогенной трансформации и оказывают антистрессовое действие (Вольф, Рансбергер, 1976; Букин, 1982; Опополь, Добрянская, 1986; Cutler, 1984; Davis, lQ^UMathews-Roth, 1991). Овощной перец Capsicum annuum L. содержит в больших количества натуральные витамины С и PP. Содержание ^-каротина (предшественник витамина А) в плодах в имеющемся отечественном сортименте овощного перца не высокое и варьирует в пределах 20-30 мг/100г сухого вещества.
Учитывая высокую биологическую активность витамина А, актуальна
селекция перца на повышенное содержание р-каротина.
Литературные данные по этому направлению в отношении овощного перца немногочисленны, обобщены недостаточно, а достигнутые практические результаты могут быть значительно улучшены. До настоящего времени не было работ по созданию линий и гибридов Fj овощного перца на стерильной основе с повышенным содержанием провитамина А. Как
1 правило, исследователи ограничивались начальными этапами селекции:
^ оценкой исходного материала по содержанию витаминов С и PP. Кроме того,
доноры улучшенного биохимического состава плодов, как правило, восприимчивы к вертициллезному увяданию и другим заболеваниям. Поэтому получение стерильных линий, и на их основе гибридов F( со значительно улучшенным биохимическим составом и толерантностью к основным заболеваниям является актуальной задачей, решение которой повышает значимость овощного перца как источника комплекса натуральных
t витаминов-антиоксидантов для населения и перерабатывающей
промышленности.
*
Направления селекции перца
Создание сортов и гибридов перца проводят в зависимости от способов выращивания культуры и типа культуры. По способу выращивания культура подразделяется на грунтовую и тепличную. В свою очередь грунтовой перец выращивается рассадным и безрассадным способом. Тепличная культура только рассадным способом (Даскалов, 1958; Филов, 1956). Перец принято подразделять на две культуры: сладкий (овощной) и острый (пряный), несмотря на принадлежность их к одному ботаническому виду (Филов, 1956). Ряд исследователей подразделяют овощной перец на три группы (Лудилов и др., 1999): перец салатный, перец стручковый, перец острый. С позиции практической селекции, на наш взгляд, удобно условно перец подразделить - даже на 4 группы: овощной салатный, томатовидный, острый и стручковый, предназначенный для помола и изготовления паприки. В этом случае четче и проще формулировать требования и задачи селекции по направлениям. Для грунтовой рассадной культуры важен набор сортов и гибридов разной скороспелости, с продленным периодом отдачи урожая с высокой общей урожайностью, высоким качеством плодов, устойчивостью к заболеваниям (Программа развития селекционных работ по овощным культурам в Нечерноземной зоне России до 2010 года). К сортам и гибридам, і предназначенным для защищенного грунта, помимо выше указанных / требований обязательна и толерантность к неблагоприятным факторам: недостатку освещенности, перепадам температур, высоким и низким температурам, что обеспечивает более стабильный и гарантированный урожай. Для сортотипа томатовидных перцев очень важно качество плодов: толстостенность, вкусовые достоинства, плотная кожица, т.к. при переработке из-за недостаточной плотности ее продукт становится кашеобразным и теряет товарный вид, а кроме того, важен высокий уровень витаминов и других биоактивных соединений способных длительное время сохраняться в продукте и, конечно, раннеспелость и дружность отдачи урожая, т.к. плоды томатовидной группы используют в биологической фазе зрелости (Ильенко, 1971; Загинайло, 1973; Тимина, 1981; Балашова я др., 1983; Харькова, 1994).
Для горького перца важен оптимальный уровень содержания горьких веществ в плодах, пригодность к сушке и консервированию, высокая урожайность, дружность созревания, устойчивость к болезням (Ильенко и др., 1987; Мамедов, Пышная, 1996; Пивоваров и др., 1998; Мартиросян, 1998).
Высокие требования предъявляются и к перцу, предназначенному для помола и изготовления паприки. Высокая урожайность» раннеспелость и дружное созревание — это базисные требования, к которым добавляется способность к высыханию, высокий уровень содержания сухого вещества (не ниже 16%), содержание красящих пигментов не должно быть ниже стандарта в единицах ASTA (не ниже 200 единиц ASTA). Перечный порошок должен быть с пряным вкусом и ароматом, а при хранении с содержанием І 0% влаги должен отличаться медленным изменением в окраске и структуре (Somos, 1984; Kapeller, 1987; Huszka etal., 1987).
В настоящее время отмечается сокращение производственных площадей под культурой перца в связи с реорганизацией сельхозпроизводства, кризисным состоянием его ряда отраслей. Но одновременно наблюдается и расширение площадей под этой культурой в частном секторе, который предъявляет к культуре ряд новых требований, и в первую очередь к качеству, эстетичности, разнообразию по назначению и использованию. В Российской Федерации в настоящее время статистика отмечает 20 миллионов огородников, для которых необходим сортимент, хорошо адаптированный для условий открытого грунта и временных пленочных укрытий. В этом направлении в РФ селекционная работа начата недавно и сортимент отечественных гибридов, отвечающих подобным требованиям с учетом разнообразия экологических условий страны, явно недостаточен. В Приднестровье такой сортимент пока отсутствует, т.к. основной задачей была селекция высокотехнологичных сортов, отвечающих задачам промышленного возделывания (Стрельникова и др., 1987). f Анализ последних совещаний EUCARPIA по перцу, показал
(EUCARPIA, 1995, 1998, 2001), что приоритетами селекционной работы с овощным перцем за рубежом остаются следующие направления: создание салатных для свежего потребления сортов и гибридов Fi, пригодных для консервирования различных сроков созревания, дружно созревающих предназначенных для механизированной уборки, с улучшенным биохимическим составом плодов, выносливых и устойчивых к различным заболеваниям, толерантных к неблагоприятным факторам среды.
Толерантных к неблагоприятным факторам внешней среды
Хотя данных по изучению значения каротиноидов для организма человека немного, они очень интересны и свидетельствуют о перспективности проведения исследований в этом направлении. Изучение 6-каротина и лекопина как факторов подавляющих окисление LDL проводилась в работе Авирам и Фухрман (Avirara, Fuhrman, 2000). LDL -основной транспортер холестирола (choleserol) в плазме. Окисление LDL ведет к повышенному поступлению в клетку липопротеина, что приводит к появлению пены в клетке. LDL защищено от окисления антиоксидантами, такими как: витамин Е, В-каротин и лекопин. В-каротин и лекопин - это изопреноиды синтезированные в растениях из мевалоната и у них с холестиролом схожи первоначальные преобразовательные процессы. Низкий уровень каротиноидов в плазме сопряжен с возрастающим риском миокарднального инфаркта и коронарной болезнью сердца, и прием антиоксидантов препятствует сердечным заболеваниям. Недавние исследования показали, что В-каротин играет важную роль в защите полиненасыщенных жирных кислот от окисления и инфаркта миокарда (Kardinall et al., 1995). Каротиноиды способны подавлять повышенное возбуждение молекулы, обусловленное включением в ее состав свободного кислорода (Di Mascio et al., 1989).
Фоточувствительные окисления LDL в плазме человека зависят от антиоксидантной активности каротиноидов генерировать свободный кислород, а также каротиноиды могут защищать токоферолы от окисления свободным кислородом (Oschim et al., 1993). У человека плазма перекисленных липидов отрицательно коррелирует с концентрацией каротиноидов в плазме, и клеточное перекисленние липидов значительно снижалось р-каротином (Franke et al., 1994), Каротиноиды являются также эффективными защитниками лимфоцитов крови от повреждения NCb радикалов (Bohra et al., 1995), В результате исследования защитное влияние лекопина подтвердилось однако, это влияние усиливалось в совокупности с р -каротином и высоким содержанием витамина Е.
Каротиноиды входят ь группу красящих веществ перца. По данным ряда исследователей в смеси каротиноидов, составляющей в среднем около 0,5% от сухого веса плодов, обнаружены: капсантин 0,35%, капсарубин 0,073%, каротин 0,031%, зеаксантин 0,025%, криптоксантин 0,016% ксантофилл (следы) и др. (Лазурьевский, Гуну, 1983).
Капсантин в 10 раз сильнее окрашен, чем другие вещества, он составляет 7/8 всех красящих веществ по количеству. Каротиноиды широко распространены в природе, но синтезируются только растениями и некоторыми микроорганизмами. Животные усваивают готовые каротиноиды, избирательно могут их модифицировать. В настоящее время насчитывается свыше 500 каротиноидов, 60 из которых являются предшественниками В-каротина, а 110 обладают даже более высокой активностью, чем В-каротин. Хотя число модификаций велико, по строению все они оказываются близкими аналогами Р-каротина (Лазурьевский, Гуцу, 1983).
Роль каротиноидов в растениях до конца не изучена. Работа по определению их функций в растении проводилась, в частности, Cholnoky et al. (1956) (цит. Выродова, 1988). Исследователи выяснили, что участие каротиноидов сводится к переносу кислорода в хлорофилл - содержащих органах растения. Причем рассматривается система, в которой участвуют все каротиноиды и связанные с ними изменения в течение всего жизненного цикла растения.
Перенос кислорода осуществляется по двум системам: первая - зеаксантин »антероксантин—лютеин вторая - р-каротин- Р-каротин - моно-эпоксид-» а-каротин.
Вторая система работает, когда первая не может удовлетворить потребность в кислороде. Так, в листьях перенос (транспорт) кислорода осуществляется по максимуму, поэтому обе системы работают. В незрелых плодах первая — основная система полностью удовлетворяет потребность в транспорте кислорода, поэтому вторая система не функционирует. Челноки и др. (Cholnoky et al., 1956) проводили исследования каротиноидов зеленых, оранжевых и красных плодов и листьев красного перца и установили, что состав каротиноидов зеленых и оранжевых плодов и листьев перца одинаков, только листья содержат еще а-каротин. В состав каротиноидов зеленых плодов перца входят; (3-каротин, нео-Р-каротин В и V, ксантофилл, Р каротин-моно-эпоксид, виолоксантин, мутатохром, фолиаксантин, фолиахром, и, вероятно, криптоксантин, а также цис-изомеры виолоксантина; в состав каротиноидов красных зрелых плодов перца входят: Р-каротин, нео-Р-каротин В и V, капсарубин, капсантин и др. Отмечено, что в оранжевых плодах перца каротиноидов в 10 раз, а в красных в 35 раз больше чем в зеленых.
Природа и биосинтез каротиноидов в декоративном перце с различной окраской у разных сортов С. anmmm изучалась в работе Davies, Matthews, Kirk (1970). Был проведен детальный анализ встречающихся каротиноидов у декоративных сортов С. annuum, который показан в процентах к их общей сумме (табл. 1.2.2.1). Данные таблицы свидетельствуют, что отсутствуют кислородо-насыщающие каротиноиды в оранжевых зрелых плодах.
Оценка генофонда С. аппиит var. аппиит по содержанию fi-каротина
Для уточнения содержания Р-каротина и витамина С в плодах перца были оценены по этому признаку плоды биологической спелости у различных представителей вида С. annuum var. annuum (таблица 3.1.1). В результате выявили дифференцированное содержание витаминов у проанализированных представителей генофонда, отражающее размах изменчивости признаков в исследованных популяциях.
Содержание (5-каротина и витамина С в плодах биологической спелости сортотипов С. annuum var. annuum (Baral, Bosland, 2002) (необогреваемые пленочные теплицы) Полученные данные свидетельствуют об относительной выравненности исследуемых популяций сортотипов по содержанию Р-каротина (отличия по содержанию статистически не значимы). Выравнивание популяций по признаку «высокое содержание (3-каротина» произошло благодаря предварительной, целенаправленной селекционной работе. В тоже время найденные коэффициенты вариации показывают значительное внутрипопуляционное варьирование этого признака (Cv 25%). У сортотипа Longum определены статистически значимые отличия по содержанию витамина С в сравнении со всеми остальными, а также у Grossum и Pomifera. Отмечается незначительное внутрипопуляционное варьирование по содержанию этого витамина у Pomifera и значительное - у всех остальных. Содержание обоих витаминов у некоторых представителей представлены в таблице 3.1.2.
Проведенная оценка выявила дифференцированное содержание 0-каротина в плодах по генотипам. Особенно интересны сорта Колобок, Оранжевая калия и линии Л-49, Л-29. Все они характеризуется высоким содержанием Р-каротина. Так сорт Колобок, характеризуется высоким содержанием витамина С, толстым и сладким перикарпием и не на много уступает по содержанию р-каротина сорту Оранжевая калия, специально отселектированной по этому признаку. Однако, как показали исследования, содержание р-каротина у него сильно варьирует так в фазе биологической зрелости в 2000 году этот показатель составил 36,39 а в следующий год 64,43 в мг/100г сухого вещества. Линия Л-29 получена путем синтетической селекции с сортом Оранжевая калия.
В результате специальной селекции по увеличению содержания J5-каротина она значительно превосходит ее по содержанию провитамина А. У сортотипа Grossum имеются как представители с очень низким содержанием этого витамина, так и с высоким (Л-49), что наряду с другими хозяйственно ценными признаками делает их перспективными для дальнейшей селекции. Хотя, у остальных сортотипов содержание fi-каротина среднее а у вида С. frutescens высокое, но их использование в качестве доноров менее перспективно, так как у них много не желательных сопутствующих признаков: наличие горечи, тонкий перикарпий, восприимчивость к увяданию, удлиненная форма плода и др.
В целом же у всей исследуемой популяции C.annuum var. annuum пределы изменчивости варьируют значительно: от 6,67 до 99,90 мг/ 100г сухого вещества. В среднем содержание (3-каротина в изученной популяции достигает около 34 мг/100г (сухого вещества), что явно говорит о преобладании в коллекции образцов с невысоким содержанием витамина. Полученные нами результаты подтверждают литературные данные об относительно низком содержании Р-каротина у овощного перца без специальной селекции по этому признаку. Проведенные исследования выявили фенотипическую зависимость между окраской плодов и содержанием каротина: линии, плоды у которых в технической спелости имеют светлую окраску (кремовую или белую), как правило, содержат наименьшее количество р -каротина. Но выяснить насколько тесно эти признаки коррелируют между собой, можно было, изучив наследование признака «высокое содержание р-каротина» у гибридов Fj и их родителей, а также определив накопления витаминов в плодах в фазу технической и биологической спелости. Проведенные исследования показали, что содержание витамина С в целом по линиям достаточно высокое, поэтому основная работа в дальнейшем велась на улучшение показателя содержания р-каротина с проверкой того, чтобы не было снижения содержания витамина С.
Пластичность и стабильность признака «высокое содержание -каротина» в плодах
В работе были использованы полученные нами три стерильные линии (Л-147, Л-61/1, Л-46), различающихся окраской и формой плодов, устойчивостью к заболеваниям, содержанием Р-каротина, на основе которых был выполнен топкросс с участием пяти линий: Л-144, Л-7, Л-22, Л-23, Л-29. Полученные гибриды F[ выращивались в теплице и открытом грунте методом систематических повторений в двух кратной повторности, У гибридов учитывали общий урожай в расчете кг/растение, устойчивость к увяданию, содержание Р-каротина, ОКС и СКС.
Оценка гибридов Fi полученных в топкроссе с использованием стерильных линий по комплексу хозяйственно-ценных признаков в двух культурооборотах выявила преимущества ряда из них в сравнении с районированным стандартом F] Юбилейный Семко. Лучшие гибриды хотя и не превышали товарный урожай стандарта и устойчивость к увяданию однако и не уступали по этим показателям ему, а по содержанию р-каротина значительно превосходили стандарт (табл. 3.7.1).
Для более целенаправленной работы на гетерозис определяли комбинационную способность использованных стерильных линий, линий-опылителей и эффекты взаимодействия ms-линия х линия-опылитель по комплексу хозяйственно - ценных показателей (табл. 3.7.2, 3.7.3, 3.7.4).
Примечание: 1 - открытый грунт, летне-осенний оборот. 2 — пленочные необогреваемые теплицы, весенне-летний оборот. - значимые превышения стандарта Выявили дифференцированные значения ОКС линий по признаку товарный урожай и содержание в плодах Р-каротина в зависимости от культурооборота. В условиях пленочных теплиц ОКС по признаку товарный урожай имеет преимущество Л-147, в открытом грунте у трех использованных линий показатель в пределах ошибки опыта, ОКС тестеров по этому же признаку высокие и значимые. Лучшей ОКС в условиях пленочных теплиц обладает Л-22, а в условиях открытого грунта Л-144 и Л-22. Различия у гибридов F{ по товарному урожаю обусловлены значимой СКС в открытом грунте. Лучшие константы СКС по товарному урожаю также не совпадают в зависимости от кулыурооборота. Наибольшие показатели СКС в условиях открытого грунта, у гибридов с участием Л-61/1, Высокое содержание {3 каротина обусловлено как эффектами ОКС, так и СКС в обоих культурооборотах. В пленочной теплице самый высокий эффект ОКС у линии Л-46 и линии-опылителя Л-22, в открытом грунте максимальные значения ОКС у Л-61/1 и также Л-22. При этом наибольшие эффекты СКС в пленочной теплице у гибридов с участием Л-61/1, а в открытом грунте с участием Л-61/1 и Л-46.
Полученные данные свидетельствуют о том, что ОКС используемых стерильных линий не отличается по признаку вилтоустойчивости в двух культурооборотах. При этом у гибридов на основе этих линий отмечается хороший уровень выносливости, и даже высокая устойчивость (табл. 3.7.1). Разница по устойчивости у гибридов в условиях пленочных теплиц обусловлена только эффектами СКС, а в открытом грунте - эффектами ОКС тестеров. Таким образом, проведенный анализ ОКС и СКС использованных ms-линий и линий-опылителей показал, что в использованном материале по комплексу признаков нет универсальных линий для двух культурооборотов. Лучшей линией с комплексом хозяйственно-ценных признаков для весенне-летнего оборота является Л-147 и линия-опылитель Л-22, а для открытого грунта Л-61/1 и линии-опылители Л-23 иЛ-29.
В результате изученной комбинационной способности трех стерильных линий и пяти тестеров была выбрана лучшая комбинация скрещивания $ ms Л-61/1 х $ Л-29, которая передана в 2005 году в ГСИ Российской Федерации. Полученный гибрид (рис. 3.7.1) не превышал стандарт гибрид Ft Юбилейный Семко по урожайности и устойчивости к вертициллезному увяданию, однако значительно превосходил его по содержанию Р-каротина и витамина С (табл.3.7.5).
