Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 7
2.1. Введение 7
2.2. Метаболизм пуриновых соединений в организме 8
2.3. Учение о пуринорецепторах 11
2.4. Классификация пуринорецепторов 12
2.5. Р1 (аденозиновые) рецепторы 12
2.6. Р2-рецепторы 14
2.7. Агонисты Р2-рецепторов 19
2.8. Антагонисты Р2-рецепторов 20
2.9. Р2-рецепторы и экто-АТФаза 24
2.10. Перспективы и потенциальное клиническое значение исследования Р2-рецепторов 25
3. Материал и методы исследования 27
3.1. Объекты исследования 27
3.2. Фармакологические эксперименты на изолированных тканях 32
3.3. Изучение активности экто-АТФазы тканей морских свинок 36
3.4. Использованные вещества 37
3.5. Анализ результатов 38
4. Результаты собственных исследований 39
4.1. Фармакологическая оценка Р2-рецептор-антагонистической активности соединений, относящихся к производным тиазола, хиноксолина и азолохиноксалина (группы соединений Т,ХиА) 39
4.1.1. Эксперименты на изолированных тканях крыс 39
4.1.2. Эксперименты на изолированных тканях морских свинок 44
4.2. Фармакологическая оценка Р2-рецептор-антагонистической активности соединений, относящихся к производным пиридоксаль-фосфата и пиридиксаль-фосфоната (группа соединений К) 49
4.2.1. Эксперименты на изолированных тканях морских свинок 49
4.2.2. Эксперименты на изолированных тканях кроликов 54
4.3. Изучение влияния исследованных соединений на активность экто-АТФазы тканей морских свинок 59
Обсуждение результатов 61
Выводы 68
Практические рекомендации 68
Список литературы 69
Приложение 91
- Метаболизм пуриновых соединений в организме
- Фармакологические эксперименты на изолированных тканях
- Фармакологическая оценка Р2-рецептор-антагонистической активности соединений, относящихся к производным пиридоксаль-фосфата и пиридиксаль-фосфоната (группа соединений К)
- Изучение влияния исследованных соединений на активность экто-АТФазы тканей морских свинок
Метаболизм пуриновых соединений в организме
Еще в первой трети двадцатого века Drury и Szent-Gyorgy (1929) описали эффекты аденозина и АТФ на сердечный ритм млекопитающих, при этом эффект АТФ на ритм сердца был более выражен, чем аденозина. Впоследствии появился целый ряд исследований, посвященных влиянию адениновых нуклеотидов и нуклеозидов на сердечно-сосудистую систему (Gaddum and Holz, 1933; Gillespie, 1933; Richards, 1934; Green and Stoner, 1950), а в 50-ых годах началось использование АТФ в клинике для лечения заболеваний сердечнососудистой системы у пожилых людей (Boettge et al., 1957). В 60-ых годах было убедительно показано, что во многих висцеральных тканях наблюдаются нейрогенные ответы, которые не блокируются адрено- или холинергическими блокаторами (Burnstock, 1969). Позже было установлено, что эти ответы опосредуются преимущественно АТФ, и поэтому эти не-адренергические, не-холинергические нервы были названы "пуринергическими" (Burnstock, 1972). С появлением этого, ставшего теперь классическим, обзора практически началось и продолжается до сих пор бурное изучение биологической активности и физиологической роли внеклеточных аденозина и АТФ. Было установлено, что АТФ и аденозин могут выделяться различными клетками, включая нервные (White, 1984; White and MacDonald, 1990; Zimmermann, 1994), гладкомышечные (Katzuragi et al., 1991; Kurz et.al., 1994; Shinozuka et al., 1994), клетки сердечной мышцы (Forrester, 1990; Katzuragi et al., 1993), эндотелиальные клетки (Pearson and Gordon, 1985), тучные клетки (Marquardtet al., 1984), тромбоциты и лимфоциты (Gordon, 1986). Более того, было показано, что на поверхности клеток практически всех тканей имеются специальные рецепторы для пуринов, пуринорецепторы (Burnstock, 1978; 1991; Abbracchio et al., 1993; Fredholm et al., 1994), влияя на которые АТФ и аденозин способны влиять на многие внутриклеточные процессы. Таким образом, в настоящее время стало очевидным, что физиологическое значение пуринов не ограничивается их участием во внутриклеточных процессах; безусловно, не менее важным является внеклеточная роль пуриновых нуклеотидов и нуклеозидов, которую они осуществляют, влияя на специфические рецепторы. 2.2. Метаболизм пуриновых соединений в организме Пуриновые соединения синтезируется в организме в результате сложного многостадийного процесса с участием рибозо-5-фосфата, глутамина, аспартата и некоторых других промежуточных продуктов. Важнейшими пуриновыми основаниями являются аденин, гуанин, ксантин и гипоксантин, из которых последние два в большинстве случаев являются лишь продуктами промежуточного синтеза (или распада) первых двух (Рис.2.1).
Присоединение к ядру пуриновых оснований рибозы приводит к образованию нуклеозидов аденозина и гуанозина (Рис. 2.2). Рис. 2.2. Химическая структура пуриновых нуклеозидов Фосфорилирование гидроксильной группы рибозы в положение 5 ведет к образованию соответствующих нуклеотидов. Наиболее распространенными адениновыми нуклеотидами являются аденозин-5 -монофосфорная кислота (адениловая кислота, аденозинмонофосфат, АМФ), аденозин-5 -дифосфорная кислота (аденозиндифосфат, АДФ) и аденозин-5 -трифосфорная кислота (аденозинтрифосфат, АТФ), имеющие соответственно один, два и три остатка фосфорной кислоты, присоединенных последовательно к молекуле рибозы в положении 5 (Рис. 2.3). Описаны природные пуриновые нуклеотиды, имеющие более трех фосфорных остатков, а также содержащие два пуриновых ядра, соединенные фосфатной цепочкой, (динуклеотиды), однако, в физиологических условиях концентрация их в тканях существенно ниже аденозинмоно-, -ди- и -трифосфата. Фосфатные остатки в структуре нуклеотидов связаны друг с другом при помощи так называемой макроэргической (богатой энергией) связью, поскольку при гидролизе этой связи высвобождается около 7 кКал потенциальной энергии. Поэтому АТФ, имеющая три подобные макроэргические связи, рассматривается как аккумулятор энергии, образующейся в клетке в результате различных биохимических процессов. В большинстве случаев именно энергия АТФ обеспечивает работу энерго-зависимых процессов в организме - транспорт, синтез, метаболизм различных веществ. Последовательный гидролиз остатков фосфорной кислоты в молекуле АТФ приводит к образованию соответственно АДФ, АМФ и аденозина. Образовавшийся аденозин может либо идти вновь на синтез новых молекул АТФ, либо в результате дезаминирования он превращается в инозин, который в последующем, превращаясь в гипоксантин и мочевую кислоту, выводится из организма. В физиологических условиях в результате диссоциации и отщепления атома водорода от гидроксильных радикалов остатков фосфорной кислоты, молекула нуклеотидов (особенно АТФ) приобретает значительный электрический заряд, и, следовательно, клеточная стенка становится для них непреодолимой преградой. Поэтому существует высокая разница между концентрациями адениновых нуклеотидов внутри и вне клетки, доходящая до 1000 раз в пользу внутриклеточных нуклеотидов. Исходя из этого, долгое время считалось аксиомой, что физиологическое и биохимическое значение пуриновых нуклеотидов ограничивается внутренней средой клетки, а какие-либо внеклеточные эффекты АТФ являются чистой казуистикой.
Однако, ко второй половине 20 века накопилось уже очень много сведений о разнообразных эффектах внеклеточной АТФ, на основании чего профессор Дж. Бернсток сформулировал гипотезу о рецепторах АТФ - пуринергических рецепторах (Burnstock, 1972). 2.3. Учение о пуринорецепторах В 60-70-тые года 20 века стали накапливаться сведения о том, что в автономной (вегетативной) нервной системе, иннервирующей внутренние органы, регистрируются ответы, не угнетающиеся блокаторами рецепторов ацетилхолина и норадреналина. Естественно возникло предположение, что там имеются какие-то иные рецепторы, возбуждаемые неизвестным нейромедиатором. Поскольку природа этого нейромедиатора долгое время оставалась неизвестной, он именовался просто - нехолино-, неадренергическии медиатор, и, соответственно, нехолино-, неадренергические нервы и нехолино-, неадренорецепторы. На роль этого неизвестного нейромедиатора претендентов было очень много - гистамин, серотонин, простагландины, аргинин, аланин, гистидин и другие аминокислоты, однако, большинство из них вскоре были отвергнуты. В 1972 году Дж. Бернсток опубликовал, теперь уже ставший классическим, обзор, в котором привел многочисленные факты, в пользу того, что именно АТФ и, возможно, аденозин являются неиромедиаторами в тех самых нехолино-, неадренергических нервах. Он привел убедительные доказательства того, что АТФ наилучшим образом соответствует всем критериям, которые классики нейрофизиологии выдвинули для нейромедиаторов (Eccles, 1964), и предложил называть нервы, выделяющие АТФ, пуринергическими, а рецепторы, на которые АТФ действует, пуринорецепторами. В настоящее время можно с полным основанием утверждать, что гипотеза Бернстока выдержала проверку временем и превратилась в полноценную теорию. И хотя не все аспекты этой теории полностью ясны, действенность ее подтверждается в частности тем, что уже создаются новые лекарственные препараты, воздействующие на пуринорецепторы.
Фармакологические эксперименты на изолированных тканях
Самцов белых лабораторных крыс (200-300 г) и беспородных морских свинок (350-600 г) оглушали ударом по голове и обескровливали. Самцов белых беспородных кроликов (2-3 кг) умерщвляли введением в краевую вену уха 20 мл воздуха. Семявыносящие протоки и мочевой пузырь выделяли и готовили продольные мышечные препараты размером примерно 2x10 мм. Мышечные препараты помещали в термостатируемый стаканчик с раствором Кребса объемом 10 мл для регистрации механической активности (37±0.5С). Один конец мышечного препарата фиксировали, а второй - с помощью шелковой нити был прикреплен к изометрическому датчику механической активности FSG-01 (Linton, Великобритания). Запись проводили на компьютере с помощью специальной программы (MP100WSW Data Acquisition System) и интерфейса, разработанных фирмой Віораск (Великобритания). Начальная нагрузка в 1 г была приложена к препарату, который затем оставляли в покое на 1 час для стабилизации, меняя раствор Кребса в ванночке каждые 10-15 минут. Модифицированный раствор Кребса имел следующий состав (в мМ): NaCl 133, КС1 4.7, NaHC03 16.4, MgS04 0.6, NaH2P04 0.8, СаСЬ 2.5, глюкоза 7.7, и постоянно аэрировался газовой смесью 95% кислорода и 5% углекислого газа (рН 7.3-7.4). Стимуляцию электрическим полем производили с помощью стимулятора Grass S9 (США) посредством двух платиновых колец диаметром 2.5 мм, находящихся на расстоянии 10 мм друг от друга, через которые был пропущен мышечный препарат. Стимуляцию производили прямоугольными импульсами различной частоты (1-32 имп/с), шириной 0.5 мс, при напряжении 100 В до тех пор, пока сокращение после прохождения своего максимума не снизится примерно на одну треть. Интервалы в 60 с выдерживали между последующими стимуляциями.
В предварительной серии контрольных экспериментов была оценена правильность выбранных параметров электрической стимуляции в отношении нейро-опосредованности регистрируемых сократительных ответов. Для этого регистрировали сократительные ответы мышечных препаратов до и после инкубирования в течение 30 мин. с тетродотоксином (0,1 цМ), являющимся токсином, селективно нарушающим нервную проводимость. Было установлено, что при использовании указанных выше параметров электрической стимуляции, исследованные ткани отвечают частото-зависимыми сокращениями, которые полностью угнетаются тетродотоксином. При этом тетродотоксин никак не влиял на сокращения гладкомышечных препаратов, вызванных КС1 (60 тМ). Таким образом, мы убедились, что выбранные нами параметры стимуляции обеспечивают нейро-опосредованные сокращения и не оказывают прямого стимулирующего влияния на гладкие мышцы. Во всех экспериментах с электрической стимуляцией в раствор Кребса добавляли фентоламин (3 цМ) и атропин (1 цМ) для исключения вовлечения в ответ ткани соответственно а-адрено- и М-холинорецепторов. Агонист Р2Х рецепторов а,р-метилен АТФ (0.1 - 30 цМ) вносили непосредственно в стаканчик, и отмывали препарат несколько раз раствором Кребса после того, как сокращение достигало максимума. Для избежания десенситизации рецепторов, интервалы как минимум в 30 мин делали перед каждой следующей концентрацией агониста со сменой раствора Кребса в стаканчике каждые 10 мин. Зависимости "частота-сокращение" или "концентрация-сокращение" оценивали до и после инкубации препарата (как минимум в течение 20 мин) с тестируемыми веществами. Только одно вещество в 1-2 концентрациях оценивалось на одном гладкомышечном препарате.
В контрольной серии экспериментов зависимость "частота-сокращение" или "концентрация-сокращение" оценивали повторно на одном и том же препарате в нормальном растворе Кребса. Было установлено, что сократительные ответы на электрическую стимуляцию и на а,р метилен АТФ достоверно не меняются во времени. Все сократительные ответы тканей рассчитывали как процент от сокращения мышечной полоски на раствор КС1 в концентрации 240 мМ, который добавляли в конце эксперимента. Вентральный продольный тяж слепой кишки морских свинок вырезали и готовили препараты длиной примерно 10 мм. После фиксирования в термостатируемом стаканчике и приложения начальной нагрузки в 1 г, мышечный препарат оставляли на 1 час для стабилизации, меняя раствор Кребса каждые 10-15 мин. После этого для тонического сокращения мышц в ванночку добавляли карбахолин в концентрации 0.05 цМ два или три раза с интервалом в 10-15 минут до получения стабильных сократительных ответов с выраженным плато на максимуме. На фоне тонического действия карбахолина на этом препарате оценивали расслабительные ответы АТФ (0.01-100 цМ) и СЭП (0.5-8 Гц, 0.5 мс, 100 В). АТФ добавляли непосредственно в стаканчик и отмывали несколько раз раствором Кребса после того как расслабляющий ответ на АТФ проходил свой максимум.
Препарат оставляли в покое не менее чем на 10 мин до следующего добавления карбахолина и тестирования новой концентрации АТФ. Ответы мышечного препарата на электрическую стимуляцию оценивали на фоне тонического действия карбахола после достижения плато, повышая частоту стимуляции с интервалом 30 с. За это время происходило возвращение тонуса мышцы к уровню исходного плато. Зависимость "концентрация-эффект" и "частота-эффект" оценивали до и после инкубирования (не менее 20 мин) с испытуемыми веществами. Ответы рассчитывались как процент от максимально возможного расслабления. В контрольных экспериментах было установлено, что ни эффект карбахолина, ни влияние АТФ или СЭП на продольный тяж слепой кишки морской свинки не изменяются во времени. Подкожную артерию бедра кролика выделяли в ее проксимальном отделе, освобождали от соединительных тканей и кольцевые сегменты сосуда длиной 4-5 мм помещали горизонтально в термостатируемую ванночку объемом 10 мл для регистрации механической активности (Bevan and Osher, 1972). В просвет сосуда вводили две проволоки (диаметр 0.5 мм) из нержавеющего металла, одна из которых фиксировалась, а вторая с помощью шелковой нити соединялась с изометрическим датчиком. Затем к сосуду прикладывали начальную нагрузку в 1 г и оставляли в покое не менее чем на 1 час, регулярно меняя раствор Кребса в ванночке. После этого в ванночку добавляли гистамин 10 мкМ повторно с интервалом 15-20 мин до тех пор, пока не добивались повторяемых стабильных сократительных ответов.
Фармакологическая оценка Р2-рецептор-антагонистической активности соединений, относящихся к производным пиридоксаль-фосфата и пиридиксаль-фосфоната (группа соединений К)
Эксперименты с этой группой препаратов также были проведены в двух последовательных сериях. В первой серии все новые соединения оценивались в экспериментах на изолированных мочевом пузыре и семявыносящих протоках морской свинки (Р2Х рецептор-опосредованные сократительные ответы) и продольном тяже слепой кишки морской свинки (P2Y рецептор-опосредуемое расслабление). Во второй серии экспериментов наиболее перспективные соединения, отобранные по результатам первой серии, более глубоко изучались, используя ткани кролика. Стимуляция электрическим полем (СЭП) мышечных полосок мочевого пузыря морской свинки в присутствие атропина и фентоламина приводит к зависимым от частоты сократительным ответам, которые максимальны при частоте 32 Гц (Таблицы 49-126). На Рисунках 4.10-4.12 приведены результаты экспериментов, полученных при стимуляции частотой 4, 8 и 16 Гц. Как видно из представленных на рисунках результатов, большинство соединений группы К не оказало достоверного влияния на сократительные ответы мочевого пузыря морской свинки. Достоверное угнетение этих ответов было получено лишь при использовании соединений Кб, К12 и К13 при всех частотах стимуляции, а также соединений К8 и К10 при некоторых частотах СЭП (Рис. 4.10-4.12). Во всех случаях достоверных изменений, соединения этой группы угнетали Р2Х-рецептор-опосредованные сокращения примерно на 40-50%.
При использовании семявыносящего протока морской свинки мы получили несколько иные результаты (Рисунки 4.13-4.15). На этой ткани большинство из используемых соединений проявило выраженный антагонизм по отношению к сократительным ответам, вызванным СЭП в присутствии М-холино- и альфа-адреноблокатора. Например, при частоте стимуляции 16 Гц лишь четыре соединения из 26 не оказали достоверного угнетения сокращений семявыносящих протоков морской свинки. При этом, большинство из 22 оказавших достоверное влияние соединений угнетало сокращения очень значительно - более чем в два раза по сравнению с исходными сокращениями. 8 Наиболее выраженный и стабильный ингибирующий ответ при всех частотах стимуляции проявили соединения Кб, К8 и К14, которые угнетали сократительные ответы семявыносящих протоков морской свинки, вызванные СЭП, примерно на 80% при большинстве использованных частот стимуляции. Результаты экспериментов по оценке Р2У-опосредуемых расслаблений продольного тяжа слепой кишки морской свинки представлены на Рисунках 4.16-4.18. В этих экспериментах большинство соединений не проявило определенного влияния на расслабления тонизированного карбахолом продольного тяжа слепой кишки, вызванные как СЭП, так и АТФ. Из всех исследованных соединений этой группы достоверное угнетение расслабительных ответов этой ткани вызывали лишь соединения КЗ, К9 и К17, которые проявлялись лишь при некоторых частотах стимуляции или лишь при некоторых концентрациях АТФ. Интересно, что соединение К16, достоверно не влияя на ответы этой ткани на СЭП, усиливало расслабления, вызванные АТФ. Таким образом, в результате проведенного исследования 26 новых производных пиридоксальфосфата и пиридоксальфосфоната на трех тканях морской свинки наиболее перспективными с точки зрения влияния на Р2Х рецепторы явились соединения Кб, К8, К12 и К13. Эти препараты проявили наиболее сильный антагонизм по отношению к Р2Х-рецептор-опосредуемым сокращениям на обеих исследованных тканях, не влияя при этом на Р2У-рецептор-опосредуемые расслабления. Соединения К14 и К26 были одними из наиболее сильных в этой группе по влиянию на Р2Х-рецепторы семявыносящего протока морской свинки, однако, не оказывали достоверного влияния на эти рецепторы в мочевом пузыре морской свинки. Из всех соединений этой группы лишь соединение К9 проявило значимый антагонизм по отношению к Р2У-опосредуемым ответам, при этом не влияя на Р2Хрецепторы мочевого пузыря, но угнетая сокращения, опосредуемые Р2Х рецепторами семявыносящего протока. В результате анализа данных первой серии экспериментов с этой группой соединений, нами были отобраны 7 соединений для оценки их эффектов на Р2Х рецепторы трех тканей кролика - мочевого пузыря, семявыносящих протоков и подкожной артерии бедра. Результаты этой серии экспериментов представлены в Таблицах 127-147 и Рисунках 4.19-4.25. Изолированный мочевой пузырь кролика имел особенности ответов на стимуляцию электрическим полем (СЭП) в присутствии атропина и фентоламина.
Проявлялось это тем, что уже наименьшая из использованных частот стимуляции (2 Гц) вызывала сокращения, примерно равные половине от максимального сократительного ответа на СЭП, а максимальный ответ регистрировался при частотах 8, 16 или 32 Гц. Из всех отобранных соединений лишь соединение Кб оказало достоверное угнетающее влияние на сократительные ответы этой ткани (Рис. 4. 19). Остальные соединения не оказывали какого Изолированные семявыносящие протоки кролика имели свои особенности ответов на СЭП в присутствии М-холино- и альфа-адреноблокатора. На этой ткани СЭП частотами 2 и 4 Гц практически не вызывает сократительной реакции, а с частоты 8 Гц сокращения имеют прямо-пропорциональный частото-зависимый характер. Все семь отобранных соединений имели однонаправленное угнетающее влияние на сокращения семявыносящих протоков кролика, вызванные СЭП, однако, статистически значимые снижения по сравнению с исходными регистрировались лишь при применении соединений Кб, К9 и К12. Из этих трех соединений наиболее выраженный антагонизм имело соединений Кб (Рис. 4.19).
Изучение влияния исследованных соединений на активность экто-АТФазы тканей морских свинок
В этих экспериментах мы исследовали соединения, которые проявили определенные значимые влияния на Р2-рецептор-опосредуемые ответы в фармакологических экспериментах. Таким образом, нами было оценено влияние на активность экто-АТФазы следующих 9 соединений - Т8, Т12, ХЗ, Х8, Кб, К9, К12, К14 и К26. Результаты экспериментов представлены в Приложении в Таблице 148 и на Рисунке 4.26. Из исследованных 9 соединений лишь одно соединений - ТІ2 - оказало достоверное влияние на активность экто-АТФазы всех трех тканей морской свинки. Соединение Т12 примерно в два раза угнетало активность фермента в мочевом пузыре и семявыносящих протоках и примерно на 25% угнеталась активность фермента в ткани продольного тяжа слепой кишки. Остальные восемь исследованных соединений не оказали достоверного влияния на активность фермента ни в ткани мочевого пузыря, ни в продольном тяже слепой кишки. Соединение К12 повышало активность экто-АТФазы семявыносящих протоков морской свинки почти на 25%, тогда как соединение К14 не сильно, но достоверно снижало активность этого фермента в этой ткани. Остальные соединения не оказали существенного влияния на активность экто-АТФазы в этой ткани. За прошедшие более чем три десятилетия с момента опубликования Бернстоком своего первого обзора по пуринорецепторам (Burnstock, 1972) был сделан очень большой прогресс в изучении этих рецепторов. В настоящее время установлена молекулярная структура всех известных на сегодняшний день подтипов Р2-рецепторов, изучены механизмы опосредования эффекта их лигандов, в значительной степени исследованы локализация и функциональная роль в организме экспериментальных животных. В последнее время появилась серия работ, посвященных оценке физиологического и патофизиологического значения этих рецепторов в организме человека (Зиганшин и др., 2002, 2003; Ziganshin et al., 2002, 2003). Однако, значительным препятствием в исследовании Р2-рецепторов до сих пор остается недостаточный арсенал эффективных и селективных антагонистов этих рецепторов. Несмотря на то, что несколько лабораторий занимаются синтезом подобных соединений и анализом их эффективности, прогресс в этой области пока еще не очень значительный.
Проведенный нами анализ литературы о химической структуре описанных к началу нашего исследования антагонистов Р2-рецепторов позволил установить, что большинство из них относятся к классу азотсодержащих гетероциклических соединений. Поэтому нами и было предпринято данное исследование по поиску антагонистов Р2-рецепторов среди новых азотсодержащих гетероциклических соединений, а именно производных тиазола, хиноксалина, азолохиноксалина, пиридоксальфосфата и пиридоксальфосфоната. Проведенное нами исследование 52 новых химических соединений, относящихся к классу азотсодержащих гетероциклических веществ позволило установить, что этот класс соединений действительно представляет интерес для поиска новых эффективных антагонистов Р2-рецепторов. Известно, что производные тиазола и хиноксалина имеют весьма широкий спектр биологической активности (Davey et al., 1991; Ohmori et al., 1997; Лебедев, 2002), однако их активность в отношении Р2-рецепторов до нашего исследования не была оценена. Мы установили, что из 12 производных тиазола, имеющих различные заместители в тиазольном кольце, лишь два соединения (Т4 и ТІ2) достоверно снизили величину сократительных ответов семявыносящих протоков крыс, опосредуемых Р2Х-рецепторами. Однако, в ходе последующих экспериментов выяснилось, что, хотя оба эти соединения также угнетают действие агониста Р2Х рецептора а,р-метилен-АТФ на тканях морской свинки, они вместе с тем препятствуют тонизирующему действию карбахола на продольный тяж слепой кишки морской свинки. Можно предположить, что эти соединения, вероятно, имеют неспецифическое влияние на сократительные элементы клетки и в результате этого угнетают любые сократительные ответы. Следует отметить, что соединение ТІ2 было нами также оценено в отношении влияния на экто-АТФазу тканей морской свинки и было установлено значительное ингибирующее действие вещества на этот фермент во всех трех исследованных тканях. Таким образом, исследованные производные тиазола либо не проявили эффекта на, исследованных нами моделях, либо оказывают неспецифическое действие. Из исследованных 8 производных хиноксалина лишь одно соединение (Х8) на всех использованных тканях проявило хороший антагонизм по отношению к сокращениям, опосредуемым Р2Х-рецепторами. Это вещество значительно угнетало сокращения изолированных семявыносящих протоков крыс, вызванные возбуждением Р2Х-рецепторов, а также сокращения изолированных семявыносящих протоков и мочевого пузыря морских свинок, вызванные селективным агонистом Р2Х-рецепторов - а,Р-метилен-АТФ. Важно отметить при этом, что это соединение никак не влияло на эффекты, опосредуемые P2Y-рецепторами. То есть соединение Х8 проявило не только хорошую эффективность, но и определенную селективность своего антагонизма. Оценка влияния соединения на активность экто-АТФазы показала, что в исследованной концентрации оно никак не влияет на активность этого фермента ни в одной из трех исследованных тканей морской свинки. По нашему мнению, это соединение заслуживает более пристального внимания с целью детального изучения установленного антагонизма.
Ранее для других производных хиноксалина был выявлен антагонизм с аденозиновыми Агв рецепторами (Webb et al., 2003). Наши исследования позволили установить, что хиноксалиновые производные могут обладать антагонизмом и к Р2-рецепторам. Мы считаем, что соединение Х8 может служить хорошим исходным веществом для направленного синтеза новых более эффективных антагонистов Р2-рецепторов в ряду производных хиноксалина. Мы не выявили перспективных соединений из 6 исследованных соединений азолохиноксалина. Ни одно из них не оказало достоверного влияния ни на Р2Х-опосредованный сокращения, ни на Р2У-опосредованные расслабления на использованных тканях крыс и морских свинок. Пиридоксальфосфат-6-азофенил-2 ,4 -дисульфоновая кислота (PPADS) вначале была описана как селективный блокатор Р2Х-рецепторов гладкомышечных клеток (Lambrecht et al., 1992; Ziganshin et al., 1993, 1994; McLaren et al., 1994). В последующем оказалось, что в высоких концентрациях PPADS способен блокировать как естественные, так и рекомбинантные Р2У-рецепторы (Воуег et al., 1994; Zyal et al., 1994; Windscheif et al., 1994; Brown et al., 1995; Schachter et al., 1996). Кроме того, было установлено, что PPADS угнетает активность экто-АТФазы тканей, повышая тем самым активность АТФ как на Р2Х, так и на Р2У-рецепторах, и тем самым еще более запутывая ситуацию с оценкой его эффективности (Windscheif et al., 1995; Chen et al., 1996; Ziganshin et al., 1996). Тем не менее, поскольку было установлено, что PPADS в фармакологических экспериментах не оказывает влияния на альфа-1- и бета-1-адренорецепторы, Мю-холинорецепторы, Hi-гистаминорецепторы, 5-НТз-серотонинорецепторы и Ai и Агв аденозиновые рецепторы (Lambrecht et al., 1992; Ziganshin et al., 1993, 1994; Boyer et al., 1994; Trezise et al., 1994), это вещество стало и остается до сих
![Изучение Р2-рецепторов в матке беременных женщин [Электронный ресурс]](/i/i/4397/186601.png "Изучение Р2-рецепторов в матке беременных женщин [Электронный ресурс] Зайцев Александр Петрович")
![Новые аспекты в синтезе азотсодержащих гетероциклов ряда пиперидина, гексагидропиримидина, 3-аза- и 3,7-диазабицикло[3.3.1] нонанов](/i/i/4273/487714.png "Новые аспекты в синтезе азотсодержащих гетероциклов ряда пиперидина, гексагидропиримидина, 3-аза- и 3,7-диазабицикло[3.3.1] нонанов Байбулатова, Наиля Зинуровна")
