Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Литературный обзор 12
1.1 Состав тритерпеноидных и стероидных соединений в сырье 12
1.2 Состав тритерпеноидных и стероидных соединений в шроте чаги 23
1.3 Состав тритерпеноидных и стероидных в меланине чаги 24
1.3.1 Характеристика меланина 24
1.3.2 Исследование химического состава меланина 26
1.4 Биологическая активность экстрактов, тритерпеноидных и стеро идных соединений чаги 28
ГЛАВА 2. Материалы и методы 38
2.1 Объекты исследования 38
2.1.1 Способ получения водных извлечений чаги 38
2.1.2 Способ выделения меланина чаги 39
2.1.3 Способы получения петролейных экстрактов из сырья, шрота и меланина чаги 40
2.1.3.1 Получение петролейного экстракта из сырья и шрота чаги 40
2.1.3.2 Получение петролейного экстракта из меланина чаги 41
2.2 Пробоподготовка для проведения анализа тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им веществ в сырье, шроте и меланине чаги 43
2.3 Общие методы анализа 47
2.3.1 Определение содержания сухих веществ, золы и влажности 47
2.3.2 Определение растворимости меланинов 47
2.3.3 Определение антиоксидантной активности 47
2.3.4 Определение размеров частиц меланинов методом фотон-корреляционной спектроскопии 2.3.5 Исследование элементного состава рентгенофлуоресцентным методом 48
2.3.6 Определение тритерпеноидных и стероидных соединений спек-трофотометрическим методом с хлорным железом 48
2.3.7 Определение тритерпеноидных и стероидных соединений спек-трофотометрическим методом с ванилином 49
2.3.8 Тонкослойная хроматография липофильных веществ 49
2.3.9 Высокоэффективная жидкостная хроматография 50
2.3.10 Газожидкостная хроматография 50
2.3.11 Хромато-масс-спектрометричесий анализ 51
2.3.12 Определение общей токсичности 52
2.3.13 Определение противоопухолевой активности 52
2.3.14 Статистическая обработка результатов 53
ГЛАВА 3. Обсуждение результатов 54
3.1 Извлечение тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих соединений из сырья и шрота чаги 55
3.2 Извлечение тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений из меланина чаги 57
3.3 Физико-химические свойства фракций меланина, полученных при его разделении с помощью петролейного эфира 59
3.4 Определение качественного состава и содержания тритерпеноид-ных, стероидных и сопутствующих им соединений в сырье, шроте и меланине 64
3.4.1 Сравнение содержания тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений в экстрактах, полученных из сырья, шрота и меланина 64
3.4.2 Определение качественного состава петролейных экстрактов, полученных из сырья, шрота и меланина чаги, методом тонкослойной хроматографии 65
3.4.3 Разделение петролейных экстрактов, полученных из сырья и шрота, методом колоночной и тонкослойной хроматографии 66
3.4.4 Разделение петролейного экстракта, полученного из меланина чаги, методом тонкослойной и колоночной хроматографии 70
3.4.5 Определение состава углеводородов сырья и меланина методами газожидкостной хроматографии и хромато-масс-спектрометрии 76
3.4.6 Определение состава тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений в сырье, шроте и меланине методом хромато-масс-спектрометрии 79
3.4.7 Сравнение состава тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений сырья, шрота и меланина 88
3.5 Физико-химические характеристики, биологическая активность и нормы качества Липофита чаги 90
Выводы 100
Список использованных источников
- Состав тритерпеноидных и стероидных соединений в шроте чаги
- Получение петролейного экстракта из сырья и шрота чаги
- Извлечение тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений из меланина чаги
- Разделение петролейного экстракта, полученного из меланина чаги, методом тонкослойной и колоночной хроматографии
Состав тритерпеноидных и стероидных соединений в шроте чаги
Разделение спиртового экстракта с использованием гексана, этилацетата, смеси гексан-этилацетат (25:1), и этанола позволило обнаружить три новых соединения 21,24-циклопенталаноста-3,21,25-триен, 3-гидроксиланоста-8,24-диен-21,23-лактон, 3,22,25-тригидроксиланоста-8-eн [19-21]; а при использовании элюентов петролейный эфир – вода (1:1), этилацетат и бутанол показаны 6 соединений – ланостерол, инотодиол, траметеноловая кислота, 3-гидроксиланоста-8,24-диен-21-аль, эргостерол и эргостерол-пероксид [42].
В работе Жуковича Е.Н. [43] сконцентрированный этанольный экстракт проэкстрагирован эфиром и далее последовательно обработан насыщенным раствором MgO и щелочи (0,5 и 5 %). Очищенный экстракт промыт водой, высушен над безводным Na2SO4 и упарен в вакууме до выхода очищенной нефенольной фракции, содержащей преимущественно тетрациклические тритерпены, из которой в кристаллическом виде выделены ланостерол, инотодиол, эргостерол и траметеноловая кислота.
Экстракция сырья этанолом и дальнейшая обработка смесью хлороформ – вода (1:1), этилацетатом и бутанолом, позволила обнаружить в этилацетатной фракции 7 новых тритерпенов, дитерпен абиетанового типа, а также 10 тритерпеновых и 6 стероидных соединений, ранее показанных другими исследователями. Такой результат дало многократное разделение этилацетатного экстракта на колонке с силикагелем с применением элюентов: смеси петролейный эфир – ацетон, хлороформ – ацетон, хлороформ – метанол в различных соотношениях с возрастающей полярностью [36].
Экстракция чаги метанолом с последующим фракционированием экстракта с помощью гексана, дихлорметана и этилацетата позволила получить 8 тритерпеновых и стероидных соединений – ланостерол, ино-тодиол, траметеноловую кислоту, 3-гидроксиланоста-8,24-диен-21-аль, 3,22,24-тригидроксиланоста-8,25-диен, ситостерол, эргостерол-пероксид, бетулин [34]. Использование ультразвука при экстракции сырья метанолом, с последующим разделением экстракта методом ВЭЖХ, показало наличие 0,23 % тритерпеноидных и стероидных соединений, включающих бетулин, эргостерол, холестерол, ланостерол, стигмастерол и ситостерол [40].
Хлороформ для экстракции чаги был использован в работах [26-33], с его помощью из сырья извлечено около 0,1% тритерпеноидных и стероидных соединений. После упаривания экстракта был получен темно-коричневый остаток. Последующее разделение этого остатка проведено с использованием колоночной хроматографии на силикагеле с системами хлороформ - этилацетат в различных соотношениях, жидкостной хроматографии со средним и высоким давлением. В результате в хлороформных экстрактах обнаружено около 20 соединений – производных ланостерола, из них впервые показаны 3,7-дигидрокси-7(89)абео-ланоста-24-ен-8-он, 3,11-дигидроксиланоста-8,24-диен, 3,22-дигидроксиланоста-8,24-диен-11-он, 22R,25-эпоксиланост-8-ен-3,24S-диол, ланоста-8-ен-3,22R,24R-триол, 3,25-дигидроксиланоста-8-ен-20,24-олид и их эпимеры.
Экстракция сырья гексаном, нагрев сконцентрированного экстракта с сухим эфиром, фракционирование с использованием 1 % раствора NaOH и разделение на колонке с оксидом алюминия позволило выделить в чистом виде лишь два соединения – ланостерол и обликвол (инотодиол) [13].
При экстракции гриба гексаном и разделения экстракта с помощью колоночной хроматографии при использовании в качестве адсорбента оксида алюминия обнаружены ланостерол, инотодиол, траметеноловая кислота и 3-гидроланоста-8,24-диен-21-аль [16]. В другом опыте [17] растворитель из гек-санового экстракта чаги был удален, остаток растворен в диэтиловом эфире и к нему добавлен 1 % раствор щелочи. Эфирная фракция разделена при помощи колоночной хроматографии с оксидом алюминия с получением нового соединения ланостанового типа - 3,22-дигидроланоста-7,9,24-триен.
Для извлечения из сырья чаги тритерпеноидных и стероидных соединений также применен петролейный эфир. Экстракцию проводили в аппарате Сокслета, сконцентрированный экстракт разделяли методом колоночной хроматографии, в качестве элюентов использовали петролейный эфир и ацетон [23,24]. В результате извлечены 5 новых соединений - 3,22-дигидроксиланоста-8,24-диен-25-пероксид, 3,22,25-тригидроксиланоста-8,24-диен, 25-метокси-21,22-циклоланоста-8-ен-3,21-диол, 3,22-дигидрокси-ланоста-8,23-диен-25-пероксид, 3,22,25-тригидрокси-ланоста-8,23-диен.
Измельченную чагу обрабатывали последовательно растворителями с возрастающей полярностью: петролейным эфиром, хлороформом, этилацетатом, ацетоном, этанолом и горячей водой. Далее собранные экстракты центрифугировали, концентрировали и подвергали лиофильной сушке [44]. В петролейном экстракте, содержащем преимущественно тритерпены в количестве около 0,1 %, идентифицированы 4 новые соединения. В экстрактах, полученных с помощью хлороформа, этилацетата, ацетона и этанола, также были обнаружены тритерпеноидные соединения и вещества фенольной природы.
Примененные авторами вышеописанные способы выделения три-терпеноидных и стероидных соединений не позволили достичь их максимального выхода. Наибольший выход данных соединений наблюдается при применении в качестве экстрагента диэтилового эфира, а при экстракции сырья хлороформом или этанолом извлекается широкий спектр – около 20 тритерпеноидных и стероидных соединений. Однако в этих случаях при использовании полярных растворителей вместе с тритерпеноидными и стероидными соединениями извлекается большое количество фенольных веществ. Чем ниже полярность примененного растворителя, тем более селективно он извлекает липофильные вещества, в частности петролейный эфир преимущественно экстрагирует тритерпеноидные и стероидные соединения. Следовательно, актуальной задачей является поиск способов эффективного выделения этих соединений из чаги с помощью петролейного эфира.
Получение петролейного экстракта из сырья и шрота чаги
В настоящее время противоопухолевые свойства ланостановых соединений объясняют изменением биохимических механизмов: подавления пролиферации раковых клеток, индукции остановки клеточного цикла на различных стадиях, усиления апоптоза и регулирование путей передачи сигнала, которые связаны с нарушением экспрессии ключевых ферментов (каспаз) и белков (р53, bax, Bcl-2) [25,37,109].
Однако обнаружить зависимость между химической структурой и биологической активностью этих соединений не удается. Это может быть связано с различными условиями, в которых проводились опыты, и химическим разнообразием сравниваемых соединений, например большим числом оптических изомеров [11].
Как было сказано выше, в грибе рейши также содержатся соединения ла-ностанового типа. Для некоторых из них показана in vitro выраженная цитоток-сичность против клеток гепатомы (ганодеровые кислоты U-Y), против карциномы легкого Льюиса (люцидимол) и KB клеток (ганодеровый альдегид), гепа-топротекторное действие (ганодеровые кислоты), ингибирующее воздействие на эукариотические ДНК-полимеразы (люцидиновая кислота O и люцидиновый лактон) и обезболивающий эффект (ганодеровые кислоты A, B, G, H) [8-11, 110-112].
Состав тритерпеноидных соединений, выделенных из рейши и из чаги, существенно отличается, поэтому имеются различия и в механизме действия этих соединений. Считается, что тритерпены из рейши влияют на иммунную систему. Роль их, вероятно, проявляется в воздействии на регуляцию NF-kB и их способности к увеличению посредников, таких как IL-2 и IFN-, которые регулируют неспецифический иммунный ответ, и повышают активность NK клеток, которые вносят изменения в специфический иммунный ответ [11,112]. А тритерпены из чаги могут как непосредственно вызывать апоптоз раковых клеток, так и оказывать влияние на иммунную систему.
Лекарственные средства на основе тритерпеноидных и стероидных соединений содержат и другие биологически активные соединения: полисахариды и фенольные вещества. Так фармацевтическая промышленность выпускает препараты, компонентами которых являются тритерпены и растительные стероиды [113-115]: - на основе экстракта листьев эвкалипта - «Эвкалимин», где терпены составляют 65-85 %, применяется как антибактериальное, противовоспалительное средство в терапии острых и хронических инфекционно-воспалительных заболеваниях различной локализации; - на основе экстракта листьев шалфея - «Сальвин-ВИФ». Содержит эфирные масла (туйон, 1,8-цинеол, линалоол, пинен), дитерпены (карносоловая кислота, розманол), тритерпены (урсоликовая кислота). Оказывает антисептическое, дубящее, вяжущее и местное противовоспалительное действие, показан при воспалительных заболеваниях полости рта; - на основе терпенов пихты сибирской – «Абисил», содержание терпенов в пересчете на борнилацетат – 10 %, применяется как антибактериальное, противовоспалительное, ранозаживляющее средство; - на основе экстракта из листьев гинкго билоба – «Билобил», содержит до 6 % терпеновых лактонов, оказывает антигипоксантное, антиоксидантное, ан-гиопротективное действие, улучшает мозговое и периферическое кровообращение; - на основе экстракта корневищ цимицифуги – «Ци-клим» с содержанием тритерпеновых гликозидов не менее 2,5 %, обладает эстрогеноподобным эффектом, проявляет седативные свойства, оказывает положительное терапевтическое воздействие на вегетативную нервную систему; - препараты на основе солодки голой, содержащие до 25 % глиццерризи-новой кислоты, применяются как отхаркивающие и противовоспалительные средства, ускоряют заживление язв желудка и 12-перстной кишки; - пентациклические тритерпены лупаного ряда входят в состав дегтя, который является компонентом мази Вишневского, оказывает противомикробное и местнораздражающее действие, ускоряет процессы регенерации.
- производные бетулиновой кислоты с амидной связью запатентованы в качестве средств для лечения ВИЧ [116]. В настоящее время препарат на основе бетулиновой кислоты проходит клинические исследования в США в качестве средства для лечения злокачественной меланомы [117].
Несмотря на широкий спектр биологической активности терпеноидных и стероидных соединений, рынок лекарственных средств на их основе не велик. Существующие препараты применяются в основном как противовоспалительные и антисептические средства. Следовательно, актуальным и перспективным является расширение спектра лекарственных средств, полученных на основе этих соединений.
На основании анализа научной литературы, тритерпеноидные и стероидные соединения чаги проявляют высокую активность в подавлении роста и развития различных раковых клеток и являются перспективными для разработки на их основе высокоэффективных лекарственных средств.
Для экстракции сырья чаги применялись различные органические полярные растворители (диэтиловый эфир, хлороформ, этанол), которые позволили достичь высокого выхода тритерпеноидных и стероидных соединений до 0,8 % либо широкого спектра соединений – до 20 производных ланостерола. Однако экстракты. полученные с их помощью, требуют дополнительной очистки от сопутствующих фенольных веществ. При этом установлено, что наиболее селективным экстрагентом для извлечения тритерпеноидных и стероидных соединений является петролейный эфир, однако системного применения этого растворителя для выделения данных соединений в литературе не описано.
Извлечение тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений из меланина чаги
Проведен подбор оптимальных условий процесса экстракции для извлечения максимального количества тритерпеноидных и стероидных соединений из сырья и шрота чаги.
Сырье и шрот исчерпывающе экстрагировали петролейным эфиром по стандартной методике, принятой в фармакопейных статьях, для извлечения ли-пофильных веществ из лекарственного сырья [124]. В аппарате Сокслета при соотношении сырье (шрот) : петролейный эфир 1:50 в течение 10 ч. Установлено, что данный способ экстракции из сырья и шрота позволяет извлечь не более 13 % тритерпеновых и стероидных соединений от количества экстрактивных веществ. При этом из шрота удается экстрагировать их на 2 % больше (таблица 2.3).
Экстракция объектов исследования в аппарате Сокслета является достаточно длительным процессом. Поэтому для ее интенсификации экстракцию сырья и шрота с размерами частиц менее 2 мм или 2-7 мм провели в колбе с обратным холодильником при температуре кипения растворителя (40-60 C) в течение 1 ч. Установлено, что выход тритерпеноидных и стероидных соединений существенно не изменяется по сравнению с экстракцией в аппарате Сокслета и составляет в среднем 13 % для сырья и 15 % для шрота. При этом степень измельчения сырья и шрота на полноту извлечения экстрактивных веществ не влияет (таблица 2.4).
Для анализа с завода ОАО «Татхимфармпрепараты» был взят шрот (5 партия сырья), полученный при производстве лекарственного средства «Бефун-гин». Сравнение заводской партии шрота со шротом, полученным в лабораторных условиях, показало, что они имеют аналогичные характеристики, при этом количество тритерпеноидных и стероидных соединений при экстракции в течение 1 ч при соотношении шрот : петролейный эфир 1:50 также составляет в среднем 15 % (таблица 2.4).
Для определения оптимального количества экстрагента и продолжительности процесса для максимального извлечения тритерпеноидных и стероидных соединений проведена экстракция сырья и шрота с размером частиц 2-7 мм при различных соотношениях объект : петролейный эфир в течение 1 и 2 ч (таблица 3.1). Установлено, что при экстракции сырья увеличение количества экстраген-та на 20 и 40 % приводит к снижению выхода экстрактивных веществ в 2,4 и 1,3 раза, при этом количество тритерпеноидных и стероидных соединений существенно не изменяется. Применение в 2 раза большего количества петролейного эфира при экстракции шрота и увеличение продолжительности экстракции с 1 до 2 ч позволяет повысить выход экстрактивных веществ в 3,8 раза. Однако количество тритерпеноидных и стероидных соединений в данных условиях снижается почти в 7 раз, по данным ТСХ в системе 1 (п. 2.3.8) экстракты содержат преимущественно углеводороды и воски [136]. Аналогичная зависимость между количеством липофильных веществ и долей в них тритерпеновых и стероидных соединений наблюдается также для других природных объектов [137].
Максимальный выход тритерпеноидных и стероидных соединений из сырья достигается при соотношении сырье:экстрагент 1:50 с продолжительностью экстракции 1 ч; из шрота – также продолжительность экстракции 1 ч, но при соотношении шрот:экстрагент 1:60 [138].
Как видно из данных таблицы 3.1, из шрота можно извлечь в 3 раза больше тритерпеноидных и стероидных соединений, чем из сырья. Вероятно, это связано с тем, что в сырье содержится большое количество гидрофильных компонентов, которые мешают извлечению веществ неполярным растворителем. В ходе водной экстракции основная часть этих компонентов переходит в экстракт, что облегчает извлечение гидрофобных веществ из шрота.
Проанализированы водные извлечения чаги, полученные из нескольких партий сырья (таблица 2.1). Показано, что они имеют близкие значения по содержанию сухих остатков и зольности, и незначительно отличаются по содержанию меланина и антиоксидантной активности. В целом физико-химические характеристики водных извлечений чаги мало отличаются от приведенных в литературе данных [59, 119, 139].
Проведено исследование меланинов, выделенных из различных партий сырья (таблицы 2.2, 3.5). Показано, что имеются отличия в содержании зольных элементов, антиоксидантной активности и размерах частиц в зависимости от партии сырья, но в целом эти характеристики находятся в пределах тех значений, которые приведены в литературных источниках [59, 60, 62, 63].
Экстракция петролейным эфиром высушенного меланина с влажностью 8±2 % при температуре 35±2 С показала, что количество извлекаемых веществ не превышает 0,07 % от веса меланина (таблица 2.5), из них на тритерпеноид-ные и стероидные соединения приходится не более 5 % [140-142]. Для увеличения выхода тритерпеноидных и стероидных соединений можно опираться на результаты, полученные при экстракции водного извлечения чаги при температуре 35±2 С, которая позволила извлечь из его дисперсной фазы до 21 % липофильных веществ [73, 143]. На основании этого проведена экстракция свежеосажденного меланина с влажностью 90±2 % петролейным эфиром. Действительно, выход экстрактивных веществ увеличился до 0,14 %, а содержание тритерпеноидных и стероидных соединений – до 10 % [142, 144].
Во время экстракции происходит образование однородной дисперсии. По-видимому, частица меланина, находясь на границе фаз вода – петролейный эфир, переформировывается, ее гидрофобные участки ориентируются к фазе петролейного эфира, а гидрофильные (в том числе белки и полисахариды) – к водной фазе. Дисперсия устойчива при комнатной температуре. Поскольку петролейный эфир и вода имеют разные температуры замерзания, изменение температурного режима - выдерживание при температуре минус 18±2 С в течение 14 ч и последующее постепенное доведение температуры до 22±2 С позволяет разрушить дисперсию и извлечь из пигментной части меланина большее количество экстрактивных веществ [145].
Разделение петролейного экстракта, полученного из меланина чаги, методом тонкослойной и колоночной хроматографии
Тритерпеноидные и стероидные соединения составляют основную часть экстрактивных веществ сырья и шрота, около 56 и 73 % соответственно, а в меланине около 11 %. Из них на соединения ланостанового типа приходится 39 % в сырье, 65 % в шроте и 6 % в меланине.
Стероидные соединения занимают соответственно в сырье, шроте, меланине примерно 5,4 %, 3,5 % и 1,3 % от экстрактивных веществ.
В следовых количествах присутствуют пентациклические тритерпены: в экстракте из сырья – лупеол, в меланине - бетулин.
В качестве сопутствующих соединений в сырье присутствуют насыщенные углеводороды. В шроте показаны алифатические кислоты. В меланине обнаружены насыщенные углеводороды, алифатические кислоты, алифатические спирты, в следовых количествах присутствует 6-(1-гидрокси-этил)-2-метокси-2,4,6-циклогептатриен-1-он.
Тритерпеноидные и стероидные соединения, обнаруженные в сырье, шроте и меланине чаги, приведены в таблице 3.17.
Ранее экстракция сырья чаги петролейным эфиром позволяла выделить не более 5 тритерпеноидных и стероидных соединения, их количество составляло около 0,6 % от сырья. При этом авторами в экстракте показано небольшое количество фенольных соединений [45]. В другом опыте в петролейном экстракте из чаги обнаружены только инотодиол и ланостерол, содержание которых составляло около 0,002 %, вместе с тритерпеноидами в экстракт также в следовых количествах переходят вещества ароматической природы [96]. Широкий спектр тритерпеноидных и стероидных соединений достигается при использовании полярного растворителя. Так при экстракции сырья этанолом об 88 наружено 17 соединений этого класса, однако в экстракте содержится такое же количество фенольных веществ [37]. В отличие от описанных методов разработанный в работе подход позволил выделить из чаги 26 соединений, при этом им сопутствуют только липофильные соединения – углеводороды, жирные кислоты, алифатические спирты.
Примечание: жирным шрифтом выделены соединения, присутствующие во всех исследуемых объектах, курсивом – присутствующие в шроте и меланине. Большинство из обнаруженных соединений согласно литературным данным обладают выраженной биологической активностью. Преобладающими тритерпеноидными соединениями в сырье являются инонотсуоксид, в шроте 3-гидроксиланоста-8,24-диен-21-аль и 3-ланоста-8-ен-3,22,24-триол, в меланине 25-метокси-21,22-циклоланоста-8-ен-3,21-диол и траметеноловая кислота.
Инонотсуоксид показал слабую активность против вируса Эпштейна-Барра, которая была в 3 раза ниже по сравнению с инотодиолом [27]. 3-гидроксиланоста-8,24-диен-21-аль и траметеноловая кислота показали высокую противоопухолевую активность в отношении клеток лейкемии и аденокарцином. Холестерол обеспечивает стабильность клеточной мембраны, а также является предшественником важнейших соединений – желчных кислот, стероидных гормонов и витаминов группы D [163]. Лупеол является активным цитостатиком, эффективен против вируса Эпштейна-Барра и при таких формах рака, как меланома кожи, нейробластома, саркома Уокера, аденома грудной железы, лейкемия, карцинома толстой кишки и некоторые другие [106-109]. Бензальдегид ингибирует рост аденокарциномы мышей и рака Эрлиха. Кроме того, бензальдегид, выделенный из плодов инжира, резко стимулировал проницаемость мембран бактериальных клеток [164]. Производное бензальдегида, выделенное из сырья чаги, - 3,4-дигидроксибензальацетон обладал выраженной противоопухолевой активностью против А549 и НL60 [35].
Таким образом, наиболее перспективным источником выделения тритер-пеноидных и стероидных соединений является петролейный экстракт из шрота, поскольку содержит наибольшее их количество по сравнению с сырьем и меланином. Производные ланостерола занимают около 65 % от веществ экстракта и представлены 10 представителями, из них для 5 показана противоопухолевая активность. 3.5 Физико-химические характеристики, биологическая активность и нормы качества Липофита чаги
Проведенный ранее выбор экстракта, который прост в получении и содержит максимальное количество соединений ланостанового ряда, обладающих выраженной противоопухолевой активностью, выявил перспективность использования петролейного экстракта из шрота для разработки на его основе лекарственного средства. После удаления из экстракта растворителя получена сухая субстанция – Липофит чаги.
Разработка метода анализа основного компонента Липофита чаги. Основным компонентом Липофита чаги являются тритерпеноидные соединения ла-ностанового типа. По своей структуре эти соединения близки к стероидам, и те и другие являются производными углеводорода сквалена и имеют в своей молекуле ядро циклопентанопергидрофенантрена [8].
В работе для определения тритерпеноидных и стероидных соединений применен известный и доступный метод с использованием хлорного железа, в котором для построения калибровочного графика использовали холестерол. В основе метода лежит окисление анализируемых соединений с образованием ненасыщенных продуктов, окрашенных в пурпурный цвет. Данная реакция характерна для стероидных соединений, имеющих гидроксильную группу у 3-го атома углерода. Происходит отщепление молекулы воды и две молекулы стероидных соединений соединяются с образованием непредельных углеводородов, которые и дают окрашенные соединения в присутствии серной кислоты (рисунок 3.15) [129].
