Сравнительная характеристика морфологических изменений скелетной мышцы в условиях ее прижизненного и посмертного повреждения [Электронный ресурс] Григорьева Юлия Владимировна

Данный автореферат диссертации должен поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - 240 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Григорьева Юлия Владимировна. Сравнительная характеристика морфологических изменений скелетной мышцы в условиях ее прижизненного и посмертного повреждения [Электронный ресурс] : Диссертация ... кандидата медицинских наук : 03.00.25

Содержание к диссертации

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Развитие и структурная организация скелетной мышечной ткани. Морфологические особенности строения скелетной мышечной ткани млекопитающих животных и человека 10

1.2. Виды повреждения тканей. Реактивные изменения, происходящие в тканях в зависимости от вида повреждения. Размозжение скелетной мышечной ткани. Морфологические изменения, возникающие на участке повреждения мышечного волокна на ранних стадиях посттравматической регенерации скелетной мышечной ткани 16

1.3. Прижизненность и давность повреждений. Основные критерии для определения сроков нанесения повреждений 23

1.4. Атональные повреждения. Терминальные состояния в клинической практике. Периоды умирания. Морфологические изменения, возникающие в терминальном состоянии .29

1.5. Посмертные повреждения. Ранние посмертные изменения скелетной мышечной ткани, понятия «трупное окоченение» и «аутолиз».

Последовательность гибели структурных компонентов скелетной мышцы 36

2. Собственные исследования

2.1.1. Объем изученного материала и этапы эксперимента 42

2.1.2. Характеристика методов исследования 45

2.2.1. Морфологические изменения, возникающие в интактной скелетной мышце при аутолизе 47

2.2.2. Реактивные изменения, происходящие в скелетной мышце при размозжении в первые сутки после травмы 57

2.2.3. Морфологические изменения, происходящие в скелетной мыпще, поврежденной в период агонии 80

2.2.4. Морфологические изменения, происходящие в скелетной мышце, поврежденной после констатации смерти 94

Обсуждение полученных результатов

Выводы 117

Список используемой литературы

Прижизненность и давность повреждений. Основные критерии для определения сроков нанесения повреждений
Посмертные повреждения. Ранние посмертные изменения скелетной мышечной ткани, понятия «трупное окоченение» и «аутолиз».
Реактивные изменения, происходящие в скелетной мышце при размозжении в первые сутки после травмы
Морфологические изменения, происходящие в скелетной мышце, поврежденной после констатации смерти

Прижизненность и давность повреждений. Основные критерии для определения сроков нанесения повреждений

Виды повреждения тканей. Реактивные изменения, происходящие в тканях в зависимости от вида повреждения. Размозжение скелетной мышечной ткани. Морфологические изменения, возникающие на участке повреждения мышечного волокна на ранних стадиях посттравматической регенерации скелетной мышечной ткани

По данным Авдеева М.И. (1959) под повреждением принято понимать нарушение целости и функции органов или тканей.

Повреждения классифицируются по их характеру и происхождению. Различают следующие виды механических повреждений: ссадины, кровоподтеки, раны, повреждения внутренних органов, вывихи и растяжения, переломы, размятие (размозжение) и отделение частей тела (Авдеев М.И., 1959; Попов В.Л., 1997; Чарный В.И., 1964, 1998). По происхождению, в зависимости от орудий и механизмов возникновения различают повреждения от тупых и от острых орудий (Авдеев М.И., 1959).

Под ссадиной следует понимать поверхностное повреждение кожи, не проникающее глубже сосочкового слоя, однако, ссадины нередко являются составной частью других повреждений, где затронуты глубжележащие ткани и органы. В зависимости от глубины ссадины подразделяются на поверхностные и глубокие (Громов А.П., Науменко В.Г., 1977). Муханов А.И., Юхимец И.А. (1988) выделяют очень поверхностные ссадины - осаднения. Морфологические особенности данного вида повреждения являются наиболее изученными (Касьянов М.И., 1954; Кононенко В.И., 1959; Рубинчик М.М., 1960; Муханов А.И., 1974; Крат А.И., Рубин В.М., 1982; Чарный В.И., 1964, 1998; Подоляко В.П., 2000).

Кровоподтеки представляют собой скопления крови в подкожной клетчатке и глубжележащих тканях (Авдеев М.И., 1959; Попов Н.В., 1996, 1997).

В основе механизма образования кровоподтека лежит разрыв сосудов, преимущественно артериол и мелких артерий, вследствие их растяжения. Обычно это происходит при ударах твердым тупым предметом под углом близким к 90, или при сдавлении (Крюков В.Н. и соавт., 2001). Кровоподтеки, возникшие при грубых механических воздействиях обычно сопровождаются и кровоизлиянием в полости или ткани.

Кровоизлияния микроскопически характеризуются наличием свободных эритроцитов, густо инфильтрирующих ткань на большом протяжении, в центре которого можно обнаружить поврежденный сосуд. Перифокально по отношению к кровоизлиянию быстро возникает капиллярная гиперемия, а через 1,5-2 часа - перифокальное воспаление (Громов Л.И., Митяева Н.А., 1958). Динамика изменений в зоне кровоизлияния прослеживается по последовательности превращений гемоглобина. Данный вид повреждения также является хорошо изученным (Ананьев Г.В., 1987; Акбашев В.А., Витер В.И., 2002)

Наибольший интерес представляют раны, о чем свидетельствует наличие значительного количества работ (Григолав С.С., 1954; Крыжановская И.В., 1969; Зингерман М.Я., 1970; Лисаковский В.А., Пермяков А.В., 1977; Лазарев И.К. и соавт., 1984; Пермяков А.В., Хасанянова СВ., 2001; Витер В.И., Хасанянова СВ., 2002; Gabbiani G. a Montandon D., 1977). Разнообразие морфологии, которая во многом определяется видом повреждающего предмета, механизмом его воздействия. Различают раны, причиненные острыми орудиями и тупыми предметами. Также раны могут быть поверхностными, захватывающими кожу и подкожную жировую клетчатку, и глубокими с повреждением глубжележащих тканей (Науменко Г.В., Митяева Н.А., 1980).

Микроскопическая картина ран, причиненных острыми предметами, довольно однотипна. В свежей ране эпидермис имеет хорошо выраженную структуру. В пределах собственно кожи стенка раны ровная, на уровне подкожной жировой клетчатки и мышц - волнистая. В глубине раны заметны участки коллагеновых волокон и скопления эритроцитов (Науменко Г.В., Митяева Н. А, 1980).

Если орудие, которым было нанесено повреждение, было притуплённым или тупым, при гистологическом исследовании выявляются крупные обрывки коллагеновых волокон (Громов Л.И., Митяева Н.А., 1958). В резаных ранах различают центральную зону, которая с течением времени подвергается некрозу, и периферическую. Граница между ними определяется через 8-12 часов и связана с началом некроза ткани (Науменко Г.В., Митяева Н.А, 1980).

Reznik М. (1973) описывает три нечетко ограниченные зоны: некротическую, промежуточную и неповрежденную.

Некрозу предшествуют периоды умирания, ослабления и прекращения функции клеток и тканей. Им соответствуют изменения, характерные для белковой дистрофии. Такое состояние структур называется некробиозом (Пауков B.C., Хитров Н.К., 1999).

С помощью гистохимических реакций удается определить зону будущего некроза намного раньше. Если повреждены мышечные волокна, то уже через 15 минут отмечается нарастание количества РНК, а через 1 час оно интенсивно выражено (Науменко Г.В., Митяева Н.А, 1980).

Микроскопические изменения в ранах, причиненных тупыми предметами, имеют свои особенности. Эпидермис у таких ран на отдельных участках может отсутствовать. Обрывки эпидермиса нередко обнаруживаются на уровне собственно кожи или подкожной жировой клетчатки. Ядра глубоких слоев вытянутой формы, расположены параллельно поверхности кожи. В ушибленных ранах, в отличие от резаных ран, быстро (в минуты) развивается сильный отек. Также ширина центральной зоны повреждения намного больше, граница между зонами начинает проявляться только к 3 часу. К 4-8 часу наступает некроз, который развивается по типу колликвационного с превращением ткани в мелкозернистую массу (Науменко Г.В., Митяева Н.А, 1980).

Основными признаками некроза являются необратимые изменения ядер и цитоплазмы. В процессе некроза и некробиоза клетки теряют воду, ядра сморщиваются и уплотняются, что характеризует первую стадию некроза — кариопикноз. Далее наступают стадии: кариорексис и кариолизис. Идентичная динамика некротических изменений наблюдается и в цитоплазме — в ней развиваются плазморексис и плазмолиз. Завершается некроз растворением всей клетки - происходит цитолиз (Пауков B.C., Хитров Н.К., 1999). Образовавшиеся в результате гибели тканей гомогенные некротические массы носят название некротический детрит.

Необходимость изучения ран сводится, прежде всего, к установлению орудия и механизма возникновения раны, направление движения орудия, положение пострадавшего в момент получения повреждений и другие данные, интересующие следствие (Авдеев М.И., 1959).

Размозжение (размятие) как вид повреждения является наименее изученным. Под размозжением понимают повреждения с полным разрушением структуры при непосредственном воздействии большой силы (ЧарныйВ.И., 1998).

Размозжение может быть закрытым, когда кожа остается целой, а глубжележащие ткани и органы оказываются размятыми, и открытым, с нарушением целостности кожи и глубжележащих органов и тканей (Авдеев М.И., 1959).

Размозжение отдельных частей тела может встречаться при транспортной травме, при падении на тело тяжелых предметов, при попадании в движущиеся механизмы (Чарный В.И., 1998).

Судебно-медицинское значение размозжения заключается в том, что эти повреждения характеризуют механизм возникновения, а иногда и орудие, вызвавшее повреждение, а также тяжесть расстройства здоровья (Авдеев М.И., 1959).

Посмертные повреждения. Ранние посмертные изменения скелетной мышечной ткани, понятия «трупное окоченение» и «аутолиз».

После предварительного введения подопытных животных в наркотический сон (эфирный наркоз - этоксиэтан), им наносили повреждение на икроножную мышцу в средней ее трети. Зона повреждения соответствовала ширине поверхности травмирующего предмета и равнялась 0,4 см. Сила сдавления соответствовала 76,5 кг. Забор материала для исследования проводили из места наибольших изменений и на границе с неизмененной тканью.

В первой серии эксперимента было проведено изучение реактивных и функциональных изменений зоне размозжения. Также учитывалось время, прошедшее после получения травмы. Забор материала проводили через 1, 3, 6, 12 и 24 часа после травмы.

Во второй серии эксперимента была выявлена динамика морфологических изменений, происходящих в поперечнополосатой скелетной мышце, травмированной в атональный период, с учетом морфологии аутолитического процесса, параллельно протекающего в данном участке.

Моделирование терминального состояния проводилось при помощи эфирного наркоза. Сигналом для нанесения повреждений служило появление у подопытных животных нарушения дыхания по частоте и глубине с задействованием в акте дыхания вспомогательных мышц, а также тетанических подергиваний мышц, часто переходящих в клонические судороги.

Материал для исследования брали через 1, 3, 6, 12 и 24 часа после смерти животного. В третьей серии эксперимента были изучены морфология травмы, нанесенной в ранний посмертный период, и изменения морфологической картины, явившиеся следствием посмертного аутолиза. Материал для исследования брали через 1, 3, 6, 12 и 24 часа после смерти животного. Контрольной группой служили интактные крысы, у которых сразу после смерти, а также через 1, 3, 6, 12 и 24 часа был проведен забор материала и изучены морфологические проявления аутолиза в динамике процесса. В целом в работе был изучен материал от 105 животных. Распределение животных и методы исследования приведены в таблице 1.

Номер серии эксперимента Характеристика экспериментальной модели Методы исследования Число Экспериментальных животных

1 Изучение реактивных изменений, возникающих в скелетной мышце в первые сутки после травм ы-размозжения Общегистологические и электронно-микроскопическиеГистохимические 15 10

2 Изучение морфологических изменений, возникающих в скелетной мышце, с травмой причиненной в агональный период Общегистологические и электронно-микроскопическиеГистохимические 15 10

3 Изучение структурных изменений в скелетной мышце, вызванных травмой, причиненной сразу после констатации смерти животного Общегистологические и электронно-микроскопическиеГистохимические 15 10

4 Контрольная группа Изучение морфологических проявлений посмертного аутолиза в интактной скелетной мышце Общегистологические и электронно-микроскопическиеГистохимические 18 12 Экспериментальная часть работы выполнена на кафедре гистологии и эмбриологии и на базе ЦНИЛ Самарского государственного медицинского университета. Выражаем искреннюю благодарность за возможность осуществления экспериментальной части работы директору ЦНИЛ Сам ГМУ, доктору медицинских наук, профессору Воловой Л.Т.. Характеристика методов исследования Общегистологический метод. Материал, полученный от подопытных животных, фиксировали в растворе Шабадаша, заливали в парафин, после чего готовили фронтальные и поперечные срезы. Обзорные гистологические препараты получали путем окраски срезов толщиной 5-6 мкм гематоксилином и эозином.

Морфометрический метод. При увеличении об. 20, ок. 7 в различных полях зрения проводили подсчет количественного содержания клеток белой крови.

Гистохимический метод. Уровень обменных процессов оценивали по активности окислительно-восстановительных ферментов и количественному содержанию гликогена. Активность фермента сукцинатдегидрогеназы (СДГ) выявляли по методу Нахласа (1957) в свежезамороженных срезах. Активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ) определяли в свежезамороженных срезах по методу Лилли Р. (1969). Для определения содержания гликогена препараты, приготовленные из парафиновых блоков, окрашивали по Шиффу. Количественный анализ проводили на МФМУ-1. Изучение оптической плотности проводили в монохроматическом свете при длине волны 570 нм, зондом, с локализацией его в центре среза. Цифровые данные подвергали статистической обработке. Данный фрагмент работы выполнен на кафедре биохимии Самарского государственного университета. Выражаем искреннюю благодарность доценту Теньгаеву Е.И. за помощь в проведении количественной гистохимии.

Метод статистического анализа. Статистическая обработка и графические построения проведены с использованием стандартного пакета

MICROSOFT OFFICE 2000, в среде Windows ХР. Проведенный статистический однофакторный анализ позволяет утверждать, что разница в средних показателях оптической плотности в различных типах волокон статистически достоверна с уровнем значимости альфа — 0,05. Выражаем искреннюю благодарность ассистенту кафедры физики Шаталаевой М.Н за помощь в проведении статистической обработки данных.

Электронно-микроскопический метод. Материал для электронно-микроскопического исследования подвергали префиксации в течение 2-х часов в 2,5 % растворе глютарового альдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН — 7,4 (Milloning G., 1961), затем фиксировали в 1% растворе тетраокиси осмия на таком же фосфатном буфере при температуре 0-4 С в течение часа (Pallade G.E., 1962). После этого материал промывали в растворе фосфатного буфера, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в аралдиты по методике Glauert A.M., Glauert R.H. (1958) и эпон-аралдитовую смесь. Для прицельного электронно-микроскопического анализа со всех блоков получали полутонкие срезы толщиной 1-2 мкм, которые окрашивали 1% раствором метиленового синего. Ультратонкие срезы толщиной 200-500 нм готовили на ультрамикротоме LKB 4804, контрастировали 2,5% раствором уранилацетата и 0,3% раствором цитрата свинца по Reynolds E.S. (1963). Срезы просматривали и фотографировали на электронном микроскопе ЭВМ- 100 Б. Выражаем искреннюю благодарность доктору биологических наук, профессору Круглякову П.П. за помощь в проведении электронно-микроскопического исследования. 2.2.1. Морфологические изменения, возникающие в интактной 6 скелетной мышце при аутолизе

В данной серии эксперимента были изучены морфологические проявления аутолитического процесса в интактной скелетной мышце. Результаты данной серии эксперимента послужили контролем при проведении дальнейшей работы.

Первые проявления аутолиза, выявляемые в световом микроскопе, начинают определяться через 12-24 часа от начала эксперимента. Выявляется набухание отдельных мышечных волокон, за счет чего цитоплазма выглядит мутной. Ядра также сначала увеличиваются в размерах за счет набухания, становятся несколько светлее, затем происходит уменьшение их в размерах, и к концу суток объем ядра составляет лишь половину первоначального. Поперечная исчерченность мышечных волокон сохраняется на протяжении всего эксперимента (рис. 1).

Реактивные изменения, происходящие в скелетной мышце при размозжении в первые сутки после травмы

На светооптическом уровне содержание гликогена в мышечных волокнах определяется по интенсивности их окраски по Шиффу. Уже через час после перенесенной травмы четко разграничиваются три зоны: центральная, прираневая и отдаленная (рис. 41). В центральной зоне гликоген практически полностью отсутствует, в прираневой — его содержание значительно снижено, а в отдаленной зоне выявляются волокна с высоким содержанием данного включения.

Однако, следует отметить, что снижение гликогена в прираневой зоне происходит во всех мышечных волокнах неравномерно, так как в них наблюдаются как реактивные, так и деструктивные изменения (рис. 42).

Таким образом, на основании данных светооптического и электронно-микроскопического изучения участка повреждения скелетной мышцы установлено, что при размозжении путем сдавления происходит смена последовательно развивающихся фаз: альтерации, экссудации с развитием выраженной нейтрофильно-макрофагальной реакции. Рис. 41. Содержание гликогена в мышечных волокнах через 1 час после травмы. 1 - центральная зона; 2 - прираневая зона; 3 - отдаленная зона. Окраска: по Шиффу. О6.10, ок 7.

Содержание гликогена в реактивно измененных мышечных волокнах прираневой зоны через 1 час после травмы. Окраска: по Шиффу. 06.40, ок 7. Однако, происходит некоторое замедление процессов нарастания воспалительной реакции в первые часы после травмы, что связано с особенностями тканевого строения и видом травмы. На раннем этапе запуска воспалительной реакции в зоне повреждения при сохранности плазмолеммы волокна наибольшие изменения касаются структур, расположенных внутри волокон. Сохранность плазмолеммы приводит к задержке выхода некротического детрита в пространство между волокнами, который является стимулятором запуска регенерации.

При размозжении, механизмом образования которого послужило сдавление, действие травмирующей силы направлено от центра к периферии, это влечет за собой перераспределение межклеточного вещества и других тканевых элементов далеко на периферию от центра повреждения, что затрудняет проникновение клеток макрофагальной природы к зоне повреждения.

В центральной зоне происходит гибель всех тканевых элементов, так как они полностью подвергаются некрозу и в дальнейшем резорбции.

При размозжении в зоне повреждения происходят выраженные функциональные нарушения, которые проявляются в снижении окислительного обеспечения мышечного волокна, преимущественно в первые сутки за счет окислительных (темных) волокон. Во всех типах мышечных волокон увеличивается интенсивность прохождения гликолитических процессов, которые происходят практически с равномерной интенсивностью, однако в окислительных волокнах накопление ЛДГ происходит несколько интенсивнее. Некоторое замедление нарастания активности гликолитических процессов совпадает с началом активации клеток макрофагальной природы и резорбцией ими некротических масс. Также страдает и углеводный обмен, который является составной и необходимой частью энергетического обмена в мышце. Уже через 6 часов от начала эксперимента отмечается снижение содержания гликогена в мышечных волокнах в 2 раза. 2.2.3. Морфологические изменения, происходящие в скелетной мышце, поврежденной в период агонии

Результаты морфологической оценки свидетельствуют, что через 1-12 часа после смерти животного в участках атональных повреждений скелетной мышцы отмечается однотипная картина. Общая структура мышечных волокон в большинстве участков сохранена, что проявляется в ровном контуре мышечных волокон, наличии поперечнополосатой исчерченности и сохранности ядер (рис. 43). Таюке имела место волнообразная деформация мышечных волокон (рис. 44, 45). Отдельные мышечные волокна в участке наибольшей травматизации имеют полные поперечные и продольные разрывы по длине (рис. 45, 46). В материале, забранном через 12 и 24 часа после смерти животного, наблюдалось явление некробиоза, который проявлялся в гомогенизации части волокна, усилении окраски, потере поперечной исчерченности и кариопикнозе (рис. 45). Обнаруженные в срезах сосуды имели слабое и умеренное кровенаполнение (рис. 46). Имели место очаговые диффузные диапедезные микрогеморрагии, в зоне которых насчитывалось 1-5 лейкоцитов. Также встречались незначительные единичные мелкоочаговые деструктивные кровоизлияния (рис. 45) и участки геморрагического пропитывания. В 100% срезов было выявлено явление метахромазии, при которой мышечные волокна были окрашены в цвета от желтовато-красноватого до ярко-синего (рис. 47, 48).

Морфологические изменения, происходящие в скелетной мышце, поврежденной после констатации смерти

Изменения происходят и в структуре микроциркуляторного русла. Стенки сосудов находятся в состоянии плазматизации. В сосудах крупного калибра заметно пристеночное стояние лейкоцитов с началом формирования их выхода в периваскулярное пространство, также обнаруживаются смешанные тромбы. Интенсивный отек приводит к изменению формы мышечных волокон. Выраженная макрофагальная реакция начинает определяться через 12 часов от нанесения травмы, что подтверждают данные электронной микроскопии. Это согласуется с данными Крыжановской И.В. (1969), которая наблюдала появление в ране лейкоцитов с фагоцитированными частицами в цитоплазме и отдельных макрофагов через 10-12 часов и фибробластов через 20 часов после травмы. Появление клеток фибробластического ряда в первые сутки после нанесения повреждения в нашем эксперименте не наблюдалось. В отношении времени появления фибробластов литературные данные противоречивы. Однако с помощью гистохимических реакций было определено повышение активности фибробластов уже со 2-го часа (Науменко Г.В., Митяева Н.А., 1980).

Таким образом, данное исследование показало, что при прижизненном размозжении скелетной мышцы обнаруживаются явления стаза, краевое стояние лейкоцитов в сосудах, инфильтрация лейкоцитами сначала периферической зоны, а затем и центральной, отек ткани и образование тромбов. Ранний посттравматический период в мышечной ткани развивается по общепринятым стадиям течения воспалительного процесса, изученным достаточно хорошо (Серов В.В., Шехтер А.Б., 1981; Саркисов Д.С., 1988; Струков А.И., Серов В.В., 1993; Юдашев А.А., 1996; Мяделенец О.Д., 2000; Parwaresch М. et al., 1985; Castor C.W., 1989). Однако интенсивность развития воспалительного процесса при размозжении несколько замедляется. Такая особенность данного процесса может быть обусловлена видом травмы. При размозжении, механизмом образования которого послужило сдавление, действие травмирующей силы направлено от центра к периферии, что влечет за собой перераспределение межклеточного вещества и других тканевых элементов далеко на периферию от центра повреждения, которое препятствует проникновению клеток макрофагальной природы к зоне повреждения. Полученные результаты согласуются с данными о том, что при тупой травме начальные проявления регенерации на всех структурных уровнях замедлены (Соседко Ю.И., 1984, Хасанянова СВ., 2001). Замедление динамики развития воспалительной реакции может быть обусловлено не только видом травмы, а также особенностями строения поврежденной ткани. Несмотря на выраженные изменения, наблюдаемые уже через 1 час после травмы внутри волокон, отмечается сохранность их сарколеммы. Такая структурная особенность приводит к некоторой задержке выхода некротического детрита в пространство между волокнами, который является стимулятором запуска регенерации. Вероятно, именно поэтому через 1 час после травмы наблюдается слабовыраженный лейкоцитоз (15-20 лейкоцитов в поле зрения). Полученные в результате исследования морфологические изменения скелетной мышцы с агональными повреждениями соответствуют прижизненным проявлениям (наличие кровоизлияний, некробиоза и некроза мышечных волокон), однако степень выраженности их значительно меньше. Также по естественным причинам отсутствуют реактивные изменения, наблюдаемые при развитии воспалительной реакции. Эти результаты совпадают с немногочисленными исследованиями в данном направлении (Авдеев М.И., 1959; Шалисова Л.Г., Логойда Д.М., 1984). В обнаруженных очаговых микрокровоизлияниях, насчитывалось от 1 до 5 лейкоцитов, попавших в очаг повреждения из поврежденного сосуда, а не в результате миграции из кровяного русла. На электронных микрофотографиях таюке были обнаружены эритроциты, лежащие за пределами стенки сосуда.

На ультраструктурном уровне изменения, касающиеся строения ядер и органоидов, имеют сходную картину, наблюдаемую в зоне прижизненно нанесенной травмы. Выраженные изменения ядра наблюдаются уже через 6 часов от начала эксперимента и проявляются в изменении формы, агрегации хроматина, кариопикнозе. Через 12-24 часа от начала эксперимента помимо вышеописанных изменений в мышечных волокнах наблюдались признаки некроза, который проявлялся потерей поперечной исчерченности волокна и кариолизисом.

При окраске стандартными красителями (гематоксилин и эозин) в препаратах на всех сроках эксперимента было выявлено явление метахромазии. Мышечные волокна были окрашены в цвета от желтовато-красноватого до ярко-синего. Механизм метахромазии выяснен недостаточно, считают, что ее возникновение обусловлено полимеризацией красителя, которую стимулируют хромотропные вещества, а в биологических объектах такими веществами являются мукополисахариды, гликозаминогликаны, гепарин, кератосульфат, а также нуклеиновые кислоты. Элекронно-микроскопически очагам метахромазии соответствовали участки наибольшего скопления включений гликогена, который также определялся на всех сроках проведенного эксперимента и был представлен в виде крупных, средних и мелких гранул, которые локализовались в межмиофибриллярном пространстве преимущественно на участках наибольшего расслоения и расплавления миофибрилл, в матриксе митохондрий и нуклеоплазме. Так как гликоген является полисахаридом, именно его присутствие обусловило возникновение явления метахромазии, наблюдаемое при световой микроскопии. Гликоген служит в организме резервной формой глюкозы. В организме человека может содержаться до 450 г гликогена, треть из которого накапливается в печени, а остальное - главным образом в мышцах. Синтез гликогена в органах происходит, главным образом, за счет простых Сахаров. Мукополисахариды (кислые и нейтральные), связанные с белками (миозин, миоглобин, глобулин) и эфирами серной кислоты (мукопротеиды, гликопротеиды), а также аскорбиновая кислота, гликолипиды могут быть источником образования гликогена, хотя главным его источником являются углеводы и жиры пищи, которые в клетках обладают взаимопревращаемостью. Об этом, в частности, свидетельствует обнаружение гликогена в жировых клетках (Arndt, 1926; Е. В. Чернышева и А.В. Бургман, 1958). Синтез и распад гликогена обеспечивают постоянство концентрации глюкозы в крови и создают депо для ее использования тканями по мере необходимости. Распад гликогена печени служит в основном для поддержания уровня глюкозы в крови. Гликоген мышц служит резервом глюкозы, как источника энергии при сокращении мышц и не участвует в регуляции уровня глюкозы в крови. Процессы накопления глюкозы в виде гликогена и его распада должны быть согласованы. В переключении этих метаболических путей в мышцах участвуют гормоны инсулин и адреналин. В экстремальных ситуациях под действием адреналина в мышечных клетках происходит мобилизация гликогена. Связывание адреналина с р-рецепторами, ассоциированными с аденилатциклазной системой, приводит к образованию цАМФ в клетке, а только затем фосфорилированию и активации киназы фосфорилазы и гликогенфосфорилазы, в отличие от распада гликогена в печени. В мышцах отсутствует глюкозо-6-фосфатаза, поэтому гликоген мышц не может быть источником глюкозы в крови. По этой причине колебания содержания гликогена в мышцах меньше, чем в печени. Уменыпениеи даже исчезновение гликогена может быть связано с длительной агонией, тем более, если предагональный период протекал на фоне более или менее выраженного истощения (Русаков А.В., 1946; ТишинВ.С, 1961).