Клиническая значимость полиморфных вариантов гена индуцибельной синтазы оксида азота и генов цитокинов, регулирующих ее синтез, у детей, больных бронхиальной астмой Рамазанова Наиля Назыфовна

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Рамазанова Наиля Назыфовна. Клиническая значимость полиморфных вариантов гена индуцибельной синтазы оксида азота и генов цитокинов, регулирующих ее синтез, у детей, больных бронхиальной астмой : диссертация ... кандидата медицинских наук : 14.00.09 / Рамазанова Наиля Назыфовна; [Место защиты: ГОУВПО "Башкирский государственный медицинский университет"]. - Уфа, 2008. - 124 с. : 8 ил.

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1. Основные патогенетические механизмы бронхиальной астмы (обзор литературы) 11

1.1. Роль цитокинов, участвующих в регуляции иммунного ответа при бронхиальной астме 11

1.2. Генетические аспекты этиопатогенеза бронхиальной астмы 15

1.2.1. Индуцибельная синтаза оксида азота и ее роль в патогенезе бронхиальной астмы 18

1.2.2. Цитокины, регулирующие синтез индуцибельной синтазы оксида азота 22

1.2.2.1.Интерферон у 22

1.2.2.2.Интерлейкин-1 25

1.2.2.3.Фактор некроза опухоли а : 26

1.2.2.4.Интерлейкин-4 28

1.2.2.5.Интерлейкин-10 31

Глава 2. Материалы и методы исследования 34

Глава 3. Результаты собственных исследований 38

3.1. Клинико-анамнестическая характеристика детей, находившихся под наблюдением 38

3.2. Состояние иммунной системы детей, находившихся под наблюдением...47

3.3. Результаты инструментального обследования детей, находившихся под наблюдением 53

Глава 4. Изучение полиморфных вариантов гена индуцибельной синтазы оксида азота и генов цитокинов, регулирующих ее синтез 56

4.1. Изучение микросателлитного полиморфизма (ССТТТ)п гена индуцибельной синтазы оксида азота NOS2A у детей, находившихся под наблюдением 56

4.2. Изучение динуклеотидного полиморфизма (СА)п гена интерферона у INFG у детей, находившихся под наблюдением 59

4.3. Изучение полиморфных локусов -511С>Ти 3953С>Тгена интерлейкина-1р IL1B и VNTR-полиморфизма гена его рецепторного антагониста IL1RA у детей, находившихся под наблюдением 64

4.4. Изучение полиморфного локуса -308G>A гена фактора некроза опухоли а TNFA у детей, находившихся под наблюдением 70

4.5. Изучение полиморфного локуса -590С>Т гена интерлейкина-4 IL4 и полиморфного локуса Ile50Val а-цепи его рецептора IL4Ra у детей, находившихся под наблюдением 72

4.6. Изучение полиморфного локуса -627С>А гена интерлейкина-10 1Ы0 у

детей, находившихся под наблюдением 77

Глава 5. Заключение 79

Выводы 93

Практические рекомендации 95

Список литературы 96

Приложение 115

Роль цитокинов, участвующих в регуляции иммунного ответа при бронхиальной астме
Генетические аспекты этиопатогенеза бронхиальной астмы
Клинико-анамнестическая характеристика детей, находившихся под наблюдением
Изучение микросателлитного полиморфизма (ССТТТ)п гена индуцибельной синтазы оксида азота NOS2A у детей, находившихся под наблюдением

Введение к работе

Бронхиальная астма (БА) относится к числу наиболее распространенных заболеваний детского возраста, представляя серьезную медицинскую и социальную проблему [Коростовцев Д.С., Макарова И.В., 2001; Дрожжев М.Е. и др., 2002] По данным эпидемиологических исследований БА страдают от 3 до 10% детского населения всего мира [Балаболкин И.И., 1985; Богданова А.В. и др., 1998; Чучалин А.Г., 2005; Asher M.I. et al., 1995; ISAAC, 1998]. До настоящего времени вопросы этиопатогенеза БА являются предметом дискуссий.

БА является классическим примером мультифакториального заболевания, при котором реализация патологического процесса осуществляется взаимодействием средовых и генетических факторов [Фрейдин М.Б., 2001; Фрейдин М.Б. и др., 2006].

В настоящее время наиболее применяемым методом изучения генетических основ БА является поиск ассоциации заболевания с полиморфными вариантами так называемых генов-кандидатов [Пузырев В.П. и др., 2000; Фрейдин М.Б. и др., 2006; Мазурина С.А., Казначеев В.А., 2006]. Наличие определенных полиморфных вариантов генов может приводить к изменению уровня экспрессии данных генов и изменению структуры кодируемых ими белков [Carole О. et al., 1998; Palmer L.J., William O.C.M., 2000].

При изучении патогенеза БА представляет интерес исследование возможного участия полиморфизма тех генов-кандидатов, которые отвечают за синтез белков, участвующих в реализации атопического воспаления и бронхиальной гиперреактивности [Фрейдин М.Б. и др., 2006].

Результатом исследований последних лет стало понимание важной роли оксида азота (NO) в развитии воспалительного процесса при БА. Доказано участие NO в формировании атопии и гиперреактивности бронхов [Barnes Р J., 1996; Asbutosb К., 2000]. В связи с этим большое распространение приобрел метод определения уровня N0 в выдыхаемом воздухе, нарастание которого в большинстве работ трактуется как один из показателей, свидетельствующий об активности аллергического воспаления у больных БА [Харитонов С.А. и др., 1997; Вознесенский Н.А., 2000; Цыпленкова С.Э, Мизерницкий Ю.Л., 2006; Byrnes С. et al., 1997]. При данном заболевании синтез NO контролируется индуцибельной формой синтазы оксида азота (iNOS), активность которой отчасти обусловлена взаимодействием ряда цитокинов, принимающих самое активное участие в иммунопатологическом воспалительном процессе при БА. Учитывая вышесказанное, в качестве генетических маркеров заболевания нами избраны полиморфные варианты гена iNOS и генов цитокинов, белковые продукты которых участвуют в регуляции синтеза фермента.

Цель исследования: установить значимость полиморфных вариантов гена индуцибельной синтазы оксида азота и генов цитокинов, регулирующих ее синтез, в риске возникновения и развития основных фенотипических проявлений бронхиальной астмы у детей.

Задачи исследования:

1. Оценить состояние здоровья детей, больных бронхиальной астмой различной тяжести, с помощью клинико-лабораторных и инструментальных методов исследования;

2. Изучить полиморфные варианты гена индуцибельной синтазы оксида азота NOS2A и провести анализ их ассоциаций с основными клинико-лабораторными и функциональными параметрами детей, больных бронхиальной астмой;

3. Провести анализ ассоциаций основных клинико-лабораторных и функциональных параметров детей, больных бронхиальной астмой, с полиморфными вариантами генов цитокинов, стимулирующих синтез индуцибельной синтазы оксида азота NOS2A (динуклеотидный полиморфизм (СА)п renalNFG,полиморфные локусы -511С 17и 3953С Т генаIL1B, VNTR-полиморфизм гена IL1RA, полиморфный локус -308A G гена TNFA);

4. Провести анализ ассоциаций основных клинико-лабораторных и функциональных параметров заболевания у детещ больных бронхиальной астмой с. полиморфными; вариантами генов: цитокинов, угнетающих синтез индуцибельной синтазы; оксида- азота NOS2A (полиморфные локусы, -590С Т гена IL4, Ile50Val гена IL4Rd; -627Є А тенаІЕІО);

5. Оценить риск возникновения бронхиальной?астмы, у детей по;; изучаемым? полиморфным локусам. ;.

Научная новизна исследования

Впервые показано; участие; микросателлитного.полиморфизма (ЄЄШТ)п гена индуцибельной синтазы оксида азота: NOS2Ai динуклеотидного полиморфизма (GA)nгена интерферона-у /M G, полиморфныхлокусов-577€ Z и 3953G T гена интерлейкина-1р: 1ЫВ, VNTR-полиморфизма гена рецепторного антагониста; интерлейкина-1р\ ILJRA, полиморфных локусов -308A Gгена фактора некроза опухоли a TNFA, -590С Т гена интерлейкина-41 Ш4, Ile50Val гена а-цепи рецептора интерлейкина-4; IL4R в возникновении и развитии основных фенотипических признаков бронхиальной, астмы, у детей, проживающих в Республике;Башкортостан.

Обнаружены ассоциации полиморфных. вариантов гена индуцибельной синтазы и оксида азота и генов цитокинов, регулирующих ее синтезу с такими фенотйпическими; проявлениями бронхиальной астмы у детей, как тяжесть заболевания и ее ранний дебют, эпизоды экспираторного удушья в ночное время, гиперпродукция общего сывороточного иммуноглобулина Е, наличие бытовой сенсибилизации, аллергический ринит и/ атопический дерматит в качестве сопутствующей патологии, экссудативно-катаральный диатез и пищевая сенсибилизация в анамнезе.

Установлены генетические маркеры повышенного и пониженного риска возникновения бронхиальной астмы у детей Республики Башкортостан.

Научно-практическая значимость работы

Показана ассоциация тяжести бронхиальной астмы с возрастом ребенка, воздействием ряда триггеров, ранним введением прикорма. Кроме того, установлено значение перинатального неблагополучия и неблагоприятных жилищных условий в возникновении заболевания.

Получены новые данные о влиянии полиморфных вариантов гена индуцибельной синтазы оксида азота и генов цитокинов, регулирующих ее синтез, на фенотипические проявления количественных и качественных, патогенетически важных для бронхиальной астмы признаков.

Установленные ассоциации клинико-лабораторных параметров детей, больных бронхиальной астмой, с полиморфными вариантами изученных генов, позволят индивидуализировать терапевтические подходы.

Полученные результаты позволят прогнозировать течение бронхиальной астмы. Учет риска возникновения заболевания среди родственников больного даст возможность осуществлять превентивные (первичная профилактика) и планировать адекватные лечебные мероприятия по контролю над симптомами болезни.

Внедрение в практику. Результаты исследования внедрены в работу муниципальных учреждений городского округа г. Уфа детской поликлиники № 4, детской поликлиники № 8, детского отделения Клиники БГМУ. Кроме того, полученные результаты используются в программе обучения студентов, врачей-интернов и клинических ординаторов на кафедре детских болезней ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Положения, выносимые на защиту

1. Ассоциация тяжести бронхиальной астмы с возрастом ребенка, воздействием некоторых триггеров (физическая нагрузка, эмоциональный стресс, изменение метеоситуации, пыльца), с ранним введением прикорма.

2. Ассоциация ряда клинико-лабораторных параметров детей, больных бронхиальной астмой (общий уровень сывороточного IgE, легкое течение и возраст дебюта заболевания, сочетание бронхиальной астмы с аллергическим ринитом), с полиморфными вариантами гена индуцибельной синтазы оксида азота NOS2A.

3. Ассоциация некоторых клинико-лабораторных параметров детей, больных бронхиальной астмой (общий уровень сывороточного IgE, бытовая сенсибилизация, эозинофилия периферической крови, экссудативно-катаральный диатез в анамнезе, сочетание БА с атопическим дерматитом) с полиморфными вариантами генов цитокинов, стимулирующих синтез индуцибельной синтазы оксида азота (интерферон-у INFG, интерлейкин ip 1ЫВ, рецепторный антагонист интерлейкина ip IL1RA, фактор некроза опухоли a TNFA).

4. Ассоциация ряда клинико-лабораторных параметров детей, больных бронхиальной астмой (эозинофилия периферической крови, селективная IgA-недостаточность, пищевая сенсибилизация в анамнезе) с полиморфными вариантами генов цитокинов, угнетающих синтез индуцибельной синтазы оксида азота (интерлейкин 4 IL4 и а-цепь его рецептора IL4Ra).

5. Генетическим маркером повышенного риска развития и тяжелого течения бронхиальной астмы у детей является аллель IL4 T полиморфного локуса -590С Т гена IL4. Маркерами пониженного риска развития заболевания являются аллель IL4 C и генотип IL4 C/ C полиморфного локуса -590С Т гена ПА.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Международной научно-практической конференции «Здоровье и безопасность жизнедеятельности молодежи: проблемы и пути решения» (Уфа, 2006), Международной научно-практической конференции «Третьи тульские педиатрические чтения» (Тула, 2007), Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых (Уфа, 2007), Общероссийской конференции «Фундаментальные и прикладные исследования» (Москва, 2007), школе-семинаре молодых ученых Уфимского научного центра РАН и Волго-Уральского региона по физико-химической биологии и биотехнологии (Уфа, 2007), межкафедральном заседании кафедр госпитальной педиатрии с курсом поликлинической педиатрии, факультетской педиатрии с пропедевтикой, педиатрии ИПО, биологии и лаборатории молекулярной генетики человека-ИБГ УНЦ РАН совместно с Проблемной комиссией «Новые технологии в диагностике, лечении и профилактике заболеваний у детей и подростков» (Уфа, 2008).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 7 печатных работ, из них 1 - в центральной печати.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 124 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования; глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Список литературьъ включает 181 источников, из них 133 работа зарубежных авторов и 48 публикаций отечественных авторов. Диссертация иллюстрирована 8 рисунками, 16 таблицами.

Роль цитокинов, участвующих в регуляции иммунного ответа при бронхиальной астме

БА - заболевание, нарастающий интерес к которому во всем мире вполне закономерен в связи с неуклонным ростом заболеваемости, инвалидизации и смертности. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в ряде западных государств за последние 40 лет заболеваемость аллергией и БА увеличилась в 2-3 раза и приобрела эпидемический характер [Johansson S.G.O., 2004]. Эпидемиологические исследования свидетельствуют о том, что заболеваемость Б А составляет 5-10% в детской популяции и колеблется в пределах 5% - во взрослой [Научно-практическая программа «Бронхиальная астма у детей: диагностика, лечение и профилактика, 2004; Чучалин А.Г., 2005]. В странах с разным уровнем экономического развития проведенные в рамках ISAAC исследования показали, что аллергические заболевания больше распространены среди населения развитых стран с более высоким уровнем доходов на душу населения [ISAAC, 1995, 1998]. Переоценить социально-экономическую значимость проблемы БА невозможно. Диагностика и лечение больных БА оказывает существенное влияние на экономику многих стран. 1.1. Роль цитокинов, участвующих в регуляции иммунного ответа при бронхиальной астме. Одно из первых упоминаний о Б А датируется концом 19-го века, когда врач Генри Солтер описал заболевание как эпизодическое диспноэ с нормальным дыханием в межприступный период. Уже к началу 20-го века все чаще встречались семейные случаи Б A [Cooke R.A., 1916]. Благодаря активному изучению данного вопроса в настоящее время наши представления о БА не только претерпели значительные изменения, но и продолжают меняться до сих пор.

Современное понимание этиопатогенеза БА определяет его как сложный комплекс нарушений регуляции иммунного ответа, сопровождающийся развитием персистирующего эозинофильного воспаления [Огородова Л.М. и др., 2006]. Считается, что в основе этих нарушений лежит так называемая атопия, то есть наследственная тенденция к гиперпродукции иммуноглобулинов класса Е (IgE). В формировании атопического воспаления задействовано множество фигурантов: иммунокомпетентные клетки, ткани бронхиального дерева, различные медиаторы [Iahizaka К., 1989]. Их взаимодействие ведет к бронхоконстрикции, отеку стенки бронха, гиперсекреции слизи и последующему ремоделированию бронхиального дерева.

Одну из ключевых позиций в патогенезе БА по праву занимают эозинофилы. Высвобождаемые при их активации биологически активные вещества стимулируют сокращение гладкой мускулатуры бронхов, секрецию слизи, оказывают повреждающее воздействие на эпителий дыхательных путей, вызывают дегрануляцию тучных клеток и базофилов. Эозинофилы продуцируют фактор активации тромбоцитов, который в свою очередь выступает как мощный бронхоконстриктор и хемоаттрактант. Активация эозинофилов ассоциирована, главным образом, с обострением БА, степенью тяжести последней и бронхиальной гиперреактивностью [Jatakanson A. et al., 1998; Holz G. et al., 2000]. Способность эозинофилов повреждать окружающую ткань обусловлена целым рядом механизмов [Gleich G.J., Adolphson C.R., 1998]. Так, действие гранулярных протеинов эозинофилов, являющихся чрезвычайно токсичными для эпителия респираторного тракта, проявляется в десквамации эпителия, разрушении эпителиальных клеток, изменении формы ресничек эпителия и нарушении эпителиальной секреции [Frigas Е. et al., 1981; Gleich G.J., Adolphson C.R., 1998]. Биологически активные субстанции, синтезированные эозинофилами, способствуют спазму гладких мышц и повышенной сосудистой проницаемости, индуцируют гиперреактивность бронхов. Также эозинофилы активно участвуют в процессе ремоделирования стенки бронхов [Черняк Б.А., 2002].

Важная роль в реализации многих патофизиологических эффектов при БА принадлежит NO, который признан достоверным маркером активности воспалительного процесса [Вознесенский Н.А., 2000; Byrnes С. et al., 1997]. Установлено, что главным источником NO у больных БА являются нижние отделы респираторного тракта [Yates D.H. et al., 1995], где он синтезируется в результате активации iNOS [Hamid Q. et al., 1993]. Изучение данной молекулы показало, что она способна оказывать влияние на иммунную систему и воспалительный ответ. Так, снижая активность Т-хелперов первого типа (THi), NO способствует активации Т-хелперов второго типа (ТН2). Кроме того NO стимулирует хемотаксис эозинофилов и нейтрофилов, угнетая апоптоз последних [Ferreira Н.Н. et al., 1998; Asbutosb К., 2000; Berlyne G., 2000].

Нельзя не оставить без внимания роль многочисленных медиаторов воспаления или цитокинов, принимающих непосредственное участие в патологическом процессе при Б А. В настоящее время описано более 100 цитокинов, включающих интерлейкины (IL), интерфероны (INF), факторы некроза опухоли (TNF), колониестимулирующие факторы, трансформирующие факторы роста (TGF), семейство хемокинов. Часть цитокинов обладает способностью инициировать и стимулировать воспалительные реакции (IL-1, IL-6, IL-8, IL-11, IL-12, IL-16, IL-18, TNFa, INFa, INFy), тогда как другая подавляет их (IL-4, IL-6, IL-10, IL-13, TGF[3). Неоспорима роль цитокинов в работе иммунной системы как в норме, так и при патологии, что доказано многочисленными исследованиями [Кетлинский С.А. и др., 1992; Фрейдлин И.С., 1998].

В основе аллергических заболеваний, в частности атопической БА, лежит активация аллерген-специфических лимфоцитов ТН2. Исследования последних лет внесли значительную ясность в понимание механизмов, лежащих в основе развития ТН2-фенотипа, что позволяет определить место и роль большинства ключевых цитокинов в этом процессе. Попадание в организм антигена активирует макрофаги и вызывает секрецию ими ряда медиаторов, в том числе IL-1, который в свою очередь стимулирует пролиферацию антигенчувствительных Т-лимфоцитов [Weaver С.Т., Unanue E.R., 1986] и способствует дифференцировке ТНо в THi- и ТН2-клетки [Симбирцев А.С., 1993]. Между тем известно, что при атопическом воспалении имеет место активация синтеза и других медиаторов, в том числе TNFa [Ruggiero V. et аі., 1986]. TNFa контролирует степень инфильтрации нейтрофилами стенки бронхиального дерева, участвует в регуляции экспрессии молекул [Aggarwal В.В. et al., 1985; Aggarwal В.В., Eessalu Т.Е., 1987; Ming WJ. et. al., 1987], ответственных за избирательную адгезию эозинофилов в очаге воспаления. Таким образом TNFa является медиатором, принимающим непосредственное участие в развитии поздней фазы атопической реакции. Кроме того, существует мнение, что TNFa является веществом, ответственным за хронизацию атопического воспаления [Федосеева Г.Б., 1998].

Одно из значимых мест в патогенезе БА занимает IL-4, принимая самое активное участие в реализации иммунопатологического воспаления. Связываясь с рецепторами на поверхности В-клеток, IL-4 переключает их на синтез иммуноглобулина Е (IgE) [Stavnezer J., 1996]. Кроме того, IL-4 индуцирует дифференцировку Т-лимфоцитов в ТНг-клетки [Yokota Т. et al., 1986]. Индуцируя эндотелиальные клетки на производство молекул адгезии, IL-4 участвует в миграции эозинофилов, моноцитов и базофилов в очаг воспаления [Paul W.E., Seder R.A., 1994]. Воздействие на эозинофилы в основном ассоциировано с IL-5, играющим ключевую роль в стимуляции дифференцировки, пролиферации, хемотаксиса и активации эозинофилов.

Генетические аспекты этиопатогенеза бронхиальной астмы

В 1965 году D.S. Falconer сформулировал концепцию наследственного предрасположения [Falconer D.S., 1965], согласно которой предрасположенность к тому или иному заболеванию обусловлена сочетанием в генотипе определенных аллелей, формирующих неблагоприятный наследственный фон, реализующийся при определенных условиях.

Успехи в изучении первичной структуры ДНК генома человека бесспорно являются стимулом для проведения исследований в области молекулярной генетики во всем мире. Помимо прочего эти исследования имеют и социальную востребованность, обусловленную необходимостью разработки превентивных мероприятий, направленных на повышение эффективности терапии в каждом конкретном случае болезни.

Исследования генома человека позволяют использовать в качестве маркеров патологического состояния организма вариабельность последовательности нуклеотидов в геномах-.разных индивидуумов. Ученые полагают, что поиск ассоциаций между полиморфизмами индивидуумов и различными заболеваниями позволит выявлять генетическую предрасположенность к заболеваниям, возникновение которых обусловлено воздействием нескольких генов.

Научные изыскания последних лет в области молекулярной генетики позволили определить хромосомную локализацию и полиморфизм конкретных генов ответственных за формирование предрасположенности к БА.

Международные исследования, направленные на изучение: генетических механизмов БА, в настоящее время довольно актуальны.. Причиной тому является большое: количество нерешенных вопросов, таких как; природа генетической подверженности к заболеванию, хромосомная локализация генов и так далее. .

Некоторое время назад были получены достоверные доказательства того, ... что частота встречаемости БА у родственников пробандов значительно выше, чем у родственников здоровых людей [Sibbald В., Kay А.В;,. 1997]. Также было установлено; что риск развития БА у детей, значительно выше; если один-или оба родителя ребенка страдают тем же заболеванием. Однако полученных данных было недостаточно для доказательства роли наследственности;. Подтвердить -генетическую основу БА помогли многочисленные близнецовые и эпидемиологические исследования [Фрейдин М;Б., 2001].

Генетическая гетерогенность, лежащая в основе клинического полиморфизма БА, оправдывает противоречивые результаты, касающиеся типов- наследования этого заболевания- [Фрейдин М.Б., 2001; Immervoll Т. et al;,, 2001]; Большинство исследователей. считает, что решение данного вопроса возможно при анализе наиболее существенных признаков БА, таких как атопия-и гиперреактивность бронхов, контроль за которыми- осуществляется различными генами. В настоящее времяг учеными выдвинуто предположение о наличии трех групп генов, контролирующих подверженность к Б А. Первая группа обусловливает подверженность к атопии, вторая участвует в контроле сократительной способности бронхов, третья отвечает за связь «атопия-бронхиальная гипереактивность» [Фрейдин М.Б., 2001].

Для поиска генов, играющих роль в патогенезе БА, используют методы позиционного и кандидатного картирования. Позиционный метод заключается в анализе сцепления заболевания с полиморфными маркерами в любом хромосомном положении. Кандидатное же картирование позволяет проводить анализ сцепления заболевания с определенным хромосомным участком, где локализованы уже известные гены-кандидаты. При БА большое число таких генов можно объяснить многофакторностью и сложностью патогенеза заболевания [Altmuller J. et al., 2001].

На сегодняшний день опубликованы результаты более 12 полногеномных скрининговых исследований по атопии, атопическому дерматиту и БА с тестированием различных полиморфных маркеров [Cookson W.O.C.M., 2003]. Используя подход позиционного картирования, было выявлено 8 хромосомных локусов БА: 5q31.1-33, 6р12-21.2, 1Ц12-13, 12ql4-24.1,13ql2-22, 14qll-12, 16р12.1-11.2 и Xq28/Yql2 [Kondo М. et al., 1993; Star R.A., 1993; Stavnezer J., 1996]. Результаты этих исследований показали, что воздействие генов и факторов окружающей среды на развитие БА во многом зависит от межпопуляционной вариабельности.

В России также активно проводится изучение полиморфизма генов детоксикации ксенобиотиков, генов цитокинов, генов NO-синтаз у больных бронхиальной астмой [Ляхович В. В. и др., 2000; Эткина И.А., 2000; Фрейдин М.Б., 2000, 2001, 2002; Иващенко Т. Э. и др., 2001; Петрова И.В., 2004; ШалухинаА.Р.,2006].

Клинико-анамнестическая характеристика детей, находившихся под наблюдением

WВ группу детей, больных БА, вошло 150 человек в возрасте от 4 до 18 лет. Среди них мальчиков было 106 (70,67%), девочек - 44 (29,33%) ребенка. Средний возраст больных детей составил 9,76+0,27 лет, их матерей — 35,08+0,57 лет, отцов - 37,50+0,52 лет.

В возрастную группу от 4 до 7 лет вошло 43 (28,67%) ребенка, в группу мальчиков от 8 до 12 лет - 55 (36,67%) детей, девочек от 8 до 11 лет — 18 (12%) детей, мальчиков от 13 до 16 лет- 16 (10,67%) детей, девочек от 12 до 16 лет -15 (10%) детей, в группу от 17 до 18 лет - 3 (2%) ребенка [ВОЗ, 1977]. Проведенная ранговая корреляция позволила установить положительную взаимосвязь между возрастной группой и тяжестью заболевания. Нами показано, что у старших детей преобладало более тяжелое течение БА (Rs=0,176,p=0,032).

В мононациональных семьях родилось 64,67% обследованных детей, в том числе в русских - 32%, в татарских - 25,33%, в башкирских - 7,33%. Треть детей (34,67%) родилось от смешанных браков, 1 (0,67%) ребенок был рожден в марийской семье.

При изучении данных анамнеза установлено, что от первой беременности родилась половина детей - 76 (50,67%), от второй — 32 (21,33%), от третьей - 21 (14%), от четвертой - 13 (8,66%), от последующих беременностей - 8 (5,34%) детей.

В большинстве случаев наблюдалась тенденция к увеличению патологического течения беременности (86% по сравнению с 74,6% в группе контроля, %2=3,75, р=0,0528). Так, в половине (52%) случаев у будущих матерей наблюдался ранний гестоз. Частота возникновения позднего гестоза была выше в группе женщин, впоследствии ставших матерями детей, больных Б А (41,33% по сравнению с 23,81% в группе контроля, %=5,15, р=0,0232). Следует отметить, что у беременных женщин наличие позднего гестоза положительно коррелировало с возникновением впоследствии у их детей атопического дерматита (Rs=0,213, р=0,010). Установлено, что во время беременности треть (32%) женщин перенесла острое респираторное заболевание и угрозу прерывания беременности (36% по сравнению с 20,63% в группе контроля, X =3,87, р=0,0491). У каждой 4-5-ой (23,33%) женщины выявлялась хроническая внутриутробная гипоксия плода, у каждой пятой - многоводие (19,33% по сравнению с 6,35% в группе контроля, %2=4,27, р=0,0387), у каждой восьмой (12%) - хроническая фетоплацентарная недостаточность, в единичных случаях (2,67%) - маловодне. При наличии в анамнезе у беременной женщины многоводия наибольшее значение среди триггеров БА у ребенка приобретала острая респираторная вирусная инфекция (Rs=0,170, р=0,041).

Наиболее частой причиной, осложнявшей течение родов, явилось преждевременное излитие околоплодных вод (17,33%), реже — обвитие пуповины вокруг шеи плода (7,33%). Каждые десятые (11,56%) роды были стремительными, с такой же частотой встречалась слабость родовых сил. У 10,67% женщин родоразрешение произошло путем кесарева сечения.

В преобладающем большинстве (80%) случаев дети были рождены от срочных родов, каждый десятый ребенок - от преждевременных (10,67%) или запоздалых (9,33%).

При рождении оценка по шкале Апгар 7-10 баллов отмечалась у 68% обследованных детей, 4-6 баллов - у 29,33%, 1-3 балла - у 2,67%. Нами показано, что оценка 4-6 баллов встречалась чаще в группе детей, больных БА (29,33% по сравнению с 19,05% в группе контроля, % =6,1785, р=0,0455).

При рождении масса тела ниже 2500 г имелась у 12 (8%) детей, в пределах 2500-4000 г - у 118 (78,67%), свыше 4000 г - у 20 (13,33%). Средний рост детей при рождении составил 52,78+0,34 см. Чуть более половины (54%) детей прикладывалось к груди по истечении первых суток, 40,67% - после первых суток, 5,33% детей не были приложены к груди вообще. В подавляющем большинстве случаев (82,67%) блюда прикорма вводились до 6 месяцев. Корреляционный анализ позволил установить, что введение прикорма до шестимесячного возраста способствовало развитию у ребенка более тяжелого течения заболевания (Rs=-0,176, р=0,033).

По данным анамнеза каждому пятому (19,59%) ребенку в роддоме назначались антибиотики, треть детей получала сосудистые препараты (30,41%) и витамины (34,46%), каждый пятнадцатый ребенок -противосудорожные средства (6,76%) и пробиотики (6,08%).

Анализ структуры заболеваемости детей сразу после рождения позволил выявить, что у большинства (72,79%) наблюдалось перинатальное повреждение центральной нервной системы, у каждого седьмого (13,61%) - внутриутробное инфицирование, причем в 8,16% случаев оно реализовывалось в виде внутриутробной пневмонии. У каждого десятого (9,52%) ребенка диагностировался синдром дыхательных расстройств.

Характеризуя физическое развитие детей в раннем возрасте, можно отметить, что в большинстве (76,67%) случаев оно соответствовало возрастным нормативам. Установлено, что низкие прибавки массы тела на первом году жизни ассоциировались с более тяжелым течением заболевания (Rs=-0,166, р=0,045).

Профилактическая вакцинация в полном объеме проведена лишь у половины (59,33%) детей, у остальных - по индивидуальному календарю в связи с медицинскими отводами.

Следует отметить, что более половины (59,33%) детей проживало вблизи автомобильных дорог, каждый 4-5-ый (23,33%) — недалеко от промышленной зоны. Нами показано, что значительная часть детей, больных БА, проживало в неудовлетворительных жилищных условиях (54% в сравнении с 34,92% в контрольной группе, х2=5,8182, р=0,0159).

Изучение микросателлитного полиморфизма (ССТТТ)п гена индуцибельной синтазы оксида азота NOS2A у детей, находившихся под наблюдением

Согласно данным, представленным в таблице 6, в общей выборке детей, больных БА, аллель NOS ll встречался у каждого восьмого (17,67%) ребенка, однако в группе детей с тяжелым течением заболевания он обнаружен не был.

Помимо этого нами установлено, что у больных с легким течением БА частота аллеля NOS2A 13 почти вдвое превышала таковую среди больных со среднетяжелым течением заболевания (18,83% в сравнении с 10,16%, %2=4,15, р=0,0416). Также была обнаружена тенденция к увеличению частоты встречаемости аллеля NOS2A ll у больных с БА средней степени тяжести в сравнении с больными с легким течением заболевания (24,22% в сравнении с 14,28%, х2=4,52, р=0,0335).

С помощью корреляционного анализа нами установлена ассоциация между уровнем общего IgE в сыворотке крови и аллелем NOS2A 12 (Rs=0,176, р=0,036), который также был ассоциирован с наличием у детей, больных Б А, аллергического ринита (Rs=0,210, р=0,010).

Анализ распределения частот генотипов микросателлита (ССТТТ)п гена NOS2A у детей, больных Б А и детей группы контроля (прил. 1) показал, что среди генотипов, встречающихся в общей выборке детей, больных БА, у 10 и более человек, в группе детей с тяжелым течением отсутствовали генотипы NOS 10/ 12, NOS ll/ 12 и NOS 12/ 13. В контрольной труппе детей превалировали носители генотипов NOS ll/ 13 и NOS 12/ 13.

Характеризуя данные, представленные в приложении 1, следует отметить, что статистически значимых различий по распределению частот генотипов микросателлитного полиморфизма гена NOS2A между общей выборкой больных детей и детей группы контроля получено не было.

Анализ распределения частот генотипов изучаемого гена в зависимости от тяжести Б А установил, что в группе больных с легким течением заболевания частота встречаемости генотипа NOS2A 12/ 13 была статистически значимо выше, чем в группе больных с Б А средней степени тяжести (19,48% по сравнению с 4,69%, х=5,60, р=0,0179). Наряду с этим, у больных БА установлена обратная корреляционная зависимость генотипа NOS2A 12/ 13 со степенью тяжести заболевания и (Rs=-0,238, р=0,003) и прямая - с уровнем общего сывороточного IgE (Rs=0,206, р=0,014).

Изучение частоты встречаемости генотипа NOS2A 12/ 12 у детей с легким и тяжелым течением БА показало, что данный генотип относительно чаще выявлялся в группе детей с БА тяжелой степени (33,33% в сравнении с 6,49%, %2=4,07, р=0,0437). Данную тенденцию стоит рассматривать с учетом малого объема выборки в группе с тяжелым течением заболевания. Интересно отметить наличие ассоциации генотипа NOS2A 12/ 12 с симптомами аллергического ринита (Rs=0,192, р=0,019).

Несмотря на то, что в общей выборке детей, больных БА, было всего 5 носителей генотипа NOS2A 11/ 11, нами обнаружена его ассоциация с ранним дебютом БА (Rs=-0,207, р=0,011).

Таким образом, наличие у детей различных полиморфных вариантов STR-полиморфизма гена NOS2A не только вносит вклад в общую подверженность к заболеванию, но и оказывает влияние на фенотипические проявления болезни. Так, нами обнаружена ассоциация аллеля NOS2A 12 и генотипа NOS2A 12/ 13 с гиперпродукцией общего IgE в сыворотке крови. Наличие аллергического ринита у детей, больных БА, ассоциировано с аллелем NOS2A 12 и генотипом NOS2A 12/ 12. Установлена обратная связь между степенью тяжести БА и генотипом NOS2A 12/ 13. Более ранний возраст начала заболевания, вероятно, взаимосвязан с наличием генотипа NOS2A 11/ 11. 4.2. Изучение динуклеотидного полиморфизма (СА)„ гена интерферона-у INFG у детей, находившихся под наблюдением

Нами проведено изучение динуклеотидного полиморфизма (СА)п гена INFG у детей, больных БА, и детей контрольной группы. В результате проведенного исследования идентифицировано 6 аллелей с количеством повторов от 11 до- 16. Распределение частот аллельных вариантов динуклеотидного полиморфизма (СА)п гена INFG представлена на рисунке 4. БА Группа контроля INFG 16 INFG45 INFG 14 INFG 13 INFG 12 INFG r Рис. 4. Распределение частот аллельных вариантов динуклеотидного полиморфизма (СА)„ гена INFG в общей выборке детей, больных БА, и детей группы контроля.

Характеристика распределения частот аллелей полиморфного локуса (СА)„ гена INFG показала, что в обеих группах наблюдения с наибольшей частотой встречались аллели INFG 12 и INFG I3. Так, половина (49,34%) детей, больных БА, и 43,65% детей группы контроля являлись носителями аллеля INFG I2. В группе больных детей частота встречаемости аллеля INFG 13 составила 39,00%, в группе контроля - 40,48%. Статистически значимых различий по частоте встречаемости аллельных вариантов полиморфного локуса (СА)„ гена INFG между общей выборкой детей, больных БА, и детей контрольной группы не обнаружено.

Данные распределении частот аллельных вариантов полиморфного локуса (СА)„ гена INFG у детей группы контроля и детей, больных БА в зависимости от тяжести заболевания, представлены в таблице 7.