Введение к работе
Актуальность проблемы. Одной из наиболее актуальных проблем в клинике пузырных кожных заболеваний является установление точного диагноза с целью подбора адекватных методов терапии. Современная медицина обладает целым рядом эффективных средств, позволяющих успешно подавлять развитие патологического процесса при пузырных заболеваниях [Глухенький Б.Т., Грандо С.А., 1990; Машкиллейсон А.Л., 1990]. Однако те же средства обладают нередко побочным действием, нарушающим функцию тех или иных физиологических систем организма. Например, кортикостероиды, азатиоприн, метотрексат и другие. Принцип лечения заболеваний, при которых одним из патогенетических факторов являются аутоанти-тела, направленные к антигенам тканевых структур, сходен для многих медицинских областей. Однако, также как в клинике кожных заболеваний, разные формы патологии требуют различные схемы лечения, в частности разные дозировки, назначаемых препаратов. Учитывая возможные осложнения, необходимо применять оптимальные дозы, т.е. наименьшие дозы, позволяющие достигать терапевтического эффекта. Оптимальные дозы препаратов при таких заболеваниях как вульгарная пузырчатка, буллезный пемфигоид, дерматит Дюринга также как и схемы их лечения значительно отличаются друг от друга [ГрандоС.А., 1989; Машкиллейсон А.Л., 1990]. Назначение излишне больших доз кортикостероидоз и цитостатиков при любой из форм пузырных заболеваний неоправдано. Поэтому необходима тщательная дифференциальная диагностика. Существующие данные [Беренбейн Б.А.. 1995; Beutner Е.Н. et al., 1964, 1973] свидетельствуют о том, что применение ряда иммунологических методов, в том числе метода иммунофлюоресценции, в дополнение к клиническому обследованию во многих случаях позволяют уточнить диагноз. Полученные нами предварительные результаты подтверждают эти наблюдения. Однако, например, встречаются ложноположительные реакции в прямой иммунофлюоресценции, которые могут быть вызваны приемом лекарственных препаратов, при болезни Гроувера [Millns J.L. et al„ 1980], афтозном стоматите [Coscia-Porzzi L et al., 1985], или ложно-отрицательные (непрямой метод) - либо в начале заболевания, либо в стадии ре-
миссии. Таким образом, иммунофлюоресцентный метод, применяемый в комплексе с другими исследованиями, при диагностике акантолитической пузырчатки, требует усовершенствований, которые бы позволили сократить количество как ложнополо-жительных, так и ложноотрицательных реакций до минимума. В доступной нам литературе нет сведений о попытках стабилизировать реакции иммунофлюоресценции и фиксировать растворимые иммунные комплексы в тканях, результаты которых существенно дополнили бы возможности клинико-лабораторной диагностики.
Цель настоящей работы: разработать дополнительные способы дифференциальной диагностики пузырных заболеваний с помощью антител к антигенам различных структур кожи и иммуноморфологического метода исследования биопсии кожи и слизистых оболочек, покрытых многослойным плоским эпителием, при сопоставлении полученных результатов с клиническими и морфологическими наблюдениями.
В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи исследования:
-
Определение процента больных с положительной реакцией иммунофлюоресценции в межклеточной склеивающей субстанции многослойного плоского эпителия среди контингента больных пузырчаткой в Московской области.
-
Изучение возможности использования биопсии интактной кожи при иммуногисто-химических исследованиях больных с локализацией патологического процесса в недоступных областях (слизистых оболочках полости рта, носа, гениталий) для выявления характерной иммуноморфологической картины при акантолитической пузырчатке.
-
Разработать способ стабилизации иммунных комплексов и фиксации иммуноглобулинов в тканях при пузырных заболеваниях в случав слабой аффинности антитканевых антител с целью выявления их в срезах биопсии кожи и слизистой оболочки.
-
Разработать схему дополнительного иммуноморфологического анализа биопсии кожи и слизистой оболочки полости рта с использованием моноклональных и по-
ликлональных антител к антигенам тканевых структур (коллаген IV типа, цитоке-ратины клеток базального слоя многослойного эпителия и другие).
Научная новизна исследования:
Впервые сделана попытка стабилизации реакции иммунофлюоресценции в :резах биопсии кожи с целью выявления фиксации в тканях слабоаффинных ауто-антител и растворимых иммунных комплексов .
Использован молекулярно-биологический подход с применением моноклональ--іьіх и поликлональных антител к антигенам тканевых структур кожи для дополни--ельной характеристики патологического процесса при буллезных заболеваниях.
Практическое значение:
Проведение иммунологических и иммуноморфологических исследований для голучения дополнительных данных с целью установления или уточнения диагноза іузьірньїх заболеваний и подбора адекватных методов терапии.
Положения выносимые на защиту :
-
Предложен метод повышения процента положительных реакций в межклеточной склеивающей субстанции при акантолитической пузырчатке, включая периоды ремиссии, а также на фоне медикаментозного лечения.
-
Установлен факт участия растворимых иммунных комплексов в патогенезе большинства случаев (10 из 12-ти) семейной пузырчатки Хейли-Хейли.
-
Получена с помощью поликлональных и моноклональных антител к антигенам кожи (коллаген IV типа базальных мембран эпидермиса и сосудов дермы, антиген базальной мембраны, специфичный для эпидермиса, цитокератины клеток базального и дифференцированных слоев эпидермиса) дополнительная молекулярно - биологическая характеристика изменений в коже при пузырных заболеваниях (акантолитическая пузырчатка, буллезный пемфигоид, дерматит Дюринга, приобретенный буллезный эпидермолиз, линейный lgA-зависимый дерматоз).
Апробация работы: Материалы диссертации доложены на V Российском съез-іє специалистов по лабораторной диагностике (Москва, 24-26 мая 1995 г.); на VII
Российском съезде дерматологов и венерологов (5-7 июня 1996 г., г.Казань), на научно-практической конференции, посвященной 75-летию ЦНИКВИ (Москва, 1996 г.)..
Структура диссертации:
Диссертация изложена на 183 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, иллюстрирована 52 рисунками, 6 таблицами. Библиографический указатель включает 48 отечественных и 339 иностранных источников.