Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 7
1.1 Видовой состав и распространенность вирусов яблони 7
1.1.1 Характеристика вирусов яблони 10
1.1.2 Распространенность вирусов яблони 33
1.2 Вредоносность вирусов яблони 41
1.2.1 Влияние вирусов на рост и урожай 41
1.2.2 Влияние вирусов на приживаемость глазков и индукция явление несовместимости 48
1.2.3 Влияние вирусов на метаболизм яблони. 50
1.3 Диагностика вирусов яблони 51
1.3.1 Диагностика вирусов яблони с использованием растений индикаторов 52
1.3.2 Диагностика вирусов яблони с использованием растений индикаторов 61
1.4 Способы оздоровления растений яблони от вирусов 68
1.4.1 Суховоздушная термотерапия 68
1.4.2 Метод культуры апикальных меристем и микропрививок in vitro 75
1.4.3 Метод хемотерерии 78
2. Материалы и методы проведения исследований 85
2.1 База исследований 85
2.2 Материалы и объекты исследований 85
2.3 Методика проведения экспериментов 86
3. Результаты исследований 90
3.1 Встречаемость латентных вирусов в насаждениях яблони и груши ряда научных учреждений РФ
3.2 Совершенствование технологии диагностики латентных вирусов яблони методом ИФА
3.2.1 Выявление латентной инфекции вирусами древесных растений индикаторов 110
3.2.2 Конкретизация сроков диагностики латентных вирусов яблони методом ИФА в условиях закрытого грунта 110
3.3 Оценка эффективности полевого и тепличного теста на древесных растениях-индикаторах в выявлении латентных вирусов яблони 113
3.4 Обсуждение результатов 135
3.5 Ожидаемый экономический эффект от применения тепличного теста на древесных индикаторах вместо классического полевого теста. 151
Выводы 153
Рекомендации по практическому использованию 155
Список литературы 156
Приложение 188
- Вредоносность вирусов яблони
- Влияние вирусов на приживаемость глазков и индукция явление несовместимости
- Совершенствование технологии диагностики латентных вирусов яблони методом ИФА
- Оценка эффективности полевого и тепличного теста на древесных растениях-индикаторах в выявлении латентных вирусов яблони
Введение к работе
Яблоня является ведущей плодовой культурой и занимает наибольшие площади, как в Нечерноземной зоне, так и в России в целом. Популярность этой культуры обуславливается высокими питательными и лечебно - профилактическими свойствами плодов, большой потенциальной продуктивностью и высокой адаптационной способностью к условиям выращивания. Плоды яблони транспортабельны и пригодны к более длительному хранению в свежем виде, чем плоды других плодовых культур, а также широко используются в перерабатывающей промышленности для получения пищевых продуктов.
Наряду с расширением площадей под плодовыми и ягодными культурами, основным направлением в развитии плодоводства является максимальная интенсификация этой отрасли с учетом принципов адаптивного садоводства [В.И. Кашин, 1995]. Важная роль в обеспечении высоких ежегодных урожаев плодовых культур принадлежит защите растений от вредителей и болезней, включая вирусы. Исследования, проведенные в нашей стране и за рубежом, показали широкую распространенность вирусных и фитоплазмен-ных болезней на промышленных сортах и клоновых подвоях яблони. Возбудители этих болезней обладают большой вредоносностью: вызывают нарушение физиологических процессов, подавляют рост, снижают генеративную продуктивность, устойчивость к стрессовым фактам среды, приживаемость глазков, укореняемость и выход отводков в маточниках, повышают восприимчивость растений к грибным и бактериальным заболеваниям.
Современные меры борьбы с вирусными и фитоплазменными болезнями основаными на системе без вирусного питомнико вод ства, внедренной в большинстве ведущих стран с развитым садоводством (США, Канада, Франция, Италия, Бельгия, Голландия, Германия и другие). В России в 80-е годы также были достигнуты существенные успехи в производстве без вирусного посадочного материала. Однако» с последовавшими затеми политическими изменениями и недостаточными государственным финансированием, к на стоящему времени сохранились лишь отдельные региональные фрагменты этой системы.
За последние 50 лет мировой наукой достигнут существенный прогресс в изучении вирусных болезней яблони, предпосылкой которому явилась разработка высокочувствительных серологических и молекулярных методов диагностики и биотехнологических приемов оздоровления. Однако ввиду ряда объективных факторов (латентный характер заражения растений большинством вирусов, отсутствие экспресс - методов диагностики для ряда возбудителей, высокая толерантность ряда вирусов к существующим методам оздоровления и т.д.), технологический процесс получения безвирусных клонов яблони по-прежнему является слишком продолжительными по времени (не менее 4-5 лет) и весьма дорогостоящим.
Дальнейшие исследования должны быть направлены на поиск решений, позволяющих интенсифицировать процесс получения безвирусных клонов.
В связи с вышеизложенным, целью наших исследований являлось изучение вирусных болезней яблони в Нечерноземной зоне России и совершенствование методов их диагностики.
В конкретные задачи исследования входило следующее:
1.Изучить распространенность латентных вирусов на основных группах сортов яблони в коллекциях научных учреждений.
2.Усовершенствовать технологию отбора образцов для диагностики вирусов яблони методом ИФА.
3.Отработать вопросы диагностики основных вирусов яблони на древесных индикаторах в условиях защищенного и открытого грунта.
Вредоносность вирусов яблони
Действие возбудителей вирусных болезней на поражаемые сорта яблони многообразно. Проявляется оно в ослаблении роста, снижении урожая, различных анатомических нарушениях. В Англии установлено, что вирус мозаики яблони (ApMV) может вызывать у восприимчивых сортов яблони снижение урожая плодов на 30-40% [A. Posnette, R. Cropley, 1956]. Это было характерно для сортов Allington Pippin и Cox s Orange Pippin, тогда как сорта Worcester Pearmain и Newton Wonder были более устойчивы к мозаике [A. Posnette, R. Cropley, 1959]. ApMV в комплексе с фитоплазмозом гуттаперчевостью значительно уменьшали диаметр штамбов у деревьев сортов Cox s Orange Pippin и Lord Lambourne, но несколько в меньшей степени - у сорта Sunset [A. Posnette et al., 1963]. В Польше спустя 7 лет после искусственного заражения ApMV уменьшение поперечной площади штамба наблюдалось у пяти из 6 изучаемых сортов яблони (Mclntosh-на 17,1%, Starkrimson-на 21,3%, Golden Delicious - на 16,3%, Jonared - на 14%, Idared — на 12,7%). В среднем за 4 года плодоношения снижение урожаев по сортам составило: Starkrimson - 42%, Jonared - 30%, Golden Delicious и Idared - 18%, Mcintosh - 9%, На рост и урожайность растений сорта Spartan вирус не оказал существенного влияния. Средний вес плодов в результате заражения ApMV снижался у сортов Mcintosh (на 10,9%), Starkrimson (на 8,7%) и Golden Delicious (на 8,3%). Плоды зараженных деревьев сортов Golden Delicious и Mcintosh в период сбора урожая были более зеленой окраски, чем плоды здоровых деревьев этих сортов [В. Zawadzka, 1983].
В Италии установлено, что при комплексном заражении ApMV и гут-таперчевостью урожайность деревьев яблони сорта Golden Delicious может снижаться на 80%. У саженцев восприимчивых сортов яблони в результате заражения ApMV прирост диаметра штамбов в питомнике снижался до 30% [A. Bergamini, 1980]. В Германии в течение 10 лет изучали влияние ApMV и фитоплазмоза гуттаперчивости (по отдельности и в комплексе) на продуктивность яблони сортов Cox s Orange Peppin, Jonatan и Golden Delicious на подвое M-9. В первые три года после инокуляции оба возбудителя не оказали существенного влияния на рост растений сорта Cox s Orange Peppin, но у сорта Jonatan вызвали снижение прироста диаметра штамба на 21,1% по сравнению со здоровыми растениями. У сорта Golden Delicious вирус мозаики яблони не оказывал влияние на прирост диаметра штамба, но в комплексе с гуттаперчи вестью снизил его на 13,1% по сравнению с контролем.
Средний урожай в результате комплексного заражения этими возбудителями снижался у сорта Cox s Orange Pippin на 17,6%, а у сорта Jonatan на 33,3% [G. Baumann, G.Engel, 1988]. Имеются отдельные сообщения о том, что латентные вирусы (ACLSV, ASGV и ASPV) оказывают незначительное воздействие на рост деревьев в первые годы после заражения прививкой. По-видимому, это обусловлено тем, что при заражении прививкой в растение первоначально попадает небольшое количество возбудителя, а с дальнейшим повышением концентрации вируса усиливается и его патогенность [A. Campbell, С. Bould, 1970 и другие]. В Англии на привойдо - подвойных комбинациях было изучено влияние двух болезнетворных комплексов: 1) ACLSV+ASPV+Spy decline; 2) те же вирусы плюс фитоплазмоз гуттаперчивость. В течение первых четырех лет наблюдений рост здоровых растений яблони был лучше, чем инокулирован-ных в обоих вариантах. Степень восприимчивости варьировала по сортам. Диаметр штамба у деревьев сортов Сох Orange Peppin и Laxton Superb угнетали обе комбинации патогенов, тогда как у сортов Discovery и Golden Delicious - только вариант с включением гуттаперчивости. На всех сортах обе комбинации патогенов почти вдвое уменьшали прирост побегов по сравнению со здоровыми деревьями. Деревья на подвое М-9 были более восприимчивы к вирусной инфекции, чем деревья на подвоях М-26 и ММ-106. В течение пяти последующих лет снижение урожайности в результате инокуляции латентными вирусами в среднем по сортам составило: Laxton Superb — 23,4т/га, Сох1 Orange Peppin - 6,7т/га, Discovery - 3,7т/га и Golden Delicious — 0,35т/га [A. Campbell, 1971; A. Campbell, Т. Sparks, 1976; A. Campbell et al., 1976]. В аналогическом опыте, проведенном в Италии, инокуляция ACLSV деревьев сорта Golden Delicious, привитых на подвои М-9, М-26 и ММ-106, приводило к снижению их урожайности на 22,2, 20,8, и 44,9% (соответственно используемым подвоям) по сравнению со здоровыми деревьями, а деревьев сорта Stark Delicious — соответственно на 40,1, 28,5 и 32,1%. Вредоносность ASPV мало зависела от используемых подвоев: заражение этим вирусом на 35,9-38% снижало урожайность деревьев сорта Golden Delicious и на 40,8-47,7% — деревьев сорта Stark Delicious. При комплексном заражении ACLSV и ASPV урожайность деревьев сортов Golden Delicious и Stark. Delicious, привитых на подвой М-9, снижалось соответственно на 34,2 и 51,9%, на подвое М-26 — на 46,0 и 52,9%, а на подвое ММ-106 — на 49,9 и 45,2% соответственно. Негативное влияние на продуктивность изучаемых сортов оказывало также заражение мозаикой яблони. Так после инокуляции ApMV урожайность деревьев сортов Golden Delicious и Stark Delicious на подвое М-9 уменьшалась соответственно на 18,3 и 32,5%, на подвое М-26 -28,2 и 40,3%, а на подвое ММ-106 - на 30 и 32,9% соответственно. При этом вредоносность латентных вирусов была сопоставима с такой у фитоплазмоза гуттаперчивости, который на 32,5 - 53,0% снижал урожайность деревьев сорта Golden Delicious и на 24,2 - 36,5% — сорта Stark Delicious [A. Canova, 1984]. Несколько ранее в Италии также было установлено негативное влияние ACLSV на продуктивность сортов Jonatan и Starkrimson, выражающееся в снижении массы плодов до 57% [A. Bergamini, 1980]. В Канаде 12-летний полевой эксперимент показал, что инокуляция комплексом ACLSV, ASGV, ASPV и гуттапєрчивостью существенно угнетала рост и урожайность деревьев яблони двух клонов сорта Mcintosh, но степень вредоносности патогенов зависела от используемых подвоев. Деревья на подвоях ОН-1, ОН-5, 0-7 и 0-11 (Ottawa Hybrid и Ottawa) были более восприимчивы к заражению, чем на подвоях ОН-3,ОН-4, ОН-6 и О-З. На подвоях Rob-5 и 0-11 урожайность плодов и площадь поперечного сеченья штамбов под влиянием инфекции снижалась почти на 50% [L Warner et al., 1984]. В США установлено, что вирус ямчатости древесины яблони (ASPV) сильнее снижает рост и урожайность деревьев, привитых на подвое Florence crab, чем на подвое Virginia crab. Урожай с зараженных деревьев был ниже на 80 и 50% соответственно, чем с контрольных деревьев [А.Е. Rich,1967].
Влияние вирусов на приживаемость глазков и индукция явление несовместимости
Известно, что патогенное влияние вирусов в плодовых питомниках может проявляться: 1. В угнетении развития зараженных подвоев или молодых саженцев; 2. Неудачными прививками при использовании зараженных привоев или подвоев; 3. несовместимостью семенных подвоев с рядом сортов яблони, зараженных латентными вирусами [H.R. Cameron, 1977]. В Германии и Польше неоднократно отмечали негативное влияние вируса мозаики яблони (ApMV) на приживаемость глазков в питомнике яблони [Н. Schimmelpfeng, G. Bohm, 1966; Z. Rebandel et al., 1979; B. Zawadzka et al., 1979], которое у восприимчивых сортов может достигать 20% [Н. Kegler, 1959]. В Казахстане было установлено [Ж. Тулеуов и др., 1984], что заражение латентными вирусами оказывает существенное влияние на выход саженцев в питомнике, как в качественном, так и в количественном отношении. Максимальное снижение приживаемости глазков составило 20,8% у сорта Ренет Казахский, 6% — у сорта Салтанат, который оказался наиболее устойчивым к заражению ACLSV. При заражении этих же сортов комплексом из 3-х вирусов, их патогенное воздействие возрастало: гибель заокулированных глазков составила 16,7-33,4%. Ранее в Англии было установлено относительно слабое влияние латентных вирусов на приживаемость глазков. Однако эти вирусы в комплексе с фитоплазмой, вызывающей гутаперчивость яблони, приводили к значительному снижению приживаемости окулянтов [A. Campbell, 1971]. В Таджикистане установлено отрицательное воздействие ACLSV, ASGV и ASPV на приживаемость глазков у трех сортов яблони, с максимальным снижением приживаемости в 16%. При этом приживаемость глазков яблони зависела не столько от сорта яблони, сколько от состава присутствующих вирусов [Р.Ш. Шагапов, 1993]. По мере изучения латентных вирусов яблони накапливается все больше фактов о повышенной восприимчивости к ним отдельных сортов. Явление несовместимости и отмирания деревьев наблюдали при использовании восприимчивых подвоев Spy-227, Florence crab, М. robusta №5, и прививки на них восприимчивых сортов из группы Делишес и их гибридов [F.E. Gardner et al., 1946; А.Е. Rich, 1967; M.F. Welsh, F. Klane, 1961; M.F. Welsh, L.P. Spangelo, 1971; N.P. Sjomina, T.F. Bivol, 1980]. Ранее предполагали, что в черенках несовместимых сортов содержатся токсины, которые губительно действуют на подвой Spy-227, вызывая его гибель [F.E. Gardner et al., 1946], Однако затем была выдвинута гипотеза о заражении вирусами, которая позднее была подтверждена [H.W. Guengerich, D.E.Millican, 1956].
Многие кребовые яблони также проявляют несовместимость с сортами, зараженными латентными вирусами. При прививке на V. crab сортов, зараженных вирусом бороздчатости яблони, в месте срастания привоя с подвоем ткани некротизируется, образуется коричневое некротическое кольцо, и привой легко отламывается. В связи с этим некоторые питомниководы Канады прекратили использование кребов в качестве подвоев \М, Welsh, G. May, 1967]. В США показана также роль вируса кольцевой пятнистости томата в образовании некроза по линии срастания прививки с последующим отмиранием некоторых сортов яблони на ряде вегетативно размножаемых подвоях [R.F. Stouffer, 1977]. Многими авторами показано, что ответственными за явление несовместимости подвоя с привоем является вирус ямчатости древесины яблони [A. Hilborn, G. Nuland, 1957; A. Hilborn et al., 1965 и другие]. Установлено, что симптом ямчатости древесины является результатом неспособности некоторых клеток камбия дифференцироваться в нормальные элементы. Пораженная ткань растет неравномерно, клетки флоэмы внедряются в ксилему и образуются ямки, что часто приводит к гибели растения. В нашей стране было также показано [Н.П. Семина, Т.Ф. Бивол, 1980], что морфологические и анатомические нарушения на подвоях, пораженных точечной болезнью, сходны с изменениями в древесине индикатора V. crab, вызываемыми вирусами ямчатости древесины яблони. В экспериментах Тулеуова Ж. [1982] было установлено, что в листьях растений R-12740/7А, зараженных ACLSV, содержание общего сахара и кислотность увеличивается, а количество витамина С и хлорофилла уменьшается по сравнению с контролем. Эти изменения коррелировали с климатическими условиями года. В годы с низкими летними температурами и высокой влажностью воздуха различия в содержании сахара у больных и здоровых растений значительно выше, чем в жаркую погоду. Это можно объяснить подавлением размножения вируса высокими летними температурами. Об увеличении содержания Сахаров и кислотности в листьях зараженных вирусами растений сообщают также и зарубежные авторы [В. Gyorgy, 1976; KKegler, 1961]. Значительное снижение содержания хлорофилла в листьях больных растений объясняется тем, что вирусная инфекция нарушает процесс синтеза пигментов в растительных клетках, и в растениях происходит усиленное разрушение хлорофилла в результате его взаимодействия с белками [Ж. Тулеу-лов, 1982].
Совершенствование технологии диагностики латентных вирусов яблони методом ИФА
В 2003 г, было проведено тестирование методом ИФА маточных растений индикаторных клонов яблони, содержащихся в условиях открытого грунта в Мичуринском государственном аграрном университете (МГАУ). Достоверное наличие ASGV было установлено на одном из растений М. platycarpa, а вероятное — на одном из растений V. crab. Вирусом ямчато-сти древесины яблони (ASPV) оказались заражены около половины тест-растений индикаторных клонов Лорд Ламбурн, Spy-227, V. crab и R-12740/7A, но на М. platycarpa данный вирус не выявлен (таблица 13). Возможность латентного заражения древесных индикаторов ASGV и ASPV было подтверждено тестированием горшечных растений, содержащихся в зимней теплице лаборатории вирусологии (таблица 14, приложение 2). Данные растения были получены путем прививки на сеянцы яблони черенков индикаторов с маточных клонов, содержащихся в условиях открытого грунта ВСТИСП и МГАУ. Достоверное присутствие ASGV было констатировано в отдельных растениях R-12740/7A из ВСТИСП и МГАУ, растениях Spy-227, М. platycarpa и М. baccata из ВСТИСП. В ряде растений всех протестированных индикаторных форм выявлено также недостоверное наличие этого вируса. В целом, достоверное заражение ASGV отмечено для 13,8%, а недостоверное для 13,9% растений из 65 протестированных. ASPV был достоверно диагностирован лишь в одном растении R-12740/7A из МГАУ.
Однако данным вирусом были заражены оба протестированных растений индикаторного клона груши Berry Hardi (таблица 14, приложение 2), Таким образом, нами констатирована возможность заражения индикаторных клонов яблони и груши латентными штаммами ASGV и ASPV. Несомненно, данный фактор может оказать влияние на результаты тестов с использованием индикаторов ввиду возможного перекрестного взаимодействия (как антагонистического, так и синергия ее кого) данных штаммов с другими штаммами этих вирусов, инокулируемых на индикаторы / при прививке тестируемых образцов. Следовательно, необходима / [) предварительная фитосанитарная селекция индикаторных растений с / с? использованием метода ИФА. При ранневесеннем тестировании листьев и цветков ряда растений яб- ) лони, содержащихся в зимней теплице лаборатории вирусологии, констати- Р / ровано преимущество цветков для выявления ACLSV. Тип тест-образца не оказывал существенного влияния на выявления ASGV и ApMV. Вирус кольцевой пятнистости томата (TomRSV) не был обнаружен ни в одном тест-образце (таблица 15). ; Оценка нескольких сроков проведения ИФА для диагностики ASGV выявило преимущество более ранних сроков анализа (февраль - март) по сравнению с тестом в июне. Для выявления ACLSV наиболее эффективен был тест в апреле, позволивший диагностировать данный вирус в 83% тест-образцов. В то же время, очевидно ввиду более высокой термотолерантности ASPVfncnbiTaHHbie сроки тестирования не имели существенного влияния на эффективность выявления этого вируса (таблица 16).
Оценка эффективности полевого и тепличного теста на древесных растениях-индикаторах в выявлении латентных вирусов яблони
В 2002-2004 гг. проведено три эксперимента по отработке тепличного теста на древесных растениях-индикаторах и классический полевой тест. В качестве тест - объектов (источников инокулюма) были использованы изоля-ты №6, №9, №14, №16 и №26 содержащиеся в лаборатории вирусологии на V.crab, а также растения ряда сортов и клоновых подвоев яблони, в различной степени заражённые латентными вирусами. По результатам ИФА изоляты содержали комплексы ACLSV ASGV (№6 и 16) или ACLSV + ASGV + ASPV (№9, 14, 26, М. baccata-1) (таблица 16). Используемые в экспериментах растениях сортов и клоновых подвоев яблони преимущественно имели нестабильную сероположительную реакцию или сероотрицательную реакцию (таблица 17). Эксперимент №1 был заложен в марте 2002 г. по типовой методике Фриндлунда [P.R. Fridlund, 1980]. Тестированию были подвергнуты изоляты №14 и 26, а также растения яблони с участка отдела защиты растений ВСТИСП сортов Уэлси и Шафран Саратовский. Все эти растения по результатам ИФА были признаны зараженными комплексом ACLSV + ASGV + ASPV. В качестве индикаторов были использованы М. platycarpa, Джай Дар-линг (индикаторы ACLSV), Lord Lambourne (индикатор ApMV) и Spy-227 (индикатор ASGV и ASPV). Учет приживаемости компонентов прививок показал относительно невысокую приживаемость глазков индикаторов, которая составила: у L. Lambourne - 71%, М. platycarpa и Джай Дарлинг по 62%, Spy-227 - 43%. В то же время проблем с приживаемостью глазков инокулюма не наблюдалось (приложение 3). В течение вегетационного сезона на листьях как инокулированных, так и контрольных здоровых индикаторов наблюдались симптомы в виде диффузной хлоротической крапчатости, которые не коррелировали с результатами ИФА, и, по всей видимости, явились результа- і том температурного шока из-за чрезвычайно жаркой погоды.
Аномально высокая температура воздуха в начале вегетационного сезона 2002 г., вероятно, оказала также влияние на репродукцию вирусов и обусловила их низкую вы-і являємось методом ИФА. Проведенный иммуноферментный анализ выявил аличие ACLSV лишь в одном растении индикатора Lord Lambourne, инокулированным изолятом №26. Эффективность передачи ASGV была несколько выше и отмечена у индикаторов Lord Lambourne и Джай Дарлинг, инокулированных изолятом №26, и Lord Lambourne, инокулированного изолятом из растения Уэлси. В последнем случае наблюдалась также передача ApMV В 2003 г. было проведено двукратное тестирование методом ИФА растений данного эксперимента на наличие ASGV и ASPV (таблица 18). Эти тесты показали наличие ASGV в подавляющем большинстве инокулированных растений индикаторов. Высокая эффективность передачи ASPV по результатам ИФА была констатирована для Spy-227, являющегося общепринятым индикатором на данный вирус, а также для Джай Дарлинг. В то же время ASPV был выявлен менее чем в половине инокулированных растений Lord Lambourne и М. platycarpa (таблица 18). Все растения Джай Дарлинг в данном опыте даже при наличие заражения ASGV и / или ASPV не имели симптомов.
На двух из 5 растений Spy-227 было отмечено скручивание листьев, а остальные не имели симптомов. На одном из растений Lord Lambourne, инокулированных изолятом №26, развились отчётливые симптомы мозаики, что хорошо соотносится с результатом ИФА 2002 года. На ряде растений Lord Lambourne, инокулированных другими изолятами, были отмечены симптомы хлороза и деформации листьев, что коррелировало с присутствием ASGV и ASPV по результатам ИФА. На растении М. platycarpa, инокулированном изолятом №26, наблюдались симптомы хлоротической пятнистости листьев (ХПЛ). В этом же растении в 2002г. был выявлен ACLSV (таблицы 18-19, приложение 3). На растениях М. platycarpa, инокулированных другими изолятами, преимущественно развились симптомы деформации листьев, нетипичные для ACLSV. Таким образом, проведённый эксперимент показал высокую чувствительность имеющихся во ВСТИСП индикаторных клонов М. platycarpa и Lord Lamboume. На растениях М. platycarpa развивались симпто мы хлоротическои пятнистости листьев, типичные для заражения ACLSV, а на растениях Lord Lamboume симптомы мозаики, характерные для заражения ApMV. Вирусоподобную аномалии типа хлороза, морщинистости и деформации листьев у растений Lord Lamboume, крапчатости и скручивания листьев у растений Spy-227 коррелировали по результатам ИФА с наличием ASGV и ASPV. Однако, для подтверждения данной корреляции необходимы дополнительные эксперименты с чистыми изолятами ASGV и ASPV. В то же время растения Джай Дарлинг не имели симптомов вирозов, несмотря на сероположительнуго реакцию с антисыворотками к ASGV и ASPV (таблица 18-19). Установлено также негативное влияние повышенной (более 25С) температуры воздуха на развитие симптомов у растений индикаторов. Аномально жаркая погода в весенний период 2002 г. ингибировала развитие вирусов, в растениях-индикаторах, включая М. platycarpa и Lord Lambourne. Типичные симптомы заражения ACLSV и ApMV развились на индикаторах лишь весной 2003 г., т.е. спустя год после инокуляции. Параллельное тестирование инокулированных индикаторов методом ИФА показало, что высокая температура воздуха не оказала существенного влияния на эффективность передачи термотолерантных ASGV и ASPV, В то же время более термолабильный ACLSV был выявлен лишь в двух исходных растениях из четырёх тестируемых. В эксперименте №2 по отработке тепличного теста на древесных индикаторах было использовано четыре растения-источника инокулюма: V.crab №9 (заражено комплексом ACLSV + ASGV + ASPV), М. baccata (ACLSV + ASGV + ASPV), подвой 71-330 (нестабильная сероположительнная реакция к ACLSV и ASPV) и растение яблони с симптомами пролиферации, выявленное в Белгородской области.
