Содержание к диссертации
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 6
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1.Цитокины - регуляторы иммунной системы 11
1.1.1 .Интерлейкин-1 16
1.1.2.Фактор некроза опухолей 21
1.1.3.Методы определения интерлейкина-1 фактора некроза
опухолей 26
1.1.4.Интерферон. Сопутствующая цитокиновая активность
препаратов интерферона 30
1.2. Цитокины при патологии и развитии поствакцинального
иммунитета 35
1.2.1.Цитокины при инфекциях 37
1.2.2.Цитокины и аутоиммунный процесс 42
1.2.3.Цитокины при вакцинальном процессе 49
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 55
ГЛАВА III. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1. Изучение уровня цитокинов и аутоантител при вирусных гепатитах. 3.1.1 .Уровень цитокинов в сыворотке крови здоровых лиц и
больных вирусными гепатитами типа А и В 66
3.1.2.Динамика уровня цитокинов у больных гепатитом В,
леченных препаратами интерферона 71
3.1.3.Изучение уровня аутоантител у здоровых лиц и больных
вирусными гепатитами 75
3.1.4.Изучение соотношения уровня цитокинов, аутоантител
с клинико-лабораторными показателями у здоровых лиц
и больных гепатитом В 80
3.2. Изучение уровня цитокинов и аутоантител при вакци
нации.
3.2.1 .Изучение уровня цитокинов в сыворотке крови привитых
вакциной против вирусного гепатита А 86
3.2.2.Изучение уровня цитокинов в сыворотках крови привитых
вакцинами против вирусного гепатита В 88
3.2.3.Уровень интерлейкина-ір в сыворотках крови привитых
вакциной против возбудителей гнойных инфекций 91
3.2.4.Исследование формирования специфических антител у
привитых лиц в зависимости от исходного уровня цитоки
нов 94
3.2.5.Изучение уровня аутоантител у привитых вакцинами
против вирусных гепатитов А и В 101
3.2.6.Изучение уровня аутоантител у привитых вакциной
против возбудителей гнойных инфекций ЮЗ
3.2.7.Изучение соотношения уровней аутоантител и цитокинов
у привитых лиц 108
Изучение содержания цитокинов в препаратах интерферона 111
Разработка стандартного образца рекомбинантного ин-терлейкина-ір человека
ГЛАВА IY. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 136
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВГВдж
ВИЧ ВОЗ Геп-А-ин-Вак
ГКСФ ГМКСФ
ГКГ ГЗТ
ДДНК нДНК
ИЛ-1(-) ИЛ-1(+)
ИРЛ ИФ
аутоантиген
аутоантитело
антиген
антитело
бацилла Кальметта-Герена
рекомбинантная вакцина против вирусного гепатита В дрожжевая жидкая
вирус иммунодефицита человека
всемирная организация здравоохранения
инактивированная вакцина против вирусного гепатита А
гранулоцитарный колониестимулирующий фактор
- гранулоцитарно-макрофагальный колониестиму
лирующий фактор
главный комплекс гистосовместимости
гиперчувствительность замедленного типа
дезоксирибонуклеиновая кислота
денатурированная ДНК
нативная ДНК
естественные киллерные клетки
иммунокомпетентные клетки
интерлейкин
ИЛ-1-негативные
ИЛ-1-позитивные
интерфероновая реакция лейкоцитов
интерферон
Кон А
ЛАК-клетки
МКСФ
ОВГА
ОВГ В ОРВИ ИГЕ Реваке В
СПСА-вакцина
ФНО-(-) ФНО-(+)
иммуноферментный анализ
конканавалин А
колониестимулирующий фактор
лимфокинактивированные киллерные клетки
фактор торможения миграции лейкоцитов
липополисахарид
лимфотоксин
фактор торможения миграции макрофагов
макрофагальный колониестимулирующий фактор
острый вирусный гепатит
острый вирусный гепатит типа А
острый вирусный гепатит типа В
острая респираторная вирусная инфекция
простогландин Е
рекомбинантная экспериментальная вакцина про-
тив вирусного гепатита В
радиоиммуноферментный анализ
рибонуклеиновая кислота
трансформирующий фактор роста
системная красная волчанка
стандартный образец
стафилопротейносинегнойная вакцина
фактор активирующий фагоцитоз
фитогемагглютинин
форболмиристатацетат
фактор некроза опухолей
ФНО-негативные
ФНО-позитивные
CDC - Центр по контролю заболеваемости, г. Атланта,
HAV - вирус гепатита А
HBV - вирус гепатита В
HBsAg - поверхностный антиген вируса гепатита В
HCV - вирус гепатита С
HDV - вирус гепатита D
HEV _ вирус гепатита Е
HFV _ вирус гепатита F
HGV _ вирус гепатита G
Ь" - индекс иммуноферментной реакции
1Г(~) - 1г-негативные
"(+) - 1г-позитивные
L-ИФ _ лейкинферон
1 h - Т-хелперы
1 - Т-хелперы класса О
ТЫ т і
1111 - Т-хелперы класса 1
- Т-хелперы класса 2
az-ИФ _ рекомбинантный ИФ-a человека (реаферон)
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ
Одной из главных проблем современной иммунологии является проблема участия цитокинов в формировании иммунитета. Цитокины принимают участие в процессах пролиферации и дифференцировки клеток иммунной системы, представлении антигена, антителогенезе и реакциях клеточного иммунитета. (Медуницын Н.В. с соавт.,1989; Кетлинский С.А. с соавт., 1992; Ярилин А.А., 1997; Gilis S., Watson В., 1980). Благодаря интенсивным исследованиям последних лет стало очевидно, что цитокины являются не только регуляторами иммунных реакций, но и ключевыми факторами во взаимодействии иммунной, нервной, эндокринной и других систем организма (Михайлова А.А. с соавт., 1987, 1992; Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В., 1989; Powanda М., 1985). Уже на начальном этапе развития иммунного ответа активация клеток иммунной системы происходит с помощью цитокинов, в частности интерлейкина-1 (ИЛ-1) и фактора некроза опухолей-а (ФНО-а) (Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1995; DinarelloC, 1988).
Уровни цитокинов изменяются в процессе развития иммунного ответа. Известно, что при ряде патологий, в том числе при инфекционных заболеваниях, концентрация цитокинов в биологических жидкостях организма может повышаться. Относительно содержания цитокинов у больных вирусными гепатитами данные литературы противоречивы (Muller С. et al, 1989; Ozeki Т. et al, 1990; Torre D. et al, 1994). В связи с этим, представляется существенным изучение уровня цитокинов в сыворотке крови больных разными типами вирусных гепатитов.
Вакцинация, также как и инфекции, может привести к повышению концентрации циркулирующих цитокинов (Zhan Y. et al, 1993; Castes M. et al, 1994). Важное значение имеет исходный уровень цитокинов до развития
7 иммунного ответа при вакцинации или инфекционном процессе. Состояние
цитокинового статуса при формировании поствакцинального иммунитета
практически не изучено.
При инфекционных заболеваниях и вакцинации может наблюдаться активация аутоиммунных процессов, формирование антител, специфичных к антигенным компонентам собственных органов и тканей (Медуницын Н.В., 1995; Kaufinann S., Rolinghol М., 1989). Запуск и регуляция аутоиммунных процессов опосредуется цитокинами, в том числе ИЛ-lp и ФНО-а. Известно, что у больных с аутоиммунными заболеваниями уровень цитокинов может повышаться (Симбирцев А.С., 1993; Russel R., 1990; Sany Y., 1990). Взаимосвязь между уровнем ИЛ-ір, ФНО-а и аутоантител не изучена.
Некоторые из цитокинов, в частности интерфероны (ИФ), нашли применение в терапии ряда вирусных и бактериальных инфекций. В медицинских препаратах природного ИФ-а наряду с интерфероном присутствуют и другие биологически активные цитокины, которые могут оказывать влияние на свойства готового продукта (Медуницын Н.В. с соавт.,1987). В связи с этим, актуальны исследования примесей сопутствующих цитокинов в медицинских препаратах ИФ, количественное содержание которых изучено еще недостаточно.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Изучение содержания ИЛ-1(3, ФНО-а и аутоантител у больных острыми вирусными гепатитами и у лиц, привитых вирусными и бактериальными вакцинами.
ЗАДА ЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.
1. Изучить динамику уровня ИЛ-lp и ФНО-а в сыворотке крови больных острыми вирусными гепатитами типа А и типа В (ОВГ А и ОВГ В).
2. Исследовать содержание ИЛ-ір и ФНО-а в сыворотках крови
людей, привитых вирусными и бактериальными вакцинами (вакцины против вирусных гепатитов А и В и гнойных инфекций).
Исследовать уровень аутоантител (ААТ) к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови инфицированных и привитых лиц, изучить соотношение их уровня с содержанием ИЛ-ір и ФНО-а.
Оценить влияние исходного уровня ИЛ-ір и ФНО-а на формирование специфических антител (AT) у привитых лиц.
Исследовать содержание ИЛ-1р и ФНО-а в медицинских препаратах ИФ.
6. Разработать стандартный образец активности ИЛ-1Р человека.
НА УЧНАЯ НОВИЗНА.
Впервые исследована зависимость между содержанием цитокинов (ИЛ-ір, ФНО-а) и уровнем ААТ к ДНК у вакцинированных и больных ОВГ В. Показана прямая зависимость между концентрацией цитокинов у больных ОВГ В и здоровых людей и содержанием ААТ к ДНК у этих лиц. У больных ОВГ В с высоким уровнем ФНО-а отмечено высокое содержание ААТ к ДНК, а также более тяжелые формы заболевания. Показано, что повышенная концентрация ИЛ-ір у вакцинированных лиц коррелирует с высоким содержанием ААТ к нативной и денатурированной ДНК.
Впервые исследовано влияние исходного уровня ИЛ-ір и ФНО-а на формирование специфических AT у привитых лиц. У добровольцев, в сыворотке крови которых до вакцинации указанные цитокины не были выявлены, уровень специфических AT выше, чем у лиц, в крови которых эти цитокины определялись до вакцинации.
Впервые отмечено, что в природных препаратах ИФ-а содержание ИЛ-ір и ФНО-а варьирует как в различных сериях одного производства, так и в препаратах, изготовленных на разных предприятиях.
9 ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНА ЧИМОСТЬ.
При исследовании цитокинов у здоровых лиц установлено, что ИЛ-
1р выявляется в 56% случаев в концентрации от 20 до 150 пг/мл, ФНО-а -
в 46% случаев в пределах от 20 до 75 пг/мл (чувствительность тест-систем
для ИФА от 20 пг/мл). Высокая концентрация ФНО-а в сыворотке крови
больных ОВГ В отмечена при более тяжелых формах заболевания. Показана
взаимосвязь высокого уровня ФНО-а с наличием ААТ у больных ОВГ В.
Определение цитокинов в сыворотке крови человека, в частности ФНО-а,
может быть использовано в качестве дополнительного прогностического
критерия степени тяжести течения вирусных гепатитов.
Установлено, что концентрация ИЛ-1)3 и ФНО-а повышается при вакцинации против вирусных гепатитов А и В, а также против инфекций, вызываемых стафилококком, протеем и синегнойной палочкой. У цитокин-негативных волонтеров уровень специфического иммунного ответа выше, чем у цитокин-позитивных лиц.
Выявленные значительные колебания концентрации ИЛ-1Р и ФНО-а в
инъекционных препаратах ИФ указывают на целесообразность
стандартизации по содержанию сопутствующих цитокинов.
Создан отраслевой стандартный образец активности рекомбинантного ИЛ-ір человека для тестов in vitro при определении ИЛ-ір в биологических жидкостях организма и цитокинсодержащих препаратах.
ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.
1. В сыворотке крови здоровых лиц с помощью тест-систем с чувствительностью до 20 пг/мл выявлены цитокины - ИЛ-ір (у 56% лиц) и ФНО-а (у 46% лиц). Уровень ИЛ-1р и ФНО-а возрастает при инфекции и вакцинации. Включение лейкинферона в базисную терапию больных ОВГ В приводит к достоверному снижению в сыворотке крови пациентов содержания ИЛ-1р и ФНО-а.
2. У инфицированных и вакцинированных лиц с высокими
концентрациями в сыворотке крови ИЛ-1В и ФНО-а обнаружен высокий уровень ААТ к нативной и денатурированной ДНК. Повышенное содержание ФНО-а и ААТ в сыворотке больных ОВГ В является неблагоприятным признаком течения ОВГ В.
У добровольцев, в сыворотке крови которых до вакцинации цитокины (ИЛ-ір и ФНО-а) не были выявлены, уровень специфических AT выше, чем у цитокин-позитивных лиц.
Медицинские препараты на основе природного ИФ-а содержат ИЛ-lp и ФНО-а. Установлен разброс в содержании указанных цитокинов в разных сериях ИФ одного производства и препаратах, изготовленных на разных предприятиях.
![Влияние бестима и беталейкина на эффективность вакцинации против вирусного гепатита В [Электронный ресурс]](/i/i/4277/184615.png "Влияние бестима и беталейкина на эффективность вакцинации против вирусного гепатита В [Электронный ресурс] Абрамова Наталья Николаевна")