Содержание к диссертации
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ 5
ВВЕДЕНИЕ 7
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 18
1.1. Молекулярные основы функционирования цитокиновой сети 18
1.1.1. Структурная организация цитокиновой сети, принципы функционирования 18
1.1.2. Закономерности взаимодействия цитокинов и их рецептов 24
1.1.3. Трансдукция цитокинового сигналав клетке 26
1.1.4. Молекулярные механизмы регуляции функциональной активности системы цитокин-рецептор 31
1.2. Общая характеристика систем цитокин-рецептор мононукларных лейкоцитов 40
1.3 Цитокинопосредованные механизмы кооперации иммунокомпетентных клеток в реализации противовирусного иммунитета 57
1.3.1. Основы иммунологического реагирования при вирусных инфекциях 57
1.3.2. Дисбаланс цитокиновой сети при хронической вирусной инфекции 63
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 77
2.1. Общая характеристика клинического материала 77
2.2. Методы исследования 86
2.2.1. Определение содержания лимфоцитов крови 87
2.2.2. Иммуноцитохимический метод определения экспрессии лимфоцитами CD3+, CD4+, CD8+, CD22+, CD56+ 87
2.2.3. Выделение мононуклеарных лейкоцитов крови 89
2.2.4. Культивирование мононуклеарных лейкоцитов крови 90
2.2.5. Определение содержания цитокинов в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови 91
2.2.6. Оценка количества лимфоцитов к ови, несущих мембраносвязанные формы цитокиновых рецепторов 93
2.2.7. Определение содержания растворимого рецептора TNFcc в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови 96
2.2.8. Выделение ДНК 96
2.2.9. Исследование полиморфизма генов цитокинов и их рецепторов... 97
2.2.10. Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 102
3.1. Иммунофенотипические особенности лимфоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae 102
3.2. Цитокиновый статус мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae 114
3.2.1. Особенности продукции TNFa и его рецепторов мононуклеарами крови у пациентов с длительной антигекемией вируса клещевого энцефалита и больных хроническим вирусным гепатитом С 116
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Введение к работе
Проблема персистентных вирусных инфекций приобретает все большую актуальность в современной медико биологической науке и практическом здравоохранении в связи с возросшей заболеваемостью, их широким распространением среди трудоспособного населения, недостаточной эффективностью современных методов профилактики. Особо следует подчеркнуть трудность прогнозирования характера течения заболевания, выявления предрасположенности/резистентности к развитию хронических форм инфекции, отсутствие молекулярных технологий предупреждения развития осложнений: дегенепативных, Ъибротических и опухолевых процессов. Актуальным аспектом практической медицины остается недостаточная эффективность противовирусной терапии, а также отсутствие четких предикторов эффективности проведения дорогостоящих лечебных мероприятий применительно к конкретному пациенту. Принципиально важно, что растет число вялотекущих, стертых и бессимптомных форм вирусных инфекций [Воробьев А.А. и соавт., 2000; Покровский В.И. и соавт., 2000; Шевченко Ю.Л., 2000; Пименов Е.В. и соавт., 2003; Ивашкин В.Т., 2004; Hofrman H.R., 2006; Львов Д.К., Злобин В.И., 2007; Kneisson V.M. et al., 2007].
Эволюция инфекционной патологии ставит перед медициной новые задачи, обусловливая необходимость расширения и углубления фундаментальных исследований процессов в системе патоген-хозяин. Представления о патогенезе инфекционных заболеваний человека весьма динамичны. В настоящее время многие вопросы, касающиеся молекулярной патофизиологии инфекций, вызванных вирусами семейства Flaviviridae, остаются открытыми. В частности, до конца не установлены факторы, определяющие разные исходы болезни: от полной элиминации инфекта и хроническую форму с формированием осложнений (цирроз печени, гепатоцеллюлярная карцинома в случае вирусного гепатита С, парезы. параличи и аутоиммунные процессы при клещевом энцефалите). Это обосновывает необходимость проведения фундаментальных исследований, направленных на идентификацию общих и специфических для конкретной нозологии молекулярно-генетических факторов, определяющих ключевые фенотипические характеристики заболевания — от исхода взаимодействия патогена и организма человека до риска развития тяжелых форм заболевания и его осложнений, вероятности адекватного ответа на лекарственную терапию.
На современном этапе медицинских знаний нет сомнений в том, что Лопма течения инфекционного процесса определяется сложным комплексом взаимодействия патогена и организма человека. Известно, что особенности формирования и течения хронической инфекции обусловлены, с одной стороны, гетерогенностью самого патогена (вирулентность, контагиозность, лекарственная устойчивость), а, с другой, - определяются состоянием иммунной системы организма, от адекватности функционирования которой зависят характер течения и исход заболевания [Richardson М.М., 2006; Holden A.F. et al., 2007]. Факт формирования расстройств иммунного реагирования при развитии вирусных инфекций установлен давно. Известно, вызывая иммунодефицитные состояния, степень выраженности которых связана непосредственно с характером и тяжестью инфекционного процесса и зависит от преморбидного фона пациента [Долгих В.Т., 2000; Павлович С.А., 2001; Субботин А.В. и соавт., 2002; Чуйкова К.И., 2002; Ивашкин В.Т. и соавт., 2004; Серов В.В. и соавт., 2004; Рязанцева Н.В. и соавт., 2006]. Особо следует акцентировать внимание на том, что флавивирусы, в том числе вирус гепатита С (hepatitis С virus - HCV) и вирус клещевого энцефалита (tick-borne иммунной системы, реализуя тем самым механизмы «ускользания» от иммунного надзора [Букринская А.Г., 1986; Погодина В.В. и соавт., 1986; Серов В.В., Мухин Н.А., 2000; Ивашкин ВТ. и соавт.5 2001; Пименов R.B. и соавт., 2003].
Особую роль в дизрегуляции функционирования иммунной системы при развитии инфеїшионного процесса играют нарушения межклеточной сигнализации. Известно, что в становлении и стабилизации контактов между взаимодействующими в ходе реализации противоинфекционной защиты клетками макроорганизма важное значение принадлежит биологической мулътисистеме - цитокин-рецепторной сети [Ярилин А.А., і 999; Фрейдлин И.С. и соавт., 2001; Хаитов P.M., 2001; Симбирцев А.С., 2004]. В современной мировой литепа™ре существуют данные, свидетельствующие о том, что возбудители могут использовать разные молекулярные механизмы, опосредующие изменение роли системы цитокинов в межклеточной кооперации иммуноцитов. В основе этого могут лежать как непосредственное воздействие патогенов на продукцию цитокинов мононуклеарными лейкоцитами и рецепторный аппарат лимфоцитов, так и опосредованное их влияние путем супрессии внутриклеточных сигналов активации, механизмов сигнальной трансдукции и транскрипции [Ивашкин ВТ. и соавт., 2000; Кетлинский С.А., 2002; Царегородцева Т.М., Серова Т.И.,
Высказывается предположение о генетически детерминированных нарушениях коммуникативных рецепторзависимых взаимодействий эффекторных клеток, а, следовательно, формирования иммунного ответа и элиминации инфекта. Установлено, что гены цитокинов и их рецепторов в популяции человека характеризуются аллельным полиморфизмом и наличием изоформ, что определяет их способность модулировать.
Изучение механизмов, определяющих связь генотипа или варианта и клинических особенностей инфекционных заболеваний, является одним из приоритетных направлений молекулярной медицины. Многие вопросы, касающиеся молекулярно-генетических основ положенности и резистентности опганизма к инфекции, являются дискутабельными. Накопленные в обозначенной тематике факты, однако, зачастую носят сугубо феноменологический характер. В связи с этим представляется весьма актуальным оценить ассоциированность предрасположенности/резистентности организма человека к персистентному течению флавивирусных инфекций с рядом аллельных вариантов генов иммуноцитокинов и их рецепторов. Анализ распространенности различных аллелей генов интерлейкинов и их рецепторов среди пациентов с хронической персистенцией вирусов семейства Flaviviridae позволит молекулярно-генетическим профилем системы межклеточной кооперации и характером течения инфекционного процесса. В то же время логично предположить существование совокупности специфических молекулярно-генетических маркеров для каждого конкретного заболевания. Полученные в указанном аспекте фундаментальные знания не только дополнят существующие на сегодняшний день представления о механизмах генетически детерминированной предрасположенности и резистентности организма человека к хроническому течению і т у/п ае-инфекции, но и для ранней диагностики, прогноза, лечения и профилактики заболеваний.
Цель исследования: установить молекулярные механизмы дизрегуляции кооперации иммунокомпетентных клеток крови при хронических инфекциях, вызванных вирусами семейства Flaviviridae.
Задачи исследования:
1. Оценить продукцию цитокинов (IL2, IL4, НЛО, TNFa и EFNy) мононуклеарными лейкоцитами крови и направленность Thl/Th2-поляризации иммунного ответа при длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae (хронический вирусный гепатит, длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита).
2. Дать комплексную оценку состояния рецепторного аппарата (IL2R, IL4R, IL10R, TNFR, sTNFR, IFNR) лимфоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae.
3. Установить общие закономерности и особенности изменений цитокинопосредованнои кооперации иммунокомпетентных клеток крови при хроническом вирусном гепатите С и клещевом энцефалите в зависимости от нозологической принадлежности инфекта, клинического течения инфекции.
4. Выявить молекулярно-генетические механизмы дизрегуляции цитокиновой системы при хронической Flaviviridae-шіфекіщи у лиц европеоидной популяции, проживающих на территории Западной Сибири.
