Введение к работе
Актуальность проблемы
В организме существует единая интегральная клеточно-гуморальная система защиты, включающая иммунитет, гемостаз и неспецифическую резистентность организма (Кузник Б.И., Цыбиков Н.Н., 1989; Витковский Ю.А., 1997). Известно, что нарушения в одной из них приводят к изменению в других. Связующими звеньями единой системы защиты выступают различные гуморальные факторы, среди которых важное место принадлежит полипептидам. К настоящему времени хорошо известны основные полипептиды, которые образуются различными органами и тканями и осуществляют перенос биологической информации между клетками различных популяций (Кузник Б.И. и соавт., 1980 - 2000; Морозов В.Г. и соавт., 1980 -2000; Хавинсон В.Х., 1980 - 2000). Достаточно изучены свойства этих веществ, выделенных из тимуса, печени, кишечника, сумки Фабрициуса, сосудов, тромбоцитов, эритроцитов, головного мозга, почек (Аюшиев О.Д., 1990; Белокриницкая Т.Е., 1990; Витковский Ю.А., 1990; Калашников С.Г., 1988; Кузник Б.И. и соавт., 1984-1990; Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1974-1994).
В то же время известно, что щелочные полипептиды активно вовлекаются в модуляцию коагуляционного, сосудисто-тромбоцитарного гемостаза и фибринолиза (Белокриницкая Т.Е., 1990; Витковский Ю.А., 1990; Калашников С.Г., 1988; Кузник Б.И. и соавт., 1984-1990). Кроме того, полипептиды в значительной мере определяют состояние неспецифического звена защиты организма (Кузник Б.И. и соавт., 1984-1996; Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1974-1996). Изучение новых механизмов регуляции защитной функции лимфатической системы актуально в плане разработки новых эффективных методов лечения заболеваний, сопровождающихся нарушением трофики, гиперкоагуляцией и ослаблением защитных сил организма.
В этом аспекте остаются практически не исследованными свойства полипептидной фракции лимфатических узлов, лимфы и плазмы крови.
Лимфатическая система выполняет в основном дренажную и
элиминационно-деструктивную функцию. Известно, что деструкция
чужеродных агентов факторами неспецифической и специфической защиты организма сопровождается локальными или диссеминированными гиперкоагуляционными сдвигами в лимфатических узлах, лимфе и, в конечном счете, в кровотоке. В условиях патологии значимость лимфатической системы в регуляции гемостаза еще более возрастает.
Цель и задачи исследования
Основной целью наших исследований явилось изучение роли полипептидов лимфатической системы в регуляции иммунитета, гемостаза и неспецифической резистентности в патогенезе панкреонекроза.
В связи с этим нами решались следующие задачи:
-
Выделить полипептидный комплекс из плазмы, лимфы и лимфатических узлов разных групп, определить диапазон их молекулярной массы, определить относительное содержание аминокислот и сравнить их биохимическую активность.
-
Изучить в опытах in vitro действие полипептидов лимфы, плазмы и лимфатических узлов на иммунитет, гемостаз и неспецифическую резистентность организма.
-
Выделить и исследовать состав полипептидов лимфы и плазмы у больных панкреонекрозом. Оценить биологическую активность полипептидов лимфы и плазмы больных панкреонекрозом.
-
Установить роль полипептидов плазмы, лимфы и лимфоузлов в патогенезе иммунологических и гемостатических нарушений при панкреонекрозе.
-
Исследовать влияние лимфостимулирующей и сорбционной терапии в комплексном лечении больных панкреонекрозом на клиническое течение, показатели иммунитета, гемостаза и неспецифической резистентности.
-
Разработать практические рекомендации для прогнозирования нарушений иммунитета, гемостаза и неспецифической резистентности при панкреонекрозе.
Научная новизна
Впервые установлено, что полипептидные комплексы лимфы и лимфатических узлов обладают выраженным антипротеазным действием. Полипептиды лимфы и лимфатических узлов тормозят контактную фазу коагуляционного гемостаза. Пептиды лимфы ингибируют формирование протромбиназы по внутреннему и внешнему пути. Антикоагулянтный фактор изучаемых полипептидов сосредоточен в диапазоне молекулярных масс 5-20 кД с пиком активности, соответствующим 15 кД. Полипептиды, выделенные из сыворотки лимфы теряют антикоагулянтный эффект. В составе полипептидного комплекса ЛУ и лимфы содержится антигепариновый фактор, соответствующий молекулярной массе 10-18 кД, который во время свертывания не потребляется. Пептидные фракции ЛУ ингибируют тотальный и Хагеман-зависимый фибринолиз.
Выявлено, что полипептиды лимфатических узлов и лимфы понижают общую гемолитическую активность крови, ингибируя классический и альтернативный пути активации системы комплемента. Свертывание лимфы снижает антикомплементарную активность полипептидов.
Новыми являются данные о том, что полипептиды ЛУ и лимфы стимулируют кислородзависимые и кислороднезависимые процессы
нейтрофилов, а также повышают их фагоцитарную активность. Пептиды, выделенные из лимфатических узлов и лимфы и внесенные в культуру клеток периферической крови, увеличивают экспрессию рецепторов на Т- и В-лимфоцитах здоровых людей и больных панкреонекрозом.
Обнаружено, что применение лимфостимулирующей и сорбционной терапии у пациентов с панкреонекрозом улучшает клиническое течение заболевания, повышает у них содержание лимфоцитов, несущих поверхностные маркеры CD3+, CD4+, CD8+, CD 16+, CD22+, усиливает фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, уменьшает признаки ДВС-синдрома.
Приоритетными являются данные о том, что при панкреокекрозе, сопровождающегося вторичным иммунодефицитом и ДВС-синдромом, изменяется качественный состав полипептидного комплекса, выделенного из лимфы и плазмы больных, а также снижаются их иммунореактивные и гемостатические свойства. Использование лимфостимулирующей и сорбционной терапии в комплексном лечении больных с панкреонекрозом восстанавливает способность полипептидов лимфы и плазмы усиливать экспрессию рецепторов на Т- и В-лимфоцитах, стимулировать фагоцитоз, а также проявлять антипротеазное и антикомплементарное действие.
Положения, выносимые на защиту
-
Лимфа и лимфатические узлы содержат полипептиды, отличающиеся между собой по молекулярной массе, аминокислотному составу и физиологическим свойствам.
-
Полипептидные комплексы лимфы и лимфатических узлов обладают выраженным антипротеазным действием. Полипептиды лимфы, и в меньшей степени ЛУ, тормозят контактную фазу коагуляционного гемостаза. Пептиды лимфы ингибируют формирование протромбиназы по внутреннему и внешнему пути. В составе полипептидного комплекса ЛУ и лимфы содержится антигепариновый фактор. Пептидные фракции ЛУ ингибируют тотальный и Хагеман-зависимый фибринолиз.
-
Полипептиды лимфатических узлов и лимфы понижают общую гемолитическую активность крови, ингабируя классический и альтернативный пути активации системы комплемента. Свертывание лимфы снижает антикомплементарную активность полипептидов. Пептиды ЛУ и лимфы стимулируют кислородзависимые и кислороднезависимые процессы нейтрофилов, а также повышают их фагоцитарную активность. Полипептиды, выделенные из лимфатических узлов и лимфы и внесенные в культуру клеток периферической крови, увеличивают экспрессию рецепторов на Т- и В-лимфоцитах.
-
При развитии панкреонекроза, сопровождающегося вторичным иммунодефицитом и ДВС-синдромом, изменяется качественный состав полипептидного комплекса, выделенного из лимфы и плазмы больных, а также снижаются их иммунореактивные и гемостатические свойства.
Использование лимфостимулирующей и сорбционной терапии в комплексном лечении больных с панкреонекрозом восстанавливает способность полипептидов лимфы и плазмы усиливать экспрессию рецепторов на Т- и В-лимфоцитах, стимулировать фагоцитоз, а также проявлять антипротеазное и антикомплементарное действие.
Практическая ценность работы
Полученные нами данные о роли полипептидов в регуляции иммунитета, гемостаза и неспецифической резистентности организма свидетельствуют об их высоком влиянии на защитные механизмы в норме и при панкреонекрозе. В связи с этим результаты исследований могут быть полезными для более полного расширения сведений о патогенезе заболевания, сопровождающегося нарушениями гемостаза, иммуногенеза, неспецифической резистентности организма, и с учетом этого позволяют более корректно подходить к лечению больных.
Апробация диссертации
Материалы исследований были доложены на международной конференции Экологическая патология и ее фармакокоррекция (Чита, 1991), на межвузовской конференции "Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза" (Полтава, 1993), международных конгрессах по иммунореабшгатации (Сочи, 1994; Анталия, Турция, 1996; Эйлат, Израиль, 1997), на XII Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1995), на Всероссийской конференции "Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники" (Чита, 1995), на II съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995), на Всероссийской конференции "Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии" (Санкт-Петербург, 1995), на международной конференции по проблемам гемостазиологии (Санкт-Петербург, 1995), на Всероссийской научной конференции "Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника" (Чита, 1996), на I Российском конгрессе "Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы" (Москва, 1996), на XVII конгрессе международного общества по тромбозу и гемостазу (ISTH) (Вашингтон, США, 1999), XVIII конгрессе международного общества по тромбозу и гемостазу (ISTH) (Париж, Франция, 2001).
Внедрения в практику
Полученные данные внедрены в учебный процесс кафедр нормальной и патологической физиологии, микробиологии Читинской медицинской академии, на кафедре физиологии человека Читинского педагогического университета.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 251 странице машинописного текста, иллюстрирована 49 таблицами и 37 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов и списка литературы, включающего 257 отечественных и 154 зарубежных.
