Содержание к диссертации
Введение
1. CLASS Обзор литератур CLASS ы 7
1.1. Микрофлора желудочно-кишечного тракта и ее значение для молодняка сельскохозяйственных животных 7
1.2. Роль микрофлоры желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и птицы в обеспечении их каротином, витаминами А и Е 16
1.3. Использование микроорганизмов желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и птицы для получения пробиотиче-ских препаратов 22
1.4. Применение пробиотиков в животноводстве, их значение в кормлении и профилактике заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных 26
1.5. Заключение 38
2. Собственные исследования 40
2.1. Материалы и методы исследований 40
2.2. Результаты исследований 45
2.2.1. Разработка лабораторного регламента получения сухой формы пробиотика - тококарина 45
2.2.2. Безвредность, устойчивость к антибиотикам, восприимчивость к хитозану и антагонистическая активность штамма №100 48
2.23. Сохранность сырой биомассы штамма №100 и тококарина в чистом виде и в смеси с комбикормом и премиксом 50
2.2.4. Эффективность использования сухого препарата тококарина при выращивании новорожденных телят 53
2.2.4.1. Влияние тококарина на рост, расход кормов и сохранность телят в молочный период выращивания 53
2.2.4.2. Влияние применения тококарина на естественную резистентность телят 57
2.2.4.3. Влияние тококарина на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта телят 61
2.2.4.4. Влияние тококарина на содержание в сыворотке крови телят каротина, витаминов А иЕ 79
2.2.4.5. Экономическая эффективность применения тококарина в рационах телят молочного периода 81
3. Обсуждение результатов 82
Выводы 87
Практические предложения 89
Список литературы 90
Приложение 108
- Роль микрофлоры желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и птицы в обеспечении их каротином, витаминами А и Е
- Разработка лабораторного регламента получения сухой формы пробиотика - тококарина
- Влияние тококарина на рост, расход кормов и сохранность телят в молочный период выращивания
- Экономическая эффективность применения тококарина в рационах телят молочного периода
Введение к работе
Наметившаяся тенденция производства экологически чистых продуктов питания требует поиска новых типов добавок, повышающих продуктивность животных. Одной из реальных альтернатив на сегодняшний день являются пробиотики, препараты содержащие живые культуры микроорганизмов — симбионтов желудочно-кишечного тракта. Их применяют в качестве биологически активных веществ, обладающих ростостимулирующим и лечебно-профилактическим эффектом. Преимзоцество их в том, что они безвредны и не имеют недостатков, присущих антибиотикам и химиотерапевтическим средствам (Антипов В. А., Субботин В. М., 1980; Тараканов Б.В.,1999).
Применение пробиотиков в животноводстве затрагивает ряд важных проблем, связанных с регулированием кишечного микробиоценоза, иммунной, гормональной и ферментативной систем организма молодняка (Панин А.Н., Малик Н.И., Вершинина И.Ю., 2002).
Для профилактики здоровья молодняка необходимо поддерживать популяцию полезных бактерий в пищеварительном тракте. Поэтому важно при его выращивании создавать необходимые условия, обеспечивающие формирование собственного микробиоценоза, включая применение средств, в том числе пробиотиков, способствующих формированию микрофлоры в нужном для организма направлении (Сизова А.В., 1974; Тимошко М.А., 1990,1992; Тараканов Б.В., 2003).
На сегодняшний день существует большое количество пробиотиков, созданных на основе лактобактерий, бифидумбактерий, молочнокислых, целлюлозолитических и других бактерий (Платонов А.В., 1985). Широко применяются в животноводстве и птицеводстве такие новые пробиотики как реалак, лаком, стрептобифид, ветом-1.1., субалин, целлобактерин, лактоами-ловарин и другие (Иноземцев В.П.и др., 1997; Тараканов Б.В.и др., 1999,2002; Малик Н.И., Панин А.Н., 2001). В начале 90-х годов в ВИЖе на основе каро-тинсинтезирующей культуры Rhodococcus получен пробиотик - каротино-бактерин, эффективный в рационах цыплят-бройлеров, молодняка крупного
5 рогатого скота и свиней (Пивняк И.Г. и др., 1992,1998).
Поиск микроорганизмов, пригодных для получения новых эффективных пробиотических препаратов в настоящее время остается актуальным. Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось изучение то-коферолсинтезирующего штамма №100 и создание на его основе нового про-биотического препарата - тококарина. Для достижения указанной цели ставились следующие задачи:
получить сухую форму пробиотика тококарина;
определить сохранность биомассы культуры штамма №100 и готового препарата - тококарина отдельно и в смеси с комбикормом и премиксом;
- изучить безвредность, антибиотикоустойчивость, антагонистическую
активность штамма №100.
Изучить влияние тококарина на:
интенсивность роста и профилактику заболеваний пищеварительного тракта телят;
показатели естественной резистентности телят;
состав микрофлоры пищеварительного тракта телят;
- содержание в крови телят витамина А, каротина и токоферола.
Определить оптимальные дозы и экономическую эффективность при
менения препарата при выращивании телят.
Научная новизна. Впервые получен пробиотический препарат на основе токофероле интезирующего штамма №100. Определены сроки его хранения в чистом виде и в смеси с комбикормом и премиксом, установлены дозы применения и изучено влияние при выращивании телят на:
рост и развитие;
на состояние иммунной системы;
популяцию микроорганизмов пищеварительного тракта;
содержание в сыворотке крови витамина А, каротина и токоферола. Практическое значение и реализация результатов исследований. Впервые разработаны лабораторный регламент получения сухой формы пробно-
тика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100 и наставление по применению пробиотика тококарина при выращивании телят молочного периода.
Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на:
-третьей международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», Боровск, ВНИИФБиП с.-х. животных (6-8 сентября, 2000); -52-ой конференции молодых ученых и аспирантов «Молодые ученые животноводству», п. Дубровицы, ВИЖ (27 июня, 2003);
-научной конференции отдела кормления и приготовления кормов ВИЖа «Роль биологически активных веществ в кормлении сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию со дня рождения К.М. Солнцева, п. Дубровицы, ВИЖ (14 апреля, 2004).
По материалам диссертации опубликовано 4 работы. На защиту выносятся следующие основные положения:
- разработка лабораторного регламента по получению сухого пробиоти
ка тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100;
-результаты изучения влияния пробиотика тококарина на популяцию микроорганизмов пищеварительного тракта, содержание в крови телят витамина А, каротина и токоферола;
- результаты изучения влияния пробиотика тококарина на естественную
резистентность, интенсивность роста и профилактику заболеваний пищева
рительного тракта телят.
Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы в количестве 155 источников, из них 30 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 32 рисунками.
Роль микрофлоры желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и птицы в обеспечении их каротином, витаминами А и Е
Микрофлора пищеварительного тракта выполняет многие функции в организме животного и участвует в образовании ряда биологически активных веществ, а иногда является единственным источником биосинтеза некоторых метаболитов, например целлюлазы. В литературе имеется достаточно много данных о синтезе витаминов микроорганизмами рубца, таких как тиамин , рибофлавин, пиридоксин, никотиновая, пантотеновая и фолиевая кислоты, цианкобаломин, витамин К (Жеребцов П., Вракин В., Ходырев А., 1970; Светликовская И. А., 1967; Сизова А.В, 1974).
Установлено, что микрофлора желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных способна синтезировать каротины и токоферолы. Так, при исследованиях нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных были выделены каротинсинтезирующие микроорганизмы из рубца, тонкой, толстой, слепой и прямой кишок овец и из рубца, тонкой, толстой, слепой и прямой кишок овец и крупного рогатого скота. Было выделено 190 штаммов микроорганизмов, образующих желтые пигменты, 126 из которых показали каротинсинтезирующую способность. Эти штаммы синтезировали 0,9-8,6 мкг каротинов на 100 мл питательной среды. Была проведена идентификация 108 каротинсинтезирующих культур, из которых 62% отнесены к семейству Bacteriaceae рода Flavobacterium и группе неидентифицированных микроорганизмов, а 38% - к семейству Сос-сосеае, из которых 28,8% оказались представителями рода Streptococcus и остальные - рода Micrococcus (Лаврентьева Л.И., 1970; Могильниченко Н.В., 1972; Пивняк И.Г., Арифджанова М.К., 1977; Пивняк И.Г., Тараканов Б.В., 1982).
В результате изучения микрофлоры рубца крупного рогатого скота впервые выделены токоферолсинтезирующие микроорганизмы, которые в условиях in vitro образовывали до 32 мкг а-токоферола на 100 мл питательной среды. Выявлена прямая корреляция между синтезом бактериями каро-тиноидов и а-токоферола, т.е., если данная культура синтезирует каротины, то у неё может идти и синтез а-токоферола. Кроме того, установлен факт существования токоферолсинтезирующей микрофлоры в желудочно-кишечном такте цыплят. (Худяева Е.Н., 1990, 1991; Пивняк И.Г., Худяева Е.Н., Попов А.Н., 1994).
В опытах по использованию аминокислот для регулирования микробиологических процессов в рубце жвачных животных установлено что, включение в рацион жвачных метионина повышает синтез витаминов Е, РР и группы В микрофлорой рубца (Тараканов Б.В., 2003). Есть информация о способности молочнокислых бактерий, входящих в состав пробиотиков энтероби-фидина и бактрила синтезировать наряду с витаминами В, С и К, витамин Е (Карпуть И.М., Бабина МП., 1998).
В связи с тем, что (3-каротин выполняет множество функций в организме как животных, так и человека, его мировое потребление увеличивается быстрыми темпами и к 2000 году достигло уровня 715 т в год. Рост потребления других каротиноидов составляет до 13% в год (Алексеева Л.Ф., других каротиноидов составляет до 13% в год (Алексеева Л.Ф., Драганов И.Ф., Бычкова Н.Г., 2001). При этом во многих птицеводческих и животноводческих хозяйствах поголовье испытывает дефицит каротина и ретинола (Резниченко Л.В., Носков СБ., 2003).
Каротиноиды получают с помощью химического синтеза и путем выделения из природных источников - растений и микроорганизмов. Химическим путем получают Э-каротин, витамин А, Р-апо-8-каротиналь, этиловый эфир Р-апо-8-каротиновой кислоты, кантоксантин и ряд других каротиноидов, синтез которых осуществляется в заводских масштабах. Как продуценты каротиноидов представляют интерес, наряду с растениями, грибы, дрожжи, бактерии и водоросли. Среди хематотрофов для получения каротиноидов используют дрожжи Rhodotorula gracilis, R.rabra, Rhodosporidium diobovatum, a также актиномицеты (Act. chrestomycetes var. aurantioideus, Act. chrysomallus var. carotinoides), микробактерии (Mycobacterium phlei, M. carotenum), грибы (Mucoraceae, Dacrymycetaceae и др.). Кроме того, представляются перспективными штаммы Flavobacterium, синтезирующие пигмент зеаксантин, который пока еще не может быть получен с помощью химического синтеза. Основными продуцентами (З-каротина в промышленности являются гетеротал-личные мукоровые грибы Blakeslea trispora и Choanephora conjuncta. При совместном культивировании разнополых штаммов этих грибов на специально подобранных средах выход каротина составляет около 3-4г/л среды (Промышленная микробиология, 1989).
В опытах по применению микробного каротина в рационах птицы, поросят, овец и молодняка крупного рогатого скота установлено, что его применение дает наибольший эффект в сочетании с синтетическим витамином А. При сравнении эффективности использования микробного каротина с каротином моркови в рационах цыплят, среднесуточный прирост живой массы был выше у тех, которые получали микробный каротин (Семин В.Н., Ткачев И.Ф., Бухтиярова О.Н., 1973). В опытах на телятах установлено, что микробный каротин повышает энергию роста, способствует увеличению лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови, нормализует соотношение между молочнокислыми бактериями и кишечной палочкой, при этом содержание витамина А и каротина в сыворотке крови животных возрастало в 1,5-2 раза (Шихова Р.Я., Голубцова Л.Н., Алиев В.Н., 1988; Алиев В.Н., 1989; Девяткин В.А., 1995; Шайдуллина Р.Г., Заболотский В.А., Михеенко В.М., 1998).
Каротиноиды способны всасываться у крупного рогатого скота без изменений. Повышенные концентрации кароїиноидов в воспроизводящих органах, в надпочечниках, сердце, мышцах, печени, почках, нервной ткани указывают на то, что они могут играть самостоятельную роль в организме (Ка-лунянц К.А., Ездаков Н.В., Пивняк И.Г., 1980).
Биологическая активность (3-каротина рассматривается, прежде всего, с точки зрения превращения его в витамин А (Дмитровский А.А., Тапалцян С.Х., 1973; Душейко А.А., Великий Н.Н., 1970). Условно принято, что 1 мг суммарного каротина кормов можно прировнять для птицы к 1000 НЕ, для сельскохозяйственных животных - 500 ИЕ, для пушных зверей - 250 ИЕ витамина А.
Известно, что животные в первые дни жизни не способны превращать каротин в витамин А. Только после третьей недели жизни появляется эта способность (Емелина Н.Т. и др., 1970; Двинская Л.М., Решетова Л.В., Дудин В.И., 1979; Гусак Я.С. и др., 1986).
Разработка лабораторного регламента получения сухой формы пробиотика - тококарина
Разработку лабораторного регламента получения сухого препарата тококарина на основе штамма №100 проводили по следующей схеме: посевной материал - маточная культура - ферментационная культуральная среда - получение биомассы - приготовление и расфасовка препарата.
Продуцентом пробиотика тококарина являлся токоферолсинтезирующий штамм №100.
Для получение посевного материала культуру штамма №100 из пробирки со скошенным МПА переносили петлей в физиологический раствор, суспензировали, разводили и высевали на чашки с МПА для получения отдельных характерных колоний: серо-оранжевого или бледно- оранжевого цвета, округлых, плоских, с блестящей поверхностью, однородной структуры, пастообразной консистенции (рис 4). Через 48 часов термостатирования при +37С визуально изучали характер колоний и 5-6 однородных характерных колоний пересевали в пробирки на скошенный МПА.
В качестве посевного материала нами была использована чистая суточная культура на скошенном МПА.
Для получения маточной культуры суточную культуру смывали с косяка МПА стерильным физиологическим раствором (5мл) и вносили в количестве 5-10% (по объему) в конические колбы (750-1000 мл) с жидкой питательной специальной средой. Маточную культуру получали на специальной жидкой среде после 24 часов культивирования на качалке, имеющую 180-200 об/мин при температуре +34-35С.
Для получения рабочей культуры маточную культуру засевали в количестве 5-10% на жидкую среду, разлитую по 200 мл в конические колбы емкостью 750-1000 мл. Стерилизовали среды при температуре +121С- 40 мин. Засеянные маточной культурой среды ставили на качалку, имеющую 180-200 об/мин, и ферментировали в течение 72 часов при температуре +34-3 5С. Срок ферментации обусловлен тем, что по данным Худяевой Е.Н. (1991), активное накопление биомассы идет до 3 суток. При более длительных сроках отмечено увеличение токоферолов в среде, а количество жизнеспособных клеток оставалось на прежнем уровне.
По окончании ферментации культуральную жидкость центрифугировали 30 мин при 14 тыс. оборотов в минуту. Средний выход сырой биомассы бактерий составил 3 г на 100 мл среды, средний выход бактериальных клеток на 100 мл среды - 100 млрд.
Получение препарата тококарина осуществляли методом контактной сушки биомассы штамма №100 с использованием наполнителя в соотношении 1:2, 1:2,5.
На каждом этапе работы нами проводился контроль активности препарата и бактериальной чистоты.
Активность препарата составляла не менее 10 млрд. жизнеспособных бактерий штамма №100 в 1г.
При микроскопировании мазков 1-суточной культуры отмечено типичное дифтероидно-полисадное расположение с небольшим количеством V или У образных форм. По Граму окраска положительная.
Чистым считали культуру или партию препарата, при посевах разведений которых на МПА давали рост только характерных колоний. При посевах на среду Эндо рост посторонней микрофлоры отсутствовал.
В результате работы был получен пробиотик тококарин - концентрат, который имел вид серого порошка, средней текучести, состоящего из биомассы бактерий штамма №100 и наполнителя. Препарат содержал не менее Юмлрд. (10x109) жизнеспособных бактерий штамма №100 в 1 г. Хранился в полиэтиленовых мешочках в темном сухом месте при температуре не выше 20С. Срок хранения составил 6 месяцев. Размер упаковки: 250 г и 500 г в запаянных полиэтиленовых мешочках.
. Безвредность, устойчивость к антибиотикам, восприимчивость к хитозану и антагонистическая активность штамма №100
Исследования безвредности препарата тококарина проводили на белых мышах. Установлено, что все животные оставались живыми и клинически здоровыми. Полученные данные свидетельствуют о безвредности исследуемого препарата. Учитывая, что антибиотики широко используются в животноводстве, нами были проведены исследования по определению устойчивости штамма №100 к антибиотикам.
При определении антибиотикоустойчивости установлено, что штамм №100 устойчив к нистатину, полимиксину, малочувствителен к стрептомицину и чувствителен к гентамицину, канамицину, левомицетину, неомицину, олеан-домицину, тетраниклину, фурадонину, цифроспорину, эритромицину и высокочувствителен к ампициллину, бензилпенициллину и оксациллину (табл. 3).
В животноводстве для повышения продуктивности молодняка крупного рогатого скота в настоящее время используют различные биологически активные вещества, в том числе хитозан (Фомичев Ю.П. и др., 2003). Нами была исследована возможность совместного его применения в опытах in vitro с пробио-тиком тококарином.
При определении чувствительности клеток штамма №100 к водорастворимому сукцинату хитозана через 24 часа инкубирования зон задержки роста культуры не было отмечено. Это свидетельствует о том, что хитозан в данных дозах можно применять в животноводстве совместно с пробиотиком тококарином.
Влияние тококарина на рост, расход кормов и сохранность телят в молочный период выращивания
Ранее проведенными исследованиями установлено, что из года в год на комплексе «Щапово» переболевает почти каждый новорожденный теленок. Анализ результатов показывал, что у телят отмечали болезни органов пищеварения - 56,7%, нарушения обмена веществ - 17,6%, болезни органов дыхания -14,1% (Калашников А.П. и др., 1984; Гаджиев A.M., 1998). Именно в этом хозяйстве проводились исследования влияния разрабатываемого пробиотика тококарина на рост и профилактику заболеваний новорожденных телят.
Как видно из таблицы 5, в первом опыте введение в рацион пробиотика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100 способствовало увеличению среднесуточных приростов живой массы, которые составили в контрольной группе 335, 8 г, а в опытных группах 359,0 - 374,3 г в двухмесячном возрасте, что больше на 6,8 - 11,5% соответственно.
Важным показателем при оценке эффективности выращивания молодняка сельскохозяйственных животных является величина затрат кормов на единицу прироста живой массы. На 1 кг прироста живой массы за 60 дней в опытных группах были затрачены: кормовых единиц в контроле - 5,9 в 1-ой опытной группе - 5,6, во 2-ой - 5,4. Переваримого протеина соответственно 712,4; 666,4 и 639,2. Введение в рацион пробиотика способствовало снижению затрат кормовых единиц на 6,4 - 10,2%, переваримого протеина - на 6,8 - 8,5% по сравнению с контролем.
Во втором опыте, как и в первом (табл. 6) применение тококарина также дало положительный эффект. При этом, среднесуточные приросты живой массы в контрольной группе составили 418,3 г, в опытной - 472,2 г, что выше на 12,9 %. Снижение затрат корма на 1 кг прироста живой массы в опытной группе составило: кормовых единиц на 11,4%, переваримого протеина на 11,4%, что подтверждает полученные ранее данные.
При учете количества дней с расстройством пищеварения отмечено их значительное снижение в опытных группах. Так, в первом опыте этот показатель снизился в 1,9 и в 2,3 раза (рис. 5), а во втором опыте - в 1,7 раза по отношению к контролю (рис. 6). При этом необходимо отметить, что заболевания желудочно-кишечного тракта у телят, получавших тококарин, проходили в более легкой форме.
Показателями состояния иммунитета телят служили бактерицидная и ли-зоцимная активность сыворотки крови. Бактерицидные свойства сыворотки крови обусловливаются содержащимися в ней лизоцимом, комплементом, про-пердином, интерфероном, а также присутствием так называемых бактериолизинов, способных растворять бактерийные клетки. По этому бактерицидная активность сыворотки крови отражает суммарное действие гуморальных факторов защиты.
По отношению к грамотрицательным микроорганизмам бактерицидная реакция представляет собой результат синергидного действия поэтапно включающихся в реакцию факторов: вначале иммуноглобулинов и комплемента, затем лизинов и лизоцима. Лизис грамотрицательных бактерий осуществляется в основном за счет комплемента, вызывающего деструкцию краевых слоев оболочки, и усиливается лизоцимом. У грамположительных бактерий лизоцим выступает в качестве основного литического фактора, бетализин - вспомогательного. Микробы, покрытые оболочкой с обедненным ригидным слоем, могут, видимо, лизироваться одним комплементом. Не лизированные, но поврежденные бактерии могут легче фагоцитироваться, особенно после адсорбции на их поверхности иммуноглобулинов или комплемента (Емельяненко П.А., 1980).
Лизоцимная активность сыворотки крови основана на определении лизо-цима - фермента, обладающего свойством лизировать (переваривать) живые и мертвые клетки микроорганизмов, который синтезируется тканевыми макрофагами и молодыми нейтрофилами.
Перечисленные показатели позволяют достаточно полно определить уровень естественной резистентности организма животного (Плященко С. И., Сидоров В.Т., 1979).
Анализируя показатели бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки можно сказать, что исходный уровень у обследованных животных находился на низком уровне.
Как видно из таблицы 7 и рисунков 7 и 8 в первом опыте уже в возрасте 10 дней отмечено повышение лизоцимного индекса сыворотки крови телят опытных групп по сравнению с контролем (Р 0,01). В возрасте 30 дней также отмечено повышение этого показателя в опытных группах (Р 0,001), где он составил 32,43-42,53, а в контроле оставался на исходном уровне.
Повышение бактерицидной активности сыворотки крови у опытных телят в 10 дней незначительное. В возрасте 30 дней этот показатель достоверно возрастал в опытных группах и составил 88,83-91,32% , в то время как у телят контрольной группы оставался на прежнем уровне - 78,20% (Р 0,01-0,001).
Во втором опыте в возрасте 10 дней повышение лизоцимной активности в опытной группе также было незначительным, а в возрасте 30 дней лизоцимный индекс составил 27,76 - в контрольной группе и 45,71 — в опытной, что выше контроля на 64,7% (Р 0,001).
Экономическая эффективность применения тококарина в рационах телят молочного периода
Экономическая эффективность от применения тококарина в рационах телят при дозе 5 млрд. клеток составила от 1,6 до 3,27 руб. на рубль затрат (табл. 13).
В условиях лаборатории был получен сухой пробиотик тококарин, содержащий не менее 10 млрд. жизнеспособных клеток штамма №100 в 1 г, безвредный, сохраняющий свою активность в течение 6 месяцев при комнатной температуре. Это является хорошим показателем с учетом того, что многие пробио-тические препараты требуют более строгих условий хранения, таких как герметичная упаковка, температуру ниже +4С (Сизова А.В., 1974). Исходя из полученных данных, можно сделать выводы, что применять пробиотик тококарин возможно одновременно с препаратами, содержащими хитозан марки «Р» MM 80kDa (СД 84%). При этом считаем нецелесообразным использование тококарина совместно с ампициллином, бензилпенициллином и оксациллином и препаратами, имеющими в своем составе живые бактерии Bacillus subtilis АТСС 6633.
При выборе дозы тококарина учитывали дозы уже применяемых в животноводстве пробиотических препаратов. Так, при применении лактоамиловарина телятам были испытаны дозы от 5 до 25 млрд. клеток на голову в сутки (Тараканов Б.В. и др., 1990). Эффективно применение пробиотика споробактерина поросятам при дозе 300-500 млн. микробных клеток на 1 кг массы тела (Жданов П.И., 1994), каротинобактерина - цыплятам 10-20 млн., телятам - 10 млрд. на голову в сутки (Гаппоева B.C., 1991; Пивняк И.Г., Шайдуллина Р.Г., Заболотский В.А., 1995). При введении тококарина телятам положительный эффект был получен в дозах - 5 млрд. клеток в возрасте 1-30-дней и 500 млн. в возрасте 31-60 дней и -10 млрд. клеток в возрасте 1-30 дней, 1 млрд. клеток в возрасте 31-60 дней.
Важно при использовании препаратов, содержащих живые микроорганизмы, соблюдать не только дозы, но и сроки, периодичность скармливания. Учитывая, что заселение желудочно-кишечного тракта микрофлорой начинается сразу после рождения, с целью профилактики расстройств пищеварения пробиотик тококарин телята получали с первого дня жизни. Для создания оптимальной концентрации клеток штамма №100 в желудочно-кишечном тракте телят пробиотик тококарин вводили ежедневно.
Применение тококарина при выращивании телят способствовало повышению лизоцимного индекса на 57,3-58,7%, бактерицидной активности - на 13,5-19,7%. Результаты, полученные при исследовании состояния показателей иммунной системы у телят в наших опытах, согласуется с данными других ав 84 торов о способности препаратов, содержащих живые клетки микроорганизмов повышать показатели естественной резистентности у молодняка сельскохозяйственных животных и птицы (Шайдуллина Р.Г., Заболотский В.А., Михеенко В.М., 1998; Малик Н.И., Степаненко И.П., 1999; Тараканов Б.В. и др., 1999; Малик Н.И., 2002).
Многочисленными исследованиями установлено, что состояние неспецифического иммунитета и микрофлоры желудочно-кишечного тракта молодняка сельскохозяйственных животных находятся в тесной связи (Тимошко М.А., 1992). Состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта можно регулировать введением полезных микроорганизмов, что положительно сказывается на состоянии иммунитета животных. Так, у телят, получавших тококарин, отмечали снижение количества бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, дрожжей и плесеней в кале телят на фоне увеличения количества мезофильно-аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов. Это говорит о том, что клетки штамма №100 способны благоприятно влиять на формирование микробиоценоза кишечника телят молочного периода.
Важным фактом является способность нового пробиотического препарата положительно влиять на обеспеченность телят каротином и витамином Е. Исходя из полученных данных, можно сделать выводы, что тококарин оказывает положительное влияние на обеспеченность организма телят каротином и токоферолом. Это также может быть стимулирующим фактом при формировании неспецифического иммунитета (Плященко СИ., Сидоров В.Т., 1979; Карпуть И.М., Пивоваров Л.М., Козельский В.Л., 1985; Шихова Р.Я., Голубцова Л.Н., Алиев В.Н., 1989; Драганов И.Ф., Алексеева Л.Ф., 2003).
Достоверное увеличение содержания каротина на 54,4-41,35, токоферола -на 39,8-42,3% отмечали в сыворотке крови телят, получавших тококарин, в возрасте 60 дней. Повышение концентрации витамина А в сыворотке крови телят опытных групп по отношении к контролю, было незначительным, так как ак 85 тивный синтез данного витамина из каротина в организме телят начинается после 30-дневного возраста (ЕмелинаН.Т. и др., 1970; Гусак Я.С. и др., 1986).
Повышение содержания каротина и токоферола в сыворотке крови телят, получавших тококарин, объясняется тем, что клетки штамма №100 способны синтезировать токоферолы и каротины. Эти вещества входят в состав клетки микроорганизмов. Так, каротиноиды у большинства хематотрофных микроорганизмов ассоциированы с клеточной мембраной в форме гликозидов и сложных эфиров, а у фототрофных - в фотосинтезирующем аппарате. Предполагается, что токоферолы синтезируется в пластидах (внутриклеточных органеллах цитоплазмы), а затем выделяются из них наружу и локализуются в цитоплазма-тической мембране клетки (Пивняк И.Г., Попов А.Н., Худяева Е.Н., 1994; Ваи-ernfeind J.C., 1981; Marshal P.S., Mrris S.R., Thelfall D.R., 1985; Ianiszowska W., 1987).
