Содержание к диссертации
Введение
1 .Обзор литературы 7
1.1.Полиморфные маркеры 7
1,1 Л Типы полиморфизмов и методы их исследования 7
1.1.2, Использование полиморфных маркеров в исследовании
генетики многофакторных заболеваний 11
1.2, Характеристика хронического гломерулонефрита 16
1,2,1 .Классификация хронического гломерулонефрита 16
1.2.2, Иммунные механизмы развития гломерулонефрита 18
1.2.3, Генетические факторы риска развития хронического гломерулонефрита 20
1-3. Характеристика исследованных в работе генов и полиморфных маркеров 23
1.3.1. Ген подоцина 23
1.3.2. Ген нефрина 26 1.3-3, Ген антагониста рецептора интерлейкина-1 29
1.3.4, Гены/W и Д/3 30
1.3-5- Гены HLA-D области 31
1.3.6. Ген поверхностного антигена цитотоксических Т-лимфоцитов 34
13,7. Ген белка супрессора опухолей 36
1.3.8. Ген белка ингибитора Р53 40
1.3.9. Ген поли(АОР-рибозил)полимеразы 1 42
2ЛМатериалы и методы 47 2.1,Реактивы и ферменты 47
2.2.Буферные растворы 47
2.3, Буферы для рестрикции 47
2.4, Формирование групп больных и здоровых индивидов 48
2.5, Выделение геномной ДНК человека методом фенол/хлороформной экстракции я 48
2.6.Амплификация ДНК 4S
2.7. Расщепление продуктов амплификации рестриктазами 51
2.8. Электрофоретическое разделение ДНК 51
2.9.Статистическая обработка результатов 51
2.9.1. Сравнение выборок по частотам аллелей и генотипов. Точный критерийФишера. Поправка Бонферрони 51
2.9.2. Оценка относительного риска. Odds ratio. Доверительный интервал 5:
З.Результаты и их обсуждения 55
3.1. Изучение ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов с хроническимгломерулонефритом 5І
3.2. Изучение ассоциации полиморфных маркеров A(-601)G и Arg229Gly гена NPHS2cXTU. 5(
3.3. Изучение ассоциации полиморфного маркера GlulllLys tquslNPHSI с ХГН 51
3.4. Изучение ассоциации полиморфного минисателлита во втором интроне
гена/I7JWV с ХГН 6(
3.5. Изучение ассоциации полиморфных маркеров С(-590)Т гена IL4 и G4257A гена/ШсХГН. 61
3.6. Изучение ассоциации полиморфных микросателлитов D6S2414 и D6S1271 локализованных рядом с генами HLA с ХГН 61
3.7. Изучение ассоциации полиморфного маркераЛ/аІ777іг гена CTLA4 с ХГН 6'
3.8. Изучение ассоциации полиморфного маркера Pro72Arg гена ТР53 с ХГН 6!
3.9. Изучение ассоциации полиморфного маркера G309Tгена MDM2 с ХГН 6' ЗЛО. Изучение ассоциации полиморфных маркеров Val762Ala и Leu54Phe гена ADPRT1 сУЗГН 7
Выводы 7-
Список литературы 7
Введение к работе
Актуальность проблемы: Прогрессирование хронических заболеваний почек и поиск способов предотвращения их развития, а также замедления прогрессирования остается одной из наиболее актуальных проблем нефрологии.
В общей сложности, по данным крупных европейских медицинских центров, наследственные гломерулопатии занимают от 6,5 до % среди патологий, ведущей к хронической почечной недостаточности (ХПН). Связь той или иной патологии почек с генетическими дефектами может помочь выработать тактику терапии этих заболеваний.
Роль генетики в развитии нефрологии состоит не только в выявлении генетической компоненты заболевания, но и в изменении представлений о так называемых приобретенных заболеваниях, появлении новых концепций механизмов развития болезни, дополнении информации о предохраняющих и предрасполагающих факторах в развитии заболеваний, а также формировании гипотезы о совокупности экзогенных и эндогенных факторов, приводящих к болезни.
Для многофакторных заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды. Однако для каждого конкретного заболевания можно выделить группу, так называемых генов-кандидатов, продукты которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии.
Одним из наиболее перспективных направлений в современной молекулярной генетике заболеваний является поиск полиморфных маркеров в генах-кандидатах и выявление их ассоциации с наследственными заболеваниями.
При исследовании ассоциации сравнивают распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера, расположенного внутри или рядом с геном-кандидатом, в группах больных и здоровых доноров. Наличие достоверных различий в распределении аллелей и генотипов свидетельствует об ассоциации полиморфного маркера с заболеванием.
Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и ее осложнений в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного больного.
Цель и задачи работы. Целью данной работы явилось изучение ассоциации ряда полиморфных маркеров генов-кандидатов с развитием хронического гломерулонефрита. Этими маркерами были полиморфные маркеры внутри генов кодирующих подоцин (NPHS2), нефрин (NPHS1), антагонист рецептора интерлейкина 1 (IL1RN), интерлейкин 4 (IL4), интерлейкин (IL ), поверхностный антиген цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA4), супрессор опухолей (ТР ), главный регулятор супрессора опухолей (MDM2) и поли(М)Р-рибозил)полимеразу 1 (ADPRT1). Кроме того, использовались микросателлитные маркеры D6S и D6S , расположенные рядом с генами HLA класса II.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
1, Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов NPHS2, NPHS1, ILJRN, IL4, IL f CTLA4, ТР , MDM2 и ADPRT1, а также, полиморфных микросателлитов D6S и D6S в группе больных ХГН и в группе здоровых доноров.
2. Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров, расположенных в вышеуказанных генах- кандидатах, и двух микросателлитов в исследованных выборках для выявления их ассоциации с развитием ХГН и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии.
Научная новизна работы. В этой работе впервые в мире исследована ассоциация полиморфных маркеров A(- )G и Arg Gly гена NPHS2, GlulllLys гена NPHS1) VNTR во втором интроне гена ILlRNy С(- )Т гена IL4, G A гена IL , AlaHThr гена CTLA4, Pro Arg гена ТР , G(- )T гена MDM2, Val Ala и Leu Phe гена ADPRTl, полиморфных микросателлитов D6S и D6S у русских пациентов с ХГН, проживающих в г.Москве.
Практическая ценность работы. Выявление аллельных вариантов полиморфных маркеров различных генов-кандидатов, обуславливающих повышенный генетический риск развития хронического гломерулонефрита, создает базу для разработки диагностических методов прогнозирования течения заболевания.
