Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 6
1.1. Основные факторы резистентности организма 6
1.2. Связь и ммуно гематологических показателей с репродуктивной системой животных 9
1.3. Иммунологическая недостаточность сельскохозяйственных животных 14
1.4. Современные методы иммунокоррекции 20
1.4.1. Многообразие и механизм действия биологически активных препаратов 20
1.4.2. Применение биологически активных веществ для коррекции иммунного статуса животных 27
1.4.3. Характеристика нейропептидов мозга и возможность их использования для повышения резистентности животных 33
2. Материал и методы исследования 38
3. Собственные исследования 48
3.1. Динамика гематологических и иммунных показателей у коз в разные периоды воспроизводительной функции 48
3.2. Связь иммунологических и гематологических показателей у коз... 62
3.3. Характеристика биостимулятора из тканей мозга (БСМ) 66
3.3.1. Технология приготовления БСМ 69
3.3.2. Определение активности БСМ 72
3.4. Определение оптимальных параметров применения БСМ для повышения резистентности коз 77
3.5. Влияние биологической стимуляции на иммунный статус беременных коз и их потомства 88
4. Обсуждение результатов исследования 96
5. Выводы 106
6. Практические рекомендации 107
7. Список литературы 108
- Связь и ммуно гематологических показателей с репродуктивной системой животных
- Применение биологически активных веществ для коррекции иммунного статуса животных
- Динамика гематологических и иммунных показателей у коз в разные периоды воспроизводительной функции
- Определение оптимальных параметров применения БСМ для повышения резистентности коз
Введение к работе
Актуальность исследования. Процессы индустриализации сопровождаются повышением степени загрязнения внешней среды веществами, обусловливающими нарушение естественного природного равновесия в экологических системах. Воздействие разнообразных вредных факторов среды приводит к возникновению иммунной недостаточности, связанной с различными нарушениями иммунологического равновесия (A.M. Петров, О.Н. Ма-курина, М.М. Серых и др., 2000, Ф.А. Мещеряков, 2003). Из всех продуктивных животных козы наиболее чувствительны к негативным воздействиям окружающей среды. Поэтому они могут служить моделью для установления -общебиологических закономерностей реактивности организма. Кроме того, значение молочного козоводства в последние годы неуклонно растет. В ряде стран при производстве молочных продуктов козье молоко играет решающую роль. Например, в Греции 85 % сыров и 65 % йогуртов производится с использованием молока коз (Б.С. Иолчиев, Н.С. Марзанов, Е.А. Чалых, 2000). В нашей стране востребованность в продуктах молочного козоводства, как в диетических легкоусвояемых и антиаллергических продуктах питания также высока. Поэтому изучение .особенностей физиологии коз и поиск путей, повышающих сохранность поголовья особенно актуальны. Учитывая многообразный патогенез развития иммунодефицита, возникает острая необходимость применения коррегирующих веществ, действующих на все звенья общей реактивности организма, каковыми являются биостимуляторы. Для повышения иммунитета в настоящее время имеется большое количество различных препаратов, однако, многие из них недоступны для хозяйственников ввиду сложности применения, либо ограниченности специфической направленностью действия. В связи с этим поиск и изучение действия новых биостимуляторов, простых в применении, высокоэффективных и экологически чистых является актуальным й практически обоснованным. Влияние биостимулятора из тканей мозга (БСМ) на прирост живой массы и продуктивность бройлеров, овец, и коров ранее исследовали Т.Р. Лотковская (1995); Г.А. Джаилиди, (1997), Р.А. Цыганский (2003). Однако до настоящего момента остаются неизученными вопросы о влиянии БСМ на иммунный статус животного, возможность применения препарата беременным самкам с целью повышения сохранности новорожденных, а также не определены дозы и способы введения препарата молочным козам.
Дели и задачи исследования. Основной целью наших исследований являлось изучение зависимости показателей неспецифического иммунитета у
3 [ СОСНАЦИОНАЛЬНА»
коз от физиологического состояния их, репродуктивной системы у интактных животных и под воздействием БСМ. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:
изучить динамику изменения показателей естественной резистентности у коз в различные периоды их воспроизводительной функции;
разработать простой и объективный способ оценки биологической активности биостимуляторов;
исследовать особенности действия БСМ на организм коз;
установить влияние БСМ на иммунный статус беременных животных и их потомства.
Научная новизна. Впервые изучена динамика гематологических и иммунных показателей у коз при различных функциональных состояниях их репродуктивного тракта. Установлены тесные коррелятивные связи между показателями гемограммы, бактерицидной и лизоцимной активностями сыворотки крови, фагоцитарной активностью лейкоцитов, концентрацией Т- и В-лимфоцитов в крови. На основании исследований, выявивших циклический характер жизнедеятельности дрожжей Saccharomyces ellipsoides, разработан простой и объективный экспресс-метод определения биологической активности биостимуляторов. Подтверждена возможность применения БСМ для функциональной активации неспецифических факторов иммунной системы животных. Определены оптимальная доза и способ введения препарата козам. Выяснен характер морфологических изменений в селезенке, печени и почках белых мышей под влиянием препарата. Установлено положительное влияние биологической стимуляции матерей на неспецифическую резистентность их потомства.
Теоретическая и практическая значимость исследования. Опыты по изучению иммунных показателей коз в различные периоды их воспроизводительной функции расширяют и углубляют познания об иммунитете животных. В связи с отсутствием нормативных данных по показателям естественной резистентности у коз, полученные показатели могут послужить ориентиром при оценке неспецифического звена иммунитета у поголовья. Для определения биологической активности биопрепаратов разработан экспресс-метод, основанный на способности дрожжей Saccharomyces ellipsoides к быстрому размножению и газообразованию. Получены положительные результаты по эффективному применению препарата БСМ в качестве иммуномоду-лятора. Разработана схема применения БСМ беременным животным для повышения иммунного статуса потомства. Данные, полученные в эксперимен-
тах, используются в учебном процессе на кафедре общей биологии Ставропольского государственного университета в курсе лекций по иммунологии. Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
Свидетельством зависимости факторов неспецифического иммунитета от функционального состояния их репродуктивной системы является изменение бактерицидной и лизоцимной активностей сыворотки крови, фагоцитарной активности лейкоцитов, концентрации Т- и В-лимфоцитов и циркулирующих иммунных комплексов в крови у коз в различные стадии репродуктивной функции.
Циклический характер процессов размножения и бродильной активности дрожжей позволил использовать культуру Saccharomyces ellipsoides для разработки метода определения биологической активности биостимуляторов.
Применение БСМ оказало стимулирующее воздействие на неспецифическую резистентность коз и позволило получить от них потомство с высоким иммунным статусом.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на X международной конференции «Циклы природы и общества» (г. Ставрополь, 2002); международной научно-практической конференции «Биоресурсы. Биотехнологии. Инновации Юга России» (Ставрополь-Пятигорск, 2003).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация включаетразделы: о б -зор литературы, материалы и методы исследования, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список литературы. Работа изложена на 134 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 21 рисунком. Список литературы содержит 220 источников, в том числе 54 иностранных автора. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Связь и ммуно гематологических показателей с репродуктивной системой животных
Иммунологические показатели зависят от вида, пола, возраста животных, индивидуальных особенностей организма, состояния его здоровья, ус 10 ловий среды, времени года, кормления и т.п. Одним из важнейших факторов, оказывающих существенное влияние на иммунную систему самки, является физиологическое состояние репродуктивного тракта.
В период беременности естественные иммунные реакции самок проявляются и изменяются под действием различных факторов, определяющих рост и развитие плода. Причем этот период сопровождается изоиммунизаци-ей организма матери антигенами, поступающими из крови и тканей плода, а также из плаценты. В системе мать-плод происходит взаимное иммунологическое влияние (А.А.Сысоев, 1978).
В оплодотворенной яйцеклетке существуют по крайней мере три группы антигенов: отцовские антигены; эмбриональные антигены, появляющиеся лишь временно на определенных этапах развития зародыша, и макромолекулярные продукты женских половых путей, приобретающие антигенность после контакта с компонентами спермы. Поэтому оплодотворенная яйцеклетка, а в последующем эмбрион и плод являются чужеродными для организма беременных, а иммунная система спариваемых особей направлена против процесса воспроизводства на всех его стадиях (М.М. Серых с соавт,, 2000). Что же является причиной, обусловливающей нормальное протекание беременности и развитие полноценного плода? Этот вопрос ставят перед собой D.A. Clark, J. Chaonat, 1989, а также ряд других отечественных и зарубежных исследователей.
Высказано предположение, что иммунный ответ самки на антигены зародыша отцовского гаплотипа является необходимым звеном нормального эмбриогенеза, то есть иммунная система оказывает иммунотрофическое действие на зародыш (И.И.Соколовская, В.К. Милованов, 1981).
B.C. Авдеенко, на основании проведенных исследований, пришел к выводу, что одна из возможных функций аутоантител - удаление, изменение испорченных или неточно синтезированных белков, полимерных соединений и полисахаридных субстанций в процессе беременности. Поэтому индукцию антител не следует рассматривать как патологический процесс. Ибо такая индукция при нормально протекающей беременности позволяет получить долговременный эффект, завершающийся нормальными родами и благоприятным течением новорожденности.
Ю.А.Максимова, А.К.Михайловская (1993) утверждают, что при осеменении у животных повышается содержание лимфоцитов в крови, появляется клеточная пролиферация.
Массовый фагоцитоз сперматозоидов при их по ступлении в женский репродуктивный аппарат, по-видимому, является пусковым механизмом для миграции лимфоцитов из костного мозга в слизистую оболочку матки и дифференцировки предшественников в лимфо-циты-супрессоры, как предполагают М.М.Серых и др. (2000).
Кроме того, уже в самые ранние сроки после оплодотворения зигота начинает вырабатывать фактор ранней беременности, регулирующий процесс имплантации бластоцисты (Г.Т. Сухих и соавт., 1997). Он обладает свойством ингибировать иммунные реакции, способствует синтезу блокирующих антител, накоплению супрессорных лимфоцитов в зоне имплантации бластоцисты, модулирует иммуносупрессивное действие плацентарных гормонов.
При погружении эмбриона в глубь слизистой оболочки матки, после рассасывания защитной прозрачной оболочки, защитную функцию начинает выполнять сначала трофобласт, а затем плацента. Плацента, по мнению В.И, Говалло (1983), - это не только механический барьер, она вырабатывает многочисленные вещества, поступающие в кровь и способные затормозить все проявления иммунитета. Плацента, с одной стороны, объединяет организмы матери и плода, а с другой - в определенной мере разобщает эти иммунологи чески несовместимые организмы, препятствуя взаимному проникновению клеток, в том числе иммунокомпетентных, и макромолекул; фагоцитирует клетки и неклеточные фрагменты тканей материнского и плодного происхождения.
По данным П.А. Емельяненко (1987) беременность сопровождается снижением в периферической крови числа и уровня цитолитической активности Т-киллеров и появлением Т-супрессоров. И.А. Бурков, Т.П. Трубици-на, Л.В. Бабышева (1989) отмечают, что количество естественных клеток-киллеров у свиноматок меняется в разные периоды полового цикла в связи с осеменением и супоросностыо. Минимальное количество этих клеток, как в крови, так и в лимфоузлах и эндометрии наблюдается на 5-6 дни после осеменения. Количество их начинает уменьшаться уже через 24-48 часов после осеменения. М.Т. Badet е. а. (1983) сообщает, что литическая активность естественных киллеров у беременных в периферической крови снижается вдвое.
В отношении функционального состояния неспецифических факторов резистентности во время беременности показатели противоречивы.
Р.П.Маслянко (1963) получил экспериментальные данные, свидетельствующие о постоянном изменении фагоцитарной активности лейкоцитов крови у стельных коров. А.А.Сысоев (1973), утверждает, что фагоцитарная активность во время охоты у коров относительно высока, тогда как первая треть стельности сопровождается ее снижением до 14 % в один месяц и некоторым повышением к третьему месяцу стельности. Последняя треть стельности характеризуется относительно высокими показателями при большой их вариабельности. Максимального уровня фагоцитарная активность достигает в период отела. Г.Т. Сухих с соавт. (1997) указывают на то, что угнетение специфических иммунных реакции у беременных, по-видимому, частично компенсируется усилением факторов неспецифической системы защиты организма, и что имеются данные об активации системы фагоцитов. В то же время Т.Н. Гришина (1998) считает, что во время беременности угнетается функциональное состояние фагоцитарных нейтрофилов (особенно хемотаксис и бактерицидность по отношению к грамотрицательной и кокковой флоре).
Применение биологически активных веществ для коррекции иммунного статуса животных
Ф.И.Красота с сотр. (1985) провел серию опытов по изучению динамики показателей иммунобиологической реактивности телят при использовании балансирующих витаминно-минеральных добавок (БМВД). В результате исследований было установлено, что БМВД оказывает положительное влияние на рост, развитие телят и их резистентность. Причем наибольшее влияние БМВД оказывали на бактерицидную активность сыворотки крови телят.
Н.С. Кухаренко (1989) для нормализации гистоморфологических отклонений в органах иммунитета дойных коров предлагает в основной рацион вводить закваску Саратовская и соли недостающих микроэлементов.
Л.Г.Замарин и др. (1989) для коррекции естественной резистентности в зонах йодной недостаточности рекомендуют включать в рацион подкормки калия йодида в суточной дозе 6,2 мг и лития карбоната в количестве 0,6 г.
G. Kuhman с соавт. (1988) выяснили в эксперименте на свиньях и ягнятах, что кормовой а-кетоизокапроат положительно влияет на иммунные функции, повышает активность лимфоцитов.
А.А. Ивановский (2000) отмечает, что активными биостимулирующи-ми свойствами обладает биоинфунзин (препарат из левзей сафлоровидной). При введении его белым мышам и телятам получали достоверное увеличение показателей резистентности: общего белка и его фракций в сыворотке крови, лизоцимной, бактерицидной, нейтрофильной и антителообразующей активности клеток.
К иммуностимуляторам синтетического происхождения относятся серосодержащие препараты. Это, прежде всего, левамизол. М. Д. Машковский (1994) указывает, что левамизол, как иммуностимулирующий препарат, может быть эффективен в комплексной терапии различных заболеваний. Однако применять его необходимо с осторожностью и при доказанном уменьшений Т-иммунитета. Дозы препарата должны быть тщательно подобраны,так как при повышении доз возможно не иммуностимулирующее, а иммуноде-прессивное действие. А. М. Петров, Е. С. Воронин, М. М. Серых (1994) ус-тановили, что левамизол повышает у телят-трансплататов с 3-10-дневного возраста фагоцитарную активность нейтрофилов крови на 5-8% (р 0,01) и бактерицидную активность сыворотки крови - на 13,4-16,2% (р 0,01). A.M. Никитенко (1987), В. И. Шале с соавт. (1988), выявили, что применение го-могената тимуса и левамизола способствует повышению продуктивности телят при их выращивании в условиях промышленной технологии. В дальнейшем было создано большое число различных серосодержащих препаратов. Наибольший интерес среди них представляет имутол (диэтилдитиокарба-мит). Он обладает способностью активировать В- и Т-клетки, восстанавливает у старых животных иммунологичскую потенцию Т-лимфоцитов (А.М.Петров с соавт., 1999).
Описывая действие синтетических иммуностимулирующих препаратов, М. Д. Машковский (1994) отмечает, что натрий нуклеинат также обладает большой способностью стимулировать естественную резистентность организма: Т- и В-лимфоциты, фагоцитарную активность и, другие факторы неспецифической защиты.
Л.А. Бубенина с соавт. (1988) отмечают, что использование аквитала и фармазин-селенита позволяет повысить общую резистентность организма телят и улучшить их сохранность, интенсивность роста и развития.
Ф.Д.Онищук, А. А. Тайм асу ков, А.Б. Макрушин (2000) рекомендуют для усиления иммунного ответа, а также с целью профилактики болезней, вызванных секундарной микрофлорой применять лозеваль. Они отмечают исключительную эффективность данного препарата.
Хорошие результаты в повышении естественной резистентности по наблюдениям В.В. Семенютина с соавт. (1999) дает применение телятам фено-зана. С той же целью Р.Г. Камимуллина (2000) использовала гутамат натрия. Среди биологических иммуномодуляторов прежде всего нужно назвать липололисахаридные комплексы, выделенные из различных микроорганизмов (Е. coli, S. Tiphimurium, Вас. prodigiosum (Е. В. Ермольева, Г. Е. Вейсберг, 1976; А. В. Никитин, С. М. Миканит, 1983). Иммунорегулирую-щим действием обладают вакцина БЦЖ и выделенный из нее мурамилдипептид, Corinebacterium parvum, вирусы оспы овец и птиц. Иммуностимулирующее действие присуще не отдельным микроорганизмам или их структурным компонентам, но и некоторым продуктам их метаболизма. Так, на основе продуктов метаболизма особого штамма аэробных бактерий создан новый антидиаррейныи препарат с иммуностимулирующим действием бализ-В, в которого входит комплекс органических кислоти их лактоз (F.Floch, 1982; Ж. Г. Расулов, А. Я. Шурыгин, 1984).
Г.М.Ганеева с соавт. (2000) отмечает положительное влияние на активность иммунной системы крупного рогатого скота бруцеллезной искусственной вакцины (БИВ). Введение БИВ нормализует пониженную лизоцимную активность сыворотки крови, способствует увеличению уровня Т- и В-лимфоцитов, оказывает положительной воздействие на фагоцитарную активность.
Впервые пептидные биорегуляторы многоклеточных систем, названные впоследствии цитомединами, были выделены в 1971 году из гипоталамиче-ской области мозга, эпифиза, тимуса и сосудистой стенки. Позднее были получены: лимфалин (препарат из лимфатических узлов), лиелин и др. (Л.В. Филев с соавт., 1984; СИ. Лютинский, 1995: В.Г. Морозов, ГА. Рыжак, В.В. Малинин, 1999). Оказалось, что все цитомедины оказывают иммуномодули-рующее, противосвертывающее и противоопухолевое воздействия (В.Н. Анисимов и др., 1973; P. Jolles, A. Paraf, 1973; Y. Weinstein, K.L Meimon, 1976; B.N. Waksman, A.B. Wagshal, 1978; B.N. Waksman, 1979; M. Sela, E. Mozes, 1979; И.Ю. Фролов, 1993).
Выраженное иммунокоррегирующее влияние обнаружено у препаратов тимуса (Т-активин, тимотропин, тимозин, тималин, тимоген) (G.Goldstein; C.J.Lan, 1980; Т.А. Иванова, 1988; А.А.Новых, с соавт., 1991). Т-активин является иммуномодулирующим средством, оказывает влияние на Т-систему иммунитета и, опосредованно - на В-систему, восстанавливает нарушенную иммунологическую реактивность при первичных (врожденных) и вторичных приобретенных иммунодефицитных состояниях (В.И.Шале с соавт., 1988; Е.С. Воронин, Д.А.Дервишев, В.Н. Денисенко, 1991). Т-активин нормализует показатели относительного и абсолютного содержания Т-розеткообразующих клеток (Т-РОК), восстанавливает способность лимфоцитов периферической крови к бласттрансформации в присутствии мито-гена ФГА, регулирует синтез фактора, ингибирующего миграцию макрофагов, стимулирует иммунореактивность к специфическим антигенам, восстанавливает функциональную активность субпопуляции Т-лимфоцитов (в том числе Т-киллеров) и стволовых гемопоэтических клеток, а также стимулирует синтез иммунного интерферона и лимфокинов, увеличивает миграционную способность лейкоцитов и восстанавливает ряд показателей, характеризующих напряженность клеточного иммунитета.
Динамика гематологических и иммунных показателей у коз в разные периоды воспроизводительной функции
К настоящему моменту открытыми остаются вопросы, касающиеся иммунитета различных видов животных. Несмотря на тщательное изучение многочисленных доступных нам литературных источников, нормативные данные по иммунологическим показателям коз не были найдены. Немногие обнаруженные числовые характеристики имели спорадический характер и относились к конкретным экспериментальным ситуациям. Это дает нам основание считать, что исследованные иммунологические параметры коз за-аненской породы представляют определенную ценность. Кроме того, изменение иммунной реактивности этих животных в зависимости от физиологического состояния, в котором они пребывают, будь то охота, беременность или состояние покоя, могут послужить для объяснения тех или иных процессов, происходящих в организме животного. Взаимосвязь иммунной и репродуктивной систем не вызывает сомнений и подтверждается целым рядом крупных отечественных и зарубежных ученых. В наших исследованиях также была отмечена четкая взаимосвязь этих систем.
Действительно, чтобы соблюсти все условия, необходимые для имплантации и развития плода на 50 % генетически и, соответственно, имму-нологически чужеродного материнскому организму с одной стороны, но также поддержать и укрепить резистентность самки - с другой, организму приходится балансировать на тонкой грани между физиологической нормой и патологией. Именно эта способность - найти единственно правильный путь, умение не перейти четко выверенные границы невероятно запутанного сложнейшего механизма антагонизма и взаимодействия вызывает безмерное восхищение высочайшим мастерством и преклонение перед мудростью Природы. Изучение мельчайших аспектов этого механизма для того, чтобы научиться умело управлять происходящими процессами и направлять их в нужное русло, является одной из наших первейших задач. На основании результатов исследований можно сделать некоторые выводы о функциональной зависимости изучаемых систем.
Охота сопровождалась повышением уровня гемоглобина и эритроцитов, по сравнению с анэстральным периодом, но особенно высокие показатели пришлись на 24 часа после осеменения (время, когда происходят слияние гамет и первые деления зиготы) и во время родов. Видимо, это связано с усилением обмена веществ в обозначенные периоды.
Цветной показатель в течение всей беременности существенно не изменялся, оставаясь в пределах 1,14-1,17. Лишь в течение первых суток после осеменения произошло его некоторое увеличение до 1,24. Во время родов значение цветного показателя значительно снизилось - до 0,93, а за первые сутки послеродового периода возросло в 1,2 раза. Такая динамика цветного показателя, по-видимому, обусловлена тем, что вследствие кровопотери при родах происходит компенсаторный выброс незрелых эритроцитов из депо в кровяное русло. Однако вскоре включаются пусковые механизмы синтеза гемоглобина, и степень насыщения эритроцитов этим хромопротеином восстанавливается и даже повышается, что необходимо для нормального протекания восстановительного периода.
Определение общего количества лейкоцитов во время оплодотворения, беременности и после родов позволяет судить об активности защитных механизмов коз в каждый период размножения. Так, в результате проведенных исследований можно сделать вывод, что активация факторов резистентности происходила во время охоты и в начале беременности, а также за несколько дней до родов. Максимальным же количество лейкоцитов было во время и сразу после родов.
С возрастанием срока беременности наблюдалось повышение количества Т- и В-лимфоцитов. Причем, если с 2-го по 4-ый месяцы беременности концентрация указанных клеток увеличилась на 2,2 и 1,4 % соответственно, то за последний месяц увеличение составило 4,9 и 5,1 %. То есть, с развитием беременности возрастала потребность в регулирующих компонентах сложной цепи иммунитета, одним из основных звеньев которой являются лимфоциты. Процент Т-хелперов был невысок, а Т-супрессоров, наоборот, увеличен, но за неделю до родов упал на 15,5 %. Послеродовой период характеризовался значительным увеличением количества Т-лимфоцитов по сравнению с беременностью (в среднем на 30 %). При этом ИРИ, низкий во время беременности, также увеличился, так как возросло процентное содержание Т-хелперов и понизилось - Т-супрессоров. Уровень В-лимфоцитов снизился. Зная, что В-клетки ответственны за выработку антител, а Т-супрессоры тормозят этот процесс, можно заключить, что активность В-лимфоцитов во время беременности сдерживалась повышенным содержанием Т-супрессоров. Когда же исчезла причина сенсибилизации (беременность завершилась родами), исчезла и потребность в Т-супрессорах (оба показателя снизились).
К основным азотсодержащим компонентам крови относятся белок и свободные аминокислоты. Особое место белки занимают в осуществлении защитных реакций организма.
Падение уровня общего белка сыворотки крови во время охоты - на 9,7 % произошло, главным образом, из-за значительного уменьшения а- и (3-глобулиновых фракций. Содержание же альбуминов и у-глобулинов, наоборот, возросло, что свидетельствует об усилении обмена веществ и повышении активности защитных механизмов. Беременность характеризовалась несколько пониженным содержанием общего белка по сравнению с другими исследуемыми периодами. Это говорит о том, что для построения биомассы плода из организма матери заимствовалось значительное количество пластического материала. При этом было отмечено постепенное снижение количества общего белка с увеличением срока беременности, которое, однако не отразилось на такой важной в иммунологическом отношении фракции, как у-глобулины.
Определение оптимальных параметров применения БСМ для повышения резистентности коз
Препарат был изготовлен с помощью ряда последовательных операций, целью которых являлось расщепления крупных молекул неиропептидов на их более активные фрагменты, стимуляция образования в клетках ткани биологически активных энзимов, а также механической обработки и сублимации.
Очень важно, прежде чем рекомендовать препарат к применению на практике, наряду с растворимостью, стерильностью и другими факторами, определить его безвредность и биологическую активность.
Безвредность БСМ определяли на белых лабораторных мышах способом, рекомендованным И.А. Калашником (1990). Сухой препарат разводили дистиллированной водой до исходного объема и вводили подкожно в дозе 0,3 мл. За семидневный период наблюдения все мыши остались живы, следовательно, биостимулятор безвреден для живых организмов.
Для определения биологической активности разработали собственный метод (Ф.А. Мещеряков, П.В. Трубникова, 2002) который считаем простым, общедоступным, быстрым и, следовательно, удобным в использовании.
В основу метода мы положили способность пекарских дрожжей Sac-charomyces ellipsoides к быстрому росту и размножению и их высокую бродильную активность.
Прежде чем принять данную культуру как материал для теста, мы изучили ритмичность процессов жизнедеятельности микроорганизмов. Это было сделано для того, чтобы убедиться в целесообразности использования именно этой культуры, а также определить оптимальные временные рамки для постановки теста. Было выяснено, что газообразующую активность дрожжей можно представить в виде синусоидной кривой с постоянной амплитудой колебания в течение 24-48 часов. Каждый период этой синусоиды равен 12 часам, и, в свою очередь, делится на 3-4 подпериода. Динамика размножения клеток также имела волнообразный характер, при этом периоды положительного роста популяции чередовались с периодами отрицательного роста через каждые 1-2 часа. В первые 24-48 часов продуктивность положительного роста численности микроорганизмов превалировала над отрицательным, поэтому отмечалось увеличение популяции. Далее рост резко замедлялся и прекращался. Так как питательные вещества в среде содержались в избытке, гибель популяции мы объясняем накоплением продуктов метаболизма и смещением реакции среды в кислую сторону, несовместимую с жизнедеятельностью.
На основании полученных данных мы разработали метод определения активности биопрепаратов и в результате исследования БСМ установили, что его активность равна 20,4 Ед.
Для отработки дозы БСМ, которая не вызывала бы осложнений у животных и эффективно повышала защитные силы организма, способа введения и выяснения длительности действия препарата был поставлен ряд экспериментов.
Из испробованных способов введения препарата - per os, орошение слизистой ротовой полости и подкожные инъекции - предпочли последний. Выбор был обусловлен наилучшими гематологическими показателями у животных, которым стимулятор был введен этим способом, а также удобством применения и отсутствием потерь при введении.
Путем исследования показателей естественной резистентности у коз после введения им различных количеств БСМ была выяснена минимальная эффективная доза препарата, равная 1 мг/кг живой массы
Гистологическим исследование селезенки, печени и почек белых мышей, которым был введен БСМ в оптимальной дозе и превышающей ее в 100 раз установили следующее. У мышей, получивших дозу препарата, равную 1 мг/кг в исследуемых органах были обнаружены пролиферация клеток (особенно в селезенке), миграция лейкоцитов и умеренная артериальная гиперемия, свидетельствующие об активизации иммунных реакций. Введение БСМ в дозе 100 мг/кг вызывало дегенеративные изменения во внутренних органах
В результате исследования воздействия БСМ на организм беременных коз были разрешены некоторые вопросы.
Так, было выяснено, что стимуляция биопрепаратом оказывает положительное влияние на гематологические показатели у коз на всем протяжении беременности. Количество гемоглобина повышалось в пределах 8,22 %, эритроцитов - на 7-15,7 %, лейкоцитов - 4-9 %. Это говорит об улучшении газообмена, увеличении снабжения организма кислородом, что особенно важно во время беременности, так как полноценное клеточное дыхание зародыша является основным условием для развития нормального плода.
Повышение общего количества лейкоцитов в периферической крови в этот период свидетельствует об усилении клеточной защиты организма и повышении его устойчивости к заболеваниям.
Данные, полученные при определении показателей естественной резистентности при введении БСМ, свидетельствуют об усилении функциональной активности этого звена иммунитета у беременных коз. Так бактерицидная активность сыворотки крови повышалась в среднем на 10 %, лизоцимная активность - на 9 %. Фагоцитарная активность в опытной группе была выше, чем в контрольной на 8 %, а интенсивность фагоцитоза - на 7 % .
Бактерицидная активность является очень емким показателем. Так как бактерицидность крови определяется множеством компонентов, таких как пропердиновая, комплементарная системы и другие, мы можем говорить, что исследуемый препарат способен стимулировать активность данных факторов резистентности.
