Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 7
1.1 Роль структурных компонентов лимфатического узла в иммунном ответе
1.2 Влияние атмосферных ионов и искусственной аэроионизации на организм 26
2.0 Собственные исследования 43
2.1 Материал и методы исследований 43
2.2 Результаты собственных исследований 48
2.2.1 Влияние необработанного янтаря на гематологические показатели крыс 48
2.2.2 Коррекция необработанным янтарем иммунологической и иммуноморфологическои реактивности организма 52
2.2.2.1 Влияние необработанного янтаря на состояние естественной резистентности крыс 52
2.2.2.2 Коррекция необработанным янтарем фагоцитарных реакций в организме крыс 56
2.2.2.3 Влияние необработанного янтаря на показатели Т- и В-систем иммунитета 62
2.2.2.3.1 Динамика изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в крови 62
2.2.2.3.2 Динамика изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в
поверхностном паховом лимфатическом узле крыс 68
2.2.2.3.3 Динамика изменения содерлшния Т-Е-РОК- и В-ЕАС-лимфоцитов в селезенке 74
2.2.2.3.4 Динамика изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов в тимусе 77
2.2.2.4 Влияние необработанного янтаря на пролиферацию и дифференциацию клеток костного мозга крыс 80
2.2.2.5 Влияние необработанного янтаря на иммуноморфологическую реактивность лимфоидных органов 84
2.2.2.5.1 Иммуноморфологические перестройки структурных компонентов поверхностного пахового лимфатического узла 84
2.2.2.5.2 Иммуноморфологические перестройки структурных компоиеитов селезенки 96
2.2.2.5.3 Иммуноморфологические перестройки структурных компонентов тимуса 105
2.2.3 Влияние необработанного янтаря на состояние микробиоценоза
кишечника крыс 113
2.2.3.1 Динамика изменения содержания в кишечнике нормофлоры (бифидобактерий, лактобацилл) 113
2.2.3.2 Динамика изменения содерлшния в кишечнике условно-патогенных микроорганизмов (клостридий, стафилококков, псевдомонов) 117
3.0 Обсуждение результатов исследований 122
4.0 Выводы и практические предложения 133
5.0 Библиографический список
- Влияние атмосферных ионов и искусственной аэроионизации на организм
- Влияние необработанного янтаря на гематологические показатели крыс
- Коррекция необработанным янтарем фагоцитарных реакций в организме крыс
- Влияние необработанного янтаря на иммуноморфологическую реактивность лимфоидных органов
Введение к работе
В последние десятилетия возник интерес к изучению состава и физико-химических свойств янтаря. На промышленную основу (благодаря открытию Янтарного комбината в Калининградской области, где добывается до 90% мирового запаса янтаря) было поставлено производство янтарного масла, лака, янтарной кислоты и её солей. Нашли применение различные медикаменты на их основе: витамин D3, кортизон-ацетат, яитарно-кислая ртуть, антисептик иодоль, суксилен, сук-симед, предион и др. Значительный интерес в последние годы проявляется к изучению механизмов действия и лечебным свойствам янтарной кислоты и ее солей (Б.И. Сребродольский с соавт., 1971, 1984, 1988; В.Б. Акопян, 2000; ИЛ. Неумывакин, Я.С. Неумывакина, 2000; А. Сличная, 2001; А.Киреев, 2001; С.М.Бланк, 2003).
В литературе имеются сведения о результатах применения янтарной кислоты при патологии легких, сердца и сердечно-сосудистой системы, нервных центров, возрастных нарушений, при интенсивной мышечной работе, головных болях, экссу-дативном диатезе, мастопатии, бесплодии, при действии на организм токсических веществ, в первую очередь лекарств, болезнях щитовидной железы, остеохондрозе, аллергии и др.
Янтарную кислоту используют как биологически активную добавку. Янтарь применяют при иглорефлексотерапии, в виде янтарных ванн, посредством биолокации (радиэстезии), путем воздействия на биологически активные точки, для активации энергетического обмена (С.С.Савкевич, 1970, 1076; Б.В.Клюев, 1977, 1996, 1997; М.Н.Кондрашова, 1979, 1997; В.И. Иванов, 1991; Г.П.Малахов, 1997; А.П. Бабич, 1998; Ю.И.Бобко, В.П. Удалов, 1999; О.Н.Глотова, Н.И.Тимофеева, 2000; Э.И. Гоникмаи, 2000; Т. Литвинова, 2000, 2002; ЛГ.Пучко, 2001; А.Н.Семенова, О.П. Шувалова, 2001; Н.Н.Мошков, 2002, 2003, 2004; ВА.Хазатов, 2002; Ю.С.Бут, 2003).
Однако, до настоящего времени не изученными остаются вопросы влияния легких отрицательных ионов, фитонцидов янтаря и янтарной кислоты выделяемых необработанным янтарем на состояние иммунной системы и микробиоценоз кишечника.
В этой связи целью работы явилось - изучить влияние необработанного янтаря на иммуногенез, иммуноморфологические реакции и естественный микробиоценоз кишечника в организме крыс.
4 В задачи исследований входило:
Установить влияние необработанного янтаря на показатели крови (динамику гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов) крыс.
Изучить влияние необработанного янтаря на показатели иммунного статуса крыс, со сравнительной оценкой:
а) естественной резистентности (бактерицидной и лизоцимной активности
сыворотки крови),
б) активности фагоцитарных реакций,
в) динамики Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-
лимфоцитов в крови, лимфатических узлах, селезенке и Т-Е-РОК-
лимфоцитов в тимусе.
3) Изучить влияние необработанного янтаря на пролиферацию и диффе
ренциацию клеток костного мозга с учетом:
а) динамики клеток зернистого ростка лейкоцитов,
б) динамики клеток эритроидного ростка,
в) динамики лимфоидных клеток.
4) Определить влияние необработанного янтаря на иммуноморфологическую
реактивность лимфоидных органов с оценкой:
а) иммуноморфологических перестроек структурных компонентов лимфати
ческих узлов,
б) иммуноморфологических перестроек структурных компонентов селезенки,
в) иммуноморфологических перестроек структурных компонентов тимуса.
6) Установить влияние необработанного янтаря на состояние микробиоценоза кишечника с учетом:
а) динамики изменения содержания нормофлоры (бифидобактерий и лактоба-
цилл),
б) динамики изменения содержания условно-патогенных микроорганизмов.
Научная новизна исследований состоит в том, что впервые впервые проведено исследование влияния необработанного янтаря на показатели крови, естественной резистентности, фагоцитоза, Т- и В-систем иммунитета, иммуноморфологи-ческие реакции в центральных и периферических органах иммуногенеза (костном
5 мозге, тимусе, лимфатических узлах и селезенке). Впервые установлено влияние необработанного янтаря на состояние микробиоценоза кишечника крыс.
Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных результата, а также сравнительного изучения влияния необработанного янтаря в форме аэроионов , фитонцидов янтаря и янтарной кислоты при применении в виде янтарного порошка на показатели крови, естественной резистентности, фагоцитоза, Т- и В-систем иммунитета, иммуноморфологическую реактивность костного мозга, тимуса, поверхностного пахового лимфатического узла, селезенки, колонизационную резистентность кишечника, с учетом механизма влияния на организм легких отрицательных ионов, фитонцидов и янтарной кислоты, обобщены биологические закономерности изменения иммуногенеза, иммуноморфологических перестроек в лим-фоидных органах, микробиоценоза кишечника, способствующие повышению иммунного статуса, восстановлению естественного микробиоцеиоза кишечника.
Теоретически и практически обоснованы высокие иммуностимулирующие и иммунокоррегирующие свойства необработанного янтаря, способствующие созданию в организме прочного иммунного баланса, профилактике вторичных иммуно-дефицитов и дисбактериозов. Полученные данные позволяют рекомендовать всесторонние исследования необработанного янтаря для применения в медицине и ветеринарной медицине.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
Влияние разных форм применения необработанного янтаря (в виде легких отрицательных ионов и фитонцидов янтаря в янтарных комнатах и в виде янтарной кислоты в янтарном порошке) на повышение гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов крови, активизацию естественной резистентности и фагоцитоза.
Активизация необработанным янтарем показателей Т- и В-систем иммунитета (Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, В-ЕАС-лимфоцитов), а также восстановление реакции Т-супрессоров в крови, лимфатических узлах, селезенке и тимусе.
Иммуноморфологические реакции в костном мозге, тимусе, лимфатических узлах и селезенке под влиянием разных форм применения необработанного янтаря.
Активизация иормофлоры (бифидобактерий и лактобацилл) и затормаживание размножения до уровня физиологических норм условно-патогенных микроорганизмов под влиянием разных форм применения необработанного янтаря.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Экология. Труд. Здоровье. Взгляд в XXI век» (Уфа, 1999); Международной научной конференции «Современные проблемы истории естествознания в области химии, химических технологий и нефтяного дела» (Уфа, 2004); на конференциях профессорско-преподавательского состава БГАУ (1999-2004); иа российском научном форуме «РеаСпоМед, 2005» «Современные технологии в реабилитации и спортивной медицине» (Москва, 2005).
Публикация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 12 работах.
По результатам исследований изданы методические рекомендации «Применение продуктов натурального янтаря в условиях «янтарной комнаты» в комплексе восстановительного лечения больных», утвержденные Зам. министра здравоохранения РБ С.ШМурзабаевой и ректором БГМУ, профессором В.М.Тимербулатовым. -Уфа, 2003.-18 с.
По материалам диссертации имеются два патента:
Рапиев Р.А., Рапиев Р.А., Рапиев Р.А Патент РФ № 2246330 от 07.05.2003 «Терапевтический кабинет - аэроионизатор».
Рапиев Р.А,, Рапиев Р.А., Рапиев Р.А. Патент РФ № 2246328 от 07.05.2003 «Способ и устройство Рапиевых Р.А, «Защита человека от излучений электрических приборов»».
Изобретение внесено в «Книгу рекордов планеты» и в «Книгу рекордов Ги-несса» (18 января 2003).
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 157 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практичесішх предложений. Работа иллюстрирована 36 таблицами 36 рисунками в виде гистограмм, графиков и 24 микрофотографиями. Список литературы вісяючает 409 работ, в том числе 151 иностранных авторов.
7 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Влияние атмосферных ионов и искусственной аэроионизации на организм
Более семидесяти лет назад было положено начало новому методу лечения и предупреждения болезней посредством содержащихся в воздухе заряженных электричеством частиц — атмосферных ионов, или аэроионов (Чижевский А.Л., 1933; 1934; 1959; Чижевский А.А., 1960).
В биофизическом и биохимическом отношении аэроионы образуются из нейтральных молекул кислорода и углекислого газа при воздействии иа молекулы ионизирующих факторов. В природных условиях ими чаще всего являются излучения радиоактивных веществ. Эти вещества в очень малых количествах всегда присутствуют в горных породах, в почве, строительных материалах и в самом воздухе в виде радиоактивного газа — эманации (радона). Другим постоянно ионизирующим фактором являются космические лучи. Местное действие, ионизирующее воздух, оказывают и такие явления, как разбрызгивание, распыление воды, раздробление и трение твердых тел, трение движущихся масс воздуха о скалистые горные хребты, разряды насыщенных электричеством грозовых туч, истечение земного электричества в воздух с остроконечных предметов, например игл хвойных деревьев и т. п. (Минх А.А., 1963).
Под влиянием перечисленных ионизирующих факторов то одна, то другая газовая молекула теряет один из своих электронов (элементарных электрических зарядов) и превращается вследствие этого в положительный ион молекулярных размеров. Выделившийся электрон тотчас же присоединяется к другой нейтральной газовой молекуле, сообщая ей дополнительный отрицательный заряд, т. е. превращает ее в отрицательный ион молекулярных размеров (Васильев Л.Л., 1960).
На образовавшиеся таким образом ионы молекулярных размеров (молионы) мгновенно оседают нейтральные молекулы газа (числом 10—15), образуя тем самым легкие, быстрые аэроионы — положительные и отрицательные, — величина которых не превышает 10"7 см. Благодаря своей подвижности такие аэроионы недолговечны, они существуют от нескольких десятков секунд до 10—20 минут. Легкие аэроионы легко отдают свой заряд окружающим предметам, встречаясь с аэроионами противоположного знака, они нейтрализуют друг друга и снова становятся обычными газовыми молекулами (Чижевский А.А., 1960).
Вместе с тем, легкие аэроионы превращаются и в тяжелые, атмосферные ионы, размер которых достигает 10"5 - Ю"4 см. Это происходит благодаря оседанию легких аэроионов на взвешенные в воздухе капельки воды и водяного пара (гидро-аэроионы), а также на пылевые, дымовые частицы и т. п. Подвижность этих ионов в тысячи раз меньше подвижности легких аэроионов, поэтому они несравненно долговечнее, а потому и многочисленнее. У земной поверхности количество легких аэроионов, как положительных, так и отрицательных, невелико; оно колеблется от 100 до 1000 ионов в 1 см3 воздуха. Число тяжелых ионов в 1 см" воздуха колеблется от пятисот до нескольких десятков тысяч. Понятно, чем чище, суше, прозрачнее воздух, тем меньше в нем тяжелых ионов и относительно больше легких (Васильев Л.Л., 1953).
Кроме обычных легких и тяжелых ионов, в атмосфере встречаются и более редкие аэроионы средних размеров (10б см). Можно поэтому говорить о «спектре» аэроионов, различающихся по величине, подвижности, химическому составу и числу несомых ими электрических нарядов, положительных или отрицательных. Абсолютные количества различных атмосферных ионов и их количественные соотношения (в частности, соотношение легких положительных и отрицательных аэроионов, так называемый коэффициент униполярности) дают представление о ионном режиме воздуха в данный момент и в данном месте. Следует, однако, сказать, что ионный режим — величина весьма переменная, зависящая от времени года, часа суток, от метеорологических и других факторов (Минх А.А., 1963).
Сразу же после открытия атмосферных ионов был поставлен вопрос о их возможном биологическом и медицинском значении: влияют ли они на живые существа и в чем это влияние состоит? И. П. Скворцов (1899) раньше всех, по-видимому, указал на возможное гигиеническое значение аэроионов (цит. по Минх А.А., 1963). Затем немецкие ученые Ашкииас и Каспари (1901) в горных местностях, где особенно дает себя знать горная болезнь (в ущельях, узких проходах, пещерах), обна 28 ружили повышенную ионизацию воздуха с резким преобладанием легких положительных аэроионов (цит. по Минх А.А., 1963). Тогда же чешский физиолог Чермак (1902) описал случаи ухудшения самочувствия многих больных в те дни, когда в Альпах дует горный ветер «фен», воздушные массы которого содержат большие количества положительных аэроионов (цит. по Васильеву Л.Л., 1960).
Таким образом, возникло представление о неблагоприятном, даже вредном действии на организм положительных аэроионов. В основном это представление оказалось правильным, однако на первых порах оно некоторыми исследователями оспаривалось. Так, А. П. Соколов (1904, 1925), основоположник учения о курортологическом и лечебном действии аэроионизации, полагал, что целебное действие горного воздуха обусловлено высокой концентрацией в нем легких аэроионов «с избытком положительных аэроионов над отрицательными». Особенно упорно отстаивал лечебную ценность положительных аэроионов немецкий врач Шорер. Впоследствии утвердилось, однако, противоположное мнение: в подавляющем большинстве случаев лечебное действие оказывают отрицательные аэроионы. Было показано, что воздух всемирно известных курортов Швейцарии и Тироля, воздух Биаррица, нашего Сестрорецкого курорта и многих других климатических станций отличается частым преобладанием отрицательных аэроионов, тогда как повсеместно, как правило, количественно преобладают положительные аэроионы (коэффициент п+/п- в среднем равняется 1,1 —1,2). Избыток отрицательных ионов был обнаружен на берегах горных рек Киргизии и Узбекистана, где происходит сильное разбрызгивание воды (Е. А. Чернявский, 1935; цит. по Васильеву Л.Л., 1960).
В тридцатых годах прошлого столетия было положено начало также и гигиеническому исследованию аэроионного режима в городах и городских помещениях разного рода. Первые такие работы выполнили американские ученые Яглу с сотрудниками (1933) и Уэт (1934); у нас их проводили А. А. Минх (1937), Е. Э. Лесгафт и др. (цит. по Васильеву Л.Л., 1960).
Влияние необработанного янтаря на гематологические показатели крыс
Лимфоциты выделяли разделением в градиенте плотности фиколл - верогра-фин (плотность 1,007 г/мл). Градиент готовили следующим образом: к 100 мл 9% фиколла (Pharmacia, Uppsala) добавляли 42 мл 36,17% раствора верографина, плотность доводили до 1,007 г/мл водой, измеряя ден сито литром. Кровь в объеме 2 мл, разведенную в два раза сбалансированным раствором Хешсса наслаивали на 8 - 10 мл градиента и подвергали центрифугированию. После этого лимфоциты тщательно собирали из интерфазы пастеровской пипеткой, отмывали дважды средой (199) путем центрифугирования при 1000 об./мин в течение 5 минут. Осадок клеток ресус-пензировали в 0,1 мл среды 199, подсчитывали в камере Горяева концентрацию лимфоцитов и доводили его средой до 2х 106 в 1 мл.
Выделение В-лимфоцитов проводили с эритроцитами быка. Антисыворотку против эритроцитов получали от кроликов, иммунизированных дважды внутривенно с двухдневным интервалом с 25, 50 и с 75% осадком эритроцитов. У кроликов, через неделю после последней иммунизации, брали кровь, получали антисыворотку и определяли титр. Антисыворотку хранили в холодильнике при 4С. Для получения комплекса (эритроциты-антисыворотка-комплемент) 2,5% взвесь эритроцитов в среде №199 смешивали с аытисывороткой в субагтлютинирующем разведении. Смесь инкубировали 30 минут при 37С. Затем отмывали дважды средой №199 при 1000 об./мин в течение 10 минут и к осадку добавляли 2 мл среды №199 и 2 мл комплемента в нужном разведении (0,2 мл мышиной сыворотки + 1,8 мл среды №199) и инкубировали при 37С 30 минут. Нагруженные антисывороткой и комплементом эритроциты трижды отмывали средой №199 (при 1000 об./мин, 10 минут). Готовили 0,5% концентрацию эритроцитов. За тем к ОД мл этой суспензии добавляли ОД мл лимфоцитов крови, инкубировали в термостате при температуре 37С в течение 5 минут и центрифугировали 5 минут при 1000 об./мин. Приготовленную таким образом смесь оставляли при комнатной температуре на 1 час, затем ресуспендировали в среде №199 и в камере Горяева подсчитывали количество розеткообразующих клеток. За В-лимфоциты принимали клетки, присоединившие 3 и более сенсибилизированных эритроцитов.
Определение популяции Т-лимфоцитов в крови коров проводили методом спонтанного розеткообразования лимфоцитов крыс с эритроцитами кролика. Для постановки этой реакции готовили взвесь лимфоцитов и суспензии индикаторных эритроцитов. Для этой цели кровь кролика в соотношении 1:1 помещали в консервирующий раствор Олсвера. Концентрированными эритроцитами при 4С в холодильнике, пользовались в течение двух-трех недель. Перед каждой постановкой реакции эритроциты тщательно отмывали физиологическим раствором. Из осадка готовили 1% взвесь эритроцитов в среде №199. В небольшие пробирки наливали 0,2 мл суспензии лимфоцитов (2x10 /мл). Затем добавляли к лимфоцитам крыс 0,4 мл взвеси эритроцитов и 0,2 мл среды №199. Смесь инкубировали 30 минут при темпе ратуре 37С, затем центрифугировали при 1000 об./мин в течение одной минуты и пробирки помещали в холодильник при 4С на 1-1,5 часа. Подсчет розеткообра зующих клеток проводили в камере Горяева. За Т-клетки принимали лимфоциты, присоединившие три и более соответствующих эритроцитов. Оценку субпопуляций Т-лимфоцитов проводили в реакции розеткообразования с теофиллином (Г.Фримель, 1987). , " " _-; Для приготовления клеточной суспензии из лимфоидных органов после убоя животных тотчас брали брыжеечный лимфатический узел, селезенку и тимус, взвешивали и из средней части их извлекали небольшой кусочек. Его помещали в стеклянный гомогенизатор и добавляли среду №199 из расчёта 1 мл на 20 мг органа (что важно для последующего пересчета клеток на целый орган). Кусочек растирали осторожно в гомогенизаторе. В полученной суспензии определяли с помощью ОД % раствора трипанового синего, число жизнеспособных клеток. Затем определяли число лейкоцитов, содержащихся во всем лимфоидном органе.
Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали гепари-низированную кровь. Объектом фагоцитоза служили суточные культуры Staphylococcus aureus, выращенные на агаре Хоттингера.
Кусочки органов для гистологических исследований фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином, азур П-эозином. Площадь зон лимфоидных органов определяли с помощью окуляр-сетки по Г. Г. Автандилову.
Выделение анаэробных бифидобактерий проводили посевом больших разведений фекалий в среду Блаурокка. В пробирки с 13-15 мл регенерированной в течение 45 минут среды Блаурокка засевали 1 мл фекалий в разведении до 10"9 . Посевы инкубировали при 37С в течение 24 часов.
Лактобактерии выращивали на среде МРС (Мозера-Рогоза-Шарпа). Кислотообразующую активность популяций лактобацилл определяли на стандартных пластиковых чашках Петри глубинным посевом разведений на агар МРС с 1% мела после 16-часового культивирования при температуре 39С по зонам просветления агара. Зоны просветления измеряли в миллиметрах от центра колоний. Клостридии культивировали на мясо-пептонном-неченочном бульоне (МППБ) Кита-Тароцци, плотной среде Вильсона-Блера, глюкозо-кровяном агаре Цейслера. Для выделения стафилококков использовали элективные среды - солевой кровяной МПА (с 8-10% NaCl, 5% дефибринированной крови), кровяной МПА. Из чистой культуры, выращенной на МПА, ставили реакции на плазмокоагуляцию, фибринолизин, лецитина-зу, ДНК-азу и скрытую гемолитическую активность. Из биохимических свойств определяли разжюкение желатины, коагуляцию молока, ставили реакции на маннит, лактозу, сахарозу, аммиак, сероводород.
Коррекция необработанным янтарем фагоцитарных реакций в организме крыс
Фагоцитарная активность лейкоцитов крови крыс 2 группы была незначительно выше, чем у животных 3 группы. Она превышала их на эти же сроки исследований, соответственно, в 1,008 раза (на 0,45), в 1,02 раза (на 1,7%), в 1,05 раза (на 2,7%), в 1,03 раза (на 1,4%), в 1,006 раза (на 0,3%).
Результаты исследования влияния янтаря на фагоцитарный индекс лейкоцитов в крови крыс приведены в таблице 7, на рисунке 3 Б.
Фагоцитарный индекс лейкоцитов контрольных животных находился на уровне от 1,87 до 2,16 ед. Данный показатель имел существенные отличия у крыс 2 и 3 опытных групп. Индекс фагоцитов крови крыс 2 группы увеличился, по сравнению с его значением в контроле, к 3 дню опыта в 2,25 раза (на 2,71 ед.), к 7 дню в 2,99 раза (на 4,09 ед.), к 15 дню в 3,72 раза (на 5,09 ед.), к 30 дню в 2,88 раза (иа 3,59 ед.), к 50 дню в 2,52 раза (на 3,24 ед.).
В крови крыс 3 группы фагоцитарный индекс превысил контрольный уровень на 3 день опыта в 1,68 раза (на 1,48 ед.), иа 7 день в 2,86 раза (на 3,82 ед.), на 15 день в 3,3 раза (на 4,31 ед.), на 30 день в 2,43 раза (на 2,73 ед.), на 50 день в 1,94 раза (на 2,0 ед.).
Показатель фагоцитарного индекса крови крыс 2 группы также незначительно превышал аналогичные данные животных 3 группы на эти сроки опыта: в 1,33 раза (на 1,23 ед.), в 1,04 раза (на 0,27 ед.), в 1,12 раза (на 0,78 ед.), в 1,18 раза (на 0,86 ед.), в 1,3 раза (на 1,24 ед.).
Данные по исследованию динамики изменения завершенности фагоцитоза лейкоцитов в крови крыс представлены в таблице 8, на рисунке 3 В.
Завершенность фагоцитоза в крови животных 1 контрольной группы составила, за период исследований, 1,12 - 1,31 ед. В процессе опыта описываемый показатель у животных 2 и 3 групп имел тенденцию к увеличению.
По 2 группе его повышение составило к 3, 4, 15, 30 и 50 дням опыта, соответственно, в 1,65 раза (иа 0,78 ед.), в 2,09 раза (на 1,38 ед.), в 3,05 раза (иа 2,3 ед.), в 2,7 раза (на 2,18 ед.), в 2,38 раза (на 1,81 ед.).
Фагоцитарный индекс лейкоцитов крови крыс 3 группы превысил контрольные цифры животных 1 группы к 3 дню опыта в 1,76 раза (на 0,14 ед.), к 7 дню в 1,96 раза (на 1,21 ед.), к 15 дню в 2,93 раза (на 2,17 ед.), к 30 дню, в 2,46 раза (на 1,87 ед.), к 50 дню в 2,09 раза (на 1,43 ед.).
Анализ данных представленных в разделе 2,2.2.2 свидетельствует о том, что легкие отрицательные аэроионы, фитонциды янтаря, янтарная кислота оказывают благоприятное влияние на активизацию фагоцитарных реакций в организме.
Влияние необработанного янтаря на показатели Т- и В-систем иммунитета 2.2.2.3.1 Динамика изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в крови Результаты исследования динамики изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов в крови крыс представлены в таблице 9, на рисунке 4 А. Т-Е-РОК-лимфоциты в крови крыс 1 контрольной группы находились, за период опытов, на уровне от 3,84 до 4,42-10 /л.
Легкие отрицательные ионы и фитонциды янтаря (2 группа) значительно активизировали Т-юіетки в организме крыс. Их уровень в крови увеличился, по сравнению с показателем контроля к 3, 7, 15, 30 и 50 дням опыта в 1,16, в 1,24, в 1,85, в 1,34 и 1,35 раза (на 0,7Ы09/л, на 1,09-1()9 /Л; на 3,21-10 /л, на 1,52-10 /л и 1,42-10 /л).
Подобным образом изменялась динамика Т-Е-РОК-лимфоцитов в крови крыс 3 группы. Здесь показатель Т-Е-РОК-клеток был выше, чем у контрольных животных на 3 день опыта в 1,08 раза (на 0,37-10 /л), на 7 день в 1,28 раза (на 1,25-10 /л), на 15 день в 1,73 раза (на2578-10 /л), на 30 день в 1,39 раза (на 1,74-10 /л), на 50 день в 1,3 раза (на1,21-109/л).
Динамичной последовательности в повышении числа Т-Е-РОК-клеток в крови крыс 2 и 3 групп не наблюдалось, ибо в разные сроки в этих группах степень повышения количества Т-Е-РОК-лимфоцитов был выражен не одинаково.
Данные по исследованию динамики изменения содержания Т-хелперов в крови крыс представлены в таблице 10, на рисунке 4 Б. Содержание Т-хелперов в крови животных 1 группы выявлялось на уровне от 0,94 до 1,12-10 /л. Описываемый показатель в крови опытных животных 2 и 3 групп имел тенденцию к выраженному повышению.
Результаты исследования динамики изменения содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-ЕАС-лимфоцитов в поверхностном паховом лимфатическом узле крыс представлены в таблице 13-16 , на рисунке 5.
Содержание Т-Е-РОК-лимфоцитов в поверхностном паховом лимфатическом узле крыс 1 контрольной группы, за период опытов, колебалось на уровне от 29,4 до 32,3% (табл. 13).
Описываемый показатель в лимфатическом узле животных 2 и 3 опытных групп, в процессе опытов, имел тенденцию к активизации. Его содержание повысилось, по сравнению с фоновым и контрольным значением в лимфоузле животных 2 группы к 7 дню опыта в 1,15 и 1,07 раза (на 4,6 и 2,4%), к 15 дню в 1,18 и 1,19 раза (на 5,5 и 5,9%), к 30 дню в 1,25 и 1,14 раза (на 7,7 и 4,65), к 50 дню в 1,21 и 1,19 раза (на 6,1%).
Уровень Т-Е-РОК-лимфоцитов в поверхностном паховом лимфатическом узле животных 3 группы увеличился, по сравнению с первоначальным фоновым значением и показателем контрольных животных, через 7 дней опыта в 1,05 и 1,02 раза (на 1,8 и 0,9%), через 15 дней в 1,09 и 1,15 раза (3,0 и 4,7%), через 30 дней в 1,14 и 1,15 раза (на 4,6 и 4,8%), через 50 дней в 1,13 и 1,16 раза (на 4,1 и 4,9%).
При этом, во все эти сроки опыта, показатель Т-Е-РОК-лимфоцитов в лимфоузле крыс 2 группы был выше значения его у животных 3 группы: в 1,04 раза (на 1,5%), в 1,03 раза (на 1,2%), в 1,05 раза (на 1,8%) и 1,03 раза (на 1,2%).
Влияние необработанного янтаря на иммуноморфологическую реактивность лимфоидных органов
В селезенке животных 1 контрольной группы на долю красной пульпы органа приходилось от 68,9 до 70,1%, лимфатических узелков без светлых центров от 12,7 до 13,15%, со светлыми центрами от 3,87 до 4,02%, периваскулярных лимфоидных муфт от 6,31 до 6,93% от площади гистосреза. Селезенка крыс 2 и 3 опытных групп реагировала высокой иммуноморфологической реактивностью на влияние аэрозоля легких отрицательных ионов создающихся из электронов янтаря и янтарной кислоты. Это проявлялось в виде расширения площадей В- и Т-зависимых зон.
В селезенке животных 2 группы регистрировалось расширение площади лимфатических узелков без светлых центров. К 15 дню опыта они превышали контрольный уровень в 1,39 раза (на 5,1%), фоновый в 1,47 раза (на 5,8%). Этот процесс прогрессировал н к концу опытов (50 день) площадь лимфатических узелков без светлых центров в селезенке крыс 2 группы превышала контрольную цифру в 1,63 раза (на 8,3%), фоновый показатель в 1,75 раза (на 9,2%), значение предыдущего срока опыта в 1,18 раза (на 3,4%).
Показатель площади лимфатических узелков без светлых центров в селезенке крыс 3 группы увеличился к 15 дню опыта, по сравнению с контрольным значением, в 1,27 раза (на 3,6%), к 50 дню-в 1,54 раза (на 7,2%).
Площадь лимфатических узелков со светлыми центрами в селезенке животных 2 группы на 15 день эксперимента расширилась, по сравнению с контрольным уровнем, в 1,81 раза (на 3,19%), с фоновым - в 1,89 раза (ыа 3,36%). Этот процесс прогрессировал и к концу опытов (50 день) описываемый показатель был выше контрольной цифры в 2,58 раза (на 6,38%), фонового значения в 2,76 раза (на 6,64%), показателя предыдущего срока исследования в 1,46 раза (иа 3,28%). Подобным образом, но менее выраженнее, реагировали лимфатические узелки со светлыми центрами в селезенке крыс 3 группы. Здесь их площадь к 15 дню опыта превысила контрольный уровень в 1,48 раза (на 1,95%), фоновый в 1,57 раза (на 2,18%), уступая показателю животных 2 группы, иа этот срок опыта, в 1,19 раза (на 1,15%)). На 50 день исследований площадь лимфатических узелков со светлыми центрами в селезенке крыс 3 группы превышала контрольное и фоновое значение в 2,09 и 2,22 раза (на 4,42 и 4,65%), показатель предыдущего срока исследования (15 день) в 1,41 раза (на 2,47%).
Площадь Т-зависимой периваскулярной лимфоидной муфты в селезенке крыс 2 группы расширилась, превысив к 15 дню контрольный показатель в 1,17 раза (на 1,19%), фоновый в 1,28 раза (на 1,78%). К 50 дню опыта эта разница, в сторону превышения, с контролем и фоном, составила в 1.48 и 1,62 раза (на 3,37 и 3,96%). При этом показатель 50 дня был выше значения предыдущего срока исследования (15 день) в 1,26 раза (на 2,18%).
Данные по морфометрическим и гистологическим исследованиям структуры тимуса и тимического индекса представлены в таблице 29-31, на рис. 26 А,Б,В, 27-33. В тимусе мы измеряли площадь коркового вещества органа, непосредственно ответственного за дозревание под действием гормонов тимуса Т-лимфоцитов и площадь мозгового вещества. Площадь коркового вещества тимуса крыс 1 группы занимала в среднем 58,4 - 59,7%, мозгового - 40,3 - 41,6%.
В тимусе крыс 2 и 3 опытных групп отмечали расширение площади коркового вещества органа. Так, по 2 группе данный показатель превышал к 15 дню опыта значение его в контроле в 1,09 раза (на 5,6%), фоновый показатель в 1,11 раза (иа 6,5%). Этот процесс прогрессировал по срокам опыта и к 50 дню корковое вещество тимуса крыс по площади превышало контрольную цифру в 1,21 раза (на 12,7%), фоновое значение в 1,24 раза (на 14,1%), показатель предыдущего срока исследования (15 дней) в 1,11 раза (на 7,6%). Параллельно с расширением площади коркового вещества тимуса регистрировалось уменьшение площади мозгового вещества органа.
Подобные иммуноморфологические перестройки отмечались и в тимусе животных 3 группы. Здесь площадь коркового вещества тимуса к 15 дню опыта увеличилась, по сравнению с контрольным показателем, в 1,05 раза (на 3,0%), с фоновым -также в 1,05 раза (на 3,25%). Этот процесс прогрессировал по срокам опыта и к 50 дню описываемый показатель был выше его значения в контроле в 1,16 раза (на 9,6%), фонового уровня в 1,17 раза (на 10,3%), параметра предыдущего срока исследования (15 день)-в 1,11 раза (на 7,1% ).
Тимический индекс крыс 1 контрольной группы, составивший 0,15 - 0,17 свидетельствовал о соответствии его значению нижнего уровня иммунологической реактивности организма животных (рис. 27).
Показатели тимического индекса крыс 2 и 3 групп, регистрируемые на 15 день эксперимента, равные 0,20 и 0,18 указывали на хороший иммунный баланс в организме крыс.
Индексы тимуса животных 2 и 3 групп, составившие к концу опыта 0,24 и 0,22 свидетельствовали о высокой иммунной реактивности в организме крыс на этот период исследований.
Результаты исследования динамики изменения содержания в кишечнике крыс бифидобаїстерии, под влиянием необработанного янтаря, представлены в таблице 32, на рисунке 34 А. Бифидобаїстерии в їсишечнике крыс 1 контрольной группы, за период опытов, не имели выраженных изменении в содержании и выделялись на уровне от 8,74 до 9,86 lg КОЕ/г.
Легкие отрицательные ионы, фитонциды янтаря и янтарная кислота, выделяемые необработанным янтарем способствовали значительной активизации бифидоф-лоры в їсишечнике крыс.
Уровень бифидобактерий в їсишечнике животных 2 группы повысился, по сравнению с показателем крыс 1 контрольной группы, к 7 дню опыта в 1,24 раза (на 2,44 lg КОЕ/г), к 15 дню в 1,71 раза (на 6,73 lg КОЕ/г), к 30 дню в 2,03 раза (на 9,48 lg КОЕ/г), к 50 дню в 2,1 раза (на 9,66 lg КОЕ/г).
Максимальное повышение уровня бифидобактерий отмечалось в їсишечнике крыс 3 группы. Они превысили контрольное значение и показатели животных 2 группы на 7 день опыта в 1,49 и 1,19 раза (на 4,84 и 2,4 lg КОЕ/г), на 15 день в 2,1 и 1,22 раза (на 10,4 и 3,7 lg КОЕ/г), на 30 день в 2,36 и 1,16 раза (на 12,4 и 3,0 lg КОЕ/г), на 50 день в 2,32 и 1,1 раза (на 11,5 и 1,9 lg КОЕ/г).
