Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Современные представления о процессах расщепления и всасывания липидов в желудочно-кишечном тракте и их регуляция на нейрогуморальном и клеточном уровнях 11
1.2. Метаболизм липидов в органах и тканях энтерогепатической системы. Роль энтероцитов 25
1.3.Возможные механизмы формирования холецистита и образования холестериновых камней, вызванные изменением оттока желчи 33
1.4.Пути немедикаментозной и фармакологической коррекции последствий изменения оттока желчи в физиологических условиях 44
Глава 2. Материалы и методы исследования 50
2.1. Схемы проведенных экспериментов 50
2.2. Методы исследований 52
2.2.1.Физиологические методы исследований состояния мозга и сердца 52
2.2.1.1. Регистрация электроэнцефалограмм 52
2.2.1.2. Регистрация электрокардиограмм 53
2.2.2. Методы изучения липидных фракций 53
2.2.2.1. Выделение липидов из биологических сред. Тонкослойная хроматография, денситометрия и спектрофотометрия фосфолипидов и нейтральных липидов 53
2.2.2.2. Газожидкостная хроматография жирных кислот липидов органов и тканей 56
2.2.3. Гистологический метод исследования желчного пузыря 57
2.2.4. Статистические методы обработки данных 57
Глава 3. Сравнительная оценка состава липидных фракций в органах и тканях энтерогепатической системы у кроликов в условиях физиологической нормы и экспериментально вызванного изменения оттока желчи из желчного пузыря 60
3.1 Особенности состава липидов у кроликов в условиях физиологической нормы 60
3.2. Состав липидов у кроликов в притекающей и оттекающей от тонкой кишки крови, пузырной желчи и энтероцитов при измененном оттоке желчи 69
Глава 4. Влияние растительных композиций на показатели липидных фракций органов и тканей энтерогепатической системы при измененном потоке желчи 86
4.1. Лекарственное сырье и биохимический состав фитокомпозиций 86
4.2. Состав липидных фракций крови, желчи и энтероцитов при использовании сбора лекарственных растений №142 88
4.3. Характеристика липидов при использовании галеновой фитокомпозиций 100
Глава 5. Физиологические эффекты применения растительных композиций 107
5.1 Влияние галеновой фитокомпозиций на показатели центральной нервной и сердечно-сосудистой систем у кошек и кроликов в норме и при измененном оттоке желчи 107
5.2. Морфо-функциональные характеристики желчного пузыря у кроликов 115
Заключение 123
Практические рекрмендации 126
Выводы 127
Список литературы 130
- Современные представления о процессах расщепления и всасывания липидов в желудочно-кишечном тракте и их регуляция на нейрогуморальном и клеточном уровнях
- Выделение липидов из биологических сред. Тонкослойная хроматография, денситометрия и спектрофотометрия фосфолипидов и нейтральных липидов
- Особенности состава липидов у кроликов в условиях физиологической нормы
- Состав липидных фракций крови, желчи и энтероцитов при использовании сбора лекарственных растений №142
Введение к работе
Проблема всасывания, транспорта питательных веществ из просвета желудочно-кишечного тракта в кровь и лимфу, несмотря на многочисленные исследования в этой области до сих пор остаётся весьма актуальной. В понимании закономерностей и механизма всасывания имеется ещё много нерешенных вопросов, требующих дальнейшего изучения (40). Это в первую очередь касается физиологии всасывания пищевых веществ в тонкой кишке (33,159).
Достаточно распространенное явление в популяции - структурное изменение желчного пузыря с его перегибом. Подобная аномалия зачастую сопровождаются нарушением оттока желчи, ее состава, что в ряде случаев видоизменяет липидный обмен, таким образом, что могут протекать процессы, способствующие развитию широко распространенных заболеваний, к числу которых относят в первую очередь холелитиаз (37). Эта проблема требует дальнейшего изучения физиологических и патологических механизмов, лежащих в основе холелитиаза и изменяющих биохимический состава липидов и их обмен в органах и тканях энтерогепатической системы (ЭГС)(15, 142).
Изменения количественного и качественного состава липидов в энтерогепатической циркуляции (ЭГЦ), появление и накопление ряда липидных фракций, отсутствующих или определяемых в минимальных количествах в желчи при физиологических условиях, отмечается при экспериментальном воспроизведении хронического холецистита и характерны при заболеваниях желчевыводящих путей (13).
Кроме того, в экспериментальных работах показано, что для раскрытия механизмов формирования биохимических изменений в желчи требуется комплексный подход в изучении метаболического статуса всех органов, объединенных ЭГЦ. В связи с этим необходимо учитывать, как подобные изменения отражаются на общем состоянии ведущих систем организма. Центральная нервная система (ЦНС), регулирующая определенные функции печени, желчного пузыря, желудочно-кишечного тракта, наряду с деятельностью сердечно-сосудистой системы (ССС), обеспечивает физиологический статус организма и требует анализа этих регуляторных систем.
В настоящее время при нарушениях желчного оттока применяются желчегонные препараты, такие как аллохол, холензим, холосас, одестон, растительные сборы - препараты галстена, гепабена, а также ограниченное число препаратов, влияющих на липидный обмен, например урсофальк, хенодиол, хенофальк, литофальк (91). Вместе с тем, ведется активный поиск и разработка препаратов, способных оказывать комплексный (желчегонный, противовоспалительный и регулирующий) эффект. Указанным требованиям соответствует предложенная фитокомпозиция из лекарственных трав, произрастающих в Нижегородской области. Для реализации вопроса об оценке эффективности и безопасности данной композиции, направленной на коррекцию липидного обмена при реальных последствиях нарушенного оттока желчи из желчного пузыря, приводящих к различным гастроэнтерологическим заболеваниям, в первую очередь ЖКБ, необходимо изучать влияние длительного ежедневного применения растворов биологически активных соединений на состояние сердечно-сосудистой и центральной нервной систем в эксперименте.
Цель работы
Исследовать липидный обмен тканей энтерогепатической системы в условиях измененного оттока желчи и корректирующего воздействия фитокомпозиции.
При выполнении работы были поставлены следующие задачи:
Изучить состав липидных фракций энтероцитов, пузырной желчи, и крови притекающей и оттекающей от кишечника в норме и при измененном оттоке желчи в условиях действия фитокомпозиции.
Определить состав и идентифицировать органические компоненты предложенной фитокомпозиции.
Исследовать гистологическую структуру желчного пузыря при нарушении оттока желчи и воздействии фитокомпозиции.
Произвести оценку физиологического статуса организма экспериментальных животных по показателям электрической активности головного мозга и сердца при действии фитокомпозиции.
Новизна научных исследований
В работе впервые установлены особенности специфичного формирования липидных фракций энтероцитов, притекающей и оттекающей от кишечника крови в условиях изменения оттока желчи, приводящего к холелитиазу при применении фитокомпозиции.
Определён биохимический состав фитокомпозиции и экспериментально обоснованы дозы её применения для коррекции липидного обмена в условиях измененного оттока желчи.
Показано индифферентное влияние фитокомпозиции на физиологический статус организма по данным электрической активности головного мозга и сердца подопытных животных.
Теоретическая и практическая значимость работы
Получены экспериментальные данные, углубляющие представление о механизмах всасывания липидов в тонком кишечнике и энтерогепатической циркуляции в целом. Изучена роль энтероцитов в формировании липидных комплексов оттекающей от кишечника крови в условиях нормы и нарушения оттока желчи из желчного пузыря. На основании данных морфологических и физиологических исследований установлено, что применение предложенной фитокомпозиции приводило к частичному восстановлению структуры желчного пузыря. Экспериментально доказана эффективность применения предложенной фитокомпозиции и обосновано создание на её базе препарата для профилактики и лечения заболеваний, связанных с нарушением оттока желчи из желчного пузыря (холецистит, желчнокаменной болезни и т.п.).
На защиту выносятся следующие основные положения диссертации
Изменения оттока желчи, приводящие к калькулёзному холециститу в эксперименте на кроликах сопровождаются модификациями состава липидных фракций: накоплением лизофосфатидилхолина, эфиров холестерина, арахидоновой кислоты; снижением содержания фосфатидилхолина и интегрального показателя К (соотношение уровней пальмитиновой и олеиновой кислот) в энтероцитах; уменьшением уровня свободных жирных кислот, фосфатидилхолина и показателя К в притекающей к кишечнику и оттекающей от кишечника крови, а также увеличением количества лизофосфатидилхолина, триглицеринов, эфиров холестерина и арахидоновой кислоты и уменьшением содержания свободных жирных кислот, фосфатидилхолина и показателя К в составе липидных фракций пузырной желчи.
Применение фитокомпозиции при экспериментальном холестазе приводит к нормализации липидного обмена, к восстановлению контрольных показателей свободных жирных кислот, лизофосфатидилхолина, эфиров холестерина и показателя К в энтероцитах; свободных жирных кислот, фосфатидилхолина, лизофосфатидилхолина, показателя К и арахидоновой кислоты в притекающей к кишечнику и оттекающей от кишечника крови, а также к повышению уровней свободных жирных кислот, фосфатидилхолина, показателя К и снижению уровней триглицеринов, эфиров холестерина и арахидоновой кислоты в пузырной желчи.
Физиологическоий статус организма, оценивавшийся по результатам показателей электокардиографии и электроэнцефалографии при использовании фитокомпозиции оставался неизменным.
Апробация диссертации
Основные результаты проведенных исследований были представлены на межгородской конференции молодых учёных (Санкт-Петербург, 2002 г), на шестой нижегородской сессии молодых учёных (Нижний Новгород, 2001г.), 1-й Всероссийской университетской научно-практической конференции молодых учёных и студентов по медицине (Тула, 2002г.), Шестой Пущинской школе-конференции молодых учёных «БИОЛОГИЯ -НАУКА XXI ВЕКА» (Пущино, 2002 г.).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.
Современные представления о процессах расщепления и всасывания липидов в желудочно-кишечном тракте и их регуляция на нейрогуморальном и клеточном уровнях
Липиды являются важной составной частью пищи. Они служат источником энергии, придают пище вкус и обеспечивают чувство сытости в процессе ее переваривания (40).
Классические исследования по изучению о процессах переваривания и всасывания липидов в желудочно-кишечном тракте проведены отечественными и зарубежными исследователями (35, 41,62,84, 113, 126).
Основные липиды, поступающие с пищей, относятся к триацилглицеридам (ТГ), фосфолипидам (ФЛ) и холестерину (ХС). Подавляющая часть (более 85 %) ТГ подвергается расщеплению в желудочно-кишечном тракте. В полости рта ТГ не подвергаются никаким изменениям, так как слюна не содержит расщепляющих их ферментов. С желудочным соком выделяется липаза, получившая название желудочной, однако роль ее в гидролизе пищевых ТГ невелика. Поэтому неэмульгированные ТГ, составляющие основную массу пищевого жира, проходят через желудок без особых изменений. Несмотря на то, что расщепление ТГ в желудке взрослого человека невелико, оно в какой-то степени облегчает последующее переваривание их в кишечном тракте. Даже незначительное по объему расщепление ТГ в желудке приводит к появлению свободных жирных кислот (СЖК), которые, не подвергаясь всасыванию в желудке, поступают в кишечный тракт и способствуют там эмульгированию жиров, облегчая, таким образом, воздействие на них липазы панкреатического сока. Кроме того, появление длинноцепочечных СЖК в 12-перстной кишке стимулирует секрецию панкреатической липазы. Основная масса пищевых ТГ подвергается расщеплению в верхних отделах тонкой кишки при действии липазы панкреатического сока. Панкреатическая липаза (КФ 3.1.1.3) является гликопротеидом. Она расщепляет ТГ, находящиеся в эмульгированном состоянии (действие ее на растворенные субстраты значительно слабее). Фермент катализирует гидролиз эфирных связей в а-, а -положениях, в результате чего образуется 0-МГ и освобождаются две частицы СЖК. Это отличает панкреатическую липазу от лингвальной, преджелудочной и желудочной липаз, при действии которых освобождается только одна СЖК. Панкреатическая липаза, как и другие пищеварительные ферменты (пепсин, трипсин, химотрипсин), поступает в верхний отдел тонкой кишки в виде неактивной пролипазы. Превращение пролипазы в активную липазу происходит при участии желчных кислот и еще одного белка панкреатического сока — колипазы (135).
Итак, основные продукты расщепления ТГ при действии панкреатической липазы — (3-МГ и СЖК. На скорость катализируемого липазой гидролиза ТГ не оказывают существенного влияния ни степень ненасыщенности СЖК, ни длина ее цепи. Во время триптического гидролиза проколипазы освобождается пентапептид, названный энтеростатином, функция которого еще до конца не выяснена, но установлено, что, всасываясь в кровь, он угнетает аппетит. В панкреатическом соке, наряду с липазой, содержится моноглицеридная изомераза — фермент, катализирующий внутримолекулярный перенос ацила из Р-положения МГ в а-положение. В процессе переваривания пищевых жиров при участии этого фермента примерно 1/3 (3-МГ превращается в а-МГ. Поскольку эфирная связь в Р-положении глицерида чувствительна к действию панкреатической липазы, последняя расщепляет большую часть а-МГ до конечных продуктов — глицерина и СЖК Меньшая часть а-МГ успевает всосаться в стенку тонкой кишки, минуя воздействие со стороны липазы (130). Как уже отмечалось, липаза действует на эмульгированные жиры. В эмульгировании их принимает участие ряд факторов. Наиболее сильным эмульгирующим действием обладают желчные кислоты, поступающие в 12-перстную кишку с желчью в виде конъюгатов с глицином или таурином: гликохолевая (ГХ), таурохолевая (ТХ), гликохенодезоксихолевая (ГХДХ), таурохено-дезоксихолевая кислоты (ТХДХ). Отношение глициновых конъюгатов к тауриновым составляет примерно 3:1 (128).
В 12-перстную кишку вместе с пищевой массой заносится некоторое количество желудочного сока, содержащего соляную кислоту, которая нейтрализуется в основном бикарбонатами, содержащимися в панкреатическом соке и желчи. Образующиеся при разложении бикарбонатов пузырьки углекислого газа разрыхляют пищевую кашицу и способствуют более полному перемешиванию ее с пищеварительными соками. Одновременно начинается эмульгирование липидов. Соли желчных кислот адсорбируются в присутствии небольших количеств СЖК и МГ на поверхности капелек жира в виде тончайшей пленки, препятствующей слиянию этих капелек. Кроме того, соли желчных кислот, уменьшая поверхностное натяжение на поверхности раздела двух фаз — воды и жира, способствуют расчленению больших капелек жира на меньшие. Создаются условия для образования тонкой и устойчивой жировой эмульсии с размером частиц 0,5 мкм и меньше. В результате эмульгирования резко увеличивается поверхность жиров, что облегчает взаимодействие их с липазой, т. е. ускоряет ферментативный гидролиз (113).
Подавляющая часть ФЛ содержимого тонкой кишки приходится на фосфатидилхолин (ФХ), основная масса которого поступает в кишечник с желчью (11—12 г/сут) и меньшая (1—2 г/сут)—с пищей. Столь значительная разница в количествах экзогенных и эндогенных ФЛ, находящихся в тонкой кишке, послужила основанием для высказывания двух точек зрениях относительно дальнейшей их судьбы. Согласно одной из них (100, 165), и те, и другие ФЛ подвергаются в кишечном тракте атаке со стороны фосфолипазы А2 катализирующей гидролиз сложноэфирной связи в (3-положении ФЛ. Фосфолипаза А2 выделяется в кишечный тракт с панкреатическим соком в виде неактивного проэнзима и при воздействии на нее трипсина и ионов кальция превращается в активный энзим.
В результате катализируемой фосфолипазой А2 реакции глицеро-ФЛ расщепляются с образованием лизофосфолипида (лизо-ФЛ) и СЖК. Для протекания этой реакции требуются соли желчных кислот. Таким образом, согласно приведенной точке зрения, судьба экзогенных и эндогенных ФЛ одна и та же (187). Авторы другой точки зрения (101) считают, что ФЛ «желчного» (более точно, печеночного) происхождения, в отличие от пищевых ФЛ, не подвергаются воздействию фосфолипазы А2 При этом подчеркивается, что функция желчных ФЛ исключительно связана с гепатоэнтеральной циркуляцией желчи: с желчью они поступают в кишечный тракт, с желчными кислотами участвуют в мицеллярной солюбилизации липидов и вместе с ними же возвращаются в печень. Таким образом, существуют как бы два пула ФЛ в кишечнике — «желчный», защищенный от действия фосфолипазы, и «пищевой», подверженный ее действию. Пока мы не можем объяснить причину существования двух пулов ФЛ и их различное отношение к действию фосфолипазы (97, 192).
Образующийся при действии фосфолипазы А2 лизо-ФЛ является хорошим поверхностно-активным веществом, и поэтому он способствует эмульгированию пищевых жиров и образованию смешанных жировых мицелл. Вместе с тем какая-то часть лизо-ФЛ может подвергаться расщеплению при действии другого фермента панкреатического сока — лизофосфолипазы (КФ 3.1.1.5), катализирующей гидролиз сложноэфирной связи в а-положении. В результате из лизо-ФХ освобождается последняя частица СЖК и образуется глицерилфосфохолин, который хорошо растворяется в водной среде и всасывается из тонкой кишки в кровь. Из других представителей ФЛ сфингомиелин всасывается в тонкой кишке в виде интактных молекул (23, 193).
Выделение липидов из биологических сред. Тонкослойная хроматография, денситометрия и спектрофотометрия фосфолипидов и нейтральных липидов
В работе проведен анализ следующих тканей энтерогепатической системы: энтероцитов, ПКК, ОКК и пузырной желчи. У животных, взятых в опыт утром, натощак после вскрытия брюшной полости шприцами, предварительно обработанными раствором гепарина, из воротной вены забирали ОКК, из дуги аорты - ПКК. Затем вскрывали желчный пузырь и собирали его содержимое. Энтероциты отделяли от других клеток тонкого кишечника путём соскабливания после предварительной инкубации в термостате при 37С в течение 40 мин. в специальном диссоциирующем растворе. Получение изолированных клеток проводили по методу Н.П.Канаевой и соавторов (38), используя комплексен ЭДТА и механическое воздействие. Диссоциирующая среда содержала 250мМ сахарозы, 5 мМ КС1, 0,4 мМ Na2HP04, 2 мМ дитиотрейтола, 1 мМ ЭДТА, 0,8 мМ MgCl2, 1% альбумин при рН 7,4. Для исследований использовали от 0,1 до 1,0 г осадка энтероцитов. Клетки перетирали в смеси в стеклянном гомогенизаторе. Плазму крови отбирали после центрифугирования при 4000 об/мин в течение 20мин. Для экстракции липидов из всех биосред использовали смесь хлороформ : метанол /2:1, по объёму/, предложенную Folch et al (140). Липиды из плазмы крови /4,0-10,0мл/ и желчи /2,0-20,0 мл/ экстрагировали дважды путём интенсивного встряхивания в колбах на 250 мл. Соотношение исходной биосреды и смеси растворителей составляло 1:20 по объёму. Органическую часть отделяли в воронках, промывали последовательно 0,74% раствором КС1, затем дистилированной водой /1:10/ и концентрировали упариванием в колбах на 100 мл до объёма 2,5-3,0 мл, в которых проводили упаривание до объёма 0,25-0,50 мл. Затем проводили тонкослойную хроматографию /ТСХ/ на силикагеле 5/40 мкм + 13% гипса, нанесённом слоем 0,8-1,2 мм на стеклянные пластины размером 18x30 см. С этой целью из органической вытяжки микрошприцом на 50 мкл на силикагель в несколько приёмов наносились полосы размером 0,5x1,5 см на расстоянии 2 см от краёв и друг друга. Объём нанесённой жидкости варьировал в зависимости от объёма концентрированной липидной вытяжки и составлял, например, для 0,5 г сырой ткани - 25 мкл, для 4 мл жидкости -100 мкл. Разделение липидов проводили в стеклянных ёмкостях размером 17x22x26 см, размещая в них пластины под углом в 60С. Фракции ФЛ получали после хроматографирования дважды в одном направлении в системе хлороформ : метанол : вода /65:24:4, по объёму/. Фронт растворителя фиксировали на расстоянии 2 см до верха пластины. Между двумя последующими разделениями пластины сушили 15-20 мин. при 30С. Пятна ФЛ с помощью окраски липидов смесью К2Сг20з в 80% H2S04 или под парами йода выявляли в эксикаторе с кристаллическим йодом. ФЛ располагались на пластинках в следующем порядке от места старта : ФТИ, лизоФХ, СФ, ФХ и ФТЭА, дифосфатидилглицерины + ФТК и НЛ. Идентификацию ФЛ проводили на основании хроматографической подвижности коммерческого ФХ. Фракции НЛ получали после хроматографирования в двух системах органических растворителей: 1-я -диэтиловый эфир:бензол:96% этиловый спирт:ледяная :уксусная кислота /40:50:2:0,2, по объёму/, 2-я - гексан:диэтиловый эфир /94:6, по объёму/. В первой системе фронт растворителя доводится до 9-10 см от верха пластины. Пластину сушат в термостате при 37С до исчезновения запаха кислоты и проводят хроматографирование во второй системе, которая позволяет отделить эфиры холестерина от триацилглицеринов. В результате отмечается следующая последовательность расположения НЛ на пластине от места старта: МГ, СЖК, ХС, 1,2-диацилглицерины, 1,3-диацилглицерины, ТГ и ЭХ. При указанных условиях хроматографии на старте остаются ФЛ. Количественная оценка НЛ и ФЛ проводилась с использованием регистрирующего микрофотометра ИФО-451 при максимальном светопотоке, сооответствующих плотности пятен клиньев /1,2; 1,8 и 2,2/, скорости движения ленты самописца - 200 мм/час, путём сравнивания площадей пятен липидов и стандартов: смеси СЖК из 10 коммерческих жирных кислот, ХС, ФХ в концентрациях от 50мкг до 1,0 мг и выше.
Определение количественного и качественного состав желчных кислот в биосредах проводили с помощью восходящей хроматографии в тонком слое на пластинках "Силуфол"(31), используя метод экстракции и очистки, предложенный А.Ф.Блюгером с соавт.(8).
Для выполнения ГЖХ жирных кислот после проведения ТСХ каждую конкретную фракцию липида, взятого в зоне, параллельной окрашенному пятну, соскабливали с силикагелем в пробирки ёмкостью на 15 мл со шлифом. Далее получали термостабильные производные - метиловые эфиры жирных кислот двумя способами. 1-й - инкубирование в течение 60 мин. при 80С с 5 мл 5% раствором H2SO4 в метаноле или в течение 12-16 часов при комнатной температуре. 2-й способ - с использованием диазометана. С этой целью использовали 0,5-2,0 мл диазометана, получаемого на выходе из лабораторного холодильника в результате двухэтапной реакции: смесь гидрозингидрата /1,0 мл/, КОН /2,5 г/ и этилового (метилового) спирта /8,0 мл/ в колбе, соединенной с холодильником, воронкой и газоотводной трубкой, через которую пропускается азот через смесь, объединяют с хлороформом /1,5-4,0 мл/ и конденсируют образовавшийся газ - диазометан - в приемную колбу. Метилирование проб в этом случае заканчивается через 15 мин после термостатирования при 37С. Метиловые эфиры жирных кислот экстрагировали из реакционной среды гексаном /8,0-12,0 мл/, который упаривали до 0,02-0,50 мл в зависимости от количества выделяемых фракций липидов. Для анализа использовали газовый хроматограф «Цвет-ПО» с ионизационно-пламенным детектором. Разделение кислот проводили в стеклянных колонках размером 200x0,35 см, заполненных хроматоном N-AW-,UMCS /0125-0,160 мм/ + 4,5 полидиэтиленгликольсукцинат при следующих условиях анализа: температура испарителя 200-220С, термостата колонок - в изотермическом режиме - 185С, в режиме программирования температур от 75 до 185С с интервалом 60 мин. Поток газа-носителя (азот) не превышал 30 мл/мин. Для изучения эффективности колонки и для количественного анализа использовали искусственно приготовленные смеси метиловых эфиров 17 жирных кислот. Для построения калибровочных графиков анализировали характеристики каждой из кислот.
Особенности состава липидов у кроликов в условиях физиологической нормы
Изучение состава липидов разных классов, в том числе жирных кислот в составе в НЛ, ФЛ и СФМ органов и тканей, обеспечивающих ЭГЦ липидов, являются принципиально важным при рассмотрении вопроса о формировании липидных комплексов, способных к отложению в кровеносных сосудах и желчных протоках, в слизистой желчного пузыря, энтероцитах и клетках других органов при их холестеринизации (61).
Нами изучались уровни основных фракций НЛ, СФМ и ФЛ, спектры составляющих их жирных кислот, количественный и качественный состав желчных кислот в системе: желчь - ПКК - энтероциты - ОКК у кроликов в норме (контроль), а также у кроликов, у которых развивалась КФХ, т.е. фиксировались ХЖК в желчном пузыре.
Уровни и состав липидов изучаемых органов и тканей 10 контрольных кроликов характеризуются определенной специфичностью. Концентрации суммарных НЛ в ПКК и ОКК не различаются и составляют 3,19±0,29 мМ/л и 2,29±0,33 мМ/л (р 0,001) соответственно. При этом содержание СЖК в ОКК меньше (0,08±0,01 мМ/л), чем в ПКК (0,27±0,02 мМ/л, р 0,001). Более высокий уровень СЖК, поступающих из миокарда, объясняется, по-видимому, тем обстоятельством, что в кардиомицитах, использующих данную группу кислот в качестве основного энергетического субстрата, происходит постоянный гидролиз липидов (172). По нашим данным у кроликов в сердце на долю СЖК приходится 3,61-0,29% из состава НЛ (1,17±0,09 мк/г) ткани, тогда как в энтероцитах их относительное содержание не превышает 1%.
Уровни ТГ, ЭХ и ХС (в мМ/л) в данных двух видах крови не различаются: 0,84±0,05; 1,31±0,15; 0,59±0,05 - в ПКК и 0,93±0,04; 1,23±0,07 и 0,51±0,08 - в ОКК (р 0,001 для всех 3-х сравниваемых фракций). Соотношение между количеством ЭХ и ХС составляет 2,46±0,33 в ПКК и 2,9±0,68 в ОКК (р 0,001).Болыную часть среди НЛ занимают ТГ - 38,0±1,4% в ПКК и 48,6±2,0 в ОКК (р 0,05), среди ФЛ - ФХ: 58,0±3,9% в ПКК и 64,5±2,5% - в ОКК (р 0,05). Количество суммарных ФЛ и СФМ в ПКК 1,11±0,06 мМ/л и в СКК - 1,05±0,09 мМ/л. не различаются (р 0,05), аналогично состоянию уровней ТГ в ПКК - 0,84±0,05 мМ/л и в ОКК -0,93±0,04 мМ/л (р 0,05). Содержание ФЛ также не подвержено изменению в анализируемых двух видах крови. Уровень СФМ в ОКК меньше -0,09±0,01 мМ/л, чем в ПКК - 0,15±0,02 мМ/л (р 0,05), потому что данный сфинголипид задерживается клетками слизистой кишечника. Соотношение между уровнями ФХ и лизоФХ, фракциями взаимообменивающимися жирными кислотами, составляет в ПКК 4,5±0,4 и в ОКК -5,0±0,3, а между количеством ФХ и ФЭА - 4,8±0,3 в ПКК и 6,1±0,4 в ОКК (табл.2).
Жирнокислотный состав индивидуальных фракций липидов в исследуемых объектах крови кроликов более, чем на 90% представлен суммой 5 кислот, относительное содержание которых в разных фракциях варьирует в следующих пределах: пальмитиновая (16:0) кислота -30,7±54,9%, стеариновая (18:0) - 6,4±26,1%, олеиновая (18:1) -8,0±20,6%, линолевая (18:2) - 1,0±4,6% и арахидоновая (20:4) 2,51- -12,09%. Выявлено отсутствие или минимальное содержание кислот серии (18:3, 20:3, 20:5, 22:5), что отмечено и другими авторами (318). В ОКК по сравнению с ПКК у кроликов содержится повышенное количество 18:0 кислоты в СФМ (17,4±1,35% и 10,8±1,46%, р 0,005, соответственно) и сниженное - 18:1 кислоты во фракциях СЖК 1/11,9±1,73% и 17,6±1,36%, р 0,001 соответственно и ЭХ (12,7±1,4 и 20,6±1,54%, р 0,001 соответственно). Содержание подавляющего большинства жирных кислот в индивидуальных фракциях НЛ, а также СФМ и ФЛ в ПКК и ОКК варьирует в пределах границ достоверности. Среди сфинголипидов выделялась фракция СФМ, в которой в составе жирных кислот в ОКК, по сравнению с составом кислот в СФМ ПКК, определяется больше 16:0 кислоты (49,5±2,1% и 43,1±1,98%, р 0,05 соответственно) и 20:4 кислоты (0,8±0,14% и 0,34±0,06%, р 0,05, соответственно).
Между содержанием суммарных желчных кислот (в мкМ/л в ПКК 1±16,4±1,7 и ОКК - 16,2±2,0 нет различия (р 0,001). В крови ДХ кислота по 3,0±1,0 и в ПКК и в ОКК, а их конъюгаты: с таурином - тауроДХ кислота по 2,0±0,2 и в ПКК и в ОКК), ТХ - 2,3±0,3 в ПКК и 2,3±1,0 в ОКК и с глицином: гликоДХ кислота (2,8±0,2 - в ПКК и 3,0±0,9 - в ОКК), гликохолевая - (3,3±0,1 в ПКК и 3,5±1,0 в ОКК). Содержание тригидрооксилированвых кислот (3-ОН) выше, чем дигидроксилированных кислот (2-ОН). Соотношение между глико- и тауроконъюгатами в двух крови постоянно и составляет 1,08±0,08 в ПКК и 1,11±0,18в ОКК,р 0,001.
Таким образом, у кроликов, взятых в опыт натощак, в целом поддерживается относительно постоянный баланс состава липидов, а постоянство жирнокислотных спектров в липидах ПКК и ОКК, обусловлено физиологическим обеспечением в тонкой кишке процесса всасывания данных липидов в кровь и лимфу.
Клетки слизистой тонкой кишки кроликов включают в состав НЛ (16,38±2,2 мг/г ткани) преимущественно ТГ (51,5±4,3%), ДГ (21,82±2,34%), холестерин (14,2±1,8%), а среди ФЛ (20,2±1,6 мг/г ткани) - ФХ (54,0±2,8%) и ФЭА (24,1±1,1). Количество СФМ составляет 12,8±1,3%. Соотношение между содержанием ЭХ (2,19±0,3 мг/г) и ХС (0,16±0,03 мг/г) является специфическим для данной ткани (1:11).
Состав липидных фракций крови, желчи и энтероцитов при использовании сбора лекарственных растений №142
Для коррекции липидного обмена, показатели которого специфически изменяются в наших опытах в результате экспериментальной задержки оттока желчи у кроликов, вследствие чего развивается холецистит и в ряде случаев его каменная форма, нами были апробированы две фитокомпозиций:
1-я фитокомпозиция представляет собой сбор лекарственных растений №142: чистотел большой (трава), одуванчик лекарственный (корни), горец птичий (трава), зверобой продырявленный (трава), фиалка трехцветная (трава), анис обыкновенный (плоды). Для коррекции липидного обмена сбор №142 применялся в виде отвара.
2-я фитокомпозиция включает четыре лекарственных растения: тысячелистник (Ahilleafolium) , репейничек аптечный (Agvimania rupatoria) хвощ полевой (Equsetum arvense) и пустырник пятилопастной (Leonums cardiaca) в соответствии 1:2:1:1, по весовому обьему в виде экстракта 70 % водного спирта (галеновая фитокомпозиция).
Проведенные испытания данной 2-й фитокомпозиций, анализ литературы о биологических эффектах компонентов каждого растения, и изучение ее количественного и качественного состава (75) позволили заключить, что композиция относится к средствам, обладающим комплексным воздействием на ЭГС в целом. Ее необходимо рассматривать в качестве гепатопротектора. Она усиливает образование желчи и синтез желчных кислот, т.к. содержит компоненты, аналогичные входящим в состав цветков бессмертника, флакулина, конвафлавина и других средств растительного происхождения, относящихся к 1-й группе желчегонных средств - холеретиков или холесекретиков.
Механизм действия комбинированный, обусловленный с одной стороны рефлексами со слизистой оболочкой кишечника, что вызвано влиянием эфирных масел (тысячелистник) и горечи, главным образом леонурина (пустырник), а также воздействием на секреторную функцию паренхимы печени. Гепатоциты увеличивают количество желчи, повышая осмотический градиент в контактах желчь-кровь. Одновременно с увеличением оттока желчи увеличивается содержание желчных кислот, что связано с увеличением их доли при синтезе из ХС, пул которого меняется под действием Р-ситостерина галеновой фитокомпозиции. Увеличение оттока желчи затрудняет литогенез, снижает возможность выпадения в осадок ХС и других липидов в комплексе с компонентами слизистой желчного пузыря и неорганическими солями, что препятствует формированию ХЖК. С другой стороны, галеновая фитокомпозиция обладает спазмолитическим действием - понижает тонус желчных путей и сфинктера Одди, обеспечивая холекинетическое действие, аналогично конвафлавину, т.к. содержит более 20% флавоноидов.
Наряду с вышеуказанными эффектами галеновая фитокомпозиция обладает противовоспалительным (аналогично циквалону) и антибактериальным (аналогично никодину) действиями, т.к. в составе содержит репейничек аптечный (утвержден ФК МЗ РФ для производства галеновых препаратов), обладающий вяжущим, закрепляющим и желчегонным эффектами, важными при воспалениях желчного пузыря, т.к. наряду с флавоноидами содержит: углеводы (глюкоза,фруктоза, сахароза, полисахариды - 19,5%), органические кислоты (щавелевую, яблочную, винная, лимонная, хинная - 2,8% ), стерины, азотсодержащие соединения, фенолкарбоновые кислоты, кумарины, дубильные вещества (1,5-9,0%), катехины, высшие алтфатические спирты, воска, жирные кислоты, витамин С.
Противовоспалительное, дезинфицирующее и кровоостанавливающее действие галеновой фитокомпозициии связано кроме того включением в его состав хвоща полевого, содержащего алкалоиды (палюстрин, 3-метоксипиридин и никотин), антрахиноны, ситостерин, диметилсульфон, флавоноиды (эквизетрин, лютеолин-7-гликозид, лютеолин-5-гликозид, лютеолин, изоквецитрин, кемпферол-3,7-диглюкозид, кемпферол-7- диглюкозид), витамин С (30-190 мг%), каротин (4,7%), дубильные вещества, органические кислоты (до 2,5%) -щавелевую, яблочную, аскорбиновую и кремневую, смолы, горечи, эфирные масла и каротина. При этом особое внимание оказывает малоизученный сапонин - эквизетрин (1,0-5,0%),
Характерная хроматограмма галеновой фитокомпозиции для органических кислот представлена на рис.2. Условное название данной фитокомпозиции для оформления в качестве лекарственного препарата -Эквален
С целью коррекции состава липидов и в первую очередь их важнейших составляющих жирных кислот, циркулирующих в ЭГС у кроликов с КФХ, имеющих патологический дефицит незаменимых жирных кислот, нами применялась фитокомпозиция в виде сбора, назначаемая в виде водного отвара. По данным ГЖХ анализа в его жирнокислотном компоненте представлены: 18:3 (47,5%), 18:2 (18,6%), 18:1 (21,5%), 18:0 (6,2%) и 16:0 (4,0%) кислоты. Влияние ПНЖК на обмен веществ в организме связывают, главным образом, с изменением пропорции биосинтеза эйкозакоидов со 3 и со 6 семейств (79). Три кислоты, по экспериментальным результатам, при высоком содержания в рационе активно включаются во все фракции липидов органов и тканей, изменяют интегральные параметры мембранных структур и активность связанных с ними ферментов таким образом, что проявляется их гипохолестеринемическое действие (148).
