Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1. Видовой состав и распространенность вирусов на груше 9
1.2. Влияние вирусов на продуктивность и биохимические показатели у плодовых культур 14
1.3. Действие иммуностимуляторов на фитопатогены 16
1.4. Методы диагностики вирусов 18
1.4.1. Диагностика вирусов методом иммуноферментного анализа 19
1.4.2. Диагностика вирусов методом полимеразной цепной реакции 24
1.4.2.1. Оптимизация параметров ОТ-ПЦР 27
1.4.2.2. Модификации ПНР '. 30
1.4.2.3. Диагностика вирусов на груше методом ПНР 32
ГЛАВА 2. Материалы, методы и объекты исследований..35
2.1. Время, место проведения исследований 35
2.2. Метеорологические условия в годы проведения экспериментов 35
2.3. Методика исследований 39
2.3.1. Объекты исследований 39
2.3.2. Характеристика изучаемых вирусов 39
2.3.3. Характеристика изучаемых сортов 44
2.3.4. Характеристика иммуностимуляторов 46
2.3.5. Элементы учёта и наблюдений 47
2.3.6. Краткие схемы опытов 48
2.3.7. Методики тестирования растительных образцов на наличие вирусов..50
2.3.7.1. Методика ИФА 51
2.3.7.2. МетодикаПЦР 51
2.3.8. Методика количественного определения хлорофилла 54
2.3.9. Методика определения активности пероксидазы 55
2.3.10. Методика изучения антивирусных свойств препаратов рибав-экстра и циркон 56
2.3.11. Методика изучения действия иммуностимуляторов на продуктивность деревьев '. 56
2.3.12. Статистический анализ результатов исследований 57
2.3.13. Расчет экономической эффективности результатов исследований...57
ГЛАВА 3. Результаты исследований 58
3.1. Распространенность латентных вирусов на груше в Московской области 58
3.2. Совершенствование методов диагностики вирусов на груше 62
3.2.1. Совершенствование методаИФА 62
3.2.2. Совершенствование метода ОТ-ПЦР 67
3.2.3. Сравнительная оценка ИФА и ПНР 71
3.3. Вредоносность вирусных болезней 72
3.4. Изучение действия иммуностимуляторов на латентные вирусы и содержание хлорофилла в листьях груши 79
3.4.1. Изучение антивирусного действия иммуностимуляторов 79
3.4.2. Влияние иммуностимуляторов на содержание хлорофилла в листьях зараженных вирусами растений груши 84
3.5. Изучение действия иммуностимуляторов на продуктивность
деревьев груши 88
ГЛАВА 4. Экономический эффект 95
4.1. Экономическая оценка ИФА и ОТ-ПНР 95
4.2. Экономическая оценка применения иммуностимуляторов в саду 97
Выводы 98
Рекомендации по практическому использованию 100
Список использованных источников
- Действие иммуностимуляторов на фитопатогены
- Метеорологические условия в годы проведения экспериментов
- Совершенствование методов диагностики вирусов на груше
- Экономическая оценка применения иммуностимуляторов в саду
Введение к работе
Груша является одной из ведущих плодовых культур умеренного пояса, занимает второе место в мировом производстве плодов листопадных плодовых культур, уступая только яблоне. По данным ФАО, в мире ежегодно производится около 9-Ю млн. тонн плодов груши на площади 1,7 млн. га. В России груша выращивается на площади 18 тыс. га с валовым сбором около 100 тыс. тонн (). из них около 40 % производится в Европе: Италии, Франции, Испании и Германии. Из-за меньшей по сравнению с яблоней зимостойкости груша более требовательна к выбору зон для промышленного возделывания. Однако пищевая ценность плодов груши так высока, что ее пытаются выращивать в самых разнообразных, даже не подходящих для нее почвенно-климатических зонах. Например, в Российской Федерации ареал возделывания груши простирается от западных границ до Дальнего Востока (Туз, 1974).
Плоды десертных сортов груши отличаются маслянистой, сочной консистенцией мякоти, непревзойденным тонким ароматом и вкусом, привлекательным внешним видом. Наличие сортов с разными сроками потребления позволяет использовать свежие плоды груши 8-10 месяцев, а при современных методах хранения - практически круглый год. Деревья груши долговечны, при хорошем уходе грушевые сады прекрасно плодоносят десятки лет.
Плоды груши используются для различных видов переработки. Из них готовят варенье, компоты, повидло, грушевый мед (бекмес), соки и вина, а также сушат.
Народная медицина использует варенье, печеные плоды груш, отвар из сушеных груш, грушевый сок как диетические, профилактические и лекарственные продукты при различных заболеваниях.
Дикорастущие виды и формы груши используются в садоводстве в качестве семенных подвоев и для озеленения населенных пунктов (Душустина, 1979).
Древесина груши отличается твердостью и высоким удельным весом, имеет красивую красновато-коричневую окраску, используется в мебельной промышленности.
Деревья груши характеризуются меньшей по сравнению с яблоней периодичностью плодоношения, что частично связано с многоцветковостью соцветий груши (Ефимова, Гиричев, 2005). Груша обладает высоким адаптационным потенциалом и способна занять достойное место в насаждениях плодовых культур средней полосы России (Каталог мировой коллекции ВИР, 1991). Поэтому в последнее время груша приобретает все большую популярность и в условиях Нечерноземной зоны России.
Одним из главных факторов, препятствующих распрЬстранению груши, является недостаток оздоровленного посадочного материала, а также слабая изученность вопросов вредоносности вирусов и эффективных способов оздоровления от них. Вирусные и фитоплазменные заболевания ввиду хронического порядка и высокой вредоносности считаются важнейшим лимитирующим фактором повышения общей урожайности плодовых культур, в том числе и груши.
Основным направлением борьбы с этими заболеваниями является перевод питомниководства на безвирусную основу и введение системы сертификации посадочного материала, что принято в большинстве европейских стран.
За последние годы мировой наукой достигнут существенный прогресс в изучении вирусных болезней плодовых культур. Отчасти это связано с разработкой высокочувствительных серологических и молекулярных методов диагностики. Однако ввиду ряда объективных факторов (латентный характер заражения растений большинством вирусов, отсутствие экспресс-ме-тодов диагностики для ряда возбудителей и т.д.) существующие методы диагностики не всегда показывают хорошие результаты. Дальнейшие исследования должны быть направлены на поиск решений, позволяющих быстро и качественно диагностировать вирусные болезни. Актуальность исследований
в этом направлении заключается в необходимости совершенствования методов диагностики (ИФА и ПЦР) применительно к биологическим особенностям груши.
В связи с выше изложенным нами определены следуюпще цель и задачи исследований.
Действие иммуностимуляторов на фитопатогены
Известно действие препарата фенольной природы циркона как индуктора устойчивости к различным патогенам и вредителям. Благодаря его использованию возможно снижение концентрации пестицидов, применяемых в садах и питомниках, что позволяет, в свою очередь уменьшить пестицидную нагрузку в насаждениях. Например, в борьбе с паутинным клещом и розанной тлёй на розах использование циркона совместно с инсектоакарицидами позволило снизить концентрацию актары в 5 раз (с 0,1 до 0,02 %) и фитоверма в 2 раза (с 0,4 до 0,2 %) при сохранении высокой биологической эффективности (Медведев, 2006).
При умеренном уровне развития болезней целесообразно использовать комбинированные смеси регуляторов роста, в том числе фенольной природы (например, циркона), с фунгицидами системного действия при сниженной в 2 раза норме расхода фунгицида (Васецкая и др., 2005). При этом показатели биологической и хозяйственной эффективности соответствовали уровню фунгицида с полной нормой расхода и . составляли 96,0-99,8 %. По хозяйственной эффективности из большой группы (около 20) испытанных регуляторов роста разной природы М.Н. Васецкая с соавторами (2005) препарат циркон ставят на одно из первых мест (после эпина).
Использование циркона для обработки семян некоторых лекарственных растений повышало их устойчивость к грибным болезням и позволяло существенно сократить дозы традиционных пестицидов, тем самым, снизив токсикологическую нагрузку на агроценоз.
Применение циркона снижало степень поражения такими заболеваниями, как фитофтороз, альтернариоз, ризоктониоз, пероноспороз, парша обыкновенная, бактериоз, фузариоз, бурая ржавчина, белая гниль моркови серая гнильГ земляники, мучнистая роса чёрн6й"смородины (Каширская, 2001; Чурикова и др., 2004; Прусакова и др., 2005).
Циркон увеличивал устойчивость гладиолусов к грибным болезням, снижая их гибель в 3 раза (Рункова и др., 2004; Малеванная, 2004). При обработке цирконом существенно (на 31-44 %) снизилась степень развития возбудителя серой гнили на ягодах винограда (Дорожкина, 2004). Защитное действие циркона обусловлено стимуляцией защитных реакций поражённой ткани. При этом активируются репарационные процессы, снижается степень интоксикации растения, стабилизируется проницаемость клеточных мембран инфицированной ткани (Малеванная, 2004).
Предпосевная обработка семян эхинацеи пурпурной и наперстянки шерстистой раствором циркона способствовала снижению норм химических протравителей колфуго-супер и фундазола на 50 % (Бушковская, 2005). При этом наблюдалось снижение развития семенной инфекции и корневых гнилей у проростков. Довольно важным моментом является и то, что эффективность и продолжительность защитного действия смеси циркона и химического протравителя были выше, чем от применения одного протравителя. Применение смеси циркона с фунгицидом тилт для защиты наперстянки от септориоза позволило в 2 раза снизить кратность обработок фунгицидом без уменьшения биологической эффективности. При этом урожай по сравнению с контролем возрастал на 55-57 %. На подорожнике и мяте смесь циркона и фунгицида кумулус способствовала снижению развития мучнистой росы на 28-32 % с одновременным увеличением урожайности лекарственного сырья на 16-20 %. Комплексное применение циркона и фунгицида приводило к улучшению развития растений и повышению урожайности. На мелиссе лекарственной циркон улучшал приживаемость рассады, снижал поражение растений корневыми гнилями, способствовал ускорению роста.
Циркон снижал пораженность растений капусты «чёрной ножкой» и килой, причём высокую физиологическую и фунгицидную активность он проявлял в низких концентрациях - не более 50 мг/га (Будыкина, 2006). —
Следовательно, к настоящему времени имеется довольно много сообщений о фунгицидной и бактерицидной активности циркона. Данные по действию циркона на вирусную инфекцию в литературе практически отсутствуют. Вместе с тем, поскольку циркон представляет собой смесь гидроксикоричных кислот (их действие в отношении ингибирования вирусов широко известно), можно предположить наличие у данного препарата антивирусного действия. К тому же имеется сообщение, что препарат циркон способен проявлять антивирусное действие за счет ингибирования активности фермента интегразы (Малеванная, 2001).
Литературные данные по антивирусному действию препарата рибав-экстра отсутствуют ввиду его слабой изученности. Вместе с тем согласно инструкции производителя он способен повышать антистрессовую способность у растений и положительно влиять на регенерационные процессы.
Метеорологические условия в годы проведения экспериментов
В Москве и Московской области сумма осадков за год составляет 500-600 мм (по данным Каширской метеостанции).
Сумма активных температур (выше +10С) в Москве и Московской области составляет около 2000С. Гидротермический коэффициент в Московской области - 1,5. Продолжительность безморозного периода в Москве и Московской области - 130-135 дней.
Продолжительность снежного периода в среднем в Москве и Московской области - 140 дней, высота снежного покрова - до 40 см. Погодные условия вегетационных периодов 2006-2008 гг. представлены на рисунках 1 и 2.
Вегетационный период 2006 года характеризовался более высокими температурами воздуха в 1-ую и 2-ую декады апреля, 1-ую декаду мая, 3-ью декаду июня, 2-ую декаду июля, 2-ую и 3-ью декады августа по сравнению со среднемноголетними значениями температуры. В конце июля 2006 года имела место более прохладная погода. В 2007 году наиболее жаркой выдалась 2-ая половина мая и середина августа, хотя в период с начала июня по конец 2-ой декады июля температуры воздуха среднемноголетние значения. Период со 2-ой половины августа и до начала 3-ей декады сентября характеризовался пониженными, по сравнению с многолетними температурами. Температура сезона 2008 г. была в целом близка к среднемноголетним значениям. Более прохладная погода в 2008 году отмечалась во 2-ой половине мая и начале июня, тогда как во 2-ой декаде июля и 2-ой декаде августа температура воздуха была выше норма.
В 2006 году имел место недостаток осадков в мае, 2-ой и 3-ей декадах июня, июле и 1-ой половине августа. Следовательно, вегетационный период 2006 года можно охарактеризовать как засушливый. Лишь в 1-ой декаде сентября 2006 года количество осадков превысило норму в 4,6 раза Вегетационный период 2007 года также был в большинстве месяцев засушливым, за исключением 2-ой декады мая и 3-ей декады июля. Период 2008 года характеризовался избытком осадков во 2-ой декаде апреля, 3-ей декаде мая, 3-ей декаде июня, 1-ой декаде июля. Объектами исследований служили вирусы и сорта груши.
Изучали следующие виды вирусов: капилловирус бороздчатости древесины (или ствола) яблони {Apple stem grooving capillovirus - ASGV), фовеави-рус ямчатости древесины (или ствола) яблони {Apple stem pitting foveavirus — ASPV), триховирус хлоротической пятнистости листьев яблони {Apple chlorotic leaf spot trichovirus - ACLSV), иларвирус мозаики яблони {Apple mosaic ilarvirus - ApMV).
ASGV ранее по систематическому положению относили к группе бороздчатости древесины яблони (Lister, 1970), затем к подгруппе П группы Closterovims (Bar-Joseph et al., 1979). Согласно последней таксономической ревизии ASGV отнесен к новому роду Capillovirus (Murphy et al, 1995).
ASGV имеет извилистые нитевидные частицы длиной 600-700 нм и толщиной 12 нм (Lister, 1970). В США впервые была проведена очистка вируса, получена антисыворотка и изучены серологические свойства вируса (Sequeira, Lister, 1969; Lister, 1970; Uyemoto, Gilmer, 1971). Применение ранних серологических методик, таких как латекс - тест, позволяло выявлять ASGV лишь в травянистых растениях - накопителях, но не в растениях яблони (Segueira, Lister, 1969; Fuchs, 1980). Последнее было достигнуто только на основе многолуночного сэндвич-варианта ИФА (DAS -ELJSA) (Fuchs, 1980, 1983), который в настоящее время является стандартным методом диагностики этого вируса (Janeckova, Pluhar, 1987; Minoiu et al., 1995; Kirby et al., 2000).
лена полная последовательность нуклеотидов его генома (Yoshikawa, Takaha-shi, 1988; Yoshikawa et al, 1992). Проведенное изучение генома ASGV позволило применить для его диагностики методы полимеразной цепной реакции и иммуноспецифической полимеразной цепной реакции (ПЦР и ИС - ПЦР). Первоначально для этих целей были использованы дегенеративные прайме-ры, соответствующие консервативной последовательности РНК- полимеразы вирусов из бывшей группы Closterovirus (Kummert et al., 1995), а затем специфические праймеры, соответствующие участку белка оболочки генома ASGV (Kinard et al., 1996; Mackenzie et al., 1997). Последней разработкой является одноступенчатая модификация ПЦР, позволяющая существенно упростить подготовку образцов нуклеиновых кислот для анализа (Marinho et al., 1998).
Использование современных методик диагностики позволило расширить круг известных растений-хозяев ASGV. К ранее известным видам груши европейской (Pyrus communis), яблони {Malus Sylvester is, M. hupehensis, M. siebolldi), айвы (Cydonia oblonga и Pyronia veitchii) (Lister, 1970; Вердерев-ская, Маринеску, 1985) в качестве хозяев теперь отнесены также японский абрикос (Prunus тите), японская груша (Pyrus serotina) и черешня (Primus avium) (Takahashi et al., 1990; Kinard et al., 1996; Yoshikawa et al., 1996). Кроме того, изучение генома капилловируса, паразитирующего на цитрусовых растений и лилиях, и известного ранее под названием Citrus tatter leaf virus (Semancik, Weathers, 1965; Jnougl et al 1979) показало, что его следует рассматривать лишь в качестве изолята ASGV (Yoshikawa et al., 1996; Magome et al., 1997).
Фовсавирус ямчатостн древесины (или ствола) яблони (Apple stem pitting foveavirus) ASPV первоначально был отнесен к подгруппе 1 группы Closterovirus (Coffin, Courts, 1993). После ревизии таксономической системы фитовирусов (Martelli, 1992) вирусы данной подгруппы были выделены в два новых рода — Trichovirus и Vitivirus (Murphy et al., 1995; Martelli et al., 1997), но APSV не был отнесен к какому-либо роду. Позднее он был классифицирован в качестве типового члена нового рода Foveavirus (Martelly, Jelkmann, 1988).
Вирионы ASPV имеют спиральную симметрию и поверхностный рисунок из поперечных полос и продольных линий, они склонны к образованию агрегатов из 2-4-х и более частиц, соединяясь концами друг к другу. Ин-фекционность вируса в соке N. occidentalis теряется при разведении в 10" — 10" и после хранения в течение 24 часов; точка термической инактивации составляет 55-60С. Частицы вируса неустойчивы к воздействию органических растворителей и разрушаются в градиентах сульфата цезия и хлорида цезия. Они седиментируют на две или три фракции при центрифугировании в градиенте сахарозы, но лишь на одну фракцию - в равновесном градиенте Omni-paque - 350 (Koganezawa, Yanase, 1990).
Векторы ASPV по-прежнему неизвестны, но вирус распространяется с зараженным подвойным и привойным материалом (Вердеревская, Марине-ску, 1985; Martelli, Jelkmann, 1998). Стандартный метод DAS-ELISA широко используется в ряде стран для диагностики ASPV (Minoiu et al., 1995; Foissac et al, 2000).
Совершенствование методов диагностики вирусов на груше
Для корректной диагностики вирусов методом ИФА важное значение имеет отбор образцов листьев с тех частей побега, которые содержат вирус в максимальной концентрации. С целью совершенствования диагностики вирусов методом ИФА нами была изучена локализация вирусов в разных органах и частях груши.
При выявлении вируса ApMV на всех тестируемых образцах груши использование листьев в качестве образцов для ИФА оказалось предпочтительней, чем цветков, поскольку в цветках данный вирус диагностировать не удалось (таблица 7). Таблица 7 - Локализация вирусов (%) в различных органах растений груши (2006-2007 гг.) Вирус ASGV, наоборот, диагностировался в цветках в 2,1 раза чаще по сравнению с использованием листьев. По вирусу ACLSV получены примерно одинаковые результаты по его наличию как при использовании листьев, так и цветков груши.
При изучении распределения вирусов в различных частях побега выявлено, что вирус ASPV преимущественно локализуется у основания побега и в средней его части, тогда как в верхушечной части побега число зараженных образцов снижалось в 2,6-2,8 раза (таблица 8).
По вирусам ASGV и ApMV имелась та же тенденция: в образцах, отобранных у основания побега, наблюдалась наивысшая концентрация вируса. Число зараженных вирусами ASGV и ApMV тест-образцов в верхушечной части побега было соответственно в 2,3 и 3,3 раза меньше, чем у основания побега. Вирус ACLSV был сосредоточен в основном в средней части побега.
Определенное значение для корректной оценки результатов имеет длительность ферментативной реакции на заключительном этапе ИФА, когда происходит взаимодействие субстрата с содержимым микроплат. В тех случаях, когда реакция протекает медленно, возникает необходимость неоднократной регистрации результатов на автоматическом абсорбциометре. Слишком ранняя или, наоборот, поздняя регистрация показателей может значительно изменить картину зараженности тестируемых образцов.
Нами было осуществлено методическое изыскание в области совершенствования методики получения результатов, выдаваемых фотометром «Униплан». При медленной реакции различия между значениями экстинкции при считывании микроплат в двух направлениях незначительные (как правило, 0,1-0,3 единицы), поэтому необходимость переворота микроплаты отпадает (таблица 9).
Ао - экстинкция образца; НВ - наличі те вируса Вместе с тем при таком типе реакции у большинства сортов часто возникает необходимость многократной (3-4 раза) регистрации показателей оптической плотности образцов с разрывом между сроками регистрации в несколько часов. Впоследствии на основании анализа полученных результатов осуществляется отбор оптимального срока регистрации, дающего максимальные значения экстинкции образцов по отношению к сероотрицательному контролю.
При быстром протекании ферментативной реакции возникает вероятность получения некоторого количества ложноположительных результатов, особенно в том случае, если сероотрицательный образец располагается в первых лунках микроплаты. Для устранения данного недостатка необходимо либо наносить сероотрицательный контроль в несколько лунок, располагающихся в разных местах микроплаты (что не совсем целесообразно с точки зрения дороговизны реактивов), либо после стандартной пробивки осуществлять переворот микроплаты на 180 и проводить повторную регистрацию результатов.
Из таблицы 10 видно, что при быстром протекании реакции разница между показателями экстинкции образца по отношению к сероотрицательному контролю составляет уже не 0,1-0,3 единицы, как при медленной реакции, а, как правило, 0,3-0,5 единицы, а на некоторых сортах (например, Berry Hardy) и выше. Это влияет на конечный результат по зараженности вирусом образцов (в %), причем по вирусу ASPV разница между 2-мя сроками регистрации составила 12 %.
На основании полученных результатов было сделано следующее заключение: при быстром протекании ферментативной реакции необходимо осуществлять двукратное считывание микроплат на спектрофотометре: одно - обычным способом, второе - путем переворота микроплаты на 180 с последующим вычислением среднего арифметического между двумя значениями.
Совершенствование метода ОТ-ПЦР осуществляли с применением разработанной нами оригинальной технологии экстракции РНК из тканей груши, коммерческих диагностических наборов, предоставляемых компаниями «Биоком», «Агродиагностика» и синтезированных компанией «СибЭнзим» праймеров.
Одной из главных проблем, сдерживающих внедрение ПЦР в вирусологическую практику, является недостаточная надежность и отработанность этапа экстракции вирусной РНК из растительных тканей. Поэтому основное внимание нами было уделено оптимизации технологии экстракции РНК, обеспечивающей максимальный выход РНК и наработку при дальнейшем анализе достаточного для идентификации вирусов количества продуктов амплификации.
Оптимизацию этапа экстракции РНК в ОТ-ПЦР осуществляли на примере тестирования груши сорта Чижовская на вирус ACLSV. Для повышения эффективности выявления вирусной инфекции установлена необходимость использования на этапе экстракции РНК гидроксипроизводного бензойной кислоты (ГПБК) и модифицированного метода сорбции вирусов на препарате силика. В опыте использовались различные навески ГПБК: от 10 до 40 мг/образец. Как видно из рисунка 4, наиболее благоприятными навесками препарата ГПБК являлись 20 и 30 мг, что обеспечило положительный эффект при экстракции РНК вируса ACLSV из листьев груши сорта Чижовская. Более низкая (10 мг) или высокая (40 мг) навески ГПБК оказались мало эффективными.
Экономическая оценка применения иммуностимуляторов в саду
Изучение влияния иммуностимуляторов рибав-экстра и циркона на количество плодов у деревьев груши осуществляли в Ленинском отделении ГНУ ВСТИСП. Обработку проводили водными растворами препаратов в концентрации 0,01 мл/л, 0,1 мл/л и 1 мл/л в фазу цветения на 4 сортах: Лада, Кокинская, Велеса и Чижовская.
В 2006 году наиболее отзывчивым на обработку препаратом рибав-экстра оказался сорт Велеса, число плодов на котором возросло в 2 раза при использовании концентраций 0,1 и 1 мл/л (рисунок 13).
На сорте Кокинская в 2006 году положительный эффект от применения рибава-экстра достигнут только в варианте с концентрацией 0,1 мл/л (увеличение числа плодов в 1,8 раза), в то время как на сорте Лада эффект отсутствовал.
В 2007 году на деревьях, обработанных препаратом рибав-экстра в концентрации 1 мл/л, было отмечено увеличение числа плодов на всех изученных сортах: на сорте Велеса - в 4,8 раза, Лада - в 3 раза, Кокинская в 1,3 раза по сравнению с контролем. На деревьях, обработанных препаратом в концентрации 0,1 мл/л, также отмечено увеличение числа плодов: на сорте Велеса - в 3,4 раза, Лада - 1,8 раза, Кокинская - в 1,7 раза. Деревья сорта Чижовская по данным 2007 года наиболее продуктивными оказались после обработки раствором препарата рибав-экстра в концентрации 1 мл/л. Число плодов (шт.) на деревьях груши, обработанных иммуностимулятором рибав-экстра, в зависимости от его концентрации по годам исследований
В среднем за 3 года на сорте груши Велеса оптимальными концентрациями рибава-экстра оказались 0,1 и 1 мл/л, Лада и Кокинская -0,1, Чижовская - 1 мл/л (таблица 24). Таблица 24 - Число плодов (шт.) на деревьях груши, обработанных иммуностимулятором рибав-экстра (в среднем за 2006-2008 гг. исследований, отдел испытаний новых технологий, п. Ленинское)
Вместе с тем имелась и сортовая специфика по годам исследований. В среднем за 2006-2007 годы исследований было установлено, что на деревьях груши сорта Велеса, обработанных препаратом рибав-экстра в концентрации 1 мл/л, формируется наибольшее количество плодов: 70 шт. с дерева, что в 3 раза выше по сравнению с контролем (рисунок 13). Указанная тенденция имела место в оба года исследований. В 2006 году обработка деревьев сорта Велеса препаратом в концентрации 1 мл/л также способствовала увеличению числа плодов в 1,9 раза, а в 2007 году - в 4,8 раза по сравнению с необработанными деревьями. На сорте Велеса высокоэффективной концентрацией рибав-экстра наряду с 1мл/л оказалась 0,1 мл/л, обеспечившая в среднем за 2 года увеличение числа плодов в 1,9 раза. Низкая концентрация рибава-экстра (0,01 мл/л) была менее эффективной по сравнению с более высокими концентрациями, но и она увеличивала число плодов на деревьях сорта Велеса на 44 %.
В 2007-2008 годах нами таюке была проведена обработка деревьев груши препаратом циркон. Эффект зависел от концентрации препарата и сортовых особенностей. В 2007 году наибольший положительный эффект наблюдался на деревьях сорта Кокинская, обработанных препаратом в концентрациях 0,01 мл/л и 1,0 мл/л, что соответственно в 1,8 и 2,5 раз выше контроля (рисунок 14). 250
Вместе с тем в 2008 году контрольные растения сорта Кокинская формировали наибольшее число плодов. Возможно, полученные результаты связаны с тем, что деревья сорта Кокинская сильно пострадали от морозов в суровую зиму 2005-2006 г.г. и деревья восстанавливались на протяжении 2-х лет. Поэтому в 2007 году был получен хороший эффект от применения циркона на сорте Кокинская, однако в следующем году эффект отсутствовал вследствие проявления периодичности плодоношения.
В 2008 на сорте Лада наблюдалось увеличение числа плодов на деревьях, обработанных цирконом в концентрации 0,1 мл/л, на 46,3 % по сравнению с контролем. Увеличение числа плодов наблюдалось и на деревьях сорта Чижовская, обработанных препаратом циркон в концентрации 0,01 мл/л. В среднем за 2 года исследований препарат циркон оказал положительный эффект на деревьях груши всех изученных сортов, за исключением сорта Кокинская. В среднем по 4 изученным сортам число плодов в вариантах с обработкой цирконом возросло на 7 % по сравнению с необработанными деревьями. Самыми отзывчивыми оказались деревья сорта Велеса, что выразилось в увеличении числа плодов в 3,7 раза (или на 272 %) в среднем по 3-м концентрациям по сравнению с необработанными деревьями (таблица 25).
