Содержание к диссертации
Введение
2 Индуцирование хиральности при нуклеофилыюй атаке на незамещенный атом углерода в азинах 7
2.1. Введение 7
2.2. Стереохимические эффекты при атаке ахирального нуклеофила на оптически активный азиновый субстрат 8
2.2.1. Влияние хирального заместителя у атома азота азинового кольца на диастереоселективность реакции
2.2.2. Влияние ахирального заместителя у атома углерода азинового кольца на диастереоселективность реакции 25
2.2.3. Влияние природы атакующего нуклеофила на стереохимический результат реакции присоединения к хиральным ацилазиниевым солям 26
2.2.4. Влияние хирального заместителя у кольцевого С-атомаазина 29
2.3. Асимметрическая индукция при атаке оптически активного нуклеофила на ахирзльный азиновый субстрат 37
2.4. Асимметрическая индукция при атаке ахирального нуклеофила на ахиральиый азиновый субстрат 40
2.5. Заключение 48
3 Обсуждение результатов 50
3.1, Синтез пептидомиметиков, содержащих циклический дипептидный фрагмент. 50
3.1.1. Стереохимические особенности синтеза 55
3.1.2. О механизме реакции 1,2,4-триазин-5(4Н)-онов с нуклеофилами и аминокислотами
3.1.3. Напроксен как вспомогательный хиральный агент в реакциях 1,2,4-триазин-5-онов с С-нуклеофилами 62
3.1.4. Сложноэфирный и хлорангидридный методы получения циклических пептидомиметиков 65
3.1.5. Реакции 1,2,4-триазин-5-онов с О-нуклеофилами , 68
3.1.6. 6-Фенил-1,2,4-триазин-5-он в синтезе пептидомиметиков 69
3.1.7. 6-Арил-1,2,4-триазин-3(2Н)-оны в синтезе пептидомиметиков 69
3.1.8. Пиримидин-2(4Н)-оны в синтезе пептидомиметиков 74
3.2, Синтез пептидомиметиков азапептидного типа
3.2.1. Введение гидразидов карбоновых кислот в 6-арил-1,2,4-триазин-3(2Н)-оны 75
3.2.2. Синтез 1,2,4-триазоло[І,5-сІ]-І,2,4-триазин-5(6Н)-оіюв 77
3.3, Биологические испытания 80
Выводы 83
Экспериментальная часть 84
Список литературы. 115
- Стереохимические эффекты при атаке ахирального нуклеофила на оптически активный азиновый субстрат
- Влияние хирального заместителя у кольцевого С-атомаазина
- Стереохимические особенности синтеза
- Пиримидин-2(4Н)-оны в синтезе пептидомиметиков
Введение к работе
Аминокислоты и пептиды находят широкое применение в качестве лекарственных средств (гликопептидные антибиотики, ванкомицин, тейкопланин, инсулин и т.д.) Тем не менее, возможности лекарственных препаратов на пептидной основе ограничены. Этими ограничениями являются быстрый метаболизм и протеолитическое расщепление в организме, невысокая адсорбция из желудочно-кишечного тракта, быстрое выведение и їіедостаток рецепторпой специфичности [1,2]. Во многих случаях для получения нужного терапевтического эффекта природный пептид должен быть соответствующим образом модифицирован [3-8].
В настоящее время запатентовано и производится несколько десятков эффективных лекарственных препаратов [9] содержащих в своем составе фрагменты анатуральных аминокислот, либо являющихся структурными аналогами натуральных пептидов [10-12].
Автор благодарит академика О.Н. Чупахина и к.х.н. Г.В. Зырянова за постоянные внимание, консультации и ценные советы при выполнении данной работы. Известно, что пептидные лиганды и протеиновые рецепторы играют критическую роль в регулировании почти каждого биологического процесса. Однако пептидные молекулы являются очень гибкими и существуют во множестве конформаций (схема 2). Введение пространственных ограничений, определяющих жёсткую трёхмерную структуру пептида, позволяет выявить ту конформацию природного пептида, в которой он участвует в биологических процессах [15,16]. Кроме того, высокоподвижная молекула пептида испытывает большую потерю энтропии при связывании с рецептором в сравнении с её аналогом, с наложенными на него сильными конформационными ограничениями. Пептидомиметик, трёхмерная структура которого соответствует структуре рецептора, испытывает меньшие энтропийные изменения при связывании с рецептором и таким образом между молекулой - аналогом пептида и протеиновым рецептором образование связей может протекать более эффективно, чем в случае природного пептида [16].
В связи с этим синтез непептидообразующих (так называемых неклассических и анатуральных) аминокислот с последующим их внедрением в натуральные пептиды является одной из актуальных задач органического синтеза [15-21].
Полученные путем направленного химического дизайна анатуральные аминокислоты и пептиды, обладают целым рядом преимуществ, обусловливающих их использование для биоскрининга. Во-первых, при их синтезе возможно использование широкого набора инструментов для создания молекул с заданной вторичной структурой, изменяя конформациошгую гибкость структурных единиц пептидной цепи [22-23]. Гибкость можно как уменьшить введением циклических фрагментов (схема 2), так и увеличить, заменяя атомы углерода пептидной цепи атомами . азота [24-30]. Во-вторых, пептиды, содержащие неприродные структурные фрагменты обладают повышенной пролонгированностью действия, улучшенной способностью проникать через клеточные мембраны и более высокой устойчивостью к энзиматическому расщеплению [31-36].
В рамках данной диссертационной работы разработаны методы синтеза пептидомиметиков, содержащих циклические дипептидные фрагменты на основе 1,2,4-триазинонов. Одним из ключевых моментов является эффективно разрабатываемая в последние десятилетия исследовательской группой в УГТУ-УПИ методология нуклеофилыюй атаки на незамещённый С-атом в 71-дефицитных гетероароматических системах. Важной особенностью этой методологии является возможность создания гетероциклических систем содержащих в своём составе хиральные атомы углерода. Предлагаемая вашему вниманию работа состоит из обзора литературы, где рассмотрены методы индуцирования хиральности при нуклеофилыюй атаке на незамещённый атом углерода в ароматических азинах, а также разделов по синтезу новых пептидомиметиков и экспериментальной части.
Стереохимические эффекты при атаке ахирального нуклеофила на оптически активный азиновый субстрат
Пиридиновый атом азота в гетероциклах повышает их л-дефицитность, однако известно лишь несколько примеров [38] прямого введения нейтральных С-ігуклеофилов в неактивированный азиновый субстрат. Поэтому в реакциях, идущих с индуцированием хиральности в результате нуклеофильной атаки, как правило, используют, активированные формы азиновых субстратов - азиновые катионы и высоко реакционноспособные нуклеофилы, включая металл о органические соединения.
Большой цикл работ в этой области выполнен исследовательской группой Комипса. [45-49] Ими изучены 1-ацилпиридиниевые соли 2, содержащие остаток оптически активного спирта R OH в ацильной группе. Действие реактивов Гриньяра на соли 2, и последующая обработка водой приводят к предпочтительному образованию дигидропиридонов 3 с относительно высокой диастереоселективностью (схема 4) [46].
Способность хиральных ацильных групп влиять на стереоселективность реакции присоединения может быть усилена путём введения в них ароматических заместителей [47,48] (схема 5). Было обнаружено, что среди (+)- или (-)-транс-2-(ct-ку мил) цикл ore ксил производных 5-8 ((+)- или (-)-ТСС производных), ацилпнридиниевая соль полученная из хлорформиата 7, привела к наименьшей диастереоселективности - 83%. Соли, полученные из хлорформиатов 5, 6, 8, привели к диастереоселективности в пределах 86-93%. В целом, 2-(1-метил-і-фенилэтил)-4-(2-пропил)циклогексилхлорформиаты 9-12 (СРС-производные) оказались несколько более эффективны, чем ТСС хлорформиаты 5-8 [48].
Эффективность хлорформиатов, содержащих объёмные хиральные ацильные группы в данном стереоселективном синтезе авторы объясняют тем, что эти группы блокируют одну из сторон пиридинового кольца ацилпиридиниевои соли 2, что приводит к направлению нуклеофильной атаки преимущественно по одной из сторон кольца. Этому способствует и наличие арильного заместителя в хиральной ацильной группе. Между арильным заместителем и пиридиновым кольцом предполагается наличие п-п взаимодействия, стабилизирующего заслонённую коиформацшо [49,50]. Положительное влияние изопропильиой группы ментального фрагмента на стереоселективность процесса объяснить сложнее, однако есть предположение, что она может влиять на соотношение возможных ротамеров, приводя к оптимальному тг-% взаимодействию ароматических колец (рис. 1) [48,49].
Конфигурация оптического центра в ацильной группе определяет соотношение образующихся диастереоизомеров. Так в реакциях гомохиральной 1 ацилпиридиниевой соли 2, полученной при использовании в качестве ацилиругощего хиралыюго агента (+)-шрднс-2-(а-кумил)циклогексил хлорформиата, с [5-(1-алкенил)]магнийбромидом в смеси ТГФ-толуол при -78 С, были получены продукт 14 с выходом 91% и de = 90% [51] или продукт 15 с 95% выходом и de = 93%.[52] При использовании же (-)-ТСС хлорформиата был получен продукт 16, являющийся диастереомером соединения 14, с de = 90%. [53,54] Присутствие в структуре соли 2 (-)-8-фенилментального заместителя приводит к образованию продукта 17 с количественным выходом и de = 91% (схема 6) [55].
Авторы работы [58] предполагают, что причиной наблюдаемой диастереоселективности, является существование ацилазиниевых солей в конформации с максимальным л я-взаимодействием между ароматическими кольцами, что должно вести к экранированию одной из диастереотошшх сторон реагирующей связи. Рассматривая две возможные конформации (О) и (С2) иминиевых солей 32 и 35 становится очевидным, что в коиформациях 32 (С1) и 35 (С1), имеющих иминиевые и карбонильные группы в траке-положении к одинарной связи N CO тмг-взаимодейсгвие оказывается вполне возможным, и невозможно в коиформациях 32 (С2) и 35 (С2). Атака цианид-иона со стерически менее затруднённой стороны в коиформациях (С1) солей 32 и 35 приодит к примущественному образованию соединений 33 и 37 (схема 12) [59].
Влияние хирального заместителя у кольцевого С-атомаазина
Важным фактором, определяющим стереохимический состав продуктов реакции связанной с атакой нуклеофила на атом углерода двойной связи в составе азина, является наличие заместителей у углеродных атомов азинового цикла и способных к компдексообразованию с нуклеофилами. Так, пиридиниевый или хинолиниевый катионы способны к образованию комплексов с участием функциональных групп в р-положении азинового кольца [80-82].
Одним из первых примеров диастереоселективного присоединения нуклеофилов к пиридиниевым (хинолиниевым) солям, обусловленного предварительным образованием комплекса, было взаимодействие хиральных 2-(3-пиридил)-, либо 2-(3-хинолил)оксазолинов 93 с литий- и магнийорганическими реагентами в присутствии метил хлор формиата (схема 26). [80] При этом с хорошими выходами и высокой диастереомерной чистотой (de 95 %) образуются соответствующие 1,4-дигидропроизводные 94,95. Высокую стереоселективность присоединения авторы объясняют первоначальной координацией металлоорганического соединения (RM) по атому азота и метоксигруппе оксазолинового заместителя (с образованием комплекса 93RM) и последующим вступлением группы R в положение 4 пиридинового цикла. Присоединение RM с другой стороны (пунктирная стрелка на схеме 27) может вести к иной стереохимии. Предполагается, что образовавшееся после присоединения металл органического соединения RM к пиридину 93 литиевое или магниевое производное 96 ацилируется метилхлорформиатом и превращается в продукт 94 (схема 27) [80].
Однако предложен и альтернативный механизм образования аддуктов 94,95 через первоначальное образование in situ iV-ацилазиниевых солей при ацилировании хлорформиатами и последующим присоединением алкильного или фенильного остатка R по атому С-4 гетероцикла [46].
Другим примером влияния комплексообразования на стереоселективное присоединение нуклеофилов к пиридиниевым солям является взаимодействие солей 1-метил- и 1-бензшширидоксазепинонов 97 с алкил-, алкенил- и фенилмагнийбромидами, которое приводит к продукту 98а с высокой стереоселективностью и хорошими выходами (схема 28), Однако при замене реактивов Гриньяра на литийорганические соединения стереоселективность практически не наблюдается [81].
Высокая регио- и стереоспецифичность в этом случае приписывается координации между реактивом Гриньяра и амидным атомом кислорода, как показано на примере структуры 100. Перенос органического лиганда от атома магния к атому углерода С-4 пиридинового кольца генерирует енолят 101 (схема 29), после гидролиза которого образуются соединения 98, 99 [81].
Схема В ходе исследования возможных конформаций соединений 97 показано, что семичленное кольцо обладает малой гибкостью, и возможны только две энергетически выгодные конформаций. Одна из них представлена на рисунке 6. В ней амидная карбонильная группа находится над плоскостью, в которой лежит пиридиновое кольцо, в ан/ли-положении относительно атома водорода у хирального центра, в другом конформере карбонильная группа и пиридиновое кольцо компланарны. Примечательно, что у соединения 97 отсутствуют конформаций, в которых было бы возможным положение амидной карбонильной группы под плоскостью, в котором лежит пиридиновое кольцо. Таким образом, внутримолекулярный перенос группы R1 в комплексе 100 через шестицентровое переходное состояние может дать только изомер представленный формулой 101 [81].
В ходе полного синтеза антибиотика динемицина А производилось введение алкинов в замещённый тетрагидрофенантридин, содержащий хиральные углеродные атомы в циклогексановом фрагменте. При обработке соединения 102 хлорформиатом в присутствии реагента Гриньяра 103 получена смесь диастереомеров с соотношением 9:1 с преобладанием продукта «wc-присоединения к атому С2 по отношению к уже присутствующим заместителям в положениях 4 и 7 (104) (схема 30) [82].
Аналогично идет реакция и тетрагидрофенантридинов 105Д06 с фенилэтинилмагнийбромидом (схема 31). Было обнаружено, что соединение 106 в реакции с фенилэтинилмагнийбромидом в присутствии метилхлорформиата преимущественно образует продукт mpowc-присоединения по отношению к метильной группе с низкой стереоселективностью (109:110=1:1.5). Однако соединение 105 (R = Н) даёт смесь диастереомеров, в которой преобладает продукт мс-присоединения 107 [83].
Во всех ранее приведенных случаях во взаимодействие с нуклеофилами вступали оптически активные азиновые субстраты, и асимметрический характер синтеза был обусловлен стерическими препятствиями, создаваемыми хиральными заместителями азипа. Весьма интересным и гораздо менее изученным является другой вариант синтеза оптически активных азиновых производных, когда во взаимодействие вступает хиральный нуклеофил и ахиральный азин. В этом случае направление нуклеофильной атаїси зависит в первую очередь от строения атакующего нуклеофила, и, варьируя условия реакции, можно добиться стереоселективного образования продуктов реакции той или иной конфигурации.
Стереохимические особенности синтеза
Реакции нуклеофильного замещения водорода (SNH) в которых участвуют л-дефицитные гетер оароматические соединения объединяют группу двухстадийных процессов, общей чертой которых является образование на первой стадии продуктов нуклеофильного присоединения (о-аддуктов). При образовании такого рода аддуктов прохиральный циклический атом углерода становится sp3-гибридизованным и, следовательно, асимметрическим или хиральным (схема 58). Что приводит к возможности существования а-аддукта в виде смеси R- и S-энантиомеров, идентификация которых с использованием обычных физико-химических методов, как правило, затруднена.
Введение второго асимметрического атома приводит к образованию диастереомериых продуктов реакции, которые в свою очередь обладают отличными друг от друга физико-химическими свойствами (схема 59).
Схема NuH Таким образом, использование в реакции (схема 59) а-аминокислот, являющихся хиральными соединениями, в качестве ацилирующих агентов должно приводить к образованию в качестве продуктов реакции смеси диастереомеров. При взаимодействии триазинонов 123 с JV-защищёнными аминокислотами и индолами были получены пептидомиметики 148-166 (схемы 52-56). На ЯМР Н спектрах реакционной массы, образующейся при получении соединений 150-164 наблюдается значительное преобладание (dr 95:5) одного набора сигналов над другим по интенсивности, отвечающее предпочтительному образованию одного продукта. На ЯМР Н спектрах очищенных продуктов присутствует исключительно один набор сигналов (рис. 10,11).
С целью определения стереоконфигурации образовавшихся продуктов нами был выращен кристалл соединения 161а и проведено его рентгепоструктурное исследование (рис. 12). Установлено, что соединение 161а представляет собой пару диастереомеров - S,S и R,R .
Рис. 12. Строение Н-{(8)-1-[($)-6-(2-метил-1Н-индол-3-ил)-5-оксо-3-фенил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4]триазин-1-карбонил]-3-метил-бутил}-бензамида (161а) по данным РСА. Показаны атомы водорода только рядом с хиралъными углеродными атомами
Полученные данные позволяют говорить о высокой стереоспецифичности присоединения С-нуклеофилов к триазинонам 123 в присутствии JV-защищённых а-аминокислот активированных при помощи ДЦК 3.1.2. О механизме реакции 1,2,4-триазин-5(4Н)-онов с пуклсофилами и аминокислотами.
В частности, в нём присутствуют два дублета метальной группы (1.5 м.д.), два синглета толильной группы (2.4 м.д.), синглет метоксигруппы напроксена (3.8 м.д.), мультиплет С Н-группы напроксена (4.8 м.д.), два синглета С Н (6.3 м.д.), дублет С Н индола (6.5 м.д.), сигналы иидольных и фенильных фрагментов (7-8 м.д.), двойной набор уширенных синглетов 1STH триазинового кольца и NH индол ьного фрагмента в области 11 м.д.
Обнаружено, что стерические параметры нуклеофила заметно влияют на оптический выход в данной реакции. Так при введении в реакцию индола и 1-метилиндола оптические выходы реакций были примерно одинаковыми. Использование же 2-метилиндола привело к повышению диастереоселективности процесса (схема 62),
В описанных реакциях использование дициклогексилкарбодиимида (175) приводит к образованию в качестве одного из продуктов реакции N,N-дициклогексилмочевины (177) (схема 63), которая обладает растворимостью во многом сходной с растворимостью искомых продуктов, поэтому нами были предприняты попытки использования других методов пептидного синтеза.
Во первых был опробован метод смешанных ангидридов. Аминокислоты и напроксен активировались путём взаимодействия с этилхлорформиатом в присутствии триэтиламина. Несмотря на очевидное удобство метода — в качестве побочного продукта образуется легкоотделимый хлорид триэтиламина, методика оказалась менее привлекательной чем карбодиимидная, т.к. выход искомых продуктов оказался ниже (схема 64). ЛМР Н спектры продуктов показали идентичность полученных соединений соединениям синтезированным карбодиимидным методом, кроме того наличие в ІІМР ]Н спектрах полученных продуктов только одного набора сигналов привело к выводу, что данная реакция протекает с высокой диастереоселективностью.
Известно [98], что ахиральные 3-арил-1,2}4-триазин-5(4Н)-оны в растворах ангидридов карбоновых кислот при комнатной температуре легко взаимодействуют со спиртами. Нами этим путём получены продукты с таким интересным хиральным О-нуклеофилом, как холестерин (180) (схема 67). Стереоселективности в этом процессе нам достичь не удалось, несмотря на использование в качестве ацилирующего агента такого стерически затруднённого ангидрида как изомасляный.
Пиримидин-2(4Н)-оны в синтезе пептидомиметиков
Пиримидин-2-оны 147 дезазааналоги 1,2,4-триазин-3(2Н)-онов 146 и проявляют себя в реакциях с С-нуклеофилами аналогично соединениям 146. При взаимодействии с индолами они образуют продукты присоединения 203-205 .
Азапептиды являются представителями класса пептидомиметиков, являющихся структурными аналогами пептидов, в которых один из атомов углерода заменён атомом азота. Нами был осуществлён направленный синтез соединений 209. Данные соединения можно рассматривать как своего рода гибриды «циклических» и «аза» пептидомиметиков .
Препаративно наиболее удобным методом синтеза данных азапептидов является прямое введение соответствующим образом замещенных гидразидов в 1,2,4-триазин-3(2Н)-оны 146 и 6-фенил-1,2,4-триазин-3(2Н)-тион 210. В результате было обнаружено, что в условиях щелочного катализа приведённые соединения образуют продукты нуклео фил ьного присоединения с выходами 40-50%. Нами было установлено, что при нагревании триазинов 146, 210 с широким рядом гидразидов карбоновых кислот в присутствии триэтиламина в течение 2 часов образуются продукты нуклеофильного присоединения 211-229 (схема 79). Схема Аг
Строение соединений 211-229 установлено на основании данных спектроскопии ПМР. В спектрах аддуктов 211-229 присутствуют резонансные сигналы, соответствующие протонам ароматического фрагмента Аг, группы R, амидным Н-атомам. Кроме того, характеристичным признаком образования аддуктов 211-229 является присутствие в ПМР спектре однопротонпого уширенного сигнала атома Н5 в области 5.20-5.30 м.д. В присутствии уксусной кислоты-d4 уширенный сигнал превращается в синглет, что подтверждает его ССВ с соседними протонами NH-rpynn.
В ходе изучения возможностей синтеза пептидомиметиков с полностью восстановленным триазиновым кольцом, как более близких к природным объектам, нами были рассмотрены два пути. Во-первых, прямое восстановление аддуктов с гидразидами. Попытки прямого восстановления аддуктов 211-229 привели к распаду аддуктов с образованием исходного триазинона. Во-вторых -первоначальный синтез продуктов замещения водорода с последующим восстановлением двойных связей. При ароматизации аддуктов 211-229 получены следующие результаты. Попытки окисления соединений 211-229 перманганатом калия привели к распаду аддуктов с образованием 6-арил-1,2}4-триазин-3,5-дионов. Использование в реакции триазинонов 146 с гидразидами карбоновых кислот нитробенола в качестве растворителя и окисляющего агента в присутствии триэтиламина неожиданно привело к 1,2,4-триазоло[1,5-(1]-1,2,4-триазин-5(6Н)-онам (230-235) .
В спектрах ПМР полученных соединений 230-235 присутствуют сигналы, соответствующие резонансу протонов группы R, пятипротонный мультиплет Н-атомов фенильного фрагмента в области 7,4-8,6 м.д. и уширенный сигнал NH-группы (8 = 13,4-13,8 м.д,). ИК спектры полученных соединений показывают наличие NH и С=0 групп .
Для окончательного доказательства строения полученных соединений и определения характера аннелирования триазольного и триазинового циклов был проведен рентгеноструктурный анализ 2,8-дифенил-1,2,4-триазоло[ 1,5-d]-1,2,4-триазин-5(6Н)-она (231) (рис. 16). Все три циклических фрагмента молекулы 231 расположены в одной плоскости, длины связей С-С близки по величине (1,378-5-1,397 А). Несмотря на то, что связи C-N гетероциклического фрагмента в целом различаются довольно существенно (1,302 1,391 А), все же имеет место альтернирование их величин, что свидетельствует о существенном молекулярном сопряжении.
Строение 2,8-дифетиі-1,2,4-триазоло[ 1,5-d]-l ,2,4-триазин-5(6Н)-она (231) по данным РСА. На основании полученных данных мы предположили, что в данной реакции промежуточно образуются аддукты А, которые в дальнейшем окисляются нитробензолом до соединений Б. Затем вследствие высокой температуры проведения процесса, они теряют воду и образуют бицилические гетероциклы: 8-арил-3-11-1,2,4-триазоло[4,3-й ][1,2,4]триазин-5(6Н)-оны (В).
Образцы полученных в данной работе соединений были исследованы в ГНЦ ВБ «Вектор» на противовирусную активность. Противовирусное действие исследовалось в отношении оспы коров, оспы обезьян, и натуральной оспы. Противовирусное действие экспериментальных препаратов исследовали в культуре клеток почки зеленой мартышки Vero в 96-луночных культуральных планшетах. В лунки планшета с клеточным монослоем вносили по 50 мкл вируса в дозе 10 ID50 и 150 мкл питательной среды RPMI-1640 с глютамином, антибиотиками, 2% фетальной сыворотки коров и исследуемым препаратом. В контроль клеток и контроль вируса вносили среду без препарата. В качестве положительного контроля использовали препарат виразол - 500 мкг/мл. Клетки инкубировали при 37С в атмосфере 5% С02 в течение 5 суток. После этого культуральную жидкость удаляли, в лунки планшета вносили по 30 мкл раствора кристаллического фиолетового с формалином, выдерживали 1,5 часа и измеряли оптическую плотность при 570 нм.
Токсическое действие препаратов оценивали по жизнеспособности клеток при инкубировании в присутствии препарата по сравнению с контролем клеток. По результатам строили дозозависимую кривую, по которой определяли дозу препарата, на 50% снижающую жизнеспособность клеток - ТС5о-Относительную степень защиты инфицированных клеток от гибели рассчитывали по формуле:
Защита (%) = (А-О)/(В-О)хЮ0, где А - % жизнеспособности инфицированных клеток в присутствии препарата, В - % жизнеспособности в контроле клеток, О — % жизнеспособности инфицированных клеток без добавления препарата (контроль вируса). По дозозависимой кривой определяли 1С5о - дозу препарата, на 50% защищающую клетки от цитопатогешюго действия вируса.
Похожие диссертации на Синтез пептидомиметиков на основе 1,2,4-триазинонов
