Введение к работе
Актуальность темы. Среди патогенов, поражавших посадки кар^ тофеля и табака в России и других странах СІГ наиболее вредоносным является У-вирус картофеля (УВК). На картофеле этот вирус вызывает важные в экономической отношении заболевания типа морщинистой и полосчатой мозаик, Согласно данным литературы их распространенность в разных регионах нашей страны варьирует от %А% до 20-30. По приблизительным оценкам эти болезни снижает урожайность картофеля в среднем на 20-ЗС#, а в отдельные годы на 50$ и. более.
Помимо картофеля и табака этот патоген поражает и другие пас
леновые культуры, в т.ч.: перец, томаты, баклажаны и физалис. Так,
по данным Амбросова и Блоцкой (197*0 УВК приносит ощутимый ущерб
культуре томатов, в республике Беларусь. Лытаева (1975) и Тиыина
(I960) сообщают о поражении им посадок перца на иге России и в
Молдове. К сожалеют, эти исследования оказались в СНГ единствен
ными и не получили дальнейшего развития. Поэтому целый, ряд вопро
сов, связанных с раопространенносты), вредоносностью и особеннос
тями биологии УВК на этих видах пасленовых культур, остался
неизученный. ,''* ' '
В борьбе о УВК, как и с другими фитопатогентши вирусами, обычно иопольэуот комплекс профилактических мер, направленных, в первуп очередь, на раннее выявление и выбраковку больных растений, а также создание устойчивых к этому патогену сортов пасленовых культур. Однако их реализация на практике нередко осложняется ' иэ-эа трудностей идентификации УВК и низкой надежности существующих диагностических приемов.
Цель и. задачи исследований. Исходя из вышеизложенного перед нами была поставлена цель: усоверенствовать способы диагностики УВК и изучить с их помощы> биологии этого патогена на основных пасленовых культурах: картофеле, табаке, перце и томатах. В.связи с этим автору потребовалось решить следующие научные задачи:
выделить УВК из различных видов пасленовых растений и провести его штаимовур идентификации на растениях индикаторах;
провеОти препаративное выделение одного из штаммов УВК',
получить диагностическуЬ антисыворсщ к этому йтамму;
испытать её в различных способах иммунодиагностики УВК и по возможности улучшить их надежность^ . .
изучить симптоматику и динамику накопления первичной и
вторичной инфекции УВК на отечественных сортах картофеля, в той
числе; ь листьях зараженных растений, свежеубранных клубнях и
ростках картофеля;
- изучить симптоматику и динамику накопления штаммов УВК на разных сортах: табака, перца и томатов и выделить.устойчивые к нему формы пасленовых растения.
Научная новизна. Из полевых образцов томатов, перца и бархатцев, собранных автором в Приднестровской части Молдовы, на Черно- -морской побережье Грузии и в Краснодарской крае России, был выделен целый ряд нзолятов УВК.
изучена возможность использования метода виробактериальной агглотинации (АБВ-тест), латекс-теста и имыуносорбентной электронной микроскопии о белком (протеином) А (Па-ЙСЭМ) в диагностике УВК на разных пасленовых культурах.
Показано, что высокие фоновые реакции в методе иммуноферментного анализа (ИФА) могут возникать из-за леспецифического связывания меченых антител с растительными дентинами на твердой фазе. Поиск способов устранения этих мекфазных взаимодействий позволил автору разработать достаточно надежный метод диагностики УВК, который был впоследствии оформлен как изобретение.
При проведении статистической обработки результатов'ЙФА нами была испытана непараметрическая процедура их интерпретации. Она обеспечила не только высокуо точность определения положительн.о-отрицагелгного порога* но и объективную оценку диагностической информативности всех испытанных вариантов этого теста.
Впервые в нашей стране апробирована 'методика тестирования вторичной инфекции в свежеубранном клубневом материале -картофеля. Статистический анализ этих результатов позволил выявить четкуп взаимосвязь ыеждУ*весои зараженных клубнеплодов и величиной оптической плотности, полученной в методе ИФА.
Изучена симптоматика и динамика накопления ряда штаммов УВК на различных сортах табака, перца и томатов, Впервые показана возможность "самооздоровления" зараженных растений перца от обычного и некротического штаммов этого вируса.
практическая значимость. Предложена достаточно эффективная методика очистки УВК, Получена диагностическая антисыворотка к одному из некротических штаммов отого вируса и апробирована в АБВ-теств, латекс-тесте и ПА-ИСЭМ. Отработаны способы повышения
их специфичности при тестировании основных пасленовых культур.
Предложена оригинальная методика устранения неспецифических реакций, возникавших в методе ИФА при сохранении высокого уровня положительных реакций с тестируемыми экстрактами зараженных растений.
Разработана простая и надежная методика интерпретации результатов ЮА и оценки диагностической информативности разных вариантов этого теста.
Установлены оптимальные срони для тестирования первичной- и вторичной инфекции УВК на отечественных сортах картофеля методом ИФА. Показана возможность определения этого вируса в свежеубраннои и естественно проросшем 'клубневом материале на второй год после его заражения.
изучены особенности проявления мокоинфекцйи УВК и смешанной вирусной инфекции (УВК + ВТМ) на разных видах'и сортах-томатов и перца. Проведено детальное изучение симптоматики й динамики накопления разных штатов'УВК на картофеле, табаке, перце и томатах.
Среди представителей семейства Solanaceae выделены' дикие и
культурные формы растений, обладавшие абсолютной устойчивость»
к УВК. '
Апробация работы. Разработанные нами способы проведения АБВ-теста, латекс-теста и ИФА прошли успешные испытания в лаборатории вирусных, микоплазменных и нематодных болезней растений ВИЗРа, лаборатории семеноводства картофеля Всероссийского научно-исследовательского института растениеводства им. Н.И.Вавилова и в отделе семеноводства НПО "Белогорка"..
Основные положения'диссертации доложены: на Всесоюзном совещании "Теория и практика использования сельскохозяйственных культур устойчивых к вирусным болезням",. Вильнюс. (1984); на 8-ом BcecoD3-. ном совещании по иммунитету сельскохозяйственных растений к болезням и вредителям, Рига (1986); на Научно-практической конференции "Биологически активные вещества в сельскоі^аазяйстве", Ленинград [1987); на Научной конференции, посвященной IOO-лбтип со дня открытия вирусов Д.И.Ивановским, Ростов-на-Дону (1992)..
Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ і получено авторское .свидетельство на изобретение.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на iZO ігрзницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав,
- м -
общих выводов, методических рекомендаций и приложения. Список использованной литературы включает 293 наименования, из них - 217 ка иностранных языках. Диссертационная работа проиллрстрирована 32 таблицами и 35 рисунками.
