Содержание к диссертации
Введение
Часть 1. Введение. 3
Часть 2. Литературный обзор "Конформационный анализ углеводов в растворе".
2.1. Экспериментальный конформационный анализ углеводов. 7
2.1.1. Теория и методы регистрации ядерного эффекта Оверхаузера .
2.1.2. Теория и методы регистрации вицинальных констант спин-спинового взаимодействия.
2.2. Теоретический конформационный анализ углеводов . 44
Часть 3. Обсуждение результатов. 56
3.1. Целевые соединения и стратегия их исследования. 56
3.2. Олигосахариды, относящиеся к фрагментам (1—>3)- связанной фукоидановой цепи.
3.2.1. Несульфатированные олигофукозиды 1а-5а . 58
3.2.2.2-О-сульфатированные олигофукозиды 16-46. 73
3.2.3.4-0-сульфатированные олигофукозиды 1в-4в. 82
3.2.4. Применение данных спектрального и конформационного анализа синтетических олигофукозидов в структурном исследовании природных фукоиданов.
3.3. Олигосахариды, относящиеся к фрагментам фукоидановой цепи с чередующимися (1->3) и (1->4)-связями .
3.3.1. Несульфатированные олигофукозиды 1а-5а. 99
3.3.2.2-О-сульфатированные олигофукозиды 16-46. 108
3.3.3. Применение данных спектрального и конформационного анализа синтетических олигофукозидов в структурном исследовании природных фукоиданов.
Часть 4 Выводы. 122
Часть 5 Экспериментальная часть. 123
Часть 6 Список литературы.
- Теория и методы регистрации ядерного эффекта Оверхаузера
- Теоретический конформационный анализ углеводов
- Несульфатированные олигофукозиды 1а-5а
- Олигосахариды, относящиеся к фрагментам фукоидановой цепи с чередующимися (1->3) и (1->4)-связями
Введение к работе
Исследование взаимосвязи между структурой и свойствами углеводов является важнейшей задачей современной химии природных соединений. К широко изучаемым в последнее время биологически активным углеводам относятся полисахариды фукоиданы, про которые известно, что они проявляют противоопухолевую [1, 2], антикоагулянтную [3, 4], противовоспалительную [5-7] и антивирусную [8-Ю] активности.
Фукоиданы построены преимущественно из a-L-фукопиранозных остатков, связанных в полимерные цепи. При этом для их цепей характерно наличие разветвлений, а также высокая степень сульфатирования, одна-две сульфатные группы на одно фукопиранозное звено. Фукоиданы содержатся в бурых водорослях и морских беспозвоночных, относящихся к типу иглокожих. Несмотря на то, что эти биополимеры известны уже несколько десятков лет, имеются лишь фрагментарные сведения об их строении. Это обусловлено сложностью структурной характеристики фукоиданов из-за их нерегулярности, гетерогенности, а также отсутствия методов их направленного и контролируемого расщепления.
Изученные на данный момент фукоиданы можно разделить на два класса по типу соединения a-L-фукопиранозных остатков в полимерные цепи (Рисунок 1). К первому классу относятся фукоиданы с основной цепью из a-L-фукопиранозных остатков, соединенных (1- 3)-гликозидными связями. Фукоиданы с таким типом цепи были выделены из водорослей Laminaria saccharina [11], Chorda filum [12], Cladosiphon okamuranus [13], морского огурца Ludwigothurea grisea [14] и морского ежа Strongylocentrotus franciscanus [15]. Другой класс фукоиданов содержит основную цепь из a-L-фукопиранозных остатков с чередующимися (1- 3)- и (1- 4)-связями. К этому классу относятся фукоиданы из водорослей Fucus evanescense [16], Fucus distihus [17], Fucus serratus [18], Ascophyllum nodosum [19]. Для обоих типов цепей характерно наличие разветвленных фрагментов, при этом имеются сведения о 2,3- и 3,4-замещенных a-L-фукопиранозных остатках [12, 13, 18].
Наличие биологической активности фукоиданов связывают с их способностью имитировать углеводные лиганды природных рецепторов, например, белков лектинов. При этом способность фукоиданов к имитации определяется наличием в их структуре сульфатных групп, которые имеют определенную пространственную ориентацию. Таким образом, для понимания механизма имитации необходимо знать пространственную структуру фукоиданов. Это позволит разрабатывать эффективные фармацевтические препараты.
В данной работе проведено систематическое изучение вторичной (пространственной) структуры синтетических олигофукозидов (Рисунок 2 и 3), отвечающих фрагментам фукоидановых цепей обоих типов (I и И).
Изучение проводилось методами спектроскопии ЯМР и теоретического молекулярного моделирования. На основании полученных данных выявлены ключевые моменты, определяющие пространственное строение фукоидановых цепей. Другой целью работы являлась систематизация спектральных 13С ЯМР эффектов сульфатирования и гликозилирования для фукозидов и их объяснение в свете результатов теоретического конформационного анализа. В дальнейшем эти эффекты могут быть использованы при установлении структуры природных фукоиданов по данным С ЯМР [20].
Теория и методы регистрации ядерного эффекта Оверхаузера
Сигналы ЯМР, детектируемые катушкой приемника, имеют малую интенсивность, что приводит к большому уровню шума в спектре. Для получения спектра с хорошим отношением "сигнал-шум" цикл "возбуждение-регистрация" повторяют несколько раз, при этом происходит накопление сигналов ЯМР [31]. Перед началом каждого нового цикла, вводится релаксационная задержка trei (Рисунок 5), в течение которой каналы передатчика и приемника спектрометра закрыты. В это время из системы выводятся остатки возмущения, оставшиеся от предыдущего цикла (система приходит в состояние теплового равновесия).
Возвращаясь к обсуждению импульсной последовательности эксперимента по наблюдению протонных гомоядерных ЯЭО, стоит отметить, что в нем перед действием неселективного протонного импульса образец в течение времени xs подвергается действию электромагнитного излучения малой мощности (CW) на резонансной частоте облучаемого протона к (Рисунок 6). В этот промежуток времени происходит развитие ЯЭО в системе, что изменяет интенсивность детектируемых сигналов. В экспериментах ЯЭО обычно используют заключительный неселективный импульс с длительностью, отвечающей углу поворота векторов намагниченностей 90 (90-ный импульс, Рэд), что позволяет получить максимальную интенсивность сигналов ЯМР в катушке ЯМР-приемника, т.к. при этом создается максимальная компонента векторов намагниченностей в плоскости х-у.
Изменения интегральных интенсивностей сигналов в ходе экспериментов по ЯЭО, как правило, имеют малую величину (5-20%). Для их достоверной интерпретации необходимо иметь спектр с хорошим отношением "сигнал-шум", что требует длительного накопления эксперимента.
В зависимости от времени облучения протона к (электромагнитной мощностью CW, Рисунок 6) меняются величины ЯЭО наблюдаемые на других протонах системы. Общий вид зависимости величины ЯЭО на протоне d (fkd ) от времени облучения протона к представлен на рисунке 7. Из графика видно, что сначала с увеличением времени насыщения ядра к происходит увеличение ЯЭО на протоне d. Однако при больших временах насыщения величины ЯЭО выходят на плато, что соответствует достижению системой нового состояния равновесия.
В зависимости от используемого времени облучения системы различают эксперименты по равновесному и неравновесному ЯЭО [30]. В случае равновесного ЯЭО возмущение разности заселенности переходов ядра к происходит в течение столь длительного времени (несколько секунд), что система успевает достигнуть нового состояния равновесия. Формула для вычисления равновесного ЯЭО получается решением системы (3) путем устранения уравнения для облучаемого ядра к (i=k) и приравниванием S и всех производных dS/dt к нулю во всех остальных уравнениях. При этом мы получаем систему из (N-1) связанных дифференциальных уравнений (6), содержащую (N-1) неизвестную , k j где /І есть равновесный ЯЭО, возникающий на протоне j при насыщении протона к. В нашем случае система взаимодействующих ядер состоит полностью из протонов, поэтому в начальных условиях Sj одинаково для всех / Л. Система (6) может быть решена численно, если известны величины всех релаксационных коэффициентов Щ.
Ноггл и Ширмер [29] предложили другой подход для нахождения равновесных величин ЯЭО. При рассмотрении (6) при i=d, где d -наблюдаемый протон (d k), мы можем записать это уравнение
Подставляя выражения R,, и Ry из (4) и (5) в уравнение (8) и предполагая, что тс одинаково для всех протонов в пределах одной молекулы, мы получаем формулу Ноггла и Ширмера:
Подчеркнем, что это выражение получено в предположении, что подавляющий вклад в релаксацию вносит внутримолекулярное диполь-дипольное взаимодействие протонов. Если в релаксацию существенный вклад вносят другие механизмы, то, очевидно, что реальная величина ЯЭО будет меньше рассчитанной по формуле (9).
Таким образом, величина ЯЭО оказывается зависимой от нескольких факторов, в первую очередь от расстояния между насыщаемым протоном к и наблюдаемым протоном d (обратно пропорциональна rdk6), от времени корреляции протонов хс и Ларморовой частоты протонов со0 (Рисунок 8).
Для небольших органических молекул 10"10 тс 10 12 сек.; например, для моносахаридных остатков тс«10 и сек., для дисахаридов тс«10"10. При частоте прибора 500 МГц, Ларморова частота протонов со0«109, поэтому оо02Тс2 1- Для этого случая выражение, стоящее в квадратных скобках уравнения (9), равно 0,5 и таким образом уравнение (9) упрощается до:
В этом случае наблюдаются положительные ЯЭО, т.е. при насыщении резонанса протона к интенсивность наблюдаемого протона d увеличивается. Для системы из двух протонов в таких условиях fi?=Q,5 и эта величина является максимальным положительным ЯЭО. Условие соо2тс2«1 называется условием предельного сужения (это условие соответствует полному исчезновению диполь-дипольного уширения линий за счет усреднения по всем ориентациям молекулы).
Теоретический конформационный анализ углеводов
Одна из ветвей теоретического конформационного анализа связана с представлением о молекуле как о механической системе, в которой атомы рассматриваются в виде точечных масс. - Такая модель основывается на приближении Борна — Оппенгеймера, согласно которому потенциальная энергия молекулы с хорошей точностью описывается непрерывной функцией координат ядер. Основы этого направления конформационного анализа заложены Хиллом [63], Уэстхаймером [64] и Китайгородским [65, 66]. По идее авторов, химические связи характеризуются некоторыми «естественными» длинами и валентными углами, а конформации реальных молекул устанавливаются такими, чтобы в простых случаях сохранить эти величины. Кроме этого, на геометрию молекулы также оказывают влияние ван-дер-вальсовы, торсионные и электростатические межатомные взаимодействиями. Этот метод называется молекулярной механикой; подробно его теория изложена в монографии [67]. При этом потенциальная энергия молекулы определяется всеми вышеперечисленными взаимодействиями: У ІУраап+ІУіеф+ІУцдв+ІУпюрс+ Уч 09) где ZVpacm - сумма энергий растяжения связей, ІУдеф - сумма энергий деформации валентных углов, 2УВдв - сумма энергий ван-дер-вальсовых взаимодействий, ZVq - энергия электростатических взаимодействий.
Равновесному состоянию молекулы отвечает минимум потенциальной энергии. Если, в результате растяжения связей молекула деформирована по отношению к своему равновесному состоянию с энергией VQ, то ее потенциальная энергия может быть представлена в виде ряда Тейлора:
В молекулярно механических расчетах член Vo обычно принимается равным нулю, т.к. он является константой для каждой выбранной молекулы и имеет важное значение только при вычислении теплоты образования [67]. Из определения минимума потенциальной энергии также следует, что член с первой производной тоже обращается в ноль. Для достаточно небольших смещений атомов, членами выше квадратичного пренебрегают. Таким образом, в первом приближении потенциальная энергия растяжения химических связей зависит от третьего члена, и если заменить вторые производные их обычным обозначением kr, то Vpacm=0,5kr(r-r0)2 (21)
Это так называемое гармоническое приближение. При больших деформациях наблюдается отклонение от гармонического приближения, и в этом случае также учитывают четвертый член ряда Тейлора. Тогда энергия растяжения связи записывается как Vpac O.Skrir-ro? + k/(r-r0)3 (22)
В современных силовых полях энергия растяжения связей учитывается в виде уравнения (22). Силовые постоянные kr и к/, а также геометрический параметр г0 для разных связей находят варьированием в процессе воспроизведения геометрии простых молекул. Выражение, определяющее зависимость энергии молекулы от деформации валентного угла (21), имеет вид аналогичный уравнению (22): однако при этом иногда учитывают и члены пятого порядка ряда Тейлора [68]. Для описания ван-дер-вальсовых взаимодействий любой пары валентно несвязанных атомов наиболее часто используют двухпараметровый потенциал "6-12" Леннарда-Джонса [69].
Другая часто употребляемый потенциал для расчета ван-дер-вальсовых взаимодействий - трехпараметровая потенциальная функция "6-ехр" Букингема [70] где А 0, В 0, С 0- эмпирические параметры. Для определения коэффициентов в функциях типа "6-12" и "6-ехр" на основе известных поляризуемостей атомов, вычисляют параметр А, описывающего дисперсионное притяжение атомов. Затем из условия минимума функции при равновесном расстоянии между атомами, получают параметр В, который характеризует отталкивание атомов.
Расчеты ряда этаноподобных молекул показали, что если исходить только из потенциалов растяжения связей, угловых деформаций и вандервальсовых взаимодействий, то невозможно воспроизвести величины барьеров внутреннего вращения, полученные экспериментально [71, 72]. В связи с этим, было предложено, что помимо вышеуказанных взаимодействий, барьер внутреннего вращения обусловливается также обменными взаимодействиями электронов соседних связей [73]. Для описания этого явления в рамках невалентных взаимодействий наиболее удобным оказалось введение в расчеты члена, зависящего от взаимного расположения векторов, соединяющих ядра. Торсионная потенциальная функция описывается уравнением (26) и представляет собой разложение в ряд Фурье.
Разложение экспериментальной потенциальной функции вращения этаноподобных молекул в ряд Фурье показало, что существенную роль играет только третья гармоника ряда [73]. Поэтому долгое время торсионный потенциал связей представлялся в виде Однако в современных силовых полях используются и первые два члена уравнения (26) [74, 75].
Энергия электростатических взаимодействий для незаряженных полярных молекул в молекулярной механике определяется через диполь-дипольные взаимодействия по так называемой формуле Джинса Vq=(/Jiju/rij 3)(cos%-3cosai COSCCJ) (28) где є - эффективная диэлектрическая проницаемость, % - угол между двумя диполями ЦІ и uj, а а; и а,- - углы, образованные диполями с вектором, который их соединяет. Электростатические взаимодействия ионов описываются формулой Кулона
Энергия электростатических взаимодействий зависит от диэлектрической проницаемости среды, в которой находятся заряды или диполи. Однако, по причине того, что заряды на атомах используемые в молекулярно механических расчетах рассчитываются разными способами [76-79], используемые эффективные величины диэлектрической проницаемости є тоже варьируются достаточно в широких пределах. Так Рис и сотр. [80] используют значение є=4 при расчетах различных углеводов, Шторц [81, 82] -є=3 -для сульфатированных и є=81 для несульфатированных углеводов, Гербст [83, 84] - е=81 как для сульфатированных, так и несульфатированных углеводов.
Несульфатированные олигофукозиды 1а-5а
Наличие физиологической активности у фукоиданов связывают с тем, что отдельные участки их полисахаридных цепей имитируют природные углеводные лиганды белковых молекул (ферментов, молекул клеточной адгезии, гормонов и других), определяющих протекание многих важных физиологических процессов. При этом способность фукоиданов к имитации определяется наличием в их структуре сульфатных групп, которые имеют определенную пространственную ориентацию. Таким образом, для понимания механизма имитации необходимо знать пространственную структуру фукоиданов.
Как было отмечено во введении, известны два основных типа цепей фукоиданов. Фукоиданы, относящиеся к первому типу, построены из L-фукопиранозных остатков, связанных между собой преимущественно сс-(1- 3)-гликозидными связями. Для фукоиданов второго типа характерно чередование сс-(1-»3)- и сс-(1-»4)-гликозидных связей между L-фукопиранозными остатками. В данной работе проведено систематическое изучение вторичной (пространственной) структуры синтетических олигофукозидов, являющихся предполагаемыми фрагментами фукоидановых цепей обоих типов. При этом были рассмотрены олигофукозиды различающиеся числом звеньев в цепи (от 2 до 6), положением сульфатных групп (несульфатированные, 2-0-сульфатированные и 4-0-сульфатированные), а также олигофукозиды, содержащие в своей структуре разветвленные фрагменты.
Как было сказано в литературном обзоре, пространственная организация углеводов в первую очередь определяется конформациями их гликозидпых связей. Для установления строения последних традиционно используют величины ЯЭО между протонами, принадлежащими соседним моносахаридным остаткам, соединенным гликозидной связью. Однако, в случае тетра- и гексафукозидов, рассмотренных в данной работе, этот подход оказался неприменим, из-за перекрывания сигналов в спектрах ID и 2D ЯЭО.
Поэтому, мы исследовали возможность использования величин трансгликозидных КССВ тф и Jv (Рисунок 1) для конформациоппого анализа олигофукозидов. Как было сказано в литературном обзоре, величины тф и Jv определяются величинами соответствующих торсионных углов ф И Vj/ (уравнение (1), Рисунок 1) и таким образом зависят от конформации гликозидной связи. Экспериментальные величины тф и Jv были получены, с использованием 2D J-HMBC и J-resolved экспериментов.
Экспериментальные величины констант были сопоставлены с рассчитанными. Расчет констант проводился исходя из данных молекулярно-механических расчетов3 (силовое поле ММЗ, программа TINKER). При этом для каждой гликозидной связи исследуемых соединений была построена конформационная карта, дающая информацию об относительных энергиях конформеров вращения. Эмпирическое уравнение Карплуса (1) позволяет рассчитать величины трансгликозидных КССВ J9 и J для каждой точки (ф, у) конформационного пространства молекулы. Экспериментально получаемые величины Jq, и Jv являются усредненными по всем конформерам, существующим в растворе. Такие же усредненные величины могут быть получены из данных конформационного анализа, используя распределение Больцмана. Показателем правильности конформационного моделирования можно считать совпадение полученных из расчета величин трансгликозидных КССВ J p и Jv с экспериментально определенными.
Молекулярно-механические расчеты были проведены А.Г. Гербстом (ИОХ РАН).
В данном разделе представлен конформационный анализ линейных (1-»3)-связанных дифукозида 1а, трифукозида 2а, тетрафукозида За и гексафукозида 5а, а также 2,3-разветвленного тетрафукозида 4а, изомерного соединению За. В Приложениях 1 и 2 приведены химические сдвиги !Н ЯМР и 13С ЯМР исследуемых олигосахаридов. Отнесение сигналов в Н-ЯМР одномерных спектрах проводилось с использованием комбинации 2D gCOSY, gNOESY и TOCSY экспериментов, в то время как сигналы в 13С ЯМР спектрах были отнесены с применением 2D gHSQC и gJ-HMBC экспериментов.
Олигосахариды, относящиеся к фрагментам фукоидановой цепи с чередующимися (1->3) и (1->4)-связями
Экспериментальные величины констант тф для (1-»3)-связей в линейном дифукозиде 1а, трифукозиде 2а и тетрафукозиде За близки друг другу и равны 3,6+0,3 Гц. При этом расхождение между экспериментальными и рассчитанными величинами тф не превышало точности рассчетов (1 Гц).
Экспериментальные величины констант Jv в олигофукозидах 1а-3а, в отличии от тф, оказываются зависимыми от длины (1-»3)-связанной цепи и позиции соответствующей связи в цепи. Так, в случае трисахарида 2а и тетрасахарида За величины J уменьшаются для межостаточных связей в направлении от невосстанавливающего к восстанавливающему концу молекул (Таблица 2).
Сопоставление экспериментальных и рассчитанных величин Jv показывало, что они были завышены в расчетах для межостаточных связей на восстанавливающих концах линейных (1- 3)-связанных олигофукозидов 1а, 2а, За. В то же время величины Jv были занижены в расчетах для межостаточных связей на невосстанавливающих концах олигофукозидов 2а, За. Наилучшее соответствие между расчитанными и экспериментальными величинами 3Jc,n наблюдалось для внутреннего дисахаридного звена (Б-В) в тетрафукозиде За (Таблица 2).
Напомним, что молекулярно механические расчеты не показали различия в конформациях гликозидных связей в пределах одной молекулы в случае линейных трифукозида 2а и тетрафукозида За. По-нашему мнению, различие между экспериментальными и рассчитанными данными связано с тем, что молекулярно механические расчеты воспроизводят конформации терминальных гликозидных связей в линейных олигосахаридах менее точно по сравнению с внутренними. Внутренние связи являются конформационно менее подвижными, а потому молекулярная механика воспроизводит их геометрию лучше.
Введение (1- 2)-связанного фукозного остатка в (1- 3)-связанную трифукозидпую цепь в случае тетрасахарида 4а изменяло экспериментальные величины обеих констант т9 и J у для (1- 3)-связей молекулы. При этом различие между экспериментальными и рассчитанными величинами констант становилось меньше (0.6 Гц) (Таблица 2) и не превышало точности рассчетов (1 Гц).
Величины рассчитанных констант J p и J для (1—»2)-связи близки к рассчитанным величинам для (1-»3)-связи в 2,3-разветвленном фрагменте тетрафукозида 2а. Различие между ними составляет менее 0,3 Гц (Таблица 2). Однако, экспериментальные величины констант тф и Jv для (1- 2)-связи составляют 2,2 и 2,1 Гц соответственно, и они на 1 Гц меньше, чем соответствующие величины для (1- 3)-связи. Последнее может быть объяснено различным влиянием 1-пропилокси и 4-гидрокси вицинальных замещающих групп на конформационное поведение (1-»2)- и (1- 3)-связей соответственно. Таким образом, различие между экспериментальными и рассчитанными величинами констант тф и Jv для (1- 2)-связи 2,3-разветвленного тетрасахарида 4а было больше, чем для (1- 3)-связей (Таблица 2), но при этом оно также не превышало точности расчетов (1 Гц).
Исследование линейного (1- 3)-связанного гексафукозида 5а было осложнено из-за наложения сигналов в 2D ЯМР спектрах. На рисунке 8 представлен фрагмент J-HMBC спектра, соответствующий области Jv константы. На этом спектре видны три корреляционных пика. Два пика отвечают терминальным дисахаридным фрагментам. Для них обеих величина Jv была равна 2,0+0,1 Гц. Из-за близости химических сдвигов Н- и 13С ЯМР для атомов внутренних звеньев их Jv корреляционные пики в J-HMBC спектре перекрывались. Им отвечает третий пик на рисунке 8. Очевидно, что последний может иметь такой вид только при близости между собой величин Jv констант для всех трех внутренних дисахаридных фрагментов. Величина расщепления третьего корреляционного пика отвечает величине константы 3,6 Гц. Однако из-за наложения сигналов величины Jv для внутренних дисахаридных фрагментов гексасахарида 5а могут отличаться в пределах 1 Гц от величины 3,6 Гц.
Константы тф для всех (1- 3)-связей гексасахарида 5а были определены из 2D J-resolved спектра. Для дисахаридного фрагмента на восстанавливающем конце молекулы величина тф=5,0 Гц, для дисахаридного фрагмента на невосстанавливающем конце молекулы величина J p=4,0. Для внутренних фрагментов величина тф=4,5, однако из-за перекрывания отвечающих им корреляционных пиков величины тф могут отличаться в пределах 1 Гц от величины 4,5 Гц. Таким образом, согласно экспериментальным данным по
величинам J p и Jv констант конформации внутренних дисахаридных фрагментов в линейном гексасахариде 5а отличаются от конформации внешних дисахаридных фрагментов.
Сопоставление экспериментальных величин трансгликозидных Jc,n констант для внутренних (жестких) (1- 3)-связей линейного тетрафукозида За и гексасафукозида 5а показывало, что величины тф и J констант различаются на 0,6 и 0,9 Гц, соответственно. Этот факт с одной стороны может быть связан с неточным определением тф и Tv констант в гексасахариде 5а из-за перекрывания корреляций в J-resolved и J-HMBC спектрах, а с другой стороны с изменением величин углов ф и \\), т.е. с изменением геометрии связи. При данных значениях тф и Jv констант их изменение на 0,6 и 0,9 Гц, соответствует изменению углов ф и \/ на 8 и 11 (Таблица 2). Таким образом, геометрия связи меняется не очень сильно.
Рассчитанные величины тф и Jv констант в гексасахариде 5а (Таблица 2) были близки для всех гликозидных связей и при этом были близки величинам констант в линейном тетрасахариде За. Сопоставление экспериментальных и рассчитанных величин 3JC,H ДЛЯ гексасахарида 5а показывало лучшее соответствие для внутренних связей4 чем для внешних (Таблица 2). Это подтверждает предположение о том, что внутренние связи в олигофукозидах являются конформационно менее подвижными.
![Спектроскопия ЯМР 1 Н и 13 С в исследовании стереохимии производных 3-аза и 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонанов](/i/i/4496/436775.png "Спектроскопия ЯМР 1 Н и 13 С в исследовании стереохимии производных 3-аза и 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонанов Хакимова Татьяна Викторовна")
