Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Фармакология иммуномодулирующих средств и основы патогенетической терапии иммунодефицитов (обзор литературы) 12
1.1. Понятие об иммуномодуляторах 12
1.2. Патогенетические основы лечения острых бронхолегочных заболеваний иммуномодуляторами 17
Глава 2. Материалы и методы исследований 48
2.1. Материалы и структура экспериментов 48
2.2. Токсикологические исследования 48
2.3. Моделирование острого бронхолегочного воспаления на крысах 49
2.4. Метод гистологической обработки и исследования ткани легких 49
2.5. Биохимические методы исследований 50
2.5.1. Определение содержания молочной и пировиноградной кислот в ткани легких и лимфоцитах 50
2.5.2. Определение содержания свободных адениловых нуклеотидов в ткани легких и лимфоцитах 51
2.6. Иммунологические исследования 52
2.6.1. Реакция торможения миграции лейкоцитов 52
2.6.2. Определение фагоцитарной реакции нейтрофилов крови 53
2.6.3. Лизосомально-катионный тест 53
2.6.4. Тест восстановления нитросинего тетразолия 54
2.7. Изучение индукции интерферона на мышах 55
2.8. Характеристика использованных фармакологических средств 57
2.9. Статистическая обработка результатов исследования 61
Результаты собственных исследований 62
Глава 3. Исследование общетоксического действия трекрезана 62
Глава 4. Исследование иммунологических свойств трекрезана в эксперименте 67
4.1. Влияние трекрезана на показатели клеточного иммунитета и процессы фагоцитоза у мышей 70
4.2. Влияние трекрезана на показатели гуморального иммунитета 72
4.3. Влияние трекрезана на интерфероногенез 79
Глава 5. Влияние трекрезана и комбинаций на его основе на структурные, метаболические и иммунологические изменения в легких и лимфоцитах крови крыс при остром бронхолегочном воспалении 82
5.1. Патоморфологические, метаболические и иммунологические изменения при экспериментальном бронхолегочном воспалении у крыс 82
5.2. Влияние трекрезана и комбинаций на его основе на выживаемость крыс и структурные изменения в легких при остром бронхолегочном воспалении 87
5.3. Влияние трекрезана и комбинаций на его основе на метаболические изменения в легких и лимфоцитах крови крыс при остром бронхолегочном воспалении 91
5.4. Влияние трекрезана и комбинаций на его основе на показатели иммунитета у крыс при остром бронхолегочном воспалении 98
Глава 7. Обсуждение результатов исследования 103
Выводы 117
Практические рекомендации 119
Список литературы 120
- Понятие об иммуномодуляторах
- Исследование общетоксического действия трекрезана
- Патоморфологические, метаболические и иммунологические изменения при экспериментальном бронхолегочном воспалении у крыс
- Влияние трекрезана и комбинаций на его основе на показатели иммунитета у крыс при остром бронхолегочном воспалении
Введение к работе
Актуальность исследования. В настоящее время фармакология располагает достаточно большим арсеналом иммуномодулирующих средств, применяемых при различных видах патологии (Цыган В.Н. и др., 2008). К ним относятся препараты микробного происхождения (продигиозан, рибомунил, пирогенал, вакцина БЦЖ), пептидные иммуномодуляторы (тималин, тимо-ген, тимотропин, тимостимулин, т-активин, интерфероны), синтетические средства (левамизол, нестероидные анаболизанты, дибазол, трекрезан, поли-оксидоний), препараты растительного происхождения (настойка эхиноцеи, иммунал, сироп корня солодки, сплат, настойки женьшеня, элеутерококка, золотого корня). Несмотря на востребованность препаратов микробного, животного и растительного происхождения, многие специалисты отдают предпочтение иммуномодуляторам относительно простого строения, полученным на основе химического синтеза. Среди новых средств этой направленности можно выделить метапрот, полиоксидоний, трекрезан (Болехан А.В., 2006).
Новый отечественный препарат трекрезан - триэтаноламмониевая соль 2-метилфеноксиуксусной кислоты - представляет собой высокоэффективное фармакологическое средство с адаптогенным и иммуностимулирующим действием. Препарат создан в Иркутском институте органической химии СО РАН, прошел доклинические и клинические испытания как адаптогенное средство и разрешен Фармакологическим комитетом МЗ РФ к широкому применению (per. № 94/151/7). Трекрезан оказывает стресспротекторное действие на моделях иммобилизационного и болевого гиподинамического стресса, ускоряет репарацию поврежденных тканей (печень, миокард, мышцы), защищает внутренние органы от повреждающего действия токсинов, СВЧ-облучения, инфекционного фактора, обладает антиоксидантной активностью (Казамировская В.Б. и др., 1996; Шабанов П.Д. и др., 2006). В то же время общий спектр фармакологической активности трекрезана, а также механизмы его действия на организм и, в частности, на иммунную систему, исследованы недостаточно и требуют уточнения (Болехан А.В., 2006). Важно отметить, что для большинства фармакологических препаратов иммуномо-дулируюшей направленности важно не только и не столько выраженность их иммуноактивирующего действия, сколько способность устранять иммунодефицита, формирующиеся при различных заболеваниях, прежде всего, воспалительных (Хаитов P.M., 2008). К таким состояниям относят острое бронхо-легочное заболевание (пневмонию), которое занимает одно из ведущих мест среди всех видов легочной патологии в стационарах общего профиля и приобретает важное медико-социальное значение, обусловленное поражением активных в трудовом отношении лиц, а также значительным экономическим ущербом вследствие потери рабочего времени по нетрудоспособности. Особую угрозу при формировании бронхолегочной патологии представляют повторяющиеся эпизоды заболевания пневмонией, свидетельствующие о су-
пре&ии иммунного ответа и развитии вторичных иммунодефицитных состояний (Чучалин А.Г., 1995, 2008). Иммунопатогенетические механизмы развития острых бронхолегочных заболеваний требуют поиска новых эффективных средств коррекции нарушений иммунного статуса. Перспективными иммуномодуляторами с широкой фармакологической активностью являются новые отечественные иммуномодуляторы трекрезан и полиоксидоний (Кази-мировская В.Б. и др., 1996; Пинегин Б.В. и др., 2004; Болехан А.В., 2006). В то йке время, сведений о применении данных средств при остром бронхоле-гочном воспалении сравнительно мало, а сведения об их метаболических и энергостабилизирующих свойствах в тканях легких и иммунокомпетентных клетках при пневмонии отсутствуют.
Целью настоящей работы явилось изучение токсичности, а также иммуностимулирующих и энергостабилизирующих свойств трекрезана и возможности их усиления при комбинированном использовании иммуномоду-ляторов.
В задачи исследования входило:
Изучить острую, подострую и хроническую токсичность трекрезана в опытах на мышах, крысах, кроликах и собаках.
Изучить влияние трекрезана на показатели клеточного и гуморального иммунитета в модельных системах.
Изучить действие трекрезана и комбинаций на его основе на морфологические изменения и энергетический статус в ткани легких и лимфоцитах крови при экспериментальном остром бронхолегочном воспалении у крыс.
Изучить влияние трекрезана и комбинаций на его основе на показатели неспецифической резистентности фагоцитарно-макрофагальной
системы и клеточного иммунитета при экспериментальном остром бронхолегочном воспалении у крыс.
Научная новизна работы. Доказано, что трекрезан обладает свойствами малотоксичного соединения (IV класс токсичности) при остром, подоостром и хроническом введении животным разных видов (мыши, крысы, кролики, собаки). Трекрезан мажет быть классифицирован как типичный иммуномодулятор. Он угнетает колониеобразующую активность полипотентных стволовых кроветворных клеток, увеличивает количество ядросодержащих .клеток и стимулирует пролиферацию мононуклеарных клеток, действуя на разных этапах образования лимфоцитов из стволовой кроветворной клетки. Важной особенностью действия трекрезана является его способность стимулировать дифференцировку и функциональную активность более зрелых лимфоцитов, не влияя на новые, функционально незрелые лимфоидные клетки. Кроме того, трекрезан стимулирует
пролиферацию В-лимфоцитов и усиливает продукцию лимфокинов, монокинов и интерферонов. Иммуномодулирующее действие трекрезана сопоставимо с таковым или превышает активность препаратов сравнения (полиоксидония, метапрота). Все исследованные иммуномодуляторы уменьшают экспериментальное острое бронхолегочное воспаление у крыс, нормализуя энергетический обмен в ткани легких и лимфоцитах крови. Они также повышают лимфокинпродуцирующую функцию лимфоцитов, фагоцитарную активность нейтрофилов, активность кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов, снижают фагоцитарное число, показатель завершенности фагоцитоза и активность кислородзависимых микробицидных систем фагоцитов при остром бронхолегочном воспалении. Комбинированное применение трекрезана с другими иммуномодуляторами (метапрот) повышает его иммуностимулирующие свойства.
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные экспериментальные данные позволяют рассматривать трекрезан как малотоксичный (безопасный) высоко эффективный иммуномодулятор, активирующий все формы иммунитета (клеточный, гуморальный, фагоцитоз). Простое химическое строение, низкая токсичность, невысокая стоимость препарата позволяет рекомендовать трекрезан в качестве средства выбора при назначе-ниииммуномодуляторов (в сравнении с полиоксидонием и другими препаратами данного класса). Повышение иммуномодулирующей активности трекрезана при комбинировании его с другими иммуномодуляторами (метапро-том, полиоксидонием) позволяет достичь более высоких терапевтических результатов при первичных и вторичных иммунодефицитах. Наконец, результаты проведенного исследования обосновывают новые возможности метаболической защиты организма при бронхолегочных воспалениях с помощью трекрезана и комбинации на его основе. При этом комбинации трекрезана или полиоксидония с метапротом наиболее предпочтительны в лечении бронхолегочных заболеваний как средства выбора для коррекции проявлений вторичного иммунодефицита и нарушений энергетического обмена. Оптимизация указанных процессов обеспечивает полноценность лечения при бронхолегочном воспалении.
Основные положения, выносимые на защиту:
Трекрезан в экспериментальных условиях обладает низкой токсичностью и выраженными иммуномодулирующими свойствами.
Трекрезан оказывает иммуностимулирующее действие на все виды иммунитета. Он стимулирует пролиферацию мононуклеарных клеток, действуя на разных этапах образования лимфоцитов из стволовой кроветворной клетки, активирует дифференцировку и функциональную активность зрелых лимфоцитов, оказывает прямое стимулирующее влияние на пролиферацию В-лимфоцитов и усиливает продукцию лимфокинов и монокинов. Трекрезан обладает иннтерфероногенной активностью, повышая внутриклеточный син-
тез альфа-интерферона с дальнейшей активацией синтеза гамма-интерферона.
Трекрезан и иммуномодуляторы сравнения (полиоксидоний, мета-прот) эффективны при экспериментальном остром бронхолегочном воспалении.; Они уменьшают структурные повреждения ткани легких и нормализует энергетические процессы в легких и лимфоцитах крови. Действие трекрезана усиливается при его совместном применении с полиоксидонием.
Трекрезан и иммуномодуляторы сравнения (полиоксидоний,- мета-прот) усиливают процессы неспецифической защиты (фагоцитоз), клеточного и гуморального иммунитета при экспериментальном остром бронхолегочном воспалении. Иммуномодулирующее действие трекрезана усиливается при его совместном применении с полиоксидонием.
Апробация и публикация материалов исследования. Материалы
диссертации доложены на международной конференции
«Экспериментальная биология и интегральная медицина» (Судак, 2005); на IV международной научной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2006); на 5-ом международном конгрессе по патофизиологии (Пекин, 2006), на заседании Санкт-Петербургского фармакологического общества (Санкт-Петербург, 2007).
Апробация диссертации прошла на межкафедральном заседании кафедры фармакологии и НИЛ иммунологии при кафедре факультетской терапии Боенно-медицинской академии им. С.М.Кирова.
* Реализация результатов работы. Диссертационная работа выполнена в рамках плановой темы НИР Военно-медицинской академии им. СМ. Кирова № 4.04.133.П.12. Оригинальные авторские подходы методического характера реализованы в научно-исследовательской деятельности и учебном процессе кафедр фармакологии, нормальной физиологии и патологической физиологии Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 7 статей (3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК) и 4 тезиса.
Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 143 страницах машинописного текста, иллюстрированы 27 таблицами и 11 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Библиографический указатель содержит 226 наименований, в том числе 164 отечественных и 62 иностранных.
Понятие об иммуномодуляторах
Иммуностимулирующие (иммуномодулирующие) средства представляют собой препараты, усиливающие клеточный и гуморальный иммунитет, а также повышающие показатели неспецифической иммунной защиты (фагоцитоз). Они применяются для лечения заболеваний, обусловленных первичной или вторичной недостаточностью иммунной системы или ее дисфункцией (Юшков В.В. и др., 2002; Цыган В.Н. и др., 2008). Ниже представлена классификация иммуномодуляторов.
Классификация иммуномодуляторов
1. Микробного происхождения
Продигиозан Пирогенал Вакцина БЦЖ
2. Пептидные иммуномодуляторы
Тим алии
Тимоген
Тимотропин
Тимостимулин
Т-активин
Интерферон-альфа
Интерферон-бета
Интерферон-гамма
3. Синтетические иммуномодуляторы
Левамизол
Нестероидные анаболики (метилурацил)
Актопротекторы (бемитил)
Дибазол
Трекрезан
Полиоксидоний Препараты тимуса. Тимус, или вилочковая железа, является центральным органом иммунной системы. В тимусе вырабатывается несколько (около 10) пептидных факторов, которые регулируют созревание лимфоцитов и формирование иммунного ответа. В классификации выделены иммуномодуляторы тактивин, тималин, тимоген, вилозен, которые содержат комплексы пептидных факторов тимуса. При угнетении или дисфункции иммунной системы препараты тимуса восстанавливают ее нарушенную деятельность сходно с естественными стимулирующими гормонами тимуса.
Показания к их применению:
состояния и заболевания, обусловленные первичным или вторичным иммунодефицитом. Последний часто встречается при хронических инфекциях (остеомиелит, сепсис, ожоговая болезнь, вирусные, грибковые, микробные инфекции), трофических язвах, пролежнях, лучевых поражениях;
как средства профилактики инфекционных осложнений в посттравматическом и послеоперационном периодах;
как иммунокорректоры при проведении лучевой терапии и химиотерапии опухолей.
Наиболее эффективен тактивин, который назначают п/к в дозах 0,1-0,2 мг/день или через день. Тималин назначают по 10-30 мг в/м. Курс лечения — 10-20 дней. Вилозен применяют при аллергических ринитах, синуситах местно в виде закапываний в нос или интраназальных ингаляций.
При назначении препаратов бывают аллергические реакции, но сравнительно редко.
Интерфероны (альфа-, бета-, гамма-) обычно используют как неспецифические противовирусные средства. Наиболее значим гамма-интерферон, который является лимфокином и вырабатывается Т-лимфоцитами, стимулируемыми специфическими антигенами. Гамма интерферон повышает фагоцитарную активность макрофагов, усиливает действие Т-киллеров на инфицированные, поврежденные и опухолевые клетки, стимулирует антителообразование и ряд белков, обеспечивающих противовирусное состояние клеток, фактора некроза опухолей альфа, останавливающего пролиферацию опухолевых клеток. Применяется для лечения онкологических заболеваний, ревматоидного артрита, системной красной волчанки и других коллагенозов, вирусных гепатитов. В качестве иммуномодуляторов могут быть использованы индукторы интерферонов (неовир и др.), усиливающие выработку эндогенных интерферонов клетками организма. Это в основном интерфероны альфа- и бета-. При иммунодефицитных состояниях и опухолях с метастазами используют интерлейкин-1 (беталейкин) и интерлейкин-2 (пролейкин).
Синтетические иммуномодуляторы. Механизм их действия связан с активацией рецепторов лимфоцитов, следствием чего является усиление иммунного ответа. К этой группе относят левамизол (декарис), нестероидные анаболические средства (метилурацил), некоторые актопротекторы (бемитил), адаптоген дибазол, новый иммуномодулятор трекрезан, полиоксидоний.
Левамизол является противоглистным средством и обладает мощным иммуномодулирующим эффектом. Левамизол повышает чувствительность иммунных клеток к гормонам тимуса, стимулирует систему клеточного и Т-зависимого гуморального иммунитета. Препарат восстанавливает сниженный уровень иммунитета, практически не влияя на нормальный иммунитет. Повышает фагоцитарную активность макрофагов, усиливает пролиферацию Т-лимфоцитов, выработку интерлейкинов и интерферонов. Назначают по 150 мг (1 табл.) взрослым или по 50 мг детям 1-2 раза в неделю в течение 2-3 недель. Препарат имеет сравнительно высокую токсичность, вызывая желудочно-кишечные расстройства, гриппоподобный синдром, бессонницу, агранулоцитоз. Метапрот (2-тиобензимидазола гидробромид, или бемитил) обладает мягким психостимулирующим действием на центральную нервную систему. Повышает работоспособность, восстанавливает после истощающих нагрузок, инфекций, интоксикаций, гипоксических состояний. Метапрот активирует пластический и энергетический обмен организма, в том числе и в иммунной системе. Усиливает образование антител, Т-зависимые иммунные ответы, систему неспецифической иммунорезистентности, особенно функцию макрофагов. В качестве иммуномодулятора назначают при лечении вирусных гепатитов, хронических вирусных инфекциях дыхательных путей, рецидивирующих бактериальных инфекциях (рожистое воспаление, пиодермия).
Дибазол относится к адаптогенам (Шабанов П.Д., 2002). В соответствии с представлениями Н.В. Лазарева дибазол повышает систему неспецифической сопротивляемости организма. Это проявляется стимуляцией фагоцитоза макрофагами, увеличением синтеза антител, интерферонов, интерлейкинов. Препарат используют для профилактики гриппа и ОРВИ в период сезонных эпидемий (Шабанов П.Д., 2008).
Среди новых иммуномодуляторов выделяется трекрезан — триэтаноламмониевая соль 2-метилфеноксиуксусной кислоты — высокоэффективное фармакологическое средство с широким спектром адаптогенного, иммуностимулирующего и терапевтического действия. Препарат создан в Иркутском институте органической химии СО РАН, прошел доклинические и клинические испытания и разрешен Фармакологическим комитетом МЗ РФ к широкому применению (приказ №151 от 26.06.94, регистрационное удостоверение 94/151/7), ФС №42-3848-99; №42-3849-99.
Способ получения препарата защищен авторскими свидетельствами и зарубежными патентами Франции, Англии, ФРГ и др. Метод синтеза трекрезана прост, не требует специального аппаратурного оформления и основан на выпускаемом в России доступном сырье, он позволяет получать препарат, содержащий более 99% основного вещества. Формула: [ 2СН3-С6Н4ОСН2СОО]" +NH(CH2CH2OH)3
Исследование общетоксического действия трекрезана
Сводные данные по среднесмертельной дозе трекрезана (ЛД50) для мышей и крыс представлены в таблице 1. Видно, что чувствительность к острому отравлению самцов и самок практически одинакова.
Исследования токсикологического действия трекрезана в терапевтической дозе 5 мг/кг в течение 6 месяцев выполнены на кроликах породы шиншилла. Трекрезан вводили животным с кормом ежедневно.
Анализ гематологических и биохимических показателей крови опытной и контрольной групп животных не выявил существенных отличий между ними. Не отмечено значительной разницы между показаниями обеих групп и при микроскопическом анализе внутренних органов животных после шестимесячного применения трекрезана. Изучение действия трекрезана на крысах при введении препарата в дозах 1/10 и 1/20 ЛД50 выполнено в Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова. Длительность эксперимента составляла 6 недель, препарат вводили в желудок. Данные, представленные в таблицах 2 и 3, указывают, что трекрезан оказывает незначительное влияние на поведенческие реакции крыс в «открытом поле», а также гематологические и биохимические показатели крови животных.
Данные коэффициентов внутренних органов белых крыс из этого эксперимента представлены в таблице 4, и их анализ позволяет сделать заключение о несущественном влиянии трекрезана на исследуемые параметры.
Микроскопический анализ внутренних органов животных в опытных группах выявил изменение только в почках при введении трекрезана в дозе 1/10 от ЛД5о- В этом случае имело место значительное расширение дистального отдела нефрона и собирательных трубочек, в просвете канальцев выявились гомогенные эозинофильные массы.
Кроме исследований на крысах токсикологические исследования выполнены на собаках (самцах и самках) массой 5,5-9,5 кг. Препарат вводили внутрь в дозе 100 мг/кг ежедневно.
В результате проведенных исследований установлено, что при 3-месячном введении в желудок в дозе 100 мг/кг трекрезан не влияет на общее состояние и поведение животных. В течение всего эксперимента собаки, получавшие трекрезан, не отличались от контрольных. Животные имели гладкий шерстный покров, сохраняли обычную двигательную активность, охотно поедали корм. В испытанной дозе препарат не влиял на динамику массы тела животных.
При исследовании морфологического состава периферической крови собак, получавших трекрезан, не удалось выявить достоверных различий исследуемых показателей по сравнению с контролем (табл. 5). Однако показатели количества эритроцитов и уровня гемоглобина в крови животных опытной группы на протяжении всего эксперимента имели тенденцию к повышению по сравнению с контрольной группой. Изменения в лейкоцитарной формуле не найдены (табл. 6).
Отмечено умеренное увеличение уровня общего белка сыворотки крови во все периоды наблюдения (табл. 7). Уровень общего холестерина оставался постоянным.
Показатели активности аланин- и аспартаттрансаминаз, фруктозо-1,6-дифосфатальдолазы, лактатдегидрогеназы - ферментов сыворотки крови, изменение уровня которых является одним из наиболее ранних и надежных показателей паренхиматозного повреждения печени, на протяжении всего периода наблюдения не имели достоверных различий с контролем, были характерными для данного вида лабораторных животных и не выходили за пределы их физиологических показателей нормы (табл. 8).
Для оценки влияния длительного введения трекрезана в дозе 100 мг/кг на экскреторную функцию печени собак в конце хронического эксперимента была проведена бромсульфалеиновая проба, которая является чувствительным и специфическим тестом для обнаружения начальных повреждений печени. Нагрузка бромсульфалеином составляла 10 мг/кг при внутривенном введении (10% раствор в физиологическом растворе). Через 2 и 10 мин после внутривенной инъекции из вены другой конечности брали кровь. Через 2 мин после введения бромсульфалеина его концентрация в крови составляла 11,9±1,4 мг% (контроль) и 11,3+2,3 мг% (опыт). Через 10 мин уровень бромсульфалеина в крови снизился и составлял 4,7±0,9 мг% в контрольной группе и 3,9±1,3 мг% в опытной группе. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии влияния длительного введения трекрезана на экскреторную функцию печени.
Макро- и микроскопические исследования внутренних органов не выявили токсического эффекта трекрезана в этом эксперименте.
ЛД5о для собак составила 2500±320 мг/кг. Клиническая картина отравления была следующей: угнетение центральной нервной системы, повышение тонуса периферической парасимпатической нервной системы, выраженное холиномиметическое действие.
Таким образом, трекрезан является малотоксичным веществом с высоким индексом безопасности применения.
Патоморфологические, метаболические и иммунологические изменения при экспериментальном бронхолегочном воспалении у крыс
У экспериментальных животных, получавших интратрахеально скипидар для моделирования острого бронхолегочного воспаления, при морфологическом исследовании макроскопически наблюдалось значительное, чаще лобарное, воспалительное поражение легких с типичной инфильтрацией и точечными кровоизлияниями в ткань легкого (рис. 1). Легкое уплотнено.
В большинстве случаев патологический процесс локализовался в нижней доле правого легкого. При моделировании острого бронхолегочного воспаления существенных различий между особями по распространенности патологического процесса и характеру патоморфологических нарушений не наблюдалось, что говорит о воспроизводимости и адекватности выбранной модели. Для морфологической оценке моделируемого у крыс бронхолегочного воспаления брали гистологическую структуру, доминирующую в биоптатах ткани. Микроскопически в норме в легком крысы межальвеолярные перегородки обычного вида, кровеносные сосуды их умеренно полнокровные, альвеолы все наполнены воздухом (рис. 2).
Введение крысам скипидара вызывало утолщение межальвеолярных перегородок (рис. 3). Кровеносные сосуды перегородок были расширены и полнокровны. Просветы альвеол заполнены эозинофильной жидкостью с нейтрофильными лейкоцитами. Встречались нити фибрина.
В легком отмечалось наличие экссудата смешанного характера: серозного, фибринозного, фибринозно-гнойного и гнойного. В незначительной части опытов наблюдался некроз легочной ткани. В прилежащих к некрозу альвеолах содержался преимущественно серозно-фибринозный экссудат.
Метаболические изменения при экспериментальном остром бронхолегочном воспалении у крыс проявлялись увеличением в лимфоцитах крови и ткани легких содержания лактата, АДФ и АМФ на фоне снижения содержания пиру вата и АТФ. При этом более выраженные изменения наблюдались в ткани легких (табл. 19).
Так, в лимфоцитах крыс с бронхолегочным воспалением содержание лактата достоверно возрастало на 140%, АДФ - на 69% и АМФ - на 86%). Содержание пирувата снижалось на 81% и АТФ - на 54%.
В ткани легких увеличивалось содержание лактата на 204%, АДФ — на 109% и АМФ - на 143% (р 0,05). Наряду с этим, достоверно снижалось содержание пирувата на 92% и АТФ - на 69% (табл. 20).
Энергетический заряд, регулирующий скорость расхода и синтеза энергии в клетке, позволяет судить об ее энергетических возможностях и в целом об энергетическом потенциале в ткани легких и клетках крови. Изменения в адениннуклеотидном пуле при остром бронхолегочном воспалении приводили к снижению величины энергетического заряда адениннуклеотидов, что свидетельствовало о развитии энергодефицита в лимфоцитах крови и ткани легких крыс. Моделируемое острое бронхолегочное воспаление у крыс сопровождалось угнетением лимфокинпродуцирующей функции лимфоцитов в РТМЛ с Кон-А на 30% и с ФГА - на 24% (табл. 21).
Активность кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов снижалась на 11%. На фоне бронхолегочного воспаления у крыс выявлены достоверные увеличения фагоцитарного числа на 50% и показателя завершенности фагоцитоза - на 37%, при снижении на 15% числа нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе. Наряду с этим, показатели спонтанного НСТ-теста повышались в два раза, а стимулированного - на 30%).
Таким образом, моделируемое острое бронхолегочное воспаление у крыс сопровождается характерными морфологическими изменениями ткани легких и выраженными метаболическими нарушениями, заключающимися в лактацидозе и энергетическом дефиците в ткани легких и клетках крови животных. Наряду с этим, наблюдаются признаки развития вторичного иммунодефицита, заключающиеся в повышенной фагоцитарной активности лимфоцитов, угнетении Т-лимфоцитарной функции и активности кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов.
Влияние трекрезана и комбинаций на его основе на показатели иммунитета у крыс при остром бронхолегочном воспалении
Иммунотропное действие препаратов изучали на животных с экспериментальным острым бронхолегочным воспалением, которым сразу после моделирования и далее на протяжении 5 дней внутрибрюшинно вводили растворы метапрота (25 мг/кг) или трекрезана (25 мг/кг), или полиоксидония (0,75 мг/кг), а также комбинации метапрота с полиоксидонием или трекрезаном. Контролем служили крысы с бронхолегочным воспалением, получавшие эквивалентный объем физиологического раствора.
Внутрибрюшинное введение метапрота крысам с острым бронхолегочным воспалением приводило к достоверному повышению лимфокинпродуцирующей функции лимфоцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов с Кон-А на 19% и с ФГА - на 10%. Фагоцитарная активность нейтрофилов увеличивалась на 7%, при этом фагоцитарное число, равное среднему числу микробов, поглощенных одним активным нейтрофилом, и показатель завершенности фагоцитоза снижались на 10% и 8% соответственно.
Применение препаратов сопровождалось изменением активности кислородзависимых антиинфекционных систем лимфоцитов, характеризующих степень активации гексозомонофосфатного шунта и связанное с этим образование свободных радикалов. В группе животных, получавших метапрот, показатели спонтанного НСТ-теста снижались по сравнению с бронхолегочным воспалением на 17%, а стимулированного НСТ теста - на 6% (р 0,05). Наряду с этим, происходило увеличение активности кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов на 4% (табл. 26).
Применение трекрезана у крыс с бронхолегочным воспалением сопровождалось повышением показателя РТМЛ с КонА на 26% и с ФГА - на 18%. Фагоцитарная активность увеличивалась на 12% на фоне снижения фагоцитарного числа на 16% и показателя завершенности фагоцитоза - на 17% (р 0,05). Наряду с этим, снижались показатели спонтанного НСТ-теста на 25% и стимулированного - на 10%, при этом активность кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов увеличивалась на 7%.
По сравнению с не леченными крысами, введение животным полиоксидония приводило к достоверному повышению лимфокинпродуцирующей функции лимфоцитов в РТМЛ с КонА на 30%, а в РТМЛ с ФГА - на 22%). Наблюдалось увеличение фагоцитарной активности на 14% , при снижении фагоцитарного числа на 19% и показателя завершенности фагоцитоза - на 22% (р 0,05). Активность кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов увеличивалась на 9 % (р 0,05). Показатели кислородзависимых антиинфекционных систем лимфоцитов, характеризующие степень активации гексозомонофосфатного шунта и связанное с этим образование свободных радикалов, в спонтанном НСТ-тесте снижались на 27%, а в стимулированном - на 13% (р 0,05).
Введение крысам с острым бронхолегочным воспалением комбинации метапрота и трекрезана сопровождалось повышением показателей РТМЛ с КонА на 37% и с ФГА - на 26%). Фагоцитарная активность возрастала на 17%) на фоне снижения фагоцитарного числа — на 29% и показателя завершенности фагоцитоза — на 25% (р 0,05). Снижались показатели спонтанного НСТ-теста на 40%) и стимулированного — на 19%), при этом увеличивалась активность лизосомально-катионного теста на 12% (табл. 27).
Сочетанное применение метапрота и полиоксидония приводило к достоверному повышению лимфокинпродуцирующей функции лимфоцитов в РТМЛ с КонА на 38% и с ФГА - на 24%.
Наблюдалось увеличение фагоцитарной активности на 17% при снижении фагоцитарного числа на 30% и показателя завершенности фагоцитоза на 26% (р 0,05). Активность кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов увеличивалась на 11% (р 0,05). Показатели спонтанного НСТ-теста достоверно снижались на 42% и стимулированного — на 17%.
Таким образом, применение при остром бронхолегочном воспалении у крыс комбинации антигипоксанта с иммуномодулятором оказывает более выраженное иммунотропное действие, вследствие чего изучаемые иммунологические показатели восстанавливаются до значений, характерных для интактных животных.
Исходя из полученных данных, при монотерапии исследуемые препараты можно расположить в ряду по убыванию их иммунотропных свойств: полиоксидоний трекрезан метапрот. Применение комбинированной терапии сопровождалось более выраженным иммуномодулирующим действием. При этом эффекты комбинации метапрота с полиоксидонием или трекрезаном были сопоставимы.
