Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 .Экологическое качество среды и национальная безопасность 9
Глава 2.Растения и снежный покров как промежуточное депо техногенных загрязнителей 18
Глава 3 .Механизмы поражающего действия техногенных загрязнений на биологические объекты различного уровня организации 22
3.1. Характеристика нейротоксических процессов 22
3.2.Применение экспериментальных моделей поведения при исследовании эффектов техногенных загрязнителей 29
3.3.Простейшие в исследовании эффектов ксенобиотиков 34
3.4.Митохондрии как тест-объект для исследования влияния техногенных загрязнителей на биологические мембраны 42
Глава 4.0 возможных путях повышения резистентности организма к условиям техногенного загрязнения 47
4.1. Микро- и макроэлементы как средства коррекции нарушении индуцируемых техногенными загрязнениями 53
4.2. Растительные экстракты как средства коррекции нарушении индуцируемых техногенными загрязнениями 54
4.3. Пищевые жиры и резистентность организма в условиях техногенного загрязнения 63
Материалы и методы исследования 67
1.Методы исследования поведения животных 67
2. Методы исследования функционального состояния инфузории Spirostoma ambiguum 71
3.Биохимические методы исследования 70
4.Статистическая обработка результатов 71
5.Постановка эксперимента 71
Результаты и их обсуждение 73
- Характеристика нейротоксических процессов
- Микро- и макроэлементы как средства коррекции нарушении индуцируемых техногенными загрязнениями
- Пищевые жиры и резистентность организма в условиях техногенного загрязнения
Введение к работе
Множество разнообразных, чуждых жизни по своей химической природе, отходов проникают в биосферу, накапливается в природных экосистемах, включается в трофические цепи и, в конечном счете, воздействует на человека и его окружение (Федоров, 1983). В настоящее время стало очевидно, что существование человека в условиях прогрессирующего загрязнения окружающей среды техногенными воздействиями есть неизбежная реальность сегодняшнего дня и, возможно, ближайшего будущего. Этот факт означает реальную угрозу для здоровья нации (Худолей, 1998; Авалиани, 2001; Ревич, 2004) и связан с рядом проблем, среди которых нам представилось интересным выделить следующие.
Изучение ряда тест-систем для оценки в эксперименте нарушений в организме, развивающихся в условиях техногенного воздействия. Исследование общих закономерностей изменения поведенческих реакций объектов различного уровня сложности (от простейших до высших млекопитающих) с целью осуществления контроля за экологическим качеством различных биотопов (вода, воздух, почва).
Моделирование в эксперименте совместного действия факторов техногенного загрязнения, приближенного к реальным условиям.
Коррекция и предупреждение развития последствий воздействия техногенных загрязнений на организм человека с применением биологически активных комплексов природного происхождения.
В процессе мониторинга окружающей среды, в частности, тестирования уровня антропогенного загрязнения, исследователи в последние годы все чаще выбирают такие методы анализа, которые позволяют получить информацию о комплексном (интегральном) воздействии загрязнителей на организм животных и растений. Такой подход обоснован тем, что в реальной ситуации редко встречаются случаи изолированного воздействия на организм какого-либо
6 фактора в «чистом» виде. Как правило, действуют смеси соединений самого различного состава (Куценко, 2004). Один из возможных вариантов воспроизведения в лабораторных условиях действующих в реальных условиях смесей ксенобиотиков, как с целью прогноза возникновения нейрологических нарушений, индуцированных загрязнением окружающей среды, так и для экологического биотестирования, может состоять в использовании естественного комплекса антропогенных загрязнителей, аккумулированных в растениях (Смит, 1988; Dudka, 1996) и метеоосадках (Ревич, 1981; Будников, 1988), в качестве фактора воздействия в экспериментальных моделях поведения животных.
Преимущество использования экспериментальных моделей поведения животных, по сравнению с другими методами, для изучения механизмов поражения нервной системы в экологических исследованиях среды, определяется тем, что поведение может адекватно представлять суммарный индекс изменений в нервной системе, индуцированных загрязнением окружающей среды. Особый интерес представляет исследование для оценки экотоксикологических воздействий изменений в механизмах процесса формирования приобретенного поведения - обучения, которое сопровождается долговременной потенциации синаптических систем (Bliss, Lomo, 1970; Скребицкий, 2004). Для отдельных экотоксикантов, в частности для свинца, экспериментально подтверждена связь их поражающего действия на формирования долговременной памяти с нарушением долговременной потенциации в гиппокампе (Carcia-Arenas, 2004).
Очевидно, экспериментальных модели поведения животных могут эффективно применяться в исследованиях по изысканию средств, повышающих устойчивость организма к действию техногенных загрязнителей. Предпочтение в этом поиске должно быть отдано биологически активным соединениям из натуральных источников. К таким препаратам относятся, в первую очередь, экстракты растительного происхождения (Соколов, Замотаева, 1990;
7 Пастушенков, 1990). Механизм защитного действия растений на организм животных и человека есть основания связывать с различными свойствами биологически активных веществ, входящих в их состав, от мембранозащитных (Бобков, 1984; Naik et al., 2003; Simic et al., 2003; Ferreira et al., 2005; Choi, Cho, 2005) до способности индуцировать апоптоз в злокачественных клетках (Rafi et al., 2002).
Результаты целого ряда исследований отечественных и зарубежных ученых, подтверждающие эффективность применения поведения животных в качестве тест-системы для оценки загрязнения среды (Таиров, Попович, 1989; Попович, Авалиани, 1992; Kulig, 1996; Кокаева, 1998; Кокаева, 2000; Кокаева, 2001; Тушмалова, 2002; Scott, 2004) позволяет обсуждать возможность формулировки концепции нового направления в экологическом мониторинге -поведенческого мониторинга. Краеугольным камнем концепции экологического мониторинга должны стать представления, развиваемые на основе анализа откликов на действие техногенных загрязнений, возникающих в поведенческих тест-системах организмов различного уровня биологической организации.
В настоящее время можно считать бесспорным, что, по меньшей мере, одним из путей реализации эффектов техногенных загрязнителей является их воздействие на мембраны, на процессы липоперекисного окисления в этих клеточных структурах (Владимиров, 1972; Козлов, 1973). Нарушениями функций мембран и их структуры под действием химических загрязнителей обусловлены поражения различных систем организма, в том числе систем, отвечающих за организацию поведения. Роль мембранотропного действия, в частности, тяжелых металлов в деструкции клетки показана для эритроцитарных мембран (Соколовский, 1974); синаптосомальных мембран нейронов (Fasistas, 1991); простейших (Дергач, 1995). Перечисленные факты открывают новые возможности использования простейших в качестве биообъектов для мониторинга. Плазматические мембраны высших организмов,
8 в том числе и нейрональные, по своей структуре и выполняемым функциям сравнимы с мембранами одноклеточных (Хухо, 1990). Простейшие (с одной стороны это клетка, с другой - одноклеточный организм) дают возможность изучить как клеточные, так и организменные реакции на токсическое воздействие. К настоящему времени, в частности, достаточно детально описана в качестве клеточного тест-объекта, позволяющего проводить исследование растворов на предмет выявления токсичных химических соединений, инфузория Spirostomum ambiguum (Applewhite, 1972; Тушмалова, 1988; Nalecz-Jawecki, 1997, Быканова, 2003)
В рамках обсуждаемых проблем несомненный интерес представляет комплексное исследование с привлечением в качестве потенциальных тест-систем для экологического мониторинга организмов различного уровня организации и экспериментальных моделей соответствующих поведению различного уровня сложности.
Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы состояла в изучении индуцированных экотоксикологичсеким воздействием сдвигов в состоянии систем различного уровня организации. В качестве исследуемых объектов были использованы как простейшие организмы, так и высшие млекопитающие. Это определило постановку следующих задач.
Изучить влияние комплекса техногенных загрязнителей (ТЗ), депонированных в естественных объектах (листьях липы и снежном покрове), на исследовтельскую и эмоциональную активность крыс в экспериментальных моделях поведения.
Изучить влияние комплекса (ТЗ), депонированных в естественных объектах (листьях липы и снежном покрове), на обучение и память крыс в экспериментальных моделях поведения.
Изучить влияние комплекса (ТЗ), депонированных в естественных объектах (листьях липы и снежном покрове), на обучение и память крыс в экспериментальных моделях поведения при различном типе пищивых жиров в составе рациона
Изучить влияние комплекса ТЗ на состояние митохондрий печени крыс.
Изучить влияние комплекса ТЗ на функциональное состояние подвижность и осмотическую устойчивость инфузории Spirostomum ambiguum по показателям осмотической устойчивости и подвижности.
Изучить возможность применения экспериментальных моделей поведения крыс для выявления адаптогенных свойств растительных экстрактов, соответствующих условиям действия ТЗ.
Изучить влияние растительных экстрактов, характеризующихся потенциальной адаптогенной активностью в условиях действия ТЗ, на состояние митохондрий печени крыс.
Характеристика нейротоксических процессов
Нейротоксичность - это свойство химических веществ, действуя на организм немеханическим путем, вызывать нарушение структуры и/или функций нервной системы. В основе развивающегося токсического процесса может лежать повреждение любого структурного элемента нервной системы путем модификации пластического, энергетического обменов, нарушения генерации, проведения нервного импульса по возбудимым мембранам, передачи сигнала в синапсах. Нейротоксичность может быть проявлением прямого, и опосредованного повреждением других органов и систем, действия токсикантов на нервную систему. Нейротоксичность присуща большинству известных веществ. Поэтому практически любая острая интоксикация в той или иной степени сопровождается нарушениями функций ЦНС (Куценко, 2002).
Вещества, для которых порог чувствительности собственно нервной системы (отдельных её гистологических и анатомических образований) существенно ниже, чем других органов и систем, и в основе интоксикации которыми лежат нарушения моторных, сенсорных функции нервной системы, памяти, мышления, эмоций, поведения, условно относят к нейротоксикантам, даже если не известны механизмы их токсического действия.
Например, интоксикация свинцом у детей приводит к замедлению умственного развития, ухудшает способности к обучению. Механизм этого феномена неизвестен, но принято считать, что нейротоксичность - свойство свинца (Баранова, Щеплягина, 1998; Марковаи др., 1999; Ярыгина и др., 1995). Изучение особенностей действия отдельных нейротоксикантов позволяет понять механизмы феномена нейротоксичности в целом. Уязвимость нервной системы для повреждающего действия химических веществ обусловлена следующими обстоятельствами: многие химические вещества легко проникают через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), также действуют на нервные образования, не защищенные ГЭБ;
- длинные нервные отростки (аксоны и дендриты) значительно увеличивают площадь контакта нейрона с окружающей его средой, увеличивая уязвимость клеток для токсического повреждения;
- для нормального течения физиологических процессов в ЦНС необходимо поддержание электрохимического баланса в элементах нервной системы, обеспечивающееся многочисленными механизмами, на которые могут воздействовать различные химические вещества;
- нервные клетки, как правило, не в состоянии регенерировать и потому их гибель приводит к относительно стойким последствиям;
- токсические повреждения, полученные в раннем возрасте, могут проявляться и усиливаться по мере старения организма, так как потеря нейронов и другие изменения в нервной системе прогрессивно нарастают во второй половине жизни;
- даже незначительные нарушения структуры и функции ЦНС могут иметь пагубные последствия для функционирования организма в целом, проявляющиеся неврологическими, поведенческими расстройствами, изменением функций других органов и систем (Голиков и др., 1986; Rang et al, 1991).
Неиротоксиканты, как и другие ксенобиотики попадают в организм ингаляционно, через рот или кожу. Ряд веществ могут действовать несколькими путями.
Важнейшим условием прямого действия нейротоксиканта на ЦНС является его способность проникать через гематоэнцефалический барьер. Вещества, не проникающие через ГЭБ, могут вызывать токсические эффекты на периферии, главным образом в области синаптических контактов нервных волокон с иннервируемыми клетками органов, вегетативных и чувствительных ганглиев (Landis, Yu М-Н., 1995).
Некоторые широко используемые промышленные агенты и экополлютанты, обладающие высокой нейротоксичностью, представлены в Таблице 3. Возможно избирательное действие токсикантов на отдельные элементы нервной системы. Так, некоторые вещества повреждают нейроны (причем преимущественно либо тела нервных клеток, либо аксоны, либо синапсы), другие - глиальные элементы (Kulig , 1999).
Точки приложения большей части токсикантов не определены. Избирательность токсического действия, носит относительный характер. С увеличением дозы ядов все менее избирательным становится повреждение. Примеры веществ, относительно специфично действующих на отдельные структурные элементы нервной системы, представлены в Таблице 4.
Микро- и макроэлементы как средства коррекции нарушении индуцируемых техногенными загрязнениями
Известно, что кроме витаминов и лекарственных растений действие неблагоприятных экологических факторов могут снижать такие макроэлементы, как кальций, цинк, литий (Бондарев, 1984; Фокс, 1993). Один из реальных путей снижения степени токсичности действия техногенных химических загрязнений - разработка и организация соответствующего лечебно-профилактического питания с добавками микроэлементов и макроэлементов.
Диеты, включаемые в рацион, должны содержать компоненты, препятствующие всасыванию свинца в желудочно-кишечном тракте, депонированию его в различных органах и тканях и способствующие выведению металлов из организма. К числу таких компонентов, как свидетельствуют отдельные публикации, относится кальций (Суханов,. 1990).
В литературе имеются данные о большой степени сродства ионов кальция и например свинца к одним и тем же активным группам и субстратам на путях метаболизма. Вместе с тем, хорошо известна роль кальция в процессах возбуждения, сокращения мышц, активации ферментных систем и др. Металлы, конкурирующие за связывание с карбоксильными, фосфатными и сульфатными лигандами, проявляют повреждающее действие через кальциевый механизм. Механизм нейротоксического действия ряда металлов связан с нарушением транспорта Са2+ (Бингам и др., 1993). Изучение Са +- зависимого механизма позволяет прогнозировать те или иные эффекты металлов, пополняющие биосферу в результате техногенного химического загрязнения. Конкурентные взаимоотношения их с ионами кальция являются ключом к пониманию избирательного действия на нервную систему.
Установлено также, что блокировка поступления кальция в клетку при одновременном присутствии свинца вызывает цитотоксический эффект. Анализ этих данных позволяет предположить протекторную роль кальция при свинцовой интоксикации. Активные дозы микроэлементов при защите от токсических воздействий могут составлять сотни миллиграммов на 1 кг (Underwood, 1977).
Таким образом, техногенные загрязнители, накапливающиеся в объектах окружающей среды, а затем с пищей и водой поступающие в организм человека и животных оказывают различные по своим проявлениям повреждающие эффекты. Судя по имеющимся в литературе сведениям, повреждения реализуются на разных уровнях организации живой материи метаболизме, структурной целостности мембран и органелл, жизнеспособности простейших и функции сложных систем, какими являются высшие функции мозга. Так как жизнь человека связана с постоянным контактом с техногенными загрязнениями окружающей его среды необходимым является изучение эффектов этих загрязнителей и поиск путей предотвращения их повреждающего действия.
Изучение механизмов токсического действия ТЗ на организм, определение путей и последовательности в цепи запускаемых процессов, открывают пути к выработке целенаправленных алгоритмов в повышении сопротивляемости организма. При выборе способов, увеличивающих устойчивость организма к воздействию неблагоприятных факторов, следует предпочесть средства, имеющие естественное происхождение.
В качестве возможных корректоров неблагоприятного влияния техногенных загрязнителей на организм животных в ряду других растений представляют интерес экстракты корней и корневищ Солодки гладкой (Glycyrrhiza glabra L.), листьев Лавра благородного (Ldurus nobilis L.\ луковиц Лука репчатого (Allium сера L.). Основанием для такого утверждения ывляется приведенная ниже информация.
Солодка гладкая (солодка обыкновенная) — Glycyrrhiza glabra L. Семейство бобовые — Fabaceae, или Leguminosae. Народные названия: солодковый корень, солодак, сладкий корень, лакричный корень, лакричник гладкий. Многолетнее травянистое растение с глубокой мощной корневой системой. Листья очередные, сложные, непарноперистые, с яйцевидно-ланцетными листочками. Цветки бледно-фиолетовые, мотылькового типа, собраны в пазушные густые колосовидные кисти. Плоды - кожистые бурые бобы. Высота 50-100 см. Время цветения - июнь-август. Встречается в степной и полупустынной полосах. Растет по солонцеватым степям и берегам степных рек, образует местами сплошные заросли. Время сбора -поздняя осень. Корни содержат глюкозид глицирризин (до 23%) приторно-сладкого вкуса (в 40 раз слаще сахара), представляющий калиевую и кальциевую соль глицирризиновой кислоты, глицирризиновую кислоту (тритерпеновый сапонин), флавоноиды — глюкозид желтого цвета ликвиритин, ликвиритознд, глицирретовую кислоту, диоксистигмастерин, Р-ситостерин, цирризиновую горечь (до 8,1%). аспарагин (до 4%), пектиновые вещества, желтый пигмент, различные сахара (глюкозу, сахарозу), крахмал (до 30%), камеди, соли кальция, калия, магния и эфирное масло (0,03%), витамин С (до 30 мг%). Лечебное действие солодкового корня зависит от глицирризина.Лекарственным сырьем служат очищенные от коры корни и подземные побеги. Сырье содержит гликозиды (ликвиритознд, глицирризин), флавоноиды (например, ликвиритин), сахарозу и глюкозу, белки, крахмал, аспарагин, камедь, минеральные соли, пектиновые вещества, сапонины, фитогормоны. Экстракт оказывает смягчающее и противовоспалительное действие, очищает и отбеливает кожу, активизирует водно-солевой обмен. Применяется в дневных кремах, тониках и кремах для сухой и чувствительной кожи, молочке для снятия макияжа.
Солодка как лекарственное растение известна издавна. Она широко применяется в народной медицине различных стран. Растение обладает хорошим отхаркивающим, обволакивающим, мягчительным, ранозаживляющнм, мочегонным и легким слабительным действием. Доказано, что солодка регулирует водно-солевой обмен организма и обладает спазмолитическим свойством.
Отвар корней принимают как отхаркивающее и мягчительное средство при кашле, бронхите, коклюше, астме и как легкое слабительное и мочегонное средство.
В китайской народной медицине солодку применяют при коклюше, туберкулезе легких, бронхите, язвенной болезни желудка и в качестве противоядия при отравлении грибами.
В научной медицине препараты солодки используют при различных заболеваниях дыхательных путей, при хронических запорах и для улучшения вкуса лекарств.
Солодка входит в состав грудных, желудочных, слабительных, противогеморройных сборов и в состав сложного лакричного порошка. Из корня солодки приготовляют лакричный сироп и экстракты. Показано, что водный экстракт корней солодки в дозе 150 мг/кг улучшает показатели памяти у мышей в приподнятом крестообразном лабиринте и задаче пассивного избегания. При этом, предотвращение амнезии вызываемой скополамином (блокатором М-холинорецепторов), дает основания связывать его промнестическую активность с активацией холинергическои неиропередачи в мозге (Parle et al., 2004; Dhingra et al., 2004). Очевидно, при обсуждении механизмов влияния экстракта солодки на память следует иметь в виду экспериментальные данные о его способности влиять на активность системы гипофиз - кора надпочечников (Al-Qarawi et al.,2002).
Пищевые жиры и резистентность организма в условиях техногенного загрязнения
Как известно, жиры имеют большое значение в питании человека и животных. Они являются не только отличным поставщиком энергии, но и служат источником ряда незаменимых для организма полиненасыщенных жирных кислот, жирорастворимых витаминов. Работами академика Ю.А.Владимирова (1972), было показано, что процессы повреждения клеток, возникающие под действием неблагоприятных факторов внешней среды, как и процессы старения, напрямую связаны с изменением в функционировании биомембран. В свою очередь, изменение функций мембран связано с изменением микровязкости бислоя; степень микровязкости зависит от количества, состава и соотношения мембранных липидов. Липиды локализованы в мембранах клеток всех органов и тканей, но в организме человека и животных наиболее богаты липидами нервная ткань (Крепе, 1981). Большинство биомембран содержат около 40% липидов, хотя их содержание может варьировать от 20 до 80% сухой массы. У крыс липиды составляют 24% сухой массы нейронов. В клетках печени крыс наибольшая концентрация общих липидов характерна для митохондрий. Большая часть нейтральных липидов при гомогенизации клеток переходит в супернатант, а липиды митохондрий, микросом содержат 92-94% фосфолипидов и 5-6% холестерина. В пересчете на белок концентрация фосфолипидов в митохондриях печени крыс составляет -183+10, в микросомах - 320+20 мкг/1 мг белка (Кагава, 1985).
Свиной жир ( лярд) - отличается большим содержанием насыщенных жирных кислот и незначительным содержанием ненасыщенных (до 5% олеиновой кислоты и до 9% полиненасыщенных жирных кислот, в том числе и арахидоновой) (Бренц,1983 ).
Из табл.11 видно, что в растительных маслах представлены в основном ненасыщенные жирные кислоты, а количество линолевой кислоты, содержащей две двойные связи - 51-86%). В растительных маслах содержатся не только собственно жиры - триглицерины, но и многие сопутствующие им вещества. Среди них имеются такие ценные соединения как фосфатиды, стерины, витамины. Растительные фосфатиды обладают целым комплексом полезных свойств: они задерживают окисление жиров, увеличивают проницаемость мембран, являются биологически активными веществами. В последние годы появились сообщения о наличии антимутагенных свойств и у некоторых растительных масел, в том числе кукурузного, подсолнечного, обусловленных наличием ненасыщенных жирных кислот и витаминов (Raj, 1984).
Несмотря на очевидные преимущества растительного масла над животными жирами их присутствие в диете человека достаточно ощутимо, в связи с чем мы считали необходимым исследовать влияние насыщенных (содержащихся в свином жире) и ненасыщенных (содержащихся в растительном масле ) жирных кислот, на эффекты техногенных загрязнителей в процессах обучения. повреждающие эффекты. Судя по имеющимся в литературе сведениям, повреждения реализуются на разных уровнях организации живой материи метаболизме, структурной целостности мембран и органелл, жизнеспособности простейших и функции сложных систем, какими являются высшие функции мозга. Так как жизнь человека связана с постоянным контактом с техногенными загрязнениями окружающей его среды необходимым является изучение эффектов этих загрязнителей и поиск путей предотвращения их повреждающего действия.
Животные. Работа выполнена на белых беспородных крысах самцах. Крыс содержали на диете, разработанной в Институте питания АМН России. Калорийность диеты обеспечивали белки (18%), липиды (26%), углеводы (56%). Методы исследования поведения животных Тест «открытое поле». Крысу помещали в центр арены диаметром 90 см с полом, расчерченным тремя концентрическими окружностями, находящимися на равных расстояниях друг от друга, и восемью диаметрами; наблюдали за поведением крысы в течение 5 минут. В поведении крысы выделяли следующие визуально идентифицируемые поведенческие акты: пересечение диаметров (пробеги), пересечение окружностей (переходы), число актов груминга и замирания, число стоек с опорой на стенки и без опоры. После 5 минут исследования животное возвращали в клетку и тщательно протирали пол после каждого теста (Буреш , 1991).
Приподнятый крестообразный лабиринт. Животное помещали на центральную площадку лабиринта и в течение 5 минут визуально регистрировали его поведенческие акты. Рассчитывали два индекса тревожного поведения: In - отношение числа заходов в открытые рукава (ОР) к сумме заходов в открытые и закрытые рукава (х 100 %); It - отношение времени нахождения в светлых рукавах к суммарному времени нахождения в светлых и темных рукавах (х 100 %). Эти показатели являются стандартными в методике оценки тревожности грызунов. Чем ниже показатели, тем выше тревожность и наоборот (Воронина, Островская, 1998).
Т-образный лабиринт. Обучение крыс пространственному распознаванию осуществляли в Т-образном лабиринте, который состоял из стартового отсека, отделенного прозрачной дверью и двух рукавов - правого и левого. В конце каждого рукава находятся чашечки с кормом, а на расстоянии 14,5 см от точки выбора в каждом рукаве траповые двери.
Обучение начинали с ознакомления камеры (1 этап). Животные на 5 мин поочередно помещались в лабиринт. В конце каждого рукава имеется пища, доступная для крыс. На втором этапе - этапе освоения, устанавливали траповые двери, которые необходимо открыть для достижения пищи. Крысе давали возможность в течение 5 сек после открытия двери проникнуть в один из рукавов и достигнуть пищи. Если животное не воспользовалось этой возможностью, оно извлекалось из лабиринта. Процедура повторялась через 15 сек. Если животное без промедления входит в один из рукавов, траповые двери начинают постепенно (от одной попытки к другой) закрываться. После установления траповых дверей в вертикальное положение, животное совершает 20 последовательных проникновений в любой из рукавов. Через 5 сек после освобождения из стартовой камеры начинается непосредственное обучение пространственной дифференцировке.
