Введение к работе
- -- -Актуальность- проблемну Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) включила'лейшманиозы-в число наиболее важных" паразитарных Полезней, для- изучения которых создана и осуществляется специальная программа. По данным ВОЗ лейгаманиозами ежегодно болеют 12- млн- человек.' Почти третья"част5 населения земного шара проживает в эндемичной зоне и находится под угрозой
заражениям": ~ .—-_.- — " -
— -" Лейшманиозы- в целом и" кожний лейшманиоз в частности, - до
сих пор встречаются" в "странах"Центральной Азии.'Наиболее актив
ные эндемичные очаги зоонозного кожного лейшманиоза (ЗКЛ) от
мечаются в Узбекистане и Туркмении.
В настоящее время в Узбекистане ЗКЛ регистрируется в б
областях: Бухарской, Навоийской," Сурхандарьинской, Кашкадарь-
инской, Сырдарьинской и Джизакской, а также в Республике Кара-
калпакстан, нанося значительный социально-экономический ущерб.
- Кроме борьбы с резервуаром возбудителя и его" переносчи
ками в ряде случаев" важное значениеприобретают меры индиви
дуальной профилактики," среди"которых".существенную-роль' играют
профилактические прививки вирулентной культуры лейшманий.
Опыт массовых противолейшманиозных' прививок показал их эпидемиологическую эффективность'(Н.Ф.Родякин, 1957, 1964, 1968? В.А.Серебряков и Др., 1968; Д.Г.Сергиев и-др.; 1970; С. Караходжаева, 1971; В.М.Сафьянова, 1971; Э.Е.Шуйкина и др.,
-1992). - .".-" --..-----.--;-_;'-;- - --.-= ;--
Для" производства* прививочного- материала требуются све-
жевнделеннне, высоковирулентные-штаммы возбудителей". Методика
отбора, контроля" вирулентности штамма в каждой серии прививоч
ных культур-несовершенна. -;: >.-''- " " -----..
С другой'стороны,"остается-недостаточно исследованным их важнейшее свойство - вирулентность,"являющееся"мерой пато-генности паразита (Л.Т.Зильбер, 1958т В.Р.Петровская, 1967) и потому определяющее опасность возбудителя и качество-прививочного материала, т.е. прогноз'и" профилактику заболевания. -
Последние работы (В.М.Сафьянова, 1982; О.И.Келлина,1982; В.Д.Каллиникова и др., 1987; E.Killick-Kendrick; 1976; y.souhiein, 1993 и др.-)-дают начала морфогенетическому направлению в понимании и определении вирулентности лейшманий.
Вероятно, приобретение"или утрата вирулентности лейшманиями сопряжена с изменениями в их морфологии и метаболизме.
Продолжением этого нового морфогенетического направления--является настоящее исследование.
Выявление взаимосвязи между , морфологическими, цитохими
ческими, физиологическими (факторами патогенности) характеристи
ками лейшманий и их вирулентностью, а такие закономерностей
изменений этих характеристик в процессе длительного культиви
рования in vitro представляется теоретической основой
практических работ по стандартизации прививочных штаммов лей
шманий.
Исследование лейшманий в . культуре является особенно актуальним ещё и потому, что именно культуральные формы используются как для профилактических прививок, так и для совре-уенных биохимических, физиологических, иммунологических.и моле-кулярно-биологических исследовг~!ИЙ.
Цель и задачи исследования. Цель, исследования - выявить взаимосвязи между морфологическими, физиологическими, цитохимическими характеристиками лейшманий и их вгрулентностыо, закономерности этих характеристик' в пропессе длительного культивирования, разработать на . их основе иаучно-обоснованнне подхода к улучшению - стандартизации прививочных штаммов.
В процессе исследования решались следугоцие задачи:
- изучить изменения вирулентности штаммов Ь.ваЗог
в процессе длительного культивирования на искусственных питательных средах в сопоставлении с эталонными штаммами различных видов лейшманий из криэбанка НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАШ г.Москвы;
адаптировать методы оценки вирулентности и определения факторов патогенности для различных видов и штаммов лейшманий;
адаптировать цитохимические методы для исследования различных видив и штаммов лейшманий в культурах;
изучить факторы патогенности штаммов в процессе длительного культивирования на питательной среде;
изучить возможности повышения вирулентности лейшманий, сниженную культивированием, путем пассажей . на животных;
...- з -
" " - "изучить морфологические, некоторые цитохимические и физиологические параметры, характеризующие понижение in vitro и повышение ' 'ia'vivo" 'вирулентности лейшманий.
- Научная'новизна. Впервые в сравнителном аспекте изучены
изменения морфологических, цитохимических и физиологических
характеристик различных"видов и штаммов лейшманий в процессе
ИХ ДЛИТеЛЬНОГО КуЛЬТИВИрОВаНИЯ "in~Vitro И" """"ІП vivo." .
-Выявлена корреляция"важнейшей характеристики паразитов -
вирулентности с их морфологическими, цитохимическими свойствами, а также с факторами,'формирующими механизмы их патогеннос-
ти. .......
На этой основе впервые" предложена" система морфологических, цитохимических и физиологических маркеров вирулентности, которая может быть использована при отборе материала для профилактических прививвк против ЗКЛ.'
- В результате исследования предложена новая оригинальная
схема жизненного цикла лейшманий в культуре. :' '
Практическая значимость. Исследования являются итогом
25-летней работы, имеют научно-практическую направленность.
Получанные данные важны для понимания патогенеза болезни. Пред
ложены новые морфологические, цитохимические и" физиологические
критерии для отбора, птшвивочного материала в профилактике ЗКЛ.
Они отличаются от существующих методов биопроб простотой, на
дежностью, доступностью и позволяют быстро, на протяжении 2-3
суток (вместо 3-7 месяцев), определить, вирулентность штамма,
пригодность его для производства прививочного препарата и эф
фективно контролировать его качество. - -
Результаты' работы могут быть- использованы в практичес
ком здравоохранении и научно-исследовательских' учреждениях для
повышения качества и эффективности профилактики и иммунодиаг
ностики." " '""" *
Предложения выносимые" на защиту:-" -
- I." Предложена-новая схема жизненного-цикла лейшманий,
согласна которой в процессе развития в культуре на питательной
среде имеет место закономерная, последовательная смена либо че
тырех морфологических форм (темные, просветляющиеся, светлые и
метацикпические), либо трех (темные, просветляющиеся л светлые)
в пределах одной промастиготной стадии. -
2. Потеря вирулентности (азирулентность) в процессе кулъ-
-A ~
тивирования связана с постепенной утратой способности промасти-гот дифференцироваться в финальные метациклкческие формы.
-
Вирулентность лейшманий в культуре определяется цитохимическими свойствами популяции промастигот задолго, до взаимодей- ; ствия паразитов с организмом ^хозяина и даже до возникновения ме-тациклических форм. Сохранение вирулентности коррелирует с достаточно высоким уровнем диафоразной и пероксидазной активности в , светлых формах, предшествующих метациклическим.
-
Фактору патогенности лейшманий в виде фибринолизина, плазмокоагулазы и дермонекротоксина положительно коррелируют с уровнем вирулентности промастигот в культуре.
-
Предлагается новая экспресс-методика отбора патогенных, высоковирулентных штаммов лейшманий в качестве дополнительного контроля за степенью вирулентности производственных штаммов лейшманий. -
-
Выявленные цитологические, цитохимические и физиологические коррелят вирулентности могут быть использованы при отборе прививочного материала для профилактических прививок против ЗКЛ.
Внедрение в "практику. Изданы и внедрены в практику здравоохранения методические рекомендации: "Экспресс-мотодика' индикации патогенных, "высоковирулентных штаммов лейпшаний от непатогенных, авирулентных", утвержденные Министерством здравоохранения Узбекской ССР 25 июня 1985 г.
- Результаты исследований используются на ежегодных циклах повышения квалификации медицинских работников на базе НИИ медицинской паразитологии им.Л.М. Исаева, в преподавании на кафедрах микробиологии,детских инфекционных болезней и инфекционных болезней с курсом эпидемиологии Самаркандского и Бухарского медицинских институтов.
- Оказана практическая помощь - здравоохранению Кашкадарьинской, Бухарской и Джизакской областей Республики Узбекистан в организации мероприятий-по'.профилактике и выявление» больных ЗКЛ.
. Апробация работы: Материалы диссертации доложены и об- суждены на:. ;.;.'.-''-'. у-"-;:-,';'';":; ;'.'''>''.:'") ' '"-'I, П, ДУ и У съездах Всесоюзного общества протозооло-гов. Баку," 1971; Киев, 1976; Ленинград, 1987; Витебск, 1992;.
'-заседаниях научного общества эпидемиологов, тликробио- -,
логов, гигиенистов, инфекционистов и паразитологов. Самарканд,
.1972; 1974г 1986; 1993; 1994; \-.:- /--VУ"
:, :-'_ научных конференциях НИИ медлцинской-паразитология _'.
им.Л.М.Исаева МЗ Республики Узбекистан по проблемам медкпинской паразитологии'. Самарканд, 1972, 1974, 1975, 1933,. 1937, 1993;
научной конференции, посвященной 50-летию Армянского НИИ эпидемиологии, вирусологии и медицинской параэттологии. Ереван, 1973;
втором Всесоюзном симпозиуме по факторам патогенности микроорганизмов: химическая природа, биологические функции и генетический контроль. Москва, 1974;
республиканской научно-практической конференции, посвя-цанной ЮО-летию со дня рождения Л.Ы.Исаева. Самарканд, 1986;
научно-практических конференциях Самаркандского государственного медицинского института им.И.П.Павдова. Самарканд, 1988, [990.
Публикации. По материалан диссертации опубликовано 47 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, б глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа изложена на Т86 страницах машинописи, иллюстрирована 12 рисунками и II таблицами. Указатель дитературы включает 437 наименований, в том числе 127 иностранных авторов.
