Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1 Факторы среды, регулирующие процессы жизнедеятельности грибов...9
1.1.1. Температура 9
1.1.2. Влажность 11
1.1.3 Освещенность 11
1.2 Направления в изучении вторичных метаболитов высших грибов 13
1.2.1 Изучение антибактериальной и противогрибковой активности метаболитов высших грибов 13
1.2.2 Изучение противовирусной активности метаболитов высших грибов 17
1.2.3 Изучение иммуномодулирующей активности высших грибов 18
1.2.4 Изучение ферментной активности высших грибов 22
1.3 Химический состав плодовых тел Laetiporus sulphureus 23
Глава 2. Материалы и методы 28
2.1. Методы полевых работ 28
2.1.1.Исследование микроклиматических параметров экспериментальных плантаций (ЭП) 28
2.1.2. Получение плодовых тел L. sulphureus на экспериментальных плантациях (ЭП) 28
2.2. Культивирование прибайкальских штаммов L. sulphureus в лабораторных условиях 29
2.3. Методы исследования химического состава плодовых тел L. sulphureus 30
2.3.1. Экстракция и фракционирование 30
2.3.2 Аналитические методы разделения 31
2.3.3 Препаративные методы разделения 32
2.3.4 Физико-химические методы 33
2.3.5. Химические методы 33
2.3.6. Химические реакции 36
2.4.1. Антирадикальная активность (DPPH-метод) 38
2.4.2. Антиоксидантная активность (каротин-Н202-модель) 39
2.4.3. Определение малонового диальдегида в печени крысы 39
2.4.4. Определение диеновой конъюгации (КД) ненасыщенных высших жирных кислот в печени крысы 39
2.4.5. Моделирование острого токсического повреждения печени крыс линии Wistar 40
2.5. Гистохимические методы (ШИК-реакция) 40
ГЛАВА 3. Климатическая характеристика района исследования 42
3.1. Факторы, определяющие дифференциацию природных условий района
исследования 42
3.2. Эколого-климатические условия экспериментальных плантаций 46
3.2.1 Климатические условия экспериментальной плантации «Быстрая»47
3.2.2 Климатические условия экспериментальной плантации «Усть-Кут» 48
3.2.3.Климатические условия экспериментальной плантации «Б. Голоустное» 50
ГЛАВА 4. Результаты и их обсуждение 53
4.1. Химическое исследование плодовых тел Laetiporus sulphureus (Bull.:Fr.) Murr 53
4.1.1 Органические кислоты 55
4.1.2 Углеводы 63
4.1.3 Аминокислоты. Характеристика аминокислотного состава плодовых тел L. sulphureus 90
4.1.4. Жирные кислоты. Характеристика состава жирных кислот плодовых тел L. sulphureus 94
4.1.5. Элементный состав. Характеристика элементного состава плодовых тел L. sulphureus 96
4.1.6. Другие классы соединений 102
4.1.7. Динамика накопления основных групп химических 107
соединений в процессе развития плодового тела!, sulphureus 107
4.2. Исследование биологической активности извлечений из плодовых тел Laetiporus sulphureus (Bull.:Fr.) Murr 110
Заключение 121
Выводы 125
Список использованной литературы
- Влажность
- Культивирование прибайкальских штаммов L. sulphureus в лабораторных условиях
- Эколого-климатические условия экспериментальных плантаций
- Аминокислоты. Характеристика аминокислотного состава плодовых тел L. sulphureus
Введение к работе
источникам биологически активных соединений грибного происхождения,
обладающих протеолитической, иммуномодулирующей, антиоксидантной,
антибиотической и другими видами активностей [15, 131, 175,190]. В связи с
этим актуальными являются исследования направленной регуляции
биохимической активности высших грибов.
Химический состав тканей и органов высших растений напрямую зависит от условий обитания растительного организма. Существует мнение [105], что содержание биологически активных веществ у высших растений закономерно падает с возрастанием географической широты места произрастания. Относительно высших грибов, вопрос о накоплении в них биологически активных веществ в зависимости от условий произрастания остается мало исследованным.
Возможность использования трутовых грибов как наиболее доступных объектов в биоконверсии органических отходов, в пищевой индустрии и медицине предопределяет необходимость более глубокого исследования их химического состава, а так же определения условий, влияющих на накопление биологически активных соединений.
Объектом исследования является ксилотрофный базидиомицет Laetiporus sulphweus (Bull.: Fr.) Murr. (рис. 1.) - семейство Polyporales, относящийся к грибам бурой гнили [76]. Основной ареал L. sulphureus расположен в зоне широколиственных лесов. По экологическим характеристикам гриб относится к термофилам, в Прибайкалье его плодоношение приходится на термический максимум региона. Гриб легко культивируется как в лабораторных, так и в природных условиях, в короткий срок образует плодовые тела большой биомассы. Обладает выраженной антимикробной, протеолитической и антиоксидантной активностью [170].
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является определение влияния климатических факторов среды на химический состав и
особенности накопления биологически активных соединений в плодовых телах Laetiporus sulphureus (Bull.:Fr.) Murr. в условиях Прибайкалья. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
Изучить химический состав плодовых тел прибайкальского штамма L. sulphureus.
Изучить динамику накопления биологически активных соединений в процессе развития плодовых тел L. sulphureus.
Определить влияние климатического фактора на характер накопления углеводов, липидов, органических кислот, аминокислот, минерального состава плодовых тел двух прибайкальских штаммов L. sulphureus в разных ландшафтах Прибайкалья.
4. Показать роль климатических факторов среды на проявление
антиоксидантной активности плодовых тел L. sulphureus в экспериментах in
vivo и in vitro.
Положения, выносимые на защиту.
1) Химический состав и содержание биологически активных соединений
в плодовых телах L. sulphureus обусловлены климатическими факторами
среды.
2) Наибольшее содержание биологически активных соединений в
плодовых телах L. sulphureus наблюдается в условиях среднетаежного
ландшафта.
Научная новизна работы. Впервые исследован химический состав плодовых тел прибайкальских штаммов Laetiporus sulphureus. Обнаружено присутствие алкалоидов и фенолов, ранее не идентифицированных в химическом составе данного гриба. Впервые из плодовых тел L. sulphureus выделены и охарактеризованы два новых полисахарида: латипоран А (разветвленный Р-(1—»3)-галактоманноглюкан) и латиглюкан I (линейный 0-(1—»3)-гомоглюкан). Установлено, что содержание органических кислот, углеводов, жирных кислот, фенолов, алкалоидов и аминокислот в значительной степени определяется климатическими условиями места
произрастания гриба - наибольшее содержание биологически активных соединений в плодовых телах отмечено в среднетаежном ландшафте. Установлено, что доминирующую роль в проявлении антиоксидантного эффекта экстрактов из плодовых тел L. sulphureus играют фенольные соединения, водорастворимые полисахариды и каротиноиды. Показано, что наибольшее содержание биологически активных соединений и наиболее выраженный антиоксидантный эффект приходятся на фазу зрелого плодового тела.
Теоретическая и практическая значимость работы. Изучение химического состава плодовых тел прибайкальских штаммов L. sulphureus вносит вклад в область изучения грибных метаболитов. Полученные данные позволяют оценить влияние климатических факторов среды на процессы, связанные с синтезом и накоплением метаболитов в плодовых телах базидиомицетов. Экспериментальный материал позволяет рассматривать L. sulphureus в качестве объекта для дальнейших исследований биологически активных соединений с целью расширения спектра лекарственных препаратов грибного происхождения. Выявление высокой степени антиоксидантной активности экстрактов плодовых тел L. sulphureus позволяет рассматривать данный гриб в качестве сырья для разработки биологически активных добавок.
Апробация работы. Результаты исследований были представлены на Втором конгрессе медицинской микологии (Москва, 2004), Третьем конгрессе медицинской микологии (Москва, 2005), Пятом конгрессе медицинской микологии (Москва, 2007), 6-й Международной конференции «Проблемы лесной фитопатологии и микологии» (Москва-Петрозаводск, 2005).
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 148 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, методической и экспериментальной частей, выводов и списка
Рис. 1. Плодовое тело трутовика серно-желтого - Laetiporus sulphureus (Bull.: Fr.) Murr. - семейство Polyporales [76]
цитируемой литературы. Работа включает 37 таблиц, 33 рисунка и 1 схемы. Список литературы состоит из 196 источников, в том числе 140 иностранных авторов.
Влажность
Обмен веществ как физиологический эквивалент репродуктивной фазы охватывает превращения, отражающие «индивидуальные» особенности высших базидиомицетов [34]. Продукты метаболизма этих грибов находят применение в медицине, ветеринарии и фитопатологии. Высшие базидиомицеты использовались в народной медицине во всем мире еще с древних времен [175]. Многие представители этого класса являются источником функциональной и питательной пищи, и физиологически активных веществ обладающих благоприятным терапевтическим действием: иммуномодуляция, поддержание гомеостаза, регуляция биоритмов, лечение болезней сердца, рака, церебрального паралича [109,130, 175].
Разнообразный характер биологического действия высших грибов отмечали многие исследователи [46, 55]. Многие базидиомицеты являются объектами целенаправленных поисков веществ с антимикробной, галлюциногенной, противоопухолевой и токсической активностью [55, 130, 175]. Одним из основных и издревле известных источников фармакологически активных соединений из класса Basidiomycota является семейство Poyiporales [109]. Около 75% полипоровых грибов обладают устойчивой антимикробной, противовирусной и противораковой активностью [78, 79, 88, 92, 138, 130]. Особенно важными компонентами химического состава этих грибов являются полисахариды клеточной стенки. Комплекс этих соединений несколько десятилетий является объектом многих исследований, так как их иммуномодулирующая активность приводит к высоким результатам при противораковой терапии [175].
Из более чем 200 видов съедобных грибов около 75% исследованных полипоровых грибов проявляют антибактериальную активность [175, 184, 191]. Активностью обладают вторичные метаболиты не только с низким молекулярным весом, но и также высокомолекулярные полисахариды клеточной стенки [175, 184, 185, 195]. Многие исследователи проводили изучение компонентов базидиомицетов, обладающих антимикробной активностью против таких патогенов человека и животных, как Eschrichia coli, Staphilococcus aureus и Pseudomonas areuginosa, так же они изучали активность против других микроорганизмов[165, 168, 170]. Базидиомицеты, особенно полипоровые, имеют давнюю историю использования в медицине. Извлечения из Forties fomentarius использовались в XVII и XIX веках в качестве кровоостанавливающих и противовоспалительных повязок и бандажей [130, 131]. .
Большое количество публикаций посвящено исследованиям антимикробной активности вторичных метаболитов, выделенных из различных видов грибов семейства Poliporales [109, 113, 116, 117,119, 120, 121, 122, 133, 146]. Исследование различных экстрактов из плодовых тел грибов вида Ganoderma, таких как Ganoderma lucidum, Ganoderma pfeifferi, Ganoderma resinaceum, показали избирательную активность против Bacillus subtilis. Например, два соединения ганомицин А и ганомицин В, выделенные из Ganoderma pfeifferi, показали ингибирование роста некоторых бактериальных грамположительных штаммов В. subtilus, S. aureus, Micrococcus flavus [150, 161, 168, 171, 181, 182, 185]. Противогрибковую активность проявляют соединение оосполактон из плодовых тел Gleophilum sepisrum [192]. Это же соединение проявляет активность против аскомицета Altenaria.
Другая группа антимикробных метаболитов поликетинового происхождения - мерулиновые кислоты А, В и С, выделенные из плодовых тел Merulius tremollusus и Phelebia radiate. Мерулиновые кислоты показали антимикробную активность против Athrobacter citreus, В. subtilus, Corinobacterium insidiosum, Micrococcus roseus, Sarcina lutea [17, 109, 102, 131].
Антимикробные сесквитерпены, дезоксифофилин, хипнофилин, 6,7-эпокси-4(15)-хирсутин-5-ол, и 6,7-эпокси-4(15)-хирсутин-1,5-диол, хирсутин, скелетон были выделены их дереворазрушающего гриба Lentinus crinitus. Дезоксигипофелин и гипнофелин активны против грамположительной бактерии Bacilus cereus, Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Mucor rouxil. a,3-ненасыщенные экзометеленовые кетоновые системы являются системами, ответственными за антимикробную активность[106, 109, 112,131]. Распад углеродных групп у дезоксигипофелина приводит к снижению антимикробной активности. Гипнофелин вместе с плеуротеллолом и плеуротеллоловой кислотой выделены из Pleurotellus hypnophilus. Гипнофелин и плеуротеллоловая кислота особенно активны в ингибировании роста растений [175,184].
Культивирование прибайкальских штаммов L. sulphureus в лабораторных условиях
Полевые работы проводились в ландшафтах Прибайкалья, экологические условия которых, описаны в главе 3. Микроклиматические исследования проводились в июле - основном месяце плодоношения L. sulphureus в исследуемом регионе. Регистрировались показатели факторов наиболее значимых для дереворазрушающих грибов: температура, освещенность, влажность воздуха. Температура и относительная влажность воздуха замерялись устройством МЭС -200 (метеометр) на уровне почвы и травостоя - основных ярусов обитания дереворазрушающих грибов. Освещенность измерялась люксметром Ю117 регулярно в ясные дни в полдень.
Единым субстратом для получения плодовых тел L. sulphureus на всех пробных площадках служила древесина лиственницы Larix sibirica Ledb. Данным приемом исключали влияние немаловажного для дереворазрушающих грибов фактора - субстрата. Для работы готовились спилы высотой 1-1.5 см и диаметром 15 см. В эксперименте одновременно было задействовано два прибайкальских штамма: LS-Br-0804, выделенный в лесостепном ландшафте и LS-YK-0704 - в среднетаёжном ландшафте. Это дало представление о роли штаммовой вариабельности в характере накопления соединений в плодовых телах L. sulphureus. Инокулировали субстрат десятисуточным мицелием L. sulphureus. Инкубация проходила в термостате при температуре 23С до полного обрастания субстрата, в течение 24 дней. Имитированные пеньки в количестве 15 штук штаммов LS-Br-0804 и LS-YK-0704 переносили по разработанной ранее методике на экспериментальные плантации в естественные ландшафты Прибайкалья
[Войников и др., 2005]. Формирование плодовых тел L. sulphureus на плантациях происходило в период термического максимума региона - с июля по август. Образцы плодовых тел получали в течение двух вегетационных периодов - 2005 и 2006 гг. (табл. 1). Собранный материал высушивали на воздухе до значений влажности не более 12% и измельчали в ступке.
В работе использовались два прибайкальских штамма Laetiporus sulphureus (Bull.: Fr.) Murrill. Перед выделением плодовые тела L. sulphureus были очищены от растительных остатков, обожжены над пламенем горелки. Обожженным скальпелем из плодового тела извлекался и помещался на питательную среду с сусло-агаром в стерильную пробирку. Мицелий выращивали в чашках Петри на среде с сусло-агаром (8 по Баллингу) в термостате при контрольной температуре 21 С.
Получение плодовых тел в лабораторных условиях для определения динамики накопления биологически активных соединений, в процессе формирования происходило в ростовых камерах при температуре 21 С. В качестве субстрата была использована стерильная подсолнечная лузга. Данный субстрат, быстро утилизируется дереворазрушающим грибом, создавая условия для образования плодовых тел в укороченные сроки.
Формирование зачатков плодовых тел (примордий) плодовых тел происходило на 14 сутки после полного обрастания субстрата при регулярном воздушно-капельном увлажнении. Плодоношение происходило без низкотемпературной стимуляции, что характеризует L. sulphureus как термофил. Это подтверждается его биогеографическим распространением -он является типичным представителем широколиственных лесов, в Прибайкалье его плодоношение приходится на термический максимум региона [19].
Эколого-климатические условия экспериментальных плантаций
Согласно поставленным задачам, исследования проводились в удаленных друг от друга районах Прибайкалья, значительно различающихся показателями эколого-климатического фактора. В лесостепном, среднетаёжном и горно-таёжном ландшафтах были заложены экспериментальные природные плантации. Названия экспериментальным плантациям (ЭП) даны по географическим пунктам, вблизи которых они изучались (рис. 5). 1 -с. Быстрая, Слюдянский район; 2-е Большое Голоустное, Иркутский район; 3 - г. Усть-Кут, Усть-Кутский район. Рис. 5. Расположение районов исследования [11]
Климатические условия экспериментальной плантации «Быстрая» Экспериментальная плантация «Быстрая» находилась в 1.5 км к северу от с. Быстрая, Слюдянского района Иркутской области. Она была заложена в ельнике рододендровом бруснично-зеленомошном с подростом кедра сибирского. Рельеф плантации отличался небольшой закочкаренностью. Увлажнение происходило за счет атмосферных осадков, но в большей степени являлось внутри грунтовым. Степень увлажнения данной плантации можно охарактеризовать как «чрезмерное». Освещенность умеренная, что характерно для горно-таёжных ландшафтов. С. Быстрая расположено на юго-западе Иркутско-Черемховской предгорной равнины. Район находится на несколько пониженной части плоскогорья, с преобладанием болотистых равнин с абсолютными высотами 500-520 м [10, 11,16].
Индекс сухости, характеризующий условия увлажнения территории в долине реки Быстрая, менее 1.0. Количество осадков за год выпадает до 500 мм. В начале летнего периода засушливо, начиная с середины июля избыточно влажно. Высота снежного покрова в водораздельной части от 40 до 60 см, запас воды в снежном покрове 50-100 мл. Уровень влажности в предгорных и горных районах избыточный [16, 22].
Суммарная солнечная радиация составляет 4000-4200 мДж/м. В среднем радиационный баланс представленного района, как и в среднем по Иркутской области, составляет 20-25 % сумм при возможном безоблачном небе, коротковолновой радиации и равен 1600 МДж/м [27,44].
В летний период в районе с. Быстрая преобладают умеренные температуры с суммой среднесуточных температур воздуха выше 10С около 1000С. Средняя температура июля самого жаркого месяца этого региона составляет - 15.7 С0. Число дней с переходом температуры через 0С составляет 90-100 [10,11].
Экспериментальная площадка «Усть-Кут» находится в 1.5 километрах от г. Усть-Кут на севере Иркутской области. Административный пункт Усть-Кут расположен в переделах Приленского плато, представляющего морфоструктуру с участками унаследованного и обращенного рельефа. Холмистая поверхность плато имеет четко выраженный наклон на север и некоторое снижение высот в сторону долины р. Нижняя Тунгуска. Преобладающие высоты водоразделов 550-650 м. Глубина вреза долины рек достигает 200 м [11,44].
Климатические условия исследуемого района отличаются резкой континентальностью. Сумма положительных температур воздуха составляет 1844, выше 10- 1495. Средняя температура июля 17.3-17.6С. Суточные колебания температуры [6, 8] в июле 10-12, что связано с поступлением солнечной радиации. [11]. Средняя продолжительность безморозного периода составляет 97 дней [28]. Число дней с переходом температуры через 0С составляет 90-100; данное количество обусловлено относительно большим числом заморозков к конце мая - начале июня, а также ранними заморозками в конце августа. Понижение температуры в августе в ночное время бывает настолько значительным, что часто после первого заморозка наблюдается полное прекращение вегетации. В то же время в эти месяцы возможны абсолютные максимумы температуры: в августе 34 и в сентябре 27. В октябре температура воздуха становится устойчиво отрицательной [4, 6,8,16].
Суммарная солнечная радиация составляет 3400-3600 мДж/м . На распространение туманов, кроме условий циркуляции атмосферы, значительное влияние оказывает местный физико-географический фактор. Для данного района характерны туманы, вызываемые перемещением воздуха в виде компенсационных потоков с участков более холодных к более теплым участкам. Число дней с туманом за теплый и холодный период составляет 50. Количество туманных дней в августе сокращает уровень инсоляции. Поступившая солнечная радиация регулирует амплитуду колебания температуры воздуха в течение суток, в летний период она составляет 6-8С [6, 8]. Высокая амплитуда колебания температуры воздуха является одной из особенностей данного района
Аминокислоты. Характеристика аминокислотного состава плодовых тел L. sulphureus
В комплексе водорастворимых полисахаридов обнаружено шесть полисахаридов, названных нами как латипораны, которые отличаются величинами молекулярной массы: А - 5.6-104 Да, В - 3.9-104 Да, С - 2.7-104 Да, D - 2.5-104 Да, Е - 1.9-104 Да, F - 1.5-104 Да. С применением количественной гель-хроматографии установлено содержание каждого латипорана в LSW и его фракциях, а также в плодовом теле L. sulphureus (табл. 17).
Доминирующим компонентом комплекса водорастворимых эндополисахаридов L. sulphureus является латипоран А, содержание которого составляет более 30% от массы LSW (0.28% от массы абс.-сух. сырья).
Латипоран А. Для исследования строения доминирующего соединения комплекса водорастворимых полисахаридов нами выбрана фракция LSW-2, которая гомогенна и состоит из латипорана А.
В процессе ступенчатого гидролиза установлено, что в первую очередь от молекулы латипорана А отщепляются остатки фукозы, маннозы, рамнозы и ксилозы. После 60 мин гидролиза начинается отщепление галактозы и глюкозы.
Периодатное окисление исходного латипорана А заканчивается через 5 сут. без переокисления, расход периодата составляет 0.42 моль/ангидрозвено. Столь низкий показатель также подтверждает наличие 1— 3 -связи. Количество выделившейся муравьиной кислоты - 0.21 моль/ангидрозвено, что указывает на разветвленный характер молекулы. При степени полимеризации кора молекулы в 185-187 единиц присутствует 73-74 точки ветвления, т.е. по 2 на каждые 5 звеньев основной цепи.
Для определения конфигурации гликозидных связей проведено окисление хромовым ангидридом, при котором окислению подвергаются только Р-гликозидные связи. В гидролизате после окисления латипорана А и его кора глюкоза не обнаружена, что, возможно, указывает на наличие (3-гликозидной связи между ее остатками. Присутствие галактозы и маннозы указывает на наличие а-связи.
В ИК-спектре латипорана А (рис.16) наблюдается полоса поглощения при 890 см"1, что указывает на наличие (3-связей в структуре вещества. Максимум с меньшей интенсивностью при 840 см 1 свидетельствует о присутствии а-связанных остатков моносахаридов. Полоса при 810 см" показывает присутствие моносахаридов в пиранозной форме [26].
В области скелетных колебаний (1000-1400 см 1) наблюдаются четкие полосы поглощения. Наличие полярной связи С-0 вызвало появление в ИК-спектре интенсивной полосы в области 1000-1200 см 1. Появление полосы в интервале 1250-1400 см"1 связано с наличием деформационных колебаний ОН-группы. В области карбонильного поглощения присутствует полоса амид I - 1655 см"1, что доказывает ранее высказанное предположение о наличии белковых компонентов в составе латипорана А и его отнесении к классу гликопротеидов [26]. Интенсивная полоса в области 3000-3400 см" относится к валентным колебаниям гидроксильных групп углеводов, а также свидетельствует о присутствии как внутри- так и межмолекулярных водородных связей в структуре полимера. Следует отметить, что в ИК спектре не обнаружены полосы в областях, характерных для карбоксильной группы уроновых кислот (1640,1745 см-1) [56]. 1655 1364 12 13С-ЯМР спектр латипорана А представлен на рис.17; величины химических сдвигов сигналов (м.д.) и их интерпретация - в таблице 18.
Вид 13С-ЯМР спектра латипорана А характерен для 0-(1 —»3)-глюканов. В аномерной области (99-104 м.д.) обнаружено три интенсивных сигнала, относящиеся к Сжатому глюкозы: сигнал 103.5 м.д. связан с концевым нередуцирующим звеном, 101.4 м.д. - внутренними звеньями полимера, 99.6 м.д. - восстанавливающим концевым звеном. Наличие (3-связи подтверждается из сравнения характера сигналов Сі-атома для а- и 0-D-глюкопираноз, а также их метальных производных. Производные с 3-конфигурацией аномерного протона смещают сигнал Сгатома в более слабое поле. О присутствии З-О-замещенных глюкозных остатков свидетельствует сигнал при 103.5 м.д. Незначительное количество точек ветвления у С6 5 атома глюкозы показано наличием слабого сигнала О-замещенного углерода при 61.5 м.д. Рис. 17. 13С-ЯМР-спектры нашивного и деградированного по Смиту латипорана А. Примечание: А- латипоран А; Б - участок С-ЯМР-спектра латипорана А в диапазоне 10-20 м.д.; В - 13С-ЯМР-спектр деградированного по Смиту латипорана А. Указаны порядковые номера углеродных остатков пираноз: Ga - галактоза, GI - глюкоза, Fc - фукоза, Мп - манноза.
Сигнал СЗ-атома глюкозы находятся при 75.4 и 79.7 м.д., причем первый, относится к терминальному остатку, а второй к (1— -связанной глюкозе основной цепи. Остальным углеродным атомам глюкозы соответствуют следующие сигналы: 71.6 м.д. (С2), 68.4 м.д. (С4), 74.8 м.д. (С5). Присутствие маннозы и галактозы сказывается на общем виде 13С-ЯМР спектра латипорана А. Положение сигналов, отнесенных к маннопиранозе (102.7 м.д. - СІ, 72.8 м.д. - СЗ, 71.7 м.д. - С5, 71.0 м.д. - С2, 68.9 м.д. - С4, 61.9 м.д. - С6) и галактопиранозе (100.6 м.д. - С1, 72.9 м.д. - С5, 70.4 м.д. -СЗ, 68.9 м.д. - С4, 68.2 м.д. - С2, 61.9 м.д. - С6), что подтверждает полученные ранее в результате окисления латипорана А хромовым ангидридом данные о наличии а-связи между остатками указанных пираноз.
