Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 8
Глава II. Материал и методы исследований 38
2.1. Методы отбора и обработки проб 38
2.2. Методы общей диагностики болезней форели 46
2.3. Методы изучения вирулентности микроорганизмов 47
Глава III. Результаты исследований 49
3.1. Эпизоотическое состояние форелевых хозяйств Балтийского региона 49
3.2. Микробиоценоз воды и рыбы и влияние на него различных факторов 57
3.3. Характеристика основных бактериальных болезней форели 63
3.4. Факторы патогенности выделенной микрофлоры 74
3.5. Факторы, определяющие бактериальную контаминацию паренхиматозных органов форели 79
3.6. Профилактика и борьба с бактериозами форели в аквакультуре 81
Глава IV. Обсуждение результатов 94
Выводы 99
Список литературы 101
Приложение 126
- Эпизоотическое состояние форелевых хозяйств Балтийского региона
- Характеристика основных бактериальных болезней форели
- Факторы патогенности выделенной микрофлоры
- Профилактика и борьба с бактериозами форели в аквакультуре
Эпизоотическое состояние форелевых хозяйств Балтийского региона
С развитием садковых форелевых хозяйств в прибрежной морской зоне Балтийского региона связано получение больших объемов товарной рыбы. Использование интенсивных форм выращивания рыбы в садках позволяет перевести рыбоводство на промышленную основу. В результате интенсификации производства значительный ущерб садковым хозяйствам наносят заболевания рыб бактериальной этиологии.
Анализ санитарно-эпизоотического состояния садковых форелевых хозяйств в Ленинградской области показал, что заболевания бактериальной этиологии рыб получили большое распространение. Это связано с высокими плотностями посадки рыб, ухудшением гидрохимического режима за счет продуктов метаболизма и привнесенной с кормом дополнительной бактериальной флорой, высокой приспособляемостью бактерий к агрессивным условиям среды и перехода их из условно патогенных в разряд патогенных для рыб.
Садковые форелевые участки "Прибылово" и "Кирпа" р/к "Им. Ленина" всегда являлись потенциально неблагополучными по вибриозу. Возбудитель данного заболевания бактерия Vibrio anguillarum всегда был наиболее распространенным представителем бактериальной флоры в морской солоноватой воде. В отдельные годы отход форели при высоких плотностях посадки в садках доходил до 60% (таблица 5).
Только в 1988 году на участке "Прибылово" отмечался отход двухлеток форели в количестве 101 тыс.шт, средней массой 27г и отход трехлеток форели в количестве 73 тыс.шт, средней массой 200г. Облветлабораторией Выборгского района Ленинградской области был выделен возбудитель Vibrio parahaemolyticus (тип II), вызывающий пищевые токсикоинфекции у людей и инфекционное заболевание (вибриоз) форели. Вся больная рыба тогда была уничтожена и в дальнейшем при повторной экспертизе возбудитель не обнаруживался.
В садковых форелевых хозяйствах Эстонии на морской воде наибольшее распространение также получило заболевание форели вибриозом и в 1988г. ряд форелевых хозяйств понесли потери от 12% четырехлеток СФХ Киргесааре (р/к Хийу-Калур), до 70% (сеголеток, трехлеток, четырехлеток) в бассейновом хозяйстве на морской воде Периспеа (р/к "Им. Кирова"). С 1982г. Таллиннское отделение БалтНИИРХа проводило работы по получению вакцины против вибриоза. Производственные испытания экспериментальной вакцины против вибриоза были проведены с 1985 по 1989 в ряде неблагополучных хозяйств Эстонии, а в 1990г. - в "Прибылово" р/к "Им. Ленина".
Традиционно для лечения вибриоза в морских хозяйствах Эстонии использовали добавление в корм фуразолидона (курс лечения 5 дней, 80-90 мг/кг рыбы), фуртина (курс лечения 5 дней, 160-180 мг/кг рыбы) и окситетрациклина (курс лечения 10 дней, 70 мг/кг рыбы). Применяемые медикаментозные средства оказались малоэффективными и при дальнейшем выращивании в некоторых хозяйствах отмечали вновь повышенный отход форели с похожими клиническим признаками. В лаборатории ихтиопатологии ВНИИПРХ выделенные культуры были идентифицированы как A. hydrophila.
На всех форелевых участках рыбколхоза "Банга" в летний период (конец июля - август) регистрировали аэромоноз. Республиканская ветлаборотория Латвии так же выделила от рыб возбудитель A. hydrophila. Биопроба была положительна и показала этиологическую роль аэромонад в развитии патологических процессов у форели. Для лечения аэромоноза форели использовали корм с добавлением антибактериальных препаратов - сульфадимезина, фуразолидона, хлортетрациклина, левомицетина и витаминов наряду с улучшением биотехники выращивания.
Благодаря принятым мерам, отход от аэромоноза был незначительным и составил на участке Калтене 12%, а на участке Силкрасты и в морских садках сверхнормативного отхода удалось не допустить.
Таким образом, наряду с V.anguillaram при дальнейшим росте загрязнения окружающей среды в период интенсивной эксплуатации садков на морской воде все чаще отмечалось появление бактерий рода Aeromonas. При высокой органической нагрузке водной среды на фоне сниженной резистентности организма выращиваемой рыбы аэромонады так же проявляют патогенные свойства в морской воде. Выделенные культуры аэромонад обладали различной степенью ДНК-азной активности (зона деполимеризации от 1 до 10 мм), что свидетельствовало о различной степени вирулентности выделенных культур.
На форелевых садковых участках "Прибылово" и "Кирпа" в летний период выращивания отмечали два пика заболевания. Поскольку клиническая картина болезни у рыб была одинаковой в период заболевания в первом и во втором случае, то постоянно считали, что этиологическим агентом заболевания являлся V. anguillarum. Однако, ежемесячные контрольные бактериологические исследования воды и рыбы позволили четко дифференцировать заболевания в хозяйствах, правильно идентифицировать возбудителей и изучить их биологические свойства.
Появляясь параллельно с вибрионами или в чуть сдвинутые сроки, аэромонады затрудняли диагностику и резко снижали эффективность специфической профилактики.
Используемые на хозяйствах антибактериальные препараты не всегда давали положительный эффект, приводили к активизации нечувствительной к ним микрофлоры (коринебактерий, флавобактерий, псевдомонад). Применение этих препаратов способствовало снижению иммунологических показателей у рыб, сенсибилизации организма и дополнительному загрязнению окружающей среды. Поэтому использование антивибриозной вакцины против вибриоза способствовало профилактике этого заболевания. Однако, появление в воде и рыбе аэромонад снижало эффективность этой вакцинации.
В связи с этим, для правильной оценки эпизоотической ситуации в хозяйствах был осуществлен бактериологический контроль за водной средой и рыбой и идентификация возбудителей болезней.
При возникновении инфекционных болезней в садковых хозяйствах погибшая и погибающая рыба становится постоянным источником заражения здоровой рыбы и дополнительным источником органического загрязнения. Основными органическими веществами в воде, наряду с погибшей рыбой, становятся также экскременты рыб и не съеденный корм с дополнительной микрофлорой. Накопление органических веществ в водной среде в местах расположения садков вызывает рост численности отдельных групп бактерий, причем происходит не только их накопление, но и изменение видового состава. При достижении «пороговой» концентрации бактерий в воде начинается увеличение их количества (в том числе и условно - патогенных) в органах и тканях рыб. Для рыбоводных прудов «пороговая» концентрация составляет 104 КОЕ/мл (Каховский, Михайловская, 1990), в садковых форелевых хозяйствах «пороговая» концентрация ниже 10J КОЕ/мл, а при ассоциации бактерий концентрация еще уменьшается, т.к. совместное воздействие микробных ассоциаций на органы и ткани рыбы усиливает развитие патологических изменений в них.
Экологическое неблагополучие водной среды приводит к резкому снижению резистентности организма рыб, ослаблению защитных барьеров, в результате чего условно - патогенные, а иногда и авирулентные, бактерии, обладающие мощным набором ферментов агрессии, до поры до времени не проявлявшие себя, начинают проникать внутрь организма рыбы и вызывают развитие септического процесса. Кроме того, бактериальному заражению предшествует состояние стресса (Ведемейер и др., 1981; Peters, Hong, 1985; Головин, 1984, 1987).
На садковом форелевом участке «Прибылово» неблагополучном по вибриозу форели, было показано влияние стресса на развитие болезни. Такими стресс - факторами стали плотность посадок рыб в садках и температура воды.
Годовиков и двухгодовиков форели выращивали в садках с различными плотностями посадки: 150, 180, 210 и 230 кг на садок объемом 3x4x1,5 м3 со средней навеской 36,9г. При повышении температуры воды до 18С и выше наблюдали значительный отход форели от вибриоза, причем наибольшая гибель отмечалась в июне в садках с плотностью посадки 210 и 230 кг/садок (соответственно 29,6 28,7%). В садках, содержавших 150кг и 180кг рыбы, соответственно 9,96% и 12,8%, то есть смертность нарастала по мере усиления стрессового фактора.
В течение всего летнего выращивания форели в садках проводили контрольные бактериологические исследования воды и рыбы. От рыбы делали посевы из печени, почек, селезенки, экссудата, иногда и с поверхности тела. Посевы делали на чашки с сердечно - мозговым инфузионным агаром (Дифко), средой Риппея - Кабелли и средой Эндо. Первичное выделение и идентификацию культур проводили по общепринятой методике.
Проведение бактериологического исследования позволило не только выявить основные группы микроорганизмов, участвующих в развитии патологических процессов у рыб, но и проследить их нарастание и изменение в динамике, а также выявить факторы, способствующие их сохранению и развитию.
Изучение сезонной динамики микробиоценоза воды и рыбы показало доминирование в июне вибрионов, которые вызвали вибриоз у годовиков и двухгодовиков радужной форели. Для подавления возбудителя провели курс кормления рыбы с окситетрациклином. Гибель радужной форели временно прекратилась.
Характеристика основных бактериальных болезней форели
Особую опасность при выращивании форели в садках представляет бактериальная геморрагическая септицемия, возбудителями которой являются грамотрицательные бактерии - вибрионы (в морской воде), аэромонады, энтеробактерии, псевдомонады и другие микроорганизмы (Щелкунов и др., 1998).
Вибриоз - бактериальное заболевание морских и эстуарных рыб, наносящее значительный экономический ущерб. Болезнь часто наблюдается у радужной форели, выращиваемой в садках на морской воде. Заражение рыбы в садковых условиях происходит при попадании в их организм большого количества вибрионов, постоянно находящихся в морской воде и размножающихся при повышении температуры воды и ее органическом загрязнении (Lee et al., 1993). Инфекция передается через морскую воду и при непосредственном контакте рыб. Возбудитель выделяется в окружающую среду (садок) от больных рыб вместе с выделениями из кишечника, почек, пораженных участков мышц, что приводит к распространению инфекции. При повышении температуры воды выше 17С через 5-12 дней первыми заболевают рыбы в садках со слабым посадочным материалом и некачественным кормлением.
Патогенность вибрионов зависит от активности ферментов микробной клетки, которая возрастает с повышением температуры воды. Обладая протеолитическими, гемолитическими энзимами, токсическими свойствами, микробные клетки проникают в организм рыбы через жабры, пищеварительный тракт, кожные покровы и быстро размножаются (особенно у ослабленных рыб), проникая в кровь, а с ее током и во внутренние органы. Возбудитель вибриоза у радужной форели вызывает генерализованный сепсис и активно выделяется из крови и внутренних органов (селезенки, печени и почек), что также подтверждает патогенность этого вида бактерий для рыб.
В хозяйствах различных стран, занимающихся выращиванием лососевых в солоноватых водах морских заливов, преимущественно в прибрежных садках и бассейнах при высоких плотностях посадки и нарушениях режима выращивания наблюдается вибриозная инфекция. При этом потери среди ослабленных годовиков, сеголетков наблюдаются чаще в течение первого месяца от начала заболевания (20-35%). Отход среди двухлетков меньше, а среди Зх-леток, выращиваемых в глубоких садках, расположенных на расстоянии 2-3 км от берега - 9-16%. Отход форели в глубоких садках проходит менее интенсивно и продолжается более длительные сроки (Schaperclaus, 1954; Holt, 1970).
У сеголетков и двухлеток форели вибриоз протекает в острой септической форме. У рыб более старших возрастов наблюдается хроническая форма течения инфекции.
Острая форма вибриоза радужной форели протекает быстро, в течение 3-5 суток, часто без клинических признаков, но со значительным отходом двухлеток и годовиков (20-45%, редко до 80%). У отдельных экземпляров больных рыб отмечаются геморрагии, покраснения кожных покровов в области спинного плавника, анального отверстия и в других местах вентральной части тела. У части рыб видимые признаки патологии обнаруживаются лишь при вскрытии, а при язвенно - фурункулезной форме, которая встречается у 7-10% погибших рыб, можно предположить подострое или затянувшееся течение инфекции.
Хроническая форма имеет свои особенности и наблюдается чаще у рыб, которым проводилось медикаментозное лечение, а также среди двухлеток и трехлеток, более устойчивых к бактериальной инфекции по сравнению с годовиками. При хроническом течение вибриоза характерным признаком является наличие интрамускулярных абсцессов и язв, последние заживают постепенно в течение 3-4 месяцев, мышечная ткань краев заживающих язв приподнята, заметна их эпителизация. В отличие от острого течения, при бактериологических посевах возбудитель редко высевается из крови, но выделяется из внутренних органов (печени, селезенки, почек).
Патологическая картина при остром течение характерна для бактериальной инфекции, протекающей с явлениями сепсиса: выраженная гиперемия и увеличение размеров селезенки и почек, точечные геморрагии в ткани печени, гиперемия брыжжейки и стенки кишечника, накопление асцитной жидкости в брюшной полости у рыб. Отмечается бледность мышечной ткани при ее разрезе и анемичность жабр.
При бактериологическом исследованиях от больных рыб выделялись бактерии V. anguillarum, V. parahaemolyticus, V. fischeri (ранее описываемый как V. sp.).
Влияние температуры и солености воды на заболеваемость. По данным А.В. Луллу с соавторами (1982) в морских садковых форелевых хозяйствах при температуре воды ниже 16С вспышек вибриоза в течение 6 лет не было, что согласуется с нашими данными (Бычкова и др., 1995) в холодное лето заболеваемость вибриозом у форели не наблюдали.
Первые сообщения о болезни радужной форели обычно поступали в конце второй недели или декады июня, когда температура морской воды превышала 17С. Максимальные отходы рыбы регистрировали в июле и в начале августа (без лечения), когда в течение 14-20 дней вода нагревалась свыше 19 С. Со второй половины августа отмечалось заметное снижение заболеваемости, но отход единичных особей продолжался до середины сентября.
Соленость воды в бухте, где отмечалась частая заболеваемость, колебалась от 3,5 до 6%о. В сильно опресненных участках эпизоотии вибриоза в садках среди годовиков встречались реже.
Картина крови при вибриозе подтверждает наличие острого заболевания и по сравнению с таковой у контрольной группы, имеет свою динамику (табл.10). Вибриоз у радужной форели протекал по типу септической инфекции с проникновением возбудителя в кровь и внутренние органы. По данным В.А. Луллу с соавторами (1982) и СВ. Muhn (1980) в крови снижается количество гемоглобина и число эритроцитов (с 1,1 млн/мм в норме до 0,77 у больной вибриозом форели). В лейкоцитарной формуле при вибриозе у форели значительно возрастает число гранулоцитов (в 5-9 раз по сравнению со здоровыми особями), так и моноцитов с последующим снижением общего числа лейкоцитов. Наиболее характерным является выраженный моноцитоз (6-9 кратное увеличение) по сравнению с данными от контрольных здоровых особей. При определении лейкоцитарной формулы были использованы методика и рекомендации Н.Т. Ивановой (1976).
Вся рыба опытного участка была тщательно исследована.
Клинические признаки заболевания наблюдались примерно у 50% особей и представлены изъязвлениями на спине, повреждениями спинного плавника (до полного его отсутствия), припухлостями в области хвостового стебля и за головой, заполненными некротизированной мышечной ткань, геморрагиями на боковых поверхностях, кровоизлияниями в радужной оболочке глаза. При микроскопическом исследовании у всех рыб в хрусталике глаза обнаружены возбудители диплостомоза от 5 до 24 штук на рыбу.
Патолого-анатомически у некоторых особей - кровянистый экссудат в брюшной полости. Печень, почки, селезенка в значительной степени изменены: печень - глинистого, песочного цвета, мраморная с точечными геморрагиями почки - рыхлые, кровенаполненные, мажущей консистенции; селезенка -темная, кровенаполненная, в ряде случаев расползающаяся. Кишечник в основном пустой, в кишечнике - желтая слизь, у нескольких особей с небольшим количеством корма, у отдельных особей кишечник воспален с кровянистым содержимым.
Обращает на себя внимание значительный разброс массы тела (от 29 до 150г).
Факторы патогенности выделенной микрофлоры
Одновременно с идентификацией микроорганизмов изучали их факторы патогенности. Известно, что патогенность микроорганизмов зависит от активности ферментов микробной клетки, которая возрастает с повышением температуры воды и при пассировании через организм рыбы. Используя протеолитическую активность, микробные клетки проникают в организм рыбы через жабры, пищеварительный тракт, кожные покровы и быстро размножаются (особенно у ослабленных рыб), проникая в кровь, а с ее током и во внутренние органы.
При садковом выращивании механизмы защиты (иммунитет) форели начинают давать сбой и через ослабленные особи, от рыбы к рыбе идет наращивание ферментативной активности слабовирулентных, а иногда и авирулентных бактерий как в водной среде, так и в организме рыб (Бычкова и др., 1995; 1998; Юхименко, 2000). С целью определения некоторых факторов патогенности (протеолитической, гемолитической и ДНКазной) выборочно провели обследование доминирующих групп бактерий родов Aeromonas, Vibrio, Proteus, Pseudomonas, Citrobacter, Enterobacter.
Протеолитическую и гемолитическую активность бактерий родов Vibrio, Aeromonas, Proteus, Pseudomonas, изолированных их внутренних органов рыб, проверяли по скорости разжижения среды с желатином и по гемолизу на чашках с 5%-м кровяным агаром (таблица 12.)
Все культуры Vibrio anguillarum, выделенные из внутренних органов рыб, обладали высокой протеолитической активностью, что указывало на их вирулентность. При проведении биологической пробы они приводили к образованию у рыб абсцессов, изъязвлению мышечной ткани и к развитию септических процессов в организме.
Аэромонады также имели активную протеазу, 100% протеолитическая активность всех аэромонад, выделенных из внутренних органов рыб и их высокая ДНК - азная активность указывали на усиление их патогенности в отношении выращиваемой рыбы и способствовали возникновению у них патологических процессов (Бычкова и др., 1998).
Псевдомонады в летнее время выделялись в меньшем количестве. Чаще их изолировали из патматериала после применения окситетрациклина для подавления вибриофлоры у рыб. У всех выделенных штаммов Ps. fluorescens отмечалась высокая протеазная активность. Псевдомонады в ассоциации с другими микроорганизмами также становится этиологическим агентами, вызывающими бактериальную геморрагическую септицемию (БГС) форели, на это указывают и другие авторы (Gennari et al., 1981; Karnop, 1982; Strattan, 1983). Наличие высокой протеолитической активности у этих микроорганизмов не только способствует развитию патологических процессов, но и приводит к быстрой порче рыбы даже в условиях низких температур. Благодаря протеазе, псевдомонады лизируют белки мышечной ткани (Gennari et al., 1981; Микитюк и др., 1989; Пивоваров и др., 1989; Ларцева, 1998; Пивоваров, Подъясенев, 1985).
Представитель энтеробактерий Proteus vulgaris, вызывающий заболевание радужной форели в садках, также имел высокую протеолитическую активность, связанную с его вирулентными свойствами. Это было подтверждено биопробой с Proteus vulgaris.
В медицине протеаза протеев, как фактор патогенности была выявлена в 87,6% случаев у больных людей (Керашева. 1991). Нестерова (1990) показала, что протеи выделяют активные внеклеточные протеиназы. Несмотря на очевидные факторы патогенности у этих микроорганизмов и их способность вызывать заболевания у рыб (Ларцева и др., 1988; Аморос Хименес, 1993; Бычкова и др., 1995), они не включены в официальный перечень патогенов для рыб. Сапрофитные бактерии родов Acinetobacter и Flavobacterium встречались во внутренних органах форели и в воде, имели протеазу от 40 до 100%. Часто встречаясь в ассоциации с другими микроорганизмами, они усиливают совместным воздействием развитие патологических процессов у рыб (Паршута, 1987; СасШ, 1990; Компанец и др., 1992; Бычкова и др., 1998).
Громов Б.В. и Павленко Г.В. (1989) утверждают, что состав популяций патогенных бактерий в большей степени зависит от уровня восприимчивости популяций хозяев. Слабовирулентные бактерии менее приспособлены к существованию в иммунном организме. Структуры и молекулы, выступающие в роли факторов патогенности, являются мишенями иммунного ответа хозяина. В результате в нем будут преобладать вирулентные и высоковирулентные штаммы.
Результаты анализа сезонной динамики ДНК-азной активности аэромонад, выделенных от рыбы, показали ее нарастание с июня до начала сентября от 1,5 до 11-13 мм, что свидетельствовало об их значительной вирулентности. ДНК-азная активность водных изолятов аэромонад была ниже, однако, среди них также отмечалось ее нарастание от 0,5 до 6 мм (рис. 7).
Все это обусловливает патогенность выделенных бактерий, их эпизоотическую и эпидемическую значимость в летний и ранне-осенний периоды.
Анализ полученных данных позволяет говорить о высокой протеолитической активности почти всей выделенной микрофлоры, способности аэромонад наращивать ферментативную активность. Особенно эта активность резко возрастает с увеличением органической нагрузки в водной среде и в момент возникновения и последующего развития болезни у радужной форели.
Профилактика и борьба с бактериозами форели в аквакультуре
Несмотря на то, что проблема борьбы с болезнями гидробионтов далека от своего решения, марикультура не остается безоружной перед заболеваниями, активно использует арсенал имеющихся средств, а результаты текущих научных исследований позволяют рассчитывать на создание более эффективных препаратов. Химиопрепараты и антибиотики. Химиопрепараты разной природы (органические красители, хлорорганические соединения, неорганические вещества и т.д.) широко применяют для обработок гидробионтов. Обычно это делают методом ванн, внося препарат в воду, или замешивают его в корм. Для удобства обработки часто совмещают с процедурами сортировки и пересадки гидробионтов (Стрелков, 1992; Головин, 1997; Головина. 2000).
Обе группы препаратов применяют для борьбы с бактериальными инфекциями. Методы обработки здесь те же самые плюс (реже) инъекции, но, прежде, чем применять тот или иной препарат, необходимо определить, чувствительна ли к нему обнаруженная у гидробионтов патогенная микрофлора. Дело в том, что, в отличие от паразитов, микроорганизмы обладают способностью приобретать резистентность к антибиотикам и химиопрепаратам, если находятся в контакте с ними продолжительное время (Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб, 1998, 1999). Эта способность наследуется, и фактор наследственности - автономная кольцевая ДНК-плазмида, несущая гены резистентности, - в естественных условиях передается между бактериальными клетками путем конъюгации при их непосредственном контакте. В природе взаимный обмен плазмидами - и это весьма настораживает, происходит между микроорганизмами разной родовой и хозяинной принадлежности, в том числе между микрофлорой человека, теплокровных животных и гидробионтов.
Антибиотики и химиопрепараты имеют еще ряд недостатков: непродолжительность защитного действия, высокая стоимость препаратов, побочные эффекты на организм гидробионтов (в частности, иммуносупрессивное действие) и загрязнение окружающей среды. Антибиотики бессильны против вирусных инфекций. Все это привело к тому, что эйфорию, сопровождавшую открытие антибиотиков в конце 30-х годов и последовавшую вслед за этим «эру антибиотиков - и химиотерапии», сменяет в настоящее время переход к другим средствам контроля заболеваний. Подбор биопрепаратов для профилактики заболеваний бактериальной этиологии. Полученные материалы позже были нами проанализированы в лаборатории ихтиопатологии ВНИИПРХ: по санитарно -эпизоотическому состоянию садковых форелевых хозяйств, по микробиоценозу воды и рыбы, по лечебным и профилактическим препаратам, а также по чувствительности к часто используемому левомицетину в динамике, которая показала скорость изменчивости чувствительности аэромонад в течение одного сезона. Примером могут служить данные по рыбхозу "Бисерово". С апреля по сентябрь было проведено 8 обследований патматериала от рыбы и проб воды и установлено, что в апреле и мае все выделенные штаммы аэромонад были чувствительны к левомицетину, в июне появилось 36,8% слабочувствительных, дальше их количество увеличилось до 56,2% (рис.8).
А если учесть, что в течение рыбоводного сезона количество высоковирулентных аэромонад тоже увеличилось с 8,8% до 52,6% - 80,0% то острота проблемы становится очевидной (Юхименко и др., 2000).
В условиях экологического неблагополучия, при повышенной агрессивности среды аэромонады, подвергающиеся воздействиям неблагоприятных факторов, усиливают свою ферментативную активность и параллельно с этим возрастет их вирулентность. Таким образом, с одной стороны всевозможные стресс - факторы снижают резистентность рыбы, угнетая ее иммунную систему, способствуя развитию эндогенной инфекции, с другой стороны вызывает повышение вирулентности аэромонад и других грамотрицательных бактерий, активизируют действие ферментов агрессии и провоцируют развитие острого процесса.
Применение в таких случаях антибиотиков и фуразолидона может только ухудшить ситуацию, что хорошо было показано на примере прудового хозяйства р/х "Бисерово", в котором были выявлены культуры аэромонад практически резистентные к левомицетину и фуразолидону, а у некоторых культур в зоне угнетения роста - фуразолидонустойчивые мутанты (Юхименко и др., 1997).
Под воздействием неблагоприятных условий окружающей среды, некачественных комбикормов у двухлеток карпа начали появляться небольшие язвочки на поверхности тела. Из паренхиматозных органов выделялись единичные сапрофитные бактерии. После курса лечения левомицетином из печени и почек были выделены высоковирулентные аэромонады.
Пробиотики - как новые средства для профилактики бактериальных болезней рыб. Пробиотики в современном понимании - это препараты из живых бактериальных культур, предназначенные для коррекции микрофлоры хозяина и лечения ряда заболеваний. Определяют понятие "пробиотик" как антоним антибиотиков, т.е. "промотор жизни". Пробиотики, в отличие от антибиотиков, не оказывают отрицательного воздействия на нормальную микрофлору, поэтому их широко применяют для профилактики и лечения дисбактериозов. В то же время эти биопрепараты характеризуются выраженным клиническим эффектом при лечении (долечивании) ряда острых кишечных инфекций. Важной особенностью пробиотиков является их способность повышать противоинфекционную устойчивость организма, оказывать в ряде случаев противоаллергическое действие, регулировать и стимулировать пищеварение.
В настоящее время в медицине уже широко используют лактобактерин, бифидум - бактерии, колибактерин, бификол, ацилакт и др.
В отечественном рыбоводстве для профилактики бактериальных заболеваний в последние годы также предпочтение отдается биологическим препаратам - пробиотикам, повышающим иммунный статус рыб.
В Казахстане рыбоводстве разработан биопрепарат "Азогилин" на основе живой культуры азотфиксирующих бактерий (Щвец, 1990). Подобный препарат активно используется в Беларуси и называется "Az - 28" (Скурат и др., 2000). Получены также хорошие результаты при выращивании молоди лососевых рыб на рыбоводных заводах Севера, где для нормализации эпизоотического состояния кормление рыбы осуществляли кормом с ацидофильным препаратом (Карасева, 1994). Важным арсеналом совершенствования биопрепаратов являются бактерии рода Bacillus. Первый такой пробиотик субалин, созданный методом генной инженерии на основе бактерии Bac.subtilis, широко используется в рыбоводстве с 1997 года (Борисова и др., 2000; Юхименко и др., 2000, 2001; Вовк и др., 2000).
Преимущество препарата - это безвредность даже в концентрациях, значительно превышающих рекомендуемые для применения, а также способность существенно повышать неспецифическую резистентность макроорганизма. Важнейшими свойствами Bac.subtilis является его антагонистическая активность ко многим патогенным и условно - патогенным микроорганизмам; высокая ферментативная активность, позволяющая регулировать и стимулировать пищеварение; противоаллергенное и антитоксическое действие (Смирнов, 1998; Вовк и др., 2000; Новоскольцова и др., 2000; Юхименко и др., 2000).
Вскоре после приема препарата начинают выделяться биологически активные вещества и функционировать системы микробных клеток, оказывающие как прямое действие на патогенные и условно - патогенные микроорганизмы, так и опосредованное - путем активации специфических и неспецифических систем защиты макроорганизма. В этот же период времени бактериальные клетки пробиотика, могут рассматриваться как биокатализатор многих жизненно важных процессов в пищеварительном тракте, который активно продуцирует ферменты, аминокислоты, антибиотические вещества и другие физиологически активные субстраты, дополняющие лечебно -профилактическое действие (рис. 9).
Субалин разработан в Институте микробиологии и вирусологии Д.К. Заболотного HAH Украины совместно с НПО "Вектор" (Россия) и в настоящее время широко применяется в лососевых, осетровых и карповых рыбоводных хозяйствах
Проведенные исследования в указанных рыбоводных хозяйствах, показали, что в эпизоотически сложной, напряженной обстановке, применение субалина дает положительный эффект: у рыб происходит заживление язв, нормализация слизеобразования на поверхности тела, улучшение состояния жаберного аппарата; стабилизация функции кишечника и улучшение его ферментативной активности; восстановление естественного баланса между нормальной и потенциально патогенной микрофлорой. Внутренние органы (печень, почки, селезенка) рыб после применения субалина не были контаминированы микроорганизмами
Субалин - ветеринарный лечебно - профилактический препарат на основе живых бактерий Bacillus subtilis штамма 2335/105, продуцирующий альфа - 2 интереферон. Он обладает антагонистическим действием в отношении широкого спектра патогенных и условно - патогенных микроорганизмов (Shigella, Salmonella, энтеропатогенные E.coli, Klebsiella, Candida, Proteus и др.), а применение препарата при вакцинации резко повышает ее эффективность.
Профилактика вибриоза. Повышения устойчивости рыб к инфекционным заболеваниям можно добиться разными путями. К наиболее существенным относятся генетические методы и вакцинация. Применение вакцин в рыбоводстве против опасных бактериальных болезней рыб ставит их здоровье под контроль и способствует положительному влиянию на состояние выращиваемой рыбы.
