Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. История исследования темы 13-53
1.1. Токсические гепатиты в эксперименте 14-28
1.2. Медико-биологическое значение трепела и искусственных цеолитов 28-39
1.3. Эпидемиология, этиология и патогенез язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки 40 - 46
1.4. Гастриты и язвы желудка в эксперименте 46 - 50
1.5. Цеолитсодержащий трепел влечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки 50-53
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования 54-61
2.1. Моделирование токсического гепатита в эксперименте 54 - 55
2.2. Методы моделирования гиперацидного гастрита и язвы желудка в эксперименте 55-56
2.3. Лабораторные методы исследования 56 - 57
2.4. Биохимические методы исследования 57 - 57
2.5. Методы исследования ферментов сыворотки крови 57 - 57
2.6. Гистологические методы исследования 57 - 58
2.7. Методы исследования перекисного окисления липидов 58 - 58
2.8. Функциональные методы исследования внешнего дыхания морских свинок 59-60
2.9. Методы исследования функционального состояния высшей нервной деятельности кроликов 60-61
2.10. Метод внутрижелудочной рН-метрии у крыс 61 -61
2.11. Методы статистической обработки 61 - 61
ГЛАВА III. Биологическая активность цеолитсодержащего трепела в эксперименте на морских свинках 62 - 70
3.1. Исследование гематологических и фагоцитарных показателей 63-64
3.2. Биохимические показатели сыворотки крови 65 - 65
3.3. Исследование ферментов сыворотки крови 65 - 66
3.4. Исследование внешнего дыхания 66 - 61
3.5. Гистологическое исследование 67 - 68
3.6. Обсуждение результатов 69-70
ГЛАВА IV. Биологическая активность цеолитсодер жащего трепела в эксперименте на кроликах 71 -83
4.1. Исследование высшей нервной деятельности подопытных животных 72 - 76
4.2. Исследование перекисного окисления липидов 76 - 79
4.3. Гистологическое исследование 79 - 81
4.4. Обсуждение результатов 81 - 83
ГЛАВА V. Экспериментальное токсическое поражение печени у кроликов пероральным введением четыреххлористого углерода 84-91
5.1. Исследование гематологических показателей 84-85
5.2. Биохимические показатели сыворотки крови 85 - 87
5.3. Исследование ферментов сыворотки крови 87 - 87
5.4. Исследование перекисного окисления липидов 88 - 88
5.5. Гистологическое исследование 89-90
5.6. Обсуждение результатов 90-91
ГЛАВА VI. Отравление кроликов пероральным введением сс14 на фоне перорального введения трепела 92- 105
6.1. Исследование гематологических показателей 92-93
6.2. Биохимические показатели сыворотки крови 93 - 94
6.3. Исследование ферментов сыворотки крови 95 -96
6.4. Исследование перекисного окисления липидов 97 - 99
6.5. Гистологическое исследование 99 - 101
6.6. Обсуждение результатов 101 - 105
ГЛАВА VII. Экспериментальная терапия гиперацидного гастрита у крыс цеолитсодержащим трепелом 106 -120
7.1. Исследование внутрижелудочной рН - среды у контрольных и опытных крыс 107 - 111
7.2. Гистологическое исследование 111 - 116
7.3. Обсуждение результатов 116 - 120
ГЛАВА VIII. Экспериментальная терапия цеолитсодержащим трепелом язвы желудка у кроликов в эксперименте 121 - 139
8.1. Исследование перекисного окисления липидов 122 - 129
8.2. Гистологическое исследование 130- 135
8.3. Обсуждение результатов 135 - 139
Заключение 140-151
Выводы 152- 154
Практические рекомендации 155-155
Список литературы
- Эпидемиология, этиология и патогенез язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки
- Функциональные методы исследования внешнего дыхания морских свинок
- Исследование ферментов сыворотки крови
- Исследование перекисного окисления липидов
Введение к работе
Актуальность темы. Патологии печени и органов пищеварения являются социально-экономической и клинико-эпидемиологической проблемой здравоохранения всех стран мира (В.В. Чернин, 2000; В.Т. Ивашкин, Т.Л. Лапина, 2001; А.В. Охлобыстин, 2001; В.Г. Радченко с соавт., 2002; В.Т. Ивашкин, СИ. Рапопорт, 2004; M.A.L. Deltenre, 1997; Дж. М. Хендерсон, 1997; P. Malfertheiner et al, 2000; СП. Тревис и др., 2002 и др.).
Как считает Н.А. Агаджанян (1989), в последние десятилетия в связи с общим осложнением антропо- экологической обстановки особенно важное значение приобретают проблемы адаптации и экологии человека. Уровень здоровья популяции во многом определяется эколого-физиологическими особенностями адаптации человека к резко изменяющимся условиям современной жизни. Методология экологических исследований человека, считает он, должна включать и теоретический аспект: изучение физиологических механизмов адаптации к различным природно-климатическим и производственным условиям, моделирование процессов взаимодействия организма человека и факторов среды, а также управления трудовыми ресурсами на основе максимального снижения трудопотерь, обусловленных влиянием на организм факторов окружающей среды.
Первым патогенетическим звеном воздействия химических факторов независимо от химической природы является мембраноповреждающий эффект, сопровождающийся расстройством функции каскада митохондриаль-ных и микросомальных ферментов-оксигеназ, гидролаз, участвующих в де-токсикации и элиминации патогенного начала, а потом следуют остальные процессы, реализуемые на клеточном, органном уровнях и организмом в целом (А.С. Козлюк с соавт., 1987).
По мнению ряда ученых (P.M. Хаитов с соавт., 1998), особое внимание следует уделять хлор- и фосфорорганическим соединениям, составляющим основу ряда пестицидов и гербицидов.
Как отмечает Ю.А. Лысиков (2003), в настоящее время при лечении заболеваний печени получили распространение эфферентные методы терапии, основанные на выведении из организма токсических веществ, ксенобиотиков и продуктов метаболизма, что позволяет уменьшить токсическую и метаболическую нагрузку на печень. Энтеросорбция является наиболее простым, дешевым и физиологическим методом детоксикации организма.
В литературе есть данные о том, что активность искусственных цеолитов (С].: Сг, Сз) при энтеросорбционной детоксикации опытных животных в эксперименте не уступает активности активированного угля (А.А. Раков с со-авт., 1996). В этой связи нас заинтересовал цеолитсодержащий минерал -трепел Первомайского месторождения Алатырского района Чувашской Республики. По литературным данным, содержание цеолита (клиноптилолита) в данном трепеле составляет 24-30%. Цеолит обладает пористой кристаллической структурой. Благодаря строго определенным размерам пор и каналов цеолиты обладают адсорбирующими свойствами для органических и неорганических веществ, газов и ионообменной активностью.
Ю.Н. Шевченко (2002), исследовал кремнийорганические сорбенты, в том числе энтеросгель и комплексные препараты на его основе для обоснованного применения энтеросорбции в медицине. По его данным энтеросгель, в отличие от известных углеродных энтеросорбентов и высокодесперстных кремнеземов, характеризуются явной селективностью, ибо наиболее активно сорбируют среднемолекулярные токсические метаболиты, практически не связывает электролиты (ионы) и высокомолекулярные вещества (М.в.> 10000). Энтеросгель при внутреннем употреблении проявляет активное детоксирующее действие. Препараты адсорбируют из кишечного содержимого и крови (чрезмембранно из ворсинок слизистой оболочки кишечника) токсические вещества, продукты незавершенного метаболизма, инкорпорированные радионуклеиды, приостанавливает проявление токсикозов.
В литературе появились данные о применении трепела для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (Ж.Х. Васильев с со-
5 авт., 1998; Л.С. Семенова, 1999; Е.А. Павлова, 1999, и др.)- Однако все эти клинические исследования и наблюдения проводились без предварительного экспериментального исследования на подопытных животных.
Следовательно, весьма актуально исследование цеолитсодержащего трепела, как фактора, влияющего на физиологию органов пищеварения и патофизиологию гастритов и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки в эксперименте, тем более, что в России до 1,5-5% взрослого населения страдает язвенной болезнью (В.Х. Василенко с соавт., 1987).
В связи с высокой заболеваемостью и смертностью от язвенной болезни, проблема язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки является не только медицинской, но и важной медико-социальной проблемой (П.Б. Кириленко, М.Г. Кириленко, 1989).
По данным В.Т. Ивашкина, СИ. Рапопорта (2004) распространенность болезней органов пищеварения находится на 3-м месте после болезней органов дыхания и кровообращения, при этом выявляется тенденция к их росту, а 60% страдающих этими заболеваниями относятся к лицам трудоспособного возраста.
Цель исследования: целью настоящих исследований явилось изучение сорбционных свойств и механизмов детоксикации подопытных животных цеолитсодержащим трепелом при остром токсическом гепатите, а также изучение механизмов экспериментальной терапии на моделях токсического ги-перацидного гастрита, ацетатной острой и хронической язвы у подопытных животных. Для достижения данной цели ставились следующие задачи.
Задачи исследования:
Изучить динамику изменения реактивности морских свинок и показателей внешнего дыхания при пероральном введении цеолитсодержащего трепела гематологическими, биохимическими, ферментологическими, фагоцитарными, функциональными и гистологическими методами исследования.
Изучить влияние перорального введения цеолитсодержащего трепела на высшую нервную деятельность, на морфофункциональное состояние
некоторых тканей организма, а также состояния перекисного окисления ли-пидов (ПОЛ) подопытных кроликов.
Изучить степень отравления подопытных кроликов при перораль-ном отравлении их четыреххлористым углеродом гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования в качестве контрольной группы.
Изучить степень отравления подопытных кроликов при перораль-ном их отравлении четыреххлористым углеродом на фоне перорального введения цеолитсодержащего трепела гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования.
Изучить влияние цеолитсодержащего трепела на функциональное и морфологическое состояние слизистой оболочки желудка подопытных крыс.
Изучить влияние перорального введения цеолитсодержащего трепела на кислотность желудочного сока при воспроизведении острого ацетатного гиперацидного гастрита у подопытных крыс.
Изучить терапевтическое действие перорального введения цеолитсодержащего трепела на развитие острой ацетатной язвы желудка по Окабе у подопытных кроликов на фоне контрольной группы.
Изучить терапевтическую эффективность ЦТ при лечении экспериментальной хронической язвы желудка по Окабе у подопытных кроликов.
Научная новизна. Впервые в эксперименте исследованы механизмы положительного биологического действия ЦТ на морских свинках и кроликах с применением гематологических, биохимических, ферментологических, функциональных и гистологических методов исследования.
Впервые в эксперименте на кроликах получена модель острого токсического гепатита пероральным введением ССЦ.
Впервые на модели острого экспериментального токсического гепатита подопытных кроликов изучены энтеросорбционные свойства цеолитсодержащего трепела и механизмы детоксикации организма.
Впервые в экспериментальной гастроэнтерологии на модели острого токсического гиперацидного гастрита на подопытных крысах изучены механизмы положительного биологического, терапевтического действия ЦТ.
Впервые на модели «ацетатной» острой и хронической язвы желудка подопытных кроликов комплексно изучены механизмы терапевтического эффекта цеолитсодержащего трепела.
Впервые экспериментально показана потенциальная возможность использования ЦТ в клинике для детоксикации организма при отравлениях экзогенными токсическими веществами, в частности ССЦ и использования в комплексной терапии острого гиперацидного гастрита и язвы желудка.
Внедрение в практику. Изданы монографии: «Цеолитсодержащий трепел в медицине» Чебоксары - 2003, 119 с, «Цеолитсодержащий трепел в гепато- и гастроэнтерологии» Чебоксары - 2004,140 с. По материалам исследований в 2004 изданы Методические указания на кафедре патофизиологии Чувашского госуниверситета «Нарушение секреторной функции желудка при остром гастрите и его экспериментальная терапия». Кроме того, результаты и материалы данных исследований используются в учебном процессе на кафедрах патофизиологии, профилактической медицины и терапии Чувашского государственного университета и на кафедре патофизиологии Российского медицинского университета. Разработанные модели острого токсического гепатита, острого токсического гастрита, язвы желудка используются в экспериментальных лабораториях лечебного факультета Чувашского государственного университета.
Научно-практическая значимость.
- Разработанная нами методика перорального введения четыреххлори-стого углерода (ССЦ) позволяет получить модель острого токсического поражения печени, о чем свидетельствуют лабораторные, биохимические, фер-ментологические, гистологические методы исследования и данная методика рекомендуется для разработки экспериментальных методов профилактики и терапии при пероральном поступлении экотоксикантов.
Цеолитсодержащий трепел рекомендуется для улучшения физиологических показателей лабораторных животных при их содержании в виварии.
Результаты экспериментального исследования ЦТ на моделях острого токсического гиперацидного гастрита и острой и хронической язвы желудка позволяют рекомендовать его в комплексном лечении больных с гипе-рацидным гастритом и язвенной болезнью желудка в клинике гастроэнтерологии, ибо ЦТ доступное, дешевое и в рекомендуемых дозах, совершенно безвредное средство.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Пятой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2000), на Седьмой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2002), на Научно-практической конференции «Семейная медицина в современных условиях» (г. Чебоксары, 2002), на Восьмой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2003), Девятой Российской Гастроэнтерологической Неделе (г. Москва, 2003), на Втором Международном Симпозиуме «Проблемы ритмов в естествознании» (г. Москва, 2004), на Девятой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2004), на Межрегиональной конференции, посвященной 70-летию кафедр патологической анатомии и патофизиологии БГМУ (г. Уфа, 2004), на Десятой Российской Гастроэнтерологической Неделе (г. Москва, 2004), на III Российском Конгрессе по патофизиологии с международным участием (г. Москва, 2004), на 19-ой Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и патология пищеварения» (г. Сочи, 2004), на X Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2005), на XI Международной конференции «Новые медицинские технологии и квантовая медицина» (г. Москва, 2005).
Положения, выносимые на защиту.
1. Цеолитсодержащий трепел при пероральном его введении в использованных нами дозах интактным морским свинкам, кроликам оказывает положительное биологическое действие, что доказано гематологическими, био-
химическими, ферментологическими, функциональными и гистологическими методами исследования.
Данная методика с пероральным введением гепатотропного яда (ССЦ) кроликам вызывает острый токсический гепатит, что подтверждается гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования.
Пероральное введение ЦТ подопытным кроликам с острым токсическим гепатитом, обеспечивает значительную энтеросорбционную детокси-кацию, что подтверждено гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования.
Пятикратное пероральное введение ЦТ подопытным крысам достоверно снижает развитие острого гиперацидного состояния и гастрита по данным рН-метрии и гистологических методов исследования.
Двенадцатикратное пероральное введение цеолитсодержащего трепела подопытным кроликам с острой ацетатной язвой по Окабе у них по биохимическим и гистологическим показателям достоверно снижает степень выраженности перекисного окисления липидов, статистически достоверно снижает выраженность развития язвы и вызывает ускорение заживления экспериментальной язвы желудка, сохраняя явления гастрита.
Двенадцатикратное пероральное введение ЦТ подопытным кроликам с хронической язвой желудка по Окабе у них по биохимическим и гистологическим показателям статистически достоверно снижает выраженность перекисного окисления липидов и у всех животных существенно ускоряет заживление язвы до полного формирования слизистой оболочки.
Публикации по теме диссертации.
Материалы диссертации отражены в 32 опубликованных работах (монография - 2, статьи - 20, тезисы - 9, учебно-методическое указание - 1).
Структура и объем диссертации.
Эпидемиология, этиология и патогенез язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки
Загрязнение окружающей среды техногенными и биогенными факторами приобретают все более широкое масштабы. В результате масштабной технизации происходит загрязнение природных компонентов (атмосферы, почвы, воды и т. д.) канцерогенными и другими токсическими веществами. Увеличение концентраций токсических веществ в различных природных средах непосредственно воздействующих на гены, являются причиной роста числа наследственных болезней, врожденных уродств и злокачественных заболеваний. Химические вещества, присутствующие в народном хозяйстве, составляют наиболее обширную группу антропогенных факторов внешней среды, куда входят весьма токсичные вещества и соединения.
В последние десятилетия с развитием техногенной цивилизации огромное количество токсичных для организма химических веществ проникло в сферу жизнедеятельности человечества. Как известно, эти вещества чрезвычайно негативно действуют на ткани и органы человека. В связи с этим в медицине возникли новые научные направления: экологическая патофизиология, экологическая токсикология, экологическая иммунология и т.д.
Здоровье человека в большей степени страдает от влияния ксенобиотиков антропогенного происхождения. Ежегодно увеличивается спектр продуктов химической промышленности, вызывающих интоксикацию организма через повреждение печени: инсектициды, гербициды, фунгициды, акарици-ды, эмульгаторы, искусственные волокна, хлор- и фосфорорганические вещества и т.д.
Н.И. Расулев с соавт. (1970) изучали функционально-морфологические характеристики гепатитов в эксперименте на различных моделях. Модель гепатита и цирроза печени получали путем введения алкалоида гелиотрина в различных дозах продолжительностью 25-60 дней. Установили, что у жи 15 вотных, отравленных гелиотрином, обнаруживаются значительные сдвиги в белковом обмене (вследствие угнетения синтеза и одновременного усиления распада его в органе), меньшие, в показателях углеводного, липидного обмена. Авторы пришли к выводу, что экспериментальный гелиотринный гепатит и цирроз печени как в отношении биохимических, так и морфологических сдвигов более близок к встречающимся в условиях клиники заболеваниям печени эпидемического эндогенного и алиментарно-токсического происхождения.
В.Н. Тугаринова (1970), в процессе развития метатоксического цирроза печени у кроликов изучали гистологические, гистохимические (окислительные ферменты-дегмдрогеназы, НАДФ и НАД "диафоразы", щелочная фосфатаза, гликоген, РНК) и функциональные (показатели белкового, липидного, углеводного обмена, неспецифической иммуногенной активности и др.) изменения печени. У опытных животных отмечено прогрессирующее поражение печени, в течение которого можно было выделить три основные стадии: подострый гепатит (I и II циклы интоксикации), прецирроз (III и IV циклы), монолобулярный цирроз, аналогичный портальному циррозу человека (V, VI циклы). В стадии подострого гепатита обнаружено выраженное повышение активности ферментов (ALT, AST, FDPA, CUE), увеличение у-глобулиновой фракции и [3-липопротеидов сыворотки крови, снижение скорости утилизации галактозы, уменьшение элиминации бромсульфалена. В стадии прецирроза отмечено дальнейшее нрогрессирование процесса с присоединением существенного нарушения архитектоники печеночной ткани, характерного для начальной стадии цирроза. Снижение энергетических и пластических процессов в гепатоцитах вызывало падение концентрации альбуминов сыворотки крови. В стадии сформировавшегося монолобулярного цирроза вновь повышается активность ALT, HST, FDPA, снижаются адаптационные процессы, резко снижается синтетическая способность печени. Следовательно, считают авторы, в стадии подострого гепатита на первый план выступают реакции, связанные с острым повреждением органа, в стадии прецирроза имеет место ослабление синтетических процессов наряду с адаптационными процессами, а в стадии монолобулярного цирроза превалируют признаки функциональной и структурной дезорганизации ткани печени, нарушение гепатогематической циркуляции.
Л.И. Соловей (1971) исследовал на крысах токсическое влияние на организм животных нитрилоакриловой кислоты (НАК), используемой в современной химической промышленности как сырье для синтеза некоторых инсектицидов, эмульгаторов и в производстве синтетического каучука. При этом исследователям установлено резкое нарушение белкового обмена, падение содержания белка в печени, повышение содержания остаточного азота, пониженное поступление кислорода в печеночную ткань, что дало возможность считать, исходным патогенетическим фактором в развитии всех отличительных изменений подавление данным веществом системы окислительных ферментов, т.е. гистотоксическую гипоксию. Таким образом, автор подтвердил предположение о том, что при контакте с НАК у работающих возможно возникновение токсических гепатитов.
G. Klatskin (1975), при гистологическом исследовании ткани печени лиц, отравленных неорганическими соединениями фосфора, описал массивные некрозы и перипортальный желчный стаз.
Ы.Х. Абдулаев с соавт. (1976) исследовали метаболические механизмы повреждения при отравлении крыс алкоголем и гепатотропными ядами при пероралыюм введении 40% этилового спирта (2 мл/100 г) и гепатотропных ядов, таких, как гелиотрин, подкожно (10 мг/100 г, 20 мг/100 г) и ССЦ по 0,3 мл/100 г и 0,6 мл/100 г подкожно. При этом установлено, что при пероралыюм введении этилового спирта повышается активность щелочной фос-фатазы в печеночной и мозговой тканях. В наибольшей степени активность этих ферментов повышается при сочетапном введении гслиотрина и спирта и сравнительно меньше - при сочетании спирта и ССЦ. Авторы пришли к выводу, что наблюдаемые при алкогольной интоксикации патобиохимические сдвиги связаны с непосредственным повреждающим действием этанола на головной мозг и печеночную ткань.
IO.K. Василенко (1976), в эксперименте на белых крысах и собаках изучал функциональную способность паренхимы печени при хроническом токсико-химическом повреждении ее и характер некоторых адаптационно-компенсаторных механизмов. Для этого дважды в неделю подкожно вводился четыреххлористый углерод в количестве 0,1— 0,15 мл на 100 г массы тела крысы в течение семи недель. При этом отмечено уменьшение активности глюкозо-6-фосфатазы в ткани печени на 52,3%, сукциндегидрогеназы - на 53,9%, цитохромоксидазы — на 39,6%. Напротив, активность гексогеназы повышалась на 85,5%, а при гистологическом исследовании выявлено нарушение балочного долькового строения печени, очаговая пролиферация купфе-ровских клеток, резкое обеднение гепатоцитов гликогеном и обогащение их жиром. Автор делает заключение, что развитие хронического токсико-химического гепатита характеризуется не только структурными, метаболическими и функциональными нарушениями печени, но и существенными изменениями нервных и гуморальных звеньев защитных механизмов в организме.
Функциональные методы исследования внешнего дыхания морских свинок
Экспериментальные исследования проводились на 130 половозрелых кроликах, массой 2,0 - 3,2 кг, 105 крысах (129 - 198 г.) и 53 морских свинках, массой 450 — 650 г. До начала основных экспериментов, исходя из цели и задач исследования, отрабатывали методику перорального введения СС14 на 6 животных. Токсичность трепела исследовалась при пероральном введении 12 крысам, массой 140 - 180 г и 18 морским свинкам в различных дозах. Как показали предварительные исследования, однократное введение препарата — трепела в дозе 10-20 г/кг массы вызывало заметное угнетение поведения крыс, которое полностью исчезало в течение 20 - 30 мин. При вторичном применении, через день, клинические признаки угнетения не превышали предыдущие и через 15 — 20 мин также полностью исчезали. При введении препарата морским свинкам в дозе 2 — 5 г/кг массы никаких клинических признаков не было обнаружено.
Проведены две серии опытов по исследованию влияния ЦТ на динамику развития острого гепатита: контрольной серией для 1-й и 2-й серий опытов служила интактная группа кроликов (12 животных). 1-я серия - перо-рал ыюе введение четыреххлористого углерода 14 животным; 2-я серия - пе-роралыюе введение четыреххлористого углерода кроликам на фоне перорального введения цеолитсодержащего трепела (16 животных). Все животные находились в одинаковых условиях содержания и на одинаковом кормовом рационе.
1-я серия. Несмотря на то, что существует ряд моделей острого токсического гепатита в эксперименте на морских свинках путем парентерального введения СС14 (П.Г. Рыбак, 1975; Ю.К. Василенко, 1976; Л.М. Яковлева, Л.Н. Иванов, 1994, 1995, 1996; Л.М. Яковлева, 1997, и др.), нами впервые ис 55 пользовалась модель острого токсического поражения печени на кроликах путем перорального введения CCI4. Четыреххлористый углерод для этого готовился на оливковом масле в виде 40%-го раствора. Раствор ССЦ вводился с помощью специального шприца с удлиненным концом пятикратно, через день, из расчета 1,5 мл/кг массы. На 15-й день животные были забиты. Результаты опытов 1-й серии служили контролем для 2-й серии опытов.
2-я серия. На фоне ежедневного перорального введения ЦТ кроликам в дозе 1,5 г/кг массы животного пероралыю, пятикратно, через день вводился ССЦ из расчета 1,5 мл/кг массы. Цеолитсодержащий трепел вводили в виде водной суспензии. На 15-й день животные были забиты.
При забое, который производился утром до кормления под эфирным наркозом, путем декапитации бралась кровь для биохимических анализов, а также ткань печени для гистологических исследований.
Существует ряд методик воспроизведения острого гастрита на различных лабораторных животных. Мы использовали методику, описанную Н.П. Чесноковой с соавт. (1995) на кроликах, модифицированную нами для крыс.
Острый токсический гиперацидный гастрит воспроизводился на крысах 2-й (опытной) серии введением через зонд 5%-ного раствора уксусной кислоты из расчета 4 мл/кг массы животного. Через 5 дней производили рН-метрию. 10 животных забиты для гистологических исследований ткани желудка. 1-я серия (иитактные крысы) служили контролем для опытов 2-й и 3-й серии опытов. Крысам 3-й серии ежедневно с кормом вводился цеолитсодержащий трепел из расчета 1,5 г/кг веса. Через 5 дней производилась рН-метрия, а 10 крыс забиты для гистологических исследований. Крысам 4-й (опытной) серии ежедневно в течение 5 дней перорально вводили ЦТ из расчета 1,5 г/кг веса с кормом, после однократного введения 5%-ного раствора уксусной кислоты из расчета 4 мл/кг массы животного. Через 5 дней производилась рН-метрия, а 10 животных забиты для гистологических исследований. Забой крыс производился под эфирным наркозом.
Модель хронической ацетатной язвы на кроликах 2-й серии (аппликация ледяной уксусной кислоты к серозной оболочке желудка в течение одной минуты) воспроизводилась по Окабе (S. Okabe et al. 1971; Л.И. Аруин с со-авт. 1976), которая, как известно, используется для оценки противоязвенной эффективности различных препаратов (В.М Успенский с соавт. 1990). Биохимические исследования проводились на 12-е сутки после введения ацетата. Животные были забиты на 12-е сутки для гистологических исследований. Кроликам 3-й, опытной серии нанесение ацетата на серозную оболочку желудка кролика производилось на фоне перорального введения цеолитсодер-жащего трепела, из расчета 1,5 г/кг массы животного, в течение 12 дней. 1-я серия (интактные кролики) служили контролем для 2-й серии опытов. 4-я серия — проведение экспериментальной терапии хронической ацетатной язвы подопытных кроликов по Окабе ЦТ в течение 12 дней.
Проводили морфологические гематологические исследования крови путем подсчета абсолютного количества эритроцитов (х10 /л) и абсолютного количества лейкоцитов (х109/л) по известным методикам В.Г. Михайлова, Г.А. Алексеева (1986).
Показатель фагоцитоза в % (процент фагоцитирующих клеток) и фагоцитарное число определяли по стандартной методике (В.А. Берестов, Л.Б. Узенбаева, 1983) с использованием частиц латекса. Как известно, фагоцитоз тесно связан с такими общефизиологоческими свойствами организма, как резистентность, гомеостаз, реактивность и устойчивость. Фагоцитоз — это мощный неспецифический барьер, а также фактор, принимающий участие в специфических реакциях организма (R.L. Baehner et al.,1971; I.D. Mickenberg et al., 1972; A.M. Чернух , 1978).
Определение содержания общего холестерина в сыворотке крови производили методом Илька, основанного на реакции Либермана-Бурхарда (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982). Уровень общего билирубина в сыворотке крови определяли по Ендрашеку, Клеггорну и Грофу (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982).Уровень общего белка в сыворотке крови определяли по Лоури (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982).
Исследование ферментов сыворотки крови
Исследования внешнего дыхания, проведенные на интактных морских свинках до начала введения ЦТ (табл. 3.4), показали следующие результаты: частота дыхания в минуту в среднем 101+1,72, глубина дыхательной волны -8,44±0,47 мм, относительный минутный объем дыхания (ОМОД) 100%, отношение вдоха и выдоха 1:1,59±0,04. При этом, ритм дыхания колебался в пределах 80 - 120 в минуту, глубина дыхательной волны - от 5 до 14 мм, отношение вдоха к выдоху - от 1:1,4 до 1:1,9. Таблица 3.4 Динамика внешнего дыхания интактных и опытных (пероральное введение цеолитсодержащего трепела) морских свинок Серия и сроки опытов омод,% Ритм дыхания Глубина дыхательной волны, мм Отношение вдоха к выдоху Интактные 100±0 101±1,72 8,44±40,47 1,59±0,04 1-я серия (после 3-го введения ЦТ) 100,5+2,73 101±1,97 8,63±0,63 1,6+0,05 1 -я серия (после 8-го введения ЦТ) 104±3,71 101 ±2,23 8,13+0,23 1,61+0,06 После 3-го введения ЦТ ритм дыхания в среднем составил 101±1,97, глубина дыхательной волны - 8,63±0,63 мм, отношение вдоха к выдоху составило 1,6+0,05, ОМОД - 100,5+2,73. Следовательно, после 3-го введения ЦТ динамика внешнего дыхания подопытных морских свинок существенных изменений не претерпела (рис.3.1). После 8-го введения ЦТ ритм дыхания животных в среднем составил 101±2,23, глубина дыхательной волны 8,13±0,23 мм, отношение вдоха к выдоху составило 1,61±0,06, а ОМОД составил 104±3,71.
Таким образом, как после 3-го введения, так и после 8-го введения ЦТ динамика внешнего дыхания подопытных морских свинок достоверных изменений не претерпела. Параметры внешнего дыхания свидетельствуют о том, что ЦТ не оказывает отрицательного воздействия на внешнее дыхание подопытных морских свинок.
Гистологическое исследование ткани печени не выявило отклонений в структуре ткани по сравнению таковой интактных морских свинок. Долько-вая структура ткани печени сохранена, портальные тракты узкие, клеточных инфильтраций не обнаружено. ш
Введение цеолитсодержащего трепела животным 4-й серии привело к тенденции увеличения абсолютного количества эритроцитов и содержания общего белка, что следует трактовать как улучшение обменных, биосинтетических процессов. Г.И. Иванов и Т.Е. Григорьева (1998), используя трепел в качестве добавки к пищевому рациону сельскохозяйственных животных и кур, установили увеличение количества эритроцитов и общего белка в сыворотке крови опытных животных по сравнению с контрольной группой.
Увеличение показателя фагоцитоза на 3,76% и фагоцитарного числа на 14,55% у опытных животных с введением цеолитсодержащего трепела является свидетельством улучшения показателей неспецифической резистентности организма, улучшения интенсивности фагоцитоза, нейтрофильных лейкоцитов, повышения активности клеточных и гуморальных факторов защиты и всей физиологической реактивности, что подтверждается гематологическими и биохимическими исследованиями. Мы считаем, что данный эффект связан с повышенной адсорбцией цеолитами трепела антиметаболитов и токсинов, имеющихся в кормовом рационе. К аналогичному выводу пришли Г.И. Калачнюк (1989) и Р.И. Штоль с соавт. (1989), исследуя значение цеолитов при скармливании сельскохозяйственным животным.
Отмеченные положительные сдвиги в организме опытных животных мы связываем также с содержанием в трепеле соединений кремний. По данным Г.П. Скребкова (1987), химический состав трепела Первомайского месторождения включает от 60,3 до 72,5% оксидов кремния. Свойство кремния связано с усилением биосинтеза коллагена, с повышением барьерных функций соединительной ткани, а также дезинтоксикацией, облегчающей удаление метаболитов, чужеродных и токсических веществ. Соединения кремния участвуют также во всех метаболических процессах живого вещества, в том числе липидов (И.Ф. Заке, 1966), влияют на процессы метаболизма в эритро 70 цитах живой плазмы (W. Gedlak, 1967) и входят в качестве кофермента в состав диастаз (А.И. Войнар, 1960).
О том, что ЦТ увеличивает площадь биохимической реакции в организме, улучшает морфофункциональное состояние печени, свидетельствует тенденция к понижению аминотрансфераз (АлАТ и АсАТ) и щелочной фос-фатазы. М.Г. Чухрова с соавт. (1996), исследуя возможности применения цеолитов при лечении похмельно-интоксикационных синдромов у лиц, считает, что после использования цеолитов общее состояние больных существенно улучшается и одновременно снижается активность трансаминаз.
Снижение активности щелочной фосфатазы позволяет думать о том, что регулируется кальциево-фосфорный обмен. Известно, что и избыток и недостаток фосфора вызывают существенное нарушение обмена, особенно обмена кальция. А нарушение кальциево-фосфорного соотношения может снижать фагоцитарную активность лейкоцитов, снижая общую резистентность организма, а также нарушает углеводно-липидный обмен организма.
Отмеченные положительные физиологические показатели организма исследованных животных данной серии полностью подтверждаются показателями гистологических исследований ткани печени.
Следовательно, положительное биологическое действие ЦТ, вероятно, начинается уже в пищеварительном тракте, где благодаря адсорбционным и ионообменным процессам трепел оказывает положительное регуляторное, метаболическое воздействие в желудочно-кишечном тракте, резко снижая поступление в кровь и печень эндо- и экзотоксикантов. Надо полагать, что такие энтеросорбционные механизмы, предотвращая различные пути развития патологических процессов, способствуют детоксикации организма при его экзогенной и эндогенной интоксикации.
Исследование перекисного окисления липидов
По данным А.Н. Тарасова (2000), при изучении параметров острой токсичности в период наблюдения гибель мышей не отмечалась, а при патолого-анатомическом вскрытии слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта была без изменений, внутренние органы подопытных животных не отличались от интактных, что свидетельствует об отсутствии кумулятивного действия «Пермаита» и «Пермамика». Препараты не обладали раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки глаз кроликов.
A.M. Паничев (1990) отмечает, что человечество в течение многих веков успешно использовало в качестве минеральной пищевой добавки и для лечения многих заболеваний кремнийсодержащие глины, которые по физико-химическим свойствам и составу близки к трепелам.
Использованный нами ЦТ, по результатам наших исследований, не оказывает отрицательного действия, как на функциональное состояние ЦНС, так и на гематологические показатели организма. Результаты этих исследований делают возможным использовать цеолитсодержащий трепел, пока еще в экспериментальной медицине, в качестве энтеросорбепта и детоксиканта, а также позволяют апробировать цеолитсодержащий трепел в медицинской практике для лечения больных с различной патологией.
Как известно, нарушения правильных взаимоотношений между корковой деятельностью, функциями вегетативной нервной системы и работой внутренних органов могут идти различными путями, но едва ли не наибольшее внимание привлекает к себе следующий путь: под влиянием тех или других неблагоприятных условий, вызывающих перенапряжение корковых процессов в мозговой коре, на фоне общих динамических сдвигов возникают как бы функциональные очаги застойного возбуждения и торможения, связанные с устойчивыми, патологически фиксированными эмоциями и аффектами отрицательного характера. Эти явления патологической застойности, распространяясь на вегетативную нервную систему, длительно фиксируют в ней определенное функциональное состояние, соответствующее той или другой хронической отрицательной эмоции, причем эта болезненная застойность, инертность может надолго сохраняться и после того, как устранены вызвавшие ее внешние причины.
Кортикально обусловленная патологическая фиксация вегетативной нервной деятельности, лишая ее нормальной функциональной подвижности, ограничивая гибкость ее адаптации к изменениям, происходящим во внешней и внутренней среде организма, приводит к явлениям вегетативной и метаболической диссоциации, а вместе с тем и к нарушениям работы внутренних органов. При этом в зависимости от особенностей онтогенеза больного и перенесенных им ранее заболеваний место наибольшего патологического нарушения и наиболее пострадавшие физиологические функции могут быть в каждом отдельном случае различны. Таким путем нарушения высшей нервной деятельности приводят к соматическому заболеванию.
По-видимому, подобно явлениям патологической застойности, с мозговой коры на вегетативную нервную систему могут распространяться и, так называемые, фазовые явления. Новое понимание значения мозговой коры в патогенезе вегетативных нарушений и внутренних заболеваний (особенно язвенной и гипертонической болезни) ставит новые большие задачи перед фармакологией высшей нервной деятельности, а также перед физиотерапией. Но особенно это относится к психотерапии, которая, казалось бы, должна быть заново перестроена с учетом основных закономерностей корковой деятельности и кортико-висцеральных отношений на основе павловского учения о сонном торможении, гипнозе, внушении и о взаимодействии первой и второй сигнальных систем (А.Г. Иванов-Смоленский, 1952).
Положительные результаты применения ЦТ в клинике для лечения ряда заболеваний показал ряд исследований (А.Н. Волков, 2000; М.И. Суханова, 2000; М.К. Мамаев,2000; О.Н. Митюкова, 2000, и др.)
А.А. Чайко (2000) отмечает, что одной из актуальных задач современной медицины является удаление из организма токсических продуктов различного происхождения с помощью сорбентов. В последние годы наблюдается интенсивное развитие исследований в области синтеза сорбентов органического и неорганического происхождения, предназначенных для применения в медицинской практике в качестве энтеро- и гемосорбентов, носителей для иммобилизации биологически активных соединений (ферментов, витаминов, лекарств).
Следовательно, ЦТ в использованных нами дозах не обладает альтера-тивными, раздражающими свойствами, не оказывает отрицательного влияния на высшую нервную деятельность, на морфофункционалыюе состояние кроветворной системы, печени и является стимулятором метаболических процессов в организме, обеспечивая нормальную функциональную деятельность организма.
