Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 9
2.1.Понятие иммунитета и основные принципы морфофункциональной организации иммунной системы 9
2.1.1.Неспецифические компоненты иммунной системыи механизмы их действия 10
2.1.2. Специфические компоненты иммунной системы имеханизмы их действия 13
2.2.Роль иммун о модуляторов в стимуляции иммунной системы 18
2.3.Эффективность одновременного применения вакцин и имму-номодуляторов 29
3. Собственные исследования 32
3.1.Материалы и методы исследований 32
3.2.Результаты собственных исследований 37
3.2.1.Определение острой и хронической токсичности тимолизата и лиенолизата 37
3.2.2. Изучение влияния лиенолизата на естественную резистентность крыс при одно- и двухкратном введении 38
3.2.3.Изучение влияния тимолизата и лиенолизата на клинический статус, гемопоэз, систему иммунитета и морфологию некоторых органов 45
3.2.3.1. Результаты клинико - гематологических и иммунобиологических исследований 46
3.2.3.2.Результаты исследования макро- и микроморфологии органов 55
3.2.4.Изучение клинического статуса и гематологических показателей при введении лиофилизированных тимо- и лиенолизатов.70
3.2.5. Определение иммуномодулирующей активности тимолизатаи лиенолизата при вакцинации с применением ннактивированной вакцины 74
3.2.6.Сравнительное изучение роли некоторых иммунотропных препаратов при вакцинации против болезни Ауески 81
3.2.7.Эффективность ннактивированной вакцины против болезни Ауески при сочетанном введении её с иммунотропными препаратами 85
3.2.8.Исследование роли лизатов из тимуса и селезенки в получении гипериммунной сыворотки 88
3.2.9.Изучение влияния тимо- и лиенолизатов на вакцинный процесс при последующем облучении животных 90
Обсуждение результатов исследований 112
Выводы 131
Практические предложения 134
Список использованной литературы 135
- Специфические компоненты иммунной системы имеханизмы их действия
- Изучение влияния лиенолизата на естественную резистентность крыс при одно- и двухкратном введении
- Результаты клинико - гематологических и иммунобиологических исследований
- Определение иммуномодулирующей активности тимолизатаи лиенолизата при вакцинации с применением ннактивированной вакцины
Введение к работе
Модуляция иммунологических реакций представляет важную область исследований в современной медицине и ветеринарии. Развитие этого направления связано не только с изучением фундаментальных механизмов индукции и регуляции иммунного ответа, но и с применением иммунотропных средств при терапии широкого спектра заболеваний. Существует целый ряд биологически активных препаратов, оказывающих стимулирующее влияние на гуморальные и клеточные факторы иммунитета. Это полисахариды, препараты цинка, лимфокины, вакцина BCG, биопрепараты изготовленные из селезенки и тимуса, иммунорегуляторяые пептиды из костного мозга и др. (Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1978; Арион В.Я., 1981; Лютинский СИ. с соавт., 1988, 1998; Скрипник Э.П., 1989; Квачев ВТ., Кассич А.Ю., 1991; Земсков A.M. с соавт., 1993, 1996, 1997; Вавина О.В., Молев А.И., Великанов В.И. и др., 1999; Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 2000; Михайлова А.А., 2001; Бондаренко А.Л., 2001; Поваренный A.M. с соавт., 2002; Сизякина Л.П., Чумаков Е.А., 2003; Цепелев В.П. с соавт., 2003). Однако многие рекомендованные препараты являются дефицитными или дорогостоящими.
В настоящее время благополучие по многим инфекционным болезням контролируется благодаря массовой иммунизации. Причем развитие средств иммунологической защиты идет в двух направлениях: продолжаются и расширяются усилия в области традиционного вакцинного дела и одновременно быстро развивается новый раздел иммунопатологии -фармакологическая регуляция иммунологической реактивности организма с помощью иммуномодуляторов (Петров Р.В., 1984, 1995; Земсков A.M. с соавт., 1996,1997; Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1996; Ильясова Г.Ф., 2000).
Большую практическую значимость имеют выяснение возможности и эффективности одновременного применения вакцин и средств с иммуностимулирующей активностью, с одной стороны, и изыскание доступных и эффективных препаратов для стимуляции иммуногенеза, с другой. Научные исследования в этом направлении единичны (Обросова-Серова Н.П. с соавт., 1984; Сафин МА. с соавт., 1990; Ершов Ф.И., 1981, 1996; Макаев Х.Н., Равилов А.З., 1998; Петров Р.В., Хаитов P.M. с соавт., 1999).
Судя по немногочисленным данным, опубликованным преимущественно в 30-е годы XX столетия (Руфимский Н.П., 1931; Руфимский Н.П., Никольский В.В., 1934; Абдуллин Х.Х., 1934; Двинянинов Л., 1935; Фазлуллин Н.С., Немшил ова Н.А., 1935; Лысов В.Ф., 1970), гистолизаты обладают способностью стимулировать естественную резистентность и иммуногенез у животных. Однако, при этом необходимо отметить, что исследования по изучению иммуностимулирующего действия при вакцинации ими проводились только с лиенолизатом, при введении его многократно и в больших дозах.. Влияние же тимолизата на иммуногенез при вакцинации не изучалось совсем. Между тем, положительные результаты исследований Д.Ш.Шарипова (1998) и Ю.С.Зиганшиной (1998), по определению профилактического и коррегирующего действия тимолизата, введенного двухкратно в дозе 15 мг полипептидов на кг массы тела, при экспериментальных иммунодефицитах дают основание на возможность применения его для стимуляции иммуногенеза при вакцинации.
С учетом вышеизложенного, в качестве стимуляторов иммунной системы, нами по методу М.П.Тушнова были приготовлены лизаты из селезенки и тимуса, как доступные и дешевые препараты, простые в изготовлении, проведены исследования по определению оптимальной дозы и кратности введения лиенолизата, сравнительному изучению влияния тимолизата и лиенолизата на состояние неспецифической защиты организма животных при введении их в отдельности и сочетании, выяснению возможности использования их для стимуляции иммуногенеза при вакцинации. Цель и задачи исследования. Целью наших исследований являлось изучение влияния лизатов из тимуса и селезенки на состояние неспецифической и специфической резистентности организма и разработка способа повышения эффективности противовирусной вакцинации на основе сочетанного применения лизатов из тимуса и селезенки с инактивированной вакциной против болезни Ауески.
На разрешение были поставлены следующие задачи:
1) определить острую и хроническую токсичность изготовленных нами новых серий лизатов;
2) изучить влияние лиенолизата на естественную резистентность при одно- и двухкратном введении;
3) провести сравнительное изучение клеточных и гуморальных факторов защиты животных, характеризующих состояние специфической и неспецифической устойчивости при применении лизатов из тимуса и селезенки в отдельности и их сочетании;
4) изучить влияние лизатов на иммуногенез при вакцинации животных против болезни Ауески;
5) изучить возможность использования лизатов из тимуса и селезенки для получения гипериммунной сыворотки.
Научная новизна. Определена наиболее эффективная доза и кратность введения лиенолизата. Получены данные, свидетельствующие о целесообразности применения тимолизата и лиенолизата для стимуляции факторов естественной и специфической резистентности, роста и развития животных. Дано научное обоснование применения тимолизата и лиенолизата, вводимых в сочетании, для стимуляции формирования поствакцинального иммунитета против болезни Ауески. При изучении иммуностимулирующего действия тимолизата и лиенолизата в сравнении с другими иммунотропными препаратами показано, что они по своей активности незначительно уступают таким известным иммуномодуляторам как адъювант Фрейнда и ксимедон. Получены данные, свидетельствующие о возможности использования тимо- и лиенолизатов при получении высокоактивных иммуноспецифических сывороток крови животных доноров, необходимых как компоненты наборов для тест-систем РИГА, РВН и ИФА.
Впервые в опытах на вакцинированных против болезни Ауески вакциной «Гаммавак В НИВ И» кроликах испытано с положительными результатами, радиозащитное действие как вакцины, так и тимо- и лиенолизатов, введенных в сочетании с вакциной, при последующем гамма - облучении, более выраженное при введении лизатов.
Практическая ценность работы. Лизаты из тимуса и селезенки являются высокоэффективными иммуностимуляторами с длительным иммунотропным действием. Препараты не токсичны, просты в применении, не оказывают побочного влияния на организм животных. Приготовление данных препаратов не требует больших технических и денежных затрат.
Рекомендуется использовать их для стимуляции роста и развития молодняка сельскохозяйственных животных, а также как средство повышения эффективности вакцины против болезни Ауески.
На основании проведенных исследований нами была разработана методическая рекомендация по применению тимо- и лиенолизатов при вакцинации животных против болезни Ауески, утвержденная ректором Казанской государственной академии ветеринарной медицины, профессором Г.Ф.Кабировым и директором Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института, академиком АНТ А.З.Равиловым.
Основные положения, выносимые на защиту:
- данные оценки острой и хронической токсичности тимо- и лиенолизатов;
- результаты изучения влияния лиенолизата на рост, развитие и гемопоэз животных;
- действие лизатов из тимуса и селезенки на иммунобиологическую реактивность лабораторных и сельскохозяйственных животных; • - результаты изучения влияния лизатов на вакцинный процесс.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:
Всероссийской научно — производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); международной научно
— производственной конференции по актуальным проблемам
Агропромышленного комплекса (Казань, 2003); международной научно — производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарной медицины (Харьков, 2003); заседании Ученого совета Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана (2002, 2003).
Реализация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 4 научные работы и 1 Методическая рекомендация. Материалы диссертационной работы вошли в отчеты о научно - исследовательской работе кафедры патологической физиологии (КГАВМ) за 2002, 2003 гг. и лаборатории №10 ВНИВИ.
Объем! и структура диссертации. Диссертация изложена на 164 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, содержащего 298 источника (244 отечественных и 54 иностранных) и приложения. Иллюстрационный материал представлен 25 таблицами и 15 рисунками.
Специфические компоненты иммунной системы имеханизмы их действия
Специфическая иммунологическая резистентность - это способность распозновать, обезвреживать и элиминировать генетически чужеродные вещества, что обеспечивает постоянство генетического гомеостаза (Петров Р.В., 1983).
Функционирование иммунной системы обеспечивается центральными и периферическими органами иммуногенеза. К центральным органам относят красный костный мозг, тимус и у птиц фабрициеву сумку, её аналог у животных, возможно пейеровы бляшки (Петров Р.В., 1983; Коляков Я.Е., 1986). К периферическим органам относят селезенку, лимфатические узлы, солитарные фолликулы, кровь и др. (Лебедев К.Л., 1990; Лютинский СИ., 2001). В центральных органах лимфоциты созревают, приобретают иммунную компетентность, после чего поступают в циркуляцию (кровь, лимфу) и заселяют периферические лимфоидные органы.
Тимус представляет собой орган, принимающий пре-Т-клетки, обеспечивающий созревание и (или) отбор антиген-специфических Т-клеток и осуществляющий избирательное высвобождение этих клеток на периферию. Зрелый тимус представляет собой эпителиально-лимфоидный орган, состоящий из трех отдельных слоев, каждый из которых содержит лимфоидные клетки преимущественно одного определенного класса и нелимфоидные клетки, обеспечивающие необходимое микроокружение для созревания лимфоцитов. В настоящее время сформировалось представление о тимусе как об одном из эндокринных органов. Тимус синтезирует ряд биологически активных веществ (гормонов), оказывающих влияние на развитие и созревание определенных клеток лимфоидной ткани (Морозов В.Г., 1979; Коляков Я.Е., 1986; Goldstein A.L. et al, 1979; Bach J., Edelman R., 1981). К наиболее изученным биологически активным веществам тимуса относят тимозин, тимопоэтин. Под влиянием гормонов тимуса происходит дифференцировка лимфоцитов в тимус-зависимые клетки или Т-лимфоциты, обеспечивающие клеточные функции иммунитета. Представления о физиологической функции гормонов тимуса к настоящему времени далеко не полные. Однако уже сейчас многие биологически активные препараты, полученные из тимуса (тималин) или их синтетические аналоги (тимоген) с успехом используется для коррекции тимусзависимых первичных и вторичных иммунодефицитных состояний. Отсутствие тимуса или его удаление сказываются на состояние гипофиза (в нем атрофируются клетки, вырабатывающие СТГ, снижается выработка пролактина, АКТГ, фолликулостимулирующего гормона, лютеотропного гормона, исчезает из циркуляции тимулин). (С.ИЛютинский, 1998, 2001). У животных (мышей) тимэктомия, если операция была проведена в первые дни жизни, приводит к подавлению или резкому угнетению реакций гуморального и клеточного иммунитета. (Harris T.N. et al 1948; Good A. et al, 1962). Жизнь таким животным можно сохранить только в условиях полной стерильности, иначе наступает их гибель. (Коляков Я.Е., 1986).
Селезенка, в функциональном отношении является органом, аналогичным в некоторых отношениях к костному мозгу и лимфатическим узлам. Селезенка играет известную кроветворную роль, вырабатывая лимфоциты и спленоциты. Она участвует в обмене веществ (особенно в обмене железа), в ней продуцируются антитела и желчные пигменты. Более специфическим свойством селезенки является её гемолитическая функция, так как преимущественно в этом органе совершается уничтожение потерявших свое функциональное значение эритроцитов и других элементов крови. Кроме того, селезенка играет роль резервуара, в котором скапливается избыток крови при спокойном состоянии организма. (Колпаков И.В., 1938; Заварзин А.А., Щелкунов СИ., 1954). При удалении селезенки, богатой элементами ретикулоэндотелия, у животного понижается резистентность к инфекции. Экспериментальное удаление селезенки у крыс приводит к значительному изменению морфофункционального состояния биоаминсодержащих структур тимуса, что приводит к развитию вторичного иммунодефицита, тяжелой анемии. (Недоспасов В.О., 1971; Струнко Г.Ю. и др., 2000, 2003). В основном селезенка участвует в иммунных реакциях гуморального типа. При внутривенном введении антигена антитела вырабатываются, главным образом, в селезенке. (Колычев Н.М., Госманов Р.Г., 1996).
Изучение влияния лиенолизата на естественную резистентность крыс при одно- и двухкратном введении
Лизаты из тимуса и селезенки, приготовленные нами путем ферментного гидролиза по М.П.Тушнову представляют собой прозрачные жидкости желтоватого цвета, с рН 2,5 - 2,7.
Спектрофотометрические исследования в ультрафиолетовом спектре при длине волны Агбо и А &о показали наличие в лизате из тимуса 23,25 мг/мл полипептидов, а в лизате из селезенки 15,5 мг/мл.
Оценку острой и хронической токсичности тимо- и лиенолизатов проводили согласно «Правилам доклинической оценки безопасности фармакологических средств» (1991).
Для изучения острой токсичности использовали по 10 белых мышей и 10 белых крыс па каждый лизат. В обоих исследованиях животных разделили на две группы по 5 голов белых мышей и белых крыс. Как лиенолизат, так и тимолизат вводили мышам и крысам 1-х групп подкожным способом, однократно, в дозе превышающую терапевтическую (15 мг/кг) в 10 раз. Крысы и мыши вторых групп служили контролем, им подкожно ввели изотонический раствор поваренной соли.
В течение 10 дней за опытными животными вели клиническое наблюдение, после чего произвели убой всех подопытных животных, от них брали кровь для гематологических и кусочки органов для гистологических исследований.
Инъекции массивных доз тимо- и лиенолизатов не приводила к каким-либо нарушениям со стороны общего состояния животных в течение всего периода исследований. Они были подвижны, хорошо принимали корм и воду.
За все время опыта в живой массе, гематологической картине, макро- и микроструктуре органов заметных различий между группами не обнаружили.
Хроническую токсичность каждого лизата изучали на 10 белых крысах, которых разделили на опытную (5 голов) и контрольную (5 головы) группы. Опытным животным вводили лизат подкожно, ежедневно из расчета 15 мг/кг нолипептидов в течение 10 дней. Крысам контрольной группы подкожно вводили физиологический раствор. Через 20 дней животных обеих групп подвергали убою.
За время опыта каких-либо изменений, или нарушений со стороны общего состояния животных не наблюдали.
Многократное введение как тимолизата, так и лиенолизата не вызывало изменений в количестве эритроцитов и лейкоцитов в крови животных. В то же время происходило достоверное увеличение содержания гемоглобина и относительного количества лимфоцитов и моноцитов.
На вскрытии крыс, использованных для изучения хронической токсичности лизатов, каких-либо отклонений в макрокартине органов не обнаружили. В гистокартине органов этих животных (сердце, печень, почки, селезенка, тимус), также не наблюдали заметных изменений. Результаты исследования токсичности тимо- и лиенолизатов показали, что они не обладают ни острой и ни хронической токсичностью.
Изучение влияния лиенолизата на естественную резистентность крыс при одно- и двукратном введении
Опыты по изучению влияния лиенолизата при одно- и двухкратном введении проводили на 30 белых крысах, массой 70-80 г., разделенные на 3 группы по 10 голов в каждой. Животным первой группы лиенолизат вводили однократно из расчета 15 мг/кг полипептидов, а животным второй группы -двухкратно, с интервалом в 5 дней, в той же дозе. Крысята третьей группы служили контролем, им подкожно вводили изотонический раствор натрия хлорида.
За опытными животными вели постоянное клиническое наблюдение. Перед постановкой опыта, через 5 дней и в конце опыта, при убое, произведенном на 30-е сутки, у животных брали кровь для гематологических и иммунобиологических исследований, определяли тимусный и селезеночный индексы.
В течение всего опыта каких-либо отклонений в общем состоянии крысят всех трех групп отмечено не было, они хорошо принимали корм и воду, были подвижны.
Через 5 дней после первичного введения лиенолизата масса тела крыс 1-й группы была выше на 11% (р 0,05), а крыс П-й группы на 8,8% (р 0,05), чем у животных контрольной группы (таблица 2).
Спустя 15 дней от начала опыта животные опытных групп по-прежнему опережали по массе тела крыс контрольной группы. В этот срок таковая у крыс обеих опытных групп превышала массу тела контрольных животных на 25,54% (р 0,01).
Более высокий уровень прироста живой массы в опытных группах по сравнению с контрольными группами отмечали через 25 дней от начала опыта. В 1-й группе он был выше в среднем на 104,1% (р 0,001), а во П-й на 158,2% (р 0,001).
Через 35 дней от начала опыта привес белых крыс в 1-й группе превышал таковой у животных контрольной группы на 70% (р 0,001), а во П-й группе на 94,9%(р 0,001).
Таким образом, за период опыта прирост живой массы составил в среднем в I — и опытной группе 148% (р 0,001), во II й опытной группе 169,7% (р 0,001) и в контрольной группе животных 90,9% (р 0,001).
Результаты клинико - гематологических и иммунобиологических исследований
В течение всего опыта каких-либо отклонений в общем состоянии крыс всех четырех групп отмечено не было, они хорошо ели и пили.
Как видно из таблицы 7, прирост массы у животных опытных групп во все сроки исследований было значительно выше по сравнению с контролем.
Так, через 5 дней после введения тимолизата у крыс 1-й опытной группы живая масса превышала данные контроля на 6,35% (р 0,05), во П-й на 5,87% (р 0,05), в Ш-й на 6,89% (р 0,05); через 10 дней после повторного введения: на 5,89% (р 0,05); 12,76 и 12,76% (р 0501) соответственно.
Спустя 20 дней после повторного введения лизатов животные опытных групп по-прежнему опережали по уровню прироста живой массы белых крыс контрольной группы. В этот срок более интенсивный прирост наблюдался у крыс Ш-й группы, этот показатель составил 165,6% (р 0,001), у животных же П-й группы он равнялся 134,4% (р 0,01), 1-й группы 92,5% (р 0,01), чем у крыс IV-й группы.
Самый высокий уровень прироста живой массы в опытных группах наблюдали через 30 дней после повторного введения препаратов. В 1-й группе он был выше в среднем на 68,5% (р 0,01), во П-й на 88,9% (р 0,01), в Ш-й на 205,9% (р 0,001) по сравнению с контролем. Динамика изменения массы тела белых крыс при введении лизатов (в граммах) (М±т)
За период опыта прирост живой массы составил в среднем в 1-й опытной группе 51,1% (р 0,001), во Ц-й опытной группе 56,2% (р 0,001), в Ш-й опытной группе 93% (р 0,001) и в контрольной группе животных 29,3% (р 0,001).
Таким образом, самый больший показатель прироста отметили в Ш-й группе животных, которым вводили тимолизат в сочетании с лиенолизатом.
Определение количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и выведение лейкограммы у крыс всех четырех групп представлены в таблице 8.
Как видно из таблицы 8, при гематологическом исследовании крови, проведенном через 5 дней от начала опыта, обнаружили увеличение числалейкоцитов, гемоглобина и лимфоцитов у животных всех трех опытных групп при отсутствии таковой у животных контрольной группы. Количество лейкоцитов в 1-й группе увеличилось на 3,4%, во 11-й на 3,97%, в Ш-й на 4,25% (р 0,05). Количество гемоглобина повысилось в 1-й; П-й и Ш-й группах на 1,35; 0,67 и 0,67% соответственно (р 0,05). Но изменения в содержании этих показателей были недостоверны.
В структуре лейкограммы наблюдали повышение числа лимфоцитов у животных всех опытных групп по сравнению с контрольными: в 1-й группе на 15,4%, во П-й группе на 14,9%, в Ш-й группе на 14,3% (р 0,05), при значительном уменьшении количества нейтрофилов.
Через 10 и 20 дней после повторного введения лизатов отметили, что число лейкоцитов и гемоглобина в крови животных всех трех опытных групп по-прежнему было выше по сравнению с таковыми у животных контрольной группы. Число лейкоцитов, в эти сроки исследования, повысилось на 5,7 и 6,95% (р 0,05); 6,4 и 6,9% (р 0,05); 7,79 и 8,7% (р 0,05) соответственно у животных 1-й, П-й и Ш-й групп. Количество гемоглобина увеличилось на 5,57 и 7,19% (р 0,05); 7,5 и 8,5% (р 0,05); 10,2 и 10,46% (р 0,05) соответственно.
В эти сроки исследования в лейкограмме опытных групп животных стало заметным уменьшение относительного количества нейтрофилов, при одновременном увеличении относительного количества лимфоцитов. Количество этих клеток в крови животных опытных групп было выше в 1-й группе на 14,7% (р 0,05) и 25,7% (р 0,01); во П-й группе на 15,4% (р 0,05) и 24,2% (р 0,01); в Ш-й группе на 15% (р 0,05) и 25,7% (р 0,01) соответственно, по сравнению с таковым у животных контрольной группы.
Содержание эозинофилов и моноцитов в крови животных опытных и контрольной групп в течении всего эксперимента существенно не изменялось.
Количество лейкоцитов, гемоглобина и лимфоцитов во всех четырех группах животных в срок исследования через 30 дней после повторного введения препаратов оставались на уровне данных исследований, проведенных через 20 дней после повторного введения лизатов, так число лимфоцитов в 1-й группе было 83±0,57%, стало - 84±0,57%; во П-й группе - 82±0,57% и 83±0,57%; в Ш-й группе - 83±1,8% и 84±0,57%, а у животных IV-й группы количество этих клеток повысилось с 66±1,15% до 69±0,57%, но оставшись ниже, чем у опытных животных.
Определение иммуномодулирующей активности тимолизатаи лиенолизата при вакцинации с применением ннактивированной вакцины
Важным этапом исследований было определение влияния иммунотропных препаратов (ИМП) тимо- и лиенолизатов на эффективность вакцинации при их применении в сочетании с инактивированной вакциной против болезни Ауески (псевдобешенства) «Гаммавак — ВНИВИ», разработанной методом радиоинактивации и утвержденной ГУВ КМ РТ 19.11.2001 г.Опыты по изучению влияния тимо- и лиенолизатов на некоторые иммунобиологические показатели организма при вакцинации проводили в лаборатории иммунологии ВНИВИ.
В качестве подопытных животных брали белых крыс обоего пола массой 180-200 г, кроликов обоего пола массой 3 кг и овец массой 45 кг, которых разделили на 6 групп (3 группы - опытные и 3 контрольные, по видам животных): крыс по 10, кроликов по 5, овец по 3 головы в каждой. Опытным животным первой (I - крысы), второй (II - кролики) и третьей (III -овцы) групп вводили тимолизат, через 5 дней лиенолизат подкожно, в дозе по 15 мг/кг полипептидов. Четвертая (IV - крысы), пятая (V - кролики) и шестая (VI — овцы) группы служили контролем и не получали иммунотропных препаратов (тимолизат и лиенолизат). Спустя 3 дня после введения испытуемых лизатов животных всех шести групп вакцинировали инактивированной вакциной против болезни Ауески согласно «Наставлению по применению вакцины «Гаммавак - ВНИВИ». Вакцину вводили внутримышечно в дозе 45 мг/кг. Исследования проводили на 3, 7, 14, 21, 28 сутки после вакцинации на фоне применения ИМП и без них.
Для определения динамики антителогенеза использовали РНГА, ИФА и РВН. Результаты исследований представлены в таблицах 14, 15, 16.
Результаты исследования показали, что динамика антителогенеза при применении тимо- и лиенолизатов в режиме сочетания с инактивированной вакциной против болезни Ауески носит несколько иной характер по сравнению с таковой при применении указанной вакцины без предварительного введения лизатов. Выявление антител в кровяном русле кроликов, белых крыс и овец, вакцинированных на фоне введения тимо- и лиенолизатов, подтверждало характерную закономерность с использованием наиболее чувствительных и современных серологических и иммунохимических тест - систем, как РВН, РНГА и ИФА.
Как видно из таблицы 15, ВН - антитела выявились в титре, превышающем в 1,88 раза уже на третий день исследований у животных, которым вводили тимо- и лиенолизаты за 3 дня до иммунизации инактивированной вакциной против болезни Ауески. Аналогичная закономерность наблюдалась и при исследовании серии сывороток крови в РНГА и ИФА с набором препаратов ВНИВИ. Эти данные подтвердили известную закономерность, наблюдавшуюся при применении ксимедона в сочетании с инактивированной вакциной против болезни Ауески (псевдобешенства) в опытах проф. А.П.Цибулькина, к.м.н. Г.Ф.Ильясовой и проф. В.С.Угрюмовой (2001, 2002). В этих опытах выраженность иммуностимулирующего эффекта ксимедона при вакцинации инактивированнои вакциной превышало таковую от использования живой вакцины против болезни Ауески без ксимедона.
Предоставленными данными (таблицы 16) показано, что антитела у экспериментальных животных (кролики, белые крысы и овцы), получавших тимо- и лиенолизаты при вакцинации, определялись в ИФА с высокой степенью достоверности (р 0,01). На возрастающем пике иммунологической реактивности вакцинированных животных, приходящийся на 14-й день исследования, уровень антител у животных опытных групп достоверно превышал данные контроля в РНГА - на 1,43 раза, в РВН - на 1,29 раза, в ИФА -на 4,63 раза.
При этом необходимо отметить, что у контрольных животных (вакцинированных без ИМП), наблюдалось более раннее и интенсивное снижение титра прививочных антител к 21-28 дню после иммунизации их инактивированнои вакциной. Ранее угасание серологических реакций у животных иммунизированных инактивированнои моновакциной, без ИМП, по-видимому, связано с быстрым затуханием пролиферации антителообразующих клеток, аффинных к вирусу болезни Ауески.
Применение тимо- и лиенолизатов в сочетании с инактивированнои вакциной предотвращает угасание иммунологической реактивности организма исследуемых животных, тем самым удлиняет продуктивную фазу антителообразования, сопоставимой эффекту ревакцинации. Так, в эти сроки исследования титры антител в опытных группах животных превышали таковые по сравнению с контрольными данными у кроликов и достигали в РНГА -26,9±2,1, в РВН - 22,9±1,4, в ИФА - 196,4±23,1; у белых крыс в РНГА -23,3±1,9, в РВН - 21,4±1,3, в ИФА - 227,4±29,4; у овец в РНГА - 41,3±2,3, в РВН - 23,9±1,7, в ИФА - 409,9±24,7.
Результаты этих серий исследований показали преимущество введения тимо- и лиенолизатов в сочетании с инактивированнои вакциной против болезни Луески, обеспечивающего увеличение иммуногенности вакцины, выявленную в РВН, РНГА и ИФА.
