Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Свободнорадикальные процессы и их регуляция 10
1.1.1. Активные формы кислорода 10
1.1.2. Перекисное окисление липидов 14
1.1.3. Регуляция свободнорадикальных процессов 16
1.2. Этиология и патогенез желчнокаменной болезни (ЖКБ) 21
1.2.1. Распространенность и этиология желчнокаменной болезни 21
1.2.2. Патогенез желчнокаменной болезни 22
1.2.3. Патологические состояния организма, вызванные ЖКБ 25
Глава 2. Материалы и методы исследования 44
2.1. Характеристика групп больных 44
2.2. Получение биологического материала 44
2.2.1. Получение плазмы крови 44
2.2.2. Получение гемолизата 45
2.2.3. Получение слюны 45
2.3. Биохимические и биофизические методы исследования 45
2.3.1. Хемилюминесцентный анализ в системе Н202- люминол 45
2.3.2.Определение общего и внеэритроцитарного гемоглобина 47
2.3.3. Получение хлороформного экстракта липидов 48
2.3.4. Определение общих липидов 48
2.3.5. Определение содержания диеновых конъюгатов 43
2.3.6. Определение шиффовых оснований 50
2.3.7. Определение малонового диальдегида 50
2.3.8. Определение активности СОД и СУА 51
2.3.9. Определение активности каталазы 52
2.3.10. Определение оксидазной активности церулоплазмина 53
2.3.11 Определение содержания мочевины 54
2.3.12. Определение содержания мочевой кислоты 55
2.3.13. Определение суммарной пероксидазной активности 55
2.3.14. Определение молекул средней массы 56
2.3.15. Определение молочной кислоты 57
2.3.16. Определение ксантина 59
2.4. Статистическая обработка результатов исследования 60
Глава 3. Результаты исследования 61
3.1. СРП и их регуляция в крови больных ЖКБ 61
3.2. СРП и состояние АОС крови больных ЖКБ при лечении 67
3.2.1 Интенсивность ХЛ в плазме крови больных ЖКБ в процессе лечения 69
3.2.2 Содержание ВЭГ и уровень СПА плазмы крови больных ЖКБ в процессе лечения 71
3.2.3 Интенсивность ПОЛ в крови больных ЖКБ в процессе лечения 72
3.2.4 Активность антиоксидантных ферментов в крови больных ЖКБ в процессе лечения 75
3.2.5 Содержание мочевины и мочевой кислоты в плазме крови больных ЖКБ в процессе лечения 77
3.2.6 Уровень МСМ в плазме крови больных ЖКБ в процессе лечения...78
3.2.7 Уровень молочной кислоты и ксантина в крови больных ЖКБ в процессе лечения 80
3.3. СРП и их регуляция в слюне больных ЖКБ 81
3.3.1 СРП и состояние АОС слюны больных ЖК 82
3.3.2 СРП и состояние АОС в слюне больных ЖКБ при лечении 85
3.3.2.1 Интенсивность ХЛ в слюне больных ЖКБ в процессе лечения...86
3.3.2.2 СПА слюны больных ЖКБ в процессе лечения 87
3.3.2.3 Интенсивность ПОЛ в слюне больных ЖКБ в процессе лечения...88
3.3.2.4. Активность антиоксидантных ферментов в слюне больных ЖКБ в процессе лечения 90
3.3.2.5 Содержание мочевины и мочевой кислоты в слюне больных ЖКБ в процессе лечения 91
3.3.2.6 Уровень МСМ в слюне больных ЖКБ в процессе лечения 92
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 94
Выводы 150
Список литературы 151
- Свободнорадикальные процессы и их регуляция
- Этиология и патогенез желчнокаменной болезни (ЖКБ)
- Биохимические и биофизические методы исследования
- СРП и их регуляция в крови больных ЖКБ
Введение к работе
Желчнокаменная болезнь (ЖКБ) - заболевание гепатобилиарной системы, обусловленное нарушением обмена холестерина (cholelithiasis, от греч.споіе -желчь и lithos - камень) и / или билирубина, которое характеризуется наличием конкрементов разной этиологии и состава в желчном пузыре и / или желчных протоках (Минушкин и др., 1999; Мараховский, 2003).
В настоящее время ЖКБ занимает одно из ведущих мест среди заболеваний органов пищеварения в мире. В России "болезнь благополучия", как образно назвали ЖКБ, уступает по этой печальной статистике лишь атеросклерозу, оставив позади язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (Майст-ренко и др., 1999). В Ростовской области, в связи с низким качеством питьевой воды, хронической ЖКБ страдает каждый второй. Кроме того, наблюдается прогрессирующая тенденция к возрастанию заболеваемости холециститом, увеличивающаяся за каждое последнее десятилетие в 2 раза (Колпаков, 1993; Дадвани и др., 2000). В связи с этим изучение механизмов развития, патогенеза, этиологии ЖКБ, а также лечения данного заболевания, является одной из наиболее важных и актуальных проблем в современной медицине, выводящая ее на новый социальный уровень как проблему общественную, требующую дальнейшего изучения данной патологии (Морозов др., 2001; Петухов, 2003).
ЖКБ - комплексное заболевание, проявляющееся во множестве разнообразных форм, среди которых можно перечислить острую и хроническую, кальку-лезную и бескаменную, кроме того, известен газовый холецистит, тифозный, ксантогранулематозный и ряд других форм (Шерлок и др., 1999).
Вопрос о причине камнеобразования в настоящее время до конца не изучен. В 99 % случаев обнаружение камней у пациентов - случайная находка, опасность которой заключается в возможности внезапной обтурации конкрементом любого участка желчевыделительной системы (Хачатрян и др., 1994), а также изъязвление стенок желчного пузыря и желчеистечение, приводящее к многочисленным осложнениям ЖКБ (Майстренко и др., 1999; Сотниченко и др., 2003). Кроме того, опасность ЖКБ заключается в частом развитии данной пато-
8 логии под "маской" других заболеваний (Циммерман, 2006), что подчеркивает
сложность диагностики заболевания и необходимость дифференцированного
обследования всех органов брюшной полости (Маев и др., 2004).
В настоящее время, все большее внимание уделяется совершенствованию эндовидеохирургических методов лечения ЖКБ, клиническим формам (диспепсическая, стенокардическая и т. д.) проявления этого заболевания, в то время когда остается мало изученным вопрос о состоянии свободнорадикальных процессов (СРП) и динамики свободнорадикального и перекисного окисления при данной патологии. Изучение системы ПОЛ и антиоксидантной системы защиты у пациентов с ЖКБ необходимо для углубления сведений о механизмах развития метаболических нарушений при данном виде патологии, а также для коррекции возможных осложнений этого заболевания.
Наиболее признанным эффективным методом лечения ЖКБ на данный момент является малотравматичное оперативное удаления желчного пузыря из "мини-доступов" посредством лапароскопической холецистэктомии (ЛХЭ) (Шуркалин и др., 2001; Григорьев и др., 2002). В настоящее время данную хирургическую манипуляцию проводят с использованием карбоксиперитонеума, применение которого может способствовать развитию гипоксии, которая, как известно, сопровождается активизацией СРП (Минушкин и др., 1992; Минуш-кин и др., 1999; Козленко и др., 1999; Коссович, 2003).
В последнее время как один из методов в комплексе мероприятий при лечении желчнокаменной болезни часто применяется ГБО-терапия в терапевтических режимах. С этой целью пациенты по клиническим и биохимическим показаниям проходят сеансы ГБО. Сеансы оксигенобаротерапии (ОБТ) даже низкой интенсивности, могут способствовать усилению свободнорадикальных процессов (СРП) из-за повышения уровня и напряжения кислорода во всех тканях организма в условиях ППДК (Внуков и др., 2005; Милютина и др., 2005). К настоящему времени установлены принципиальные различия в действии кислорода на здоровый и пребывающий в состоянии гипоксии организм, что служит главным показателем для проведения ГБО-терапии. Поскольку появление эф-
9 фектов реоксигенационной активации СРП может существенно усилить токсическое действие кислорода, исследование различных сторон кислородзависи-мых свободнорадикальных процессов может явиться основой для создания адекватных способов контроля состояния организма при ГБО- терапии различных заболеваний, в патогенезе которых гипоксия занимает важное место.
Целью настоящей работы явилась оценка уровня свободнорадикального окисления и эффективности антиоксидантных систем крови и слюны больных желчнокаменной болезнью в процессе развития заболевания и в процессе лечения с применением лапароскопической холецистэктомии на фоне ГБО - терапии, выявление метаболической взаимосвязи между биохимическими показателями крови и слюны.
Для достижения поставленной цели были сформулированы и решены следующие задачи:
Исследовать уровень СРП и интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) в гемолизате, плазме крови и слюне обследуемых больных.
Определить уровень суммарной пероксидазной активности (СПА) в плазме крови и слюне, а также содержание внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ) в плазме крови клинической группы.
Исследовать состояние антиоксидантной системы по активности суперок-сиддисмутазы (СОД), каталазы, церулоплазмина (ЦП) и содержанию мочевины и мочевой кислоты в гемолизате, плазме крови и слюне больных.
Определить уровень эндогенной интоксикации по содержанию молекул средней массы (МСМ) в плазме крови и слюне, развитие гипоксии по содержанию ксантина и молочной кислоты в крови обследуемых больных.
Свободнорадикальные процессы и их регуляция
Синглетный кислород (!02) представляет собой бирадикал с двумя неспа-ренными электронами, ненесущий заряда (Меньщикова и др, 2006). !02 - высокоэнергетическая форма кислорода, на 94 кДж обладает большей энергией, чем обычный молекулярный кислород. Бирадикальная форма 02 обуславливает его высокую реакционную способность и позволяет ему запускать ПОЛ. ]02 активно взаимодействует с холестерином, нарушая стабильность биомембран. Известно участие 02 в повреждении нуклеиновых кислот (преимущественно повреждается гуанин) и индукции канцерогенеза. При взаимодействии 102 с аминокислотами в составе белков в первую очередь окисляются гистидин и триптофан, несколько слабее - метионин, тирозин и цистеин (Bast et al, 1991). Время жизни 02 Ю"6 секунд, радиус диффузии 0,3 мкм (Меньщикова и др., 1993).
Супероксидный анион - радикал (02" ) представляет собой продукт одно-электронного восстановления молекулярного кислорода, время его жизни порядка 10"6 секунд и радиус диффузии 0,3 мкм. Эффективно окисляет аскорбат, а - токоферол, водные растворы Си+ и Fe+ и сам легко окисляется люминолом (Diaber et al., 2004), Cu , Fe и цитохромом С (Владимиров и др., 1991).
Биоэффекты супероксида связаны с его патологической ролью и обусловлены реакциями депротонирования и окисления субстратов, восстановления Fe+3, а также взаимодействия с Н202 и NO , что приводит к образованию ОН. Помимо патологической роли 0{ известны другие его эффекты: вазомоторное действие, 0{ в митохондриях участвует в запуске апоптоза, супероксид из макрофагов необходим для пролиферации лимфоцитов (Вартанян и др., 1990).
В живых организмах существует несколько механизмов генерации 02": ауто-окисление гемоглобина с образованием Met-гемоглобина, аутоокисление кате-холаминов (Winterbourm, 1998), окислительно - восстановительные реакции с участием ферментов (ксантиноксидазы, цитохрома Р-450 и NADF H - оксидазы) (Mori et al., 1994; Щепеткин, 1998). В системе микросомального окисления образование Ог" может происходить в двух участках микросомальной цепи на цитохроме Р-450 (КФ 1.14.14.1) и на NADF H-n,HToxpoM Р-450-оксидоредуктазе (White, 1991; Rashba-Step et al., 1993). Избыточная активация этой системы наблюдается при различных патологиях (аллергии, аутоиммунных процессах, канцерогенезе, мутагенезе и т. д.). NADF H - оксидаза (КФ 1.6.99.6.) сложный мультиферментный комплекс, осуществляющий восстановление молекулярно-го кислорода за счет электронов NADF H. Генерация 0{ при активации NADF H - оксидазы фагоцитов играет важную роль в реализации их микроби-цидного и иммунорегуляторного действия (Матюшин и др., 1996; Меньщикова и др., 2006). В электрон-транспортной цепи супероксид образуется в качестве побочного продукта при работе двух звеньев ЭТЦ: NAD H: убихинон оксидо-редуктазы и убихинона (в форме семихинона), которые "сбрасывают" электроны на молекулярный кислород (Bandy et al., 1990; Демин и др., 1998).
Главной системой защиты от Ог" является супероксиддисмутаза (СОД), це-рулоплазмин (ЦП), а также убихинон и аскорбиновая кислота.
Перекись водорода (Н202) представляет собой продукт двухэлектронного восстановления молекулярного кислорода, который стабилизируется протони-рованием. Н2О2 достаточно стабильна, может легко проникать через мембраны и мигрировать от одних клеток и тканей в другие. Время жизни и радиус диффузии зависят от активности ферментов, образующих перекись водорода. Н202 окислитель умеренной силы (Матюшин и др., 1996).
Биологическое действие Н202 связывают с двумя механизмами (Владими % 4-0
ров и др., 1991): 1) перекись водорода активно реагирует с 0{ и Fe , участвуя в реакциях Габера-Вейса и Фентона с образованием НО , а также является важным источником гипогалоидов, 2) перекись водорода обладает широким спектром цитотоксических эффектов. При воспалении Н2Ог способствует выходу Fe+2 из железосодержащих белков (ферритин, трансферрин, лактоферин), которое в 100-1000 раз усиливает её токсичность. Среди биоэффектов Н2О2 также можно назвать сосудосуживающее действие, ингибирование пролиферации лимфоцитов, усиление окислительного взрыва нейтрофилов, макрофагов и действия тиреоидных гормонов щитовидной железы, регуляция активности тучных клеток и выброс ими гистамина (Shappel et al., 1990).
Известно несколько механизмов генерации Н2О2: дисмутация (- суперок-сиддисмутазой; двухэлектронное восстановление 02 ферментами: ксантинокси-дазой, оксидазами L-аминокислот и др.; одноэлектронное восстановление СЬ" металлами переменной валентности (Cu+, Fe+2 и т. п.).
В клетке существуют два основных фермента защиты от Н2О2: катал аза и глутатионпероксидаза (Зенков и др., 1993; Gaetani et al., 1996).
Гидроксильный радикал (НО , "радикал - убийца") является продуктом трехэлектронного восстановления молекулярного кислорода; мутагеном, канцерогеном, одним из наиболее токсичных R . Ввиду своей высокой реакционной способности НО обладает крайне малым временем жизни (10"9 секунд) и радиусом миграции ( 100 А ) (Меньшикова и др., 1993). В биосистемах НО образуется главным образом в результате одноэлектронного восстановления Н202 металлами переменной валентности, при окислении арахидоновой кислоты, при микросомальном окислении, в реакциях с флавином и убихиноном, а также при радиолизе воды (Журавлев, 1991).
Этиология и патогенез желчнокаменной болезни (ЖКБ)
Желчнокаменная болезнь представляет серьезную проблему для пациентов и для общества в целом. На сегодняшний момент около 8-12 % населения развитых стран мира страдает этим заболеванием (Корита 1993; Бурков и др., 1994; Hardt et al., 1997; Miquel, 1998; Ветшев и др., 2002). Поэтому в настоящее время ЖКБ справедливо считают "болезнью века", "болезнью цивилизации", "болезнью благополучия" (Майстренко и др, 1999). В России примерно 6-Ю млн. больных, а в Ростовской области это одно из ведущих прогрессирующих заболеваний, которой страдает каждый второй (Минушкин и др., 1999). О распространенности ЖКБ можно судить по данным Всемирного Союза хирургов: в мире ежегодно выполняется более 1,5 млн. холецистэктомий, в России 250-300 тысяч (Мараховский, 2003).
Статистикой и многолетними наблюдениями врачей отмечается явная тенденция к повышению заболеваемости ЖКБ, которая, по всей вероятности, сохранится в будущем (Максимов и др., 1992; Морозов и др., 2001; Мараховский, 2003). Кроме того, ЖКБ значительно "помолодела" и стала встречаться не только в молодом, но и в раннем детском возрасте и даже в эмбриональном периоде (при нарушениях развития обменных процессов плода) (Ahlberg et al., 1979; Everson et al, 1991; Bouchier, 1992; Leitzmann et al., 1998).
Ввиду того, что ЖКБ заболевание полиэтиологическое, то к факторам риска развития данной патологии можно отнести генетические факторы, медицинские (ожирение, цирроз печени, гемолитическая анемия, хронические воспаления в органах пищеварения (гастрит, гепатит, панкреатит), заболевания кишечника, гиперхолестеринемия, гиперлипидемия, гипербилирубинемия, нейроэндокрин-ные нарушения, сахарный диабет, застой желчи в желчном пузыре, спинномозговая травма, низкая физическая активность) и медикаментозные (связаны с применением препаратов с гипохолестеринемическим действием, диуретиков, контрацептивных препаратов на основе прогестинов, а также эстрогенов и их аналогов) (Carey, 1990; Бурков и др, 1994; Erlinger, 2000; Мараховский, 2003).
При развитии желчнокаменной болезни больные испытывают боли в правом подреберье с иррадиацией в спину, правую часть тела, поясничную область и область сердца, стимулируя приступ стенокардии (Панфилов и др, 2001; Пи-рузян, 2005). При продолжительных болях развивается зуд кожи. Помимо желчной колики больные ЖКБ часто испытывают диспептические расстрой ства: провокация болей жирной, жареной пищей, пряностями, копченостями, острыми приправами; горечь во рту (при выбросе желчи в верхние отделы пищеварительного тракта), тошнота, рвота (Carey, 1990; Мараховский, 2003).
Длительное протекание болезни без соответствующего лечения осложняется появлением в желчном пузыре холелитов (Bouchier, 1990; Carey, 1993). Желчные конкременты весьма разнообразны (Тарасенко, 1991; Гераськина, 1994): по количеству и размеру могут образоваться множество мелких, один или несколько крупных, причем опасность представляют и те и другие, так как могут приводить к закупорке желчевыносящих каналов при сокращении желчного пузыря и в считанные часы спровоцировать острое воспаление (Галкин, 1986; Кочнев и др., 1992; Осадчук и др., 2002; Титов, 2004), механическую желтуху (Хачатрян и др., 1994; Дадвани и др., 2000), воспаление поджелудочной железы (панкреонекроз) (Петухов и др., 1999; Петухов и др., 2002; Сотниченко и др., 2003; Лопаткина, 2004); по форме от гладких до шероховатых с четкими гранями; по цвету от бледно-желтых, до черных и по химическому составу выделяют холестериновые, пигментные и известковые камни (Shaffer et al., 1977; Maatsumura et al., 1996; Nunes et al., 1999; Шерлок и др., 1999).
По многочисленным данным литературы, к основополагающим причинам камнеобразования относят следующие: метаболические нарушения липидного обмена (Гребнев и др., 1990; Теслюк и др., 2004; Иванченкова и др., 2005; Цуканов и др., 2005), снижение сократительной функции желчного пузыря (гипокинезия) и застой желчи (Дедерер и др., 1983; Таджиев, 1991), воспалительные изменения в стенке желчного пузыря (Кочнев и др., 1992; Осадчук и др., 2002).
Основной предпосылкой для развития ЖКБ является образование желчи пе-ренасыщеной холестерином и с пониженным содержанием желчных кислот и фоффолипидов (литогенная желчь), но сам факт литогенности не является патологией и достаточным основанием для развития желчных камней. Необходим ряд дополнительных факторов, приводящих к гиперсекреции холестерина и его выпадению в кристаллы, которые в настоящее время дольно хорошо изученны и описанны в литературе (Арипов и др., 2002; Петухов, 2003).
Биохимические и биофизические методы исследования
На базе Южного Окружного Медицинского Центра и клиники хирургических болезней Ростовского Государственного Медицинского Университета была обследована группа больных с хроническим калькулезным холециститом, состоящая из 27 мужчин и женщин в возрасте от 45 до 65 лет. После УЗИ, ряда клинических исследований, купирования воспалительного процесса и спазмов анальгетиками и спазмолитиками все больные были направлены на плановое оперативное удаление желчного пузыря посредством лапароскопической холе-цистэктомии (ЛХЭ). До и после операции пациенты подвергались 3 сеансам ГБО. Больным в барокамере создавали давление 0,15 МПа во время 1 сеанса и 0,17 МПа во время 2 и 3 сеансов ГБО, поддерживаемом на постоянном уровне с помощью бароаппарата "БЛКС - 03" в течение 40 минут. Время компрессии и декомпрессии составляло 10 минут. 1-й сеанс ГБО проводили до операции для предадаптации больных, а 2-й и 3-й сеансы для ликвидации гипоксического состояния после оперативного вмешательства. 2-й сеанс проводили спустя один день, а 3-й два дня после ЛХЭ.
Забор крови и слюны проводился согласно следующим этапам исследования, которые соответствуют общепринятой схеме лечения изучаемого контингента больных:
В качестве контроля использовали кровь и слюну практически здоровых людей (доноров, n = 15) в возрасте от 25 до 50 лет.
Получение плазмы крови Кровь брали утром натощак путем пункции локтевой вены иглой с широким просветом без шприца. В качестве антикоагулянта использовали гепарин 5000 МЕ/мл из расчета 0,1 мл гепарина на 10 мл крови.
Для получения плазмы пробы крови с гепарином центрифугировали 15 минут при 3000 об/мин. Получали эритроцитарную массу и плазму крови, которую отбирали и хранили при температуре + 4 С.
Полученную после центрифугирования эритроцитарную массу использовали для получения 1% гемолизата. Эритроциты лизировали дистиллированной водой в соотношении 1:10 при + 4 С в течение 30 минут.
Забор слюны проводили натощак до приема пищи, предварительно предложив пациентам прополоскать ротовую полость физиологическим раствором. Слюнную жидкость центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут и хранили при + 4 С.
Интенсивность хемилюминесценции определяли в системе Н202 - люминол по методу Шестакова и др., 1979.
Метод основан на свободнорадикальном распаде перекиси водорода под действием металлов переменной валентности с образованием НО2 и НО , которые вызывают интенсивную окислительную хемилюминесценцию люминола (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фталозинедиона) (Владимиров и др., 1991)
В течение первых 4 часов после забора крови (слюны) происходит нарастание хемилюминесценции (ХЛ), поэтому измерения биопроб проводили незамедлительно. Хемилюминесцентный анализ проводили на приборе «хемилю минометр ХЛ - 003» (Уфа, 2003г).
В термостатированную кювету (37 ± 0,5 С) вносили 0,25 мл плазмы крови (или слюны) и 10 мл 0,1 Н трис HCI - буфера рН 6.8, содержащего 50 мкМ люминола (состав буфера: 4,425 мг люминола растворяли в 10 мл 1Н HCI, добавляли 6,06 гр. триса (оксиметиламинометан) и доводили бидистилятом до 500 мл). Программа ХЛ - 003 «сыворотка» или «плазма» (перемешивание - «быстро», время измерения - 5 мин, «термостат вкл.» +37С). Смесь помещают в кю-ветную камеру прибора, и прогревают в кюветодержателе в течение 2-3 мин.
ХЛ индуцируют добавлением 0,5 мл 350 мМ Н202 (концентрацию раствора Н202 проверяли методом титрования КМпОД которую вводят с помощью инсулинового шприца через инжекторный канал для введения инициирующей жидкости, через 8 секунд после начала измерений, которые проводят при постоянном перемешивании биопробы в течение 5 мин. латентный период /сек/, от момента введения Н2О2 до начала развития медленной вспышки, указывает на соотношение в системе прооксидантов и антиоксидантов.
Во время измерения интенсивности ХЛ, индуцированной Н202 выделяли 5 основных параметров:
1. «СПОНТАННЫЙ СВЕТ» - спонтанная светимость биопробы (в отн. ед), фоновое свечение плазмы крови (или слюны) до введения индуктора (Н2О2). Измеряли в течение 8 секунд.
2. «ВСПЫШКА» - h - высота быстрой вспышки (в отн. ед), зависит от содержания в системе гидроперекисей липидов ROOH. Т.е. пиковая интенсивность свечения биопробы, получаемая непосредственно после введения инициирующей жидкости (Н202).
3. «МАХ. СВЕТ» - Н - высота медленной вспышки (в отн. ед), отражает способность липидов к перекисному окислению, т.е. максимально возможную интенсивность ПОЛ после введения Н202
4. «СВ. СУММА» - Sm - светосумма медленной вспышки (в отн. ед), определяется как площадь под кривой от начала развития медленной вспышки до достижения ею максимального значения, оценивает число боковых цепей разветвления, т.е. количество перекисных радикалов RO2 , образовавшихся на одну молекулу Н2О2.
5. «НАКЛОН» - tg а - тангенс угла наклона левого плеча медленной вспышки, определяет скорость окисления липидов, т.е. скорость нарастания интенсивности свечения биопробы.
СРП и их регуляция в крови больных ЖКБ
Считается, что внеклеточная защитная роль каталазы незначительна, т.к. во внеклеточных жидкостях она быстро теряет свою активность в результате действия протеолитических ферментов. Но по данным литературы каталаза может присоединять 4 молекулы НАДФН, что предохраняет ее от инактивации и повышает ферментативную активность (Kirkman Н. N. et al., 1999). При некоторых заболеваниях (ревматоидном артрите, дистресс-синдроме), и как следует из полученых нами данных, при ЖКБ, наблюдается повышенная активность каталазы в плазме крови, что может служить для защиты от окисления определенных молекул или структур (Lock R. et al., 1988).
Церулоплазмин - медьсодержащая оксидаза, являющаяся гликопротеином -транспортёром меди, необходимой для синтеза антиоксидантных ферментов (СОД, каталазы, ГПО, аскорбатоксидазы и др. (Сох, 1999)). ЦП проявляет ката-литическую активность в отношении большого количества субстратов (Fe (k = 2-Ю6 М 1 с"1), аскорбиновая кислота, фенолы, амины, катехолы) (Васильев и др., 1988; Биленко, 1989) и принимает активное участие в ингибировании сво-боднорадикального ПОЛ (Нилова и др., 2003). Считается, что в плазме крови ЦП совместно с трансферрином образует антиоксидантную систему, регулирующую концентрацию восстановленных ионов железа (Atanasiu et al., 1998). Системе «ЦП - трансферрин» приписывают главную антиоксидантную роль в плазме крови, но, являясь белком острой фазы воспаления (Меньщикова и др., 2006) не присущей больным ЖКБ на данном этапе, активность ЦП оказывается ниже СУА и активности каталазы.
Система АОЗ имеет сложную и многоступенчатую иерархию, которую хорошо дополняют азотсодержащие антиоксиданты - мочевина и мочевая кислота. Механизм снижения ПОЛ этими неферментативными низкомолекулярными антиоксидантами сходен с ферроксидазной активностью ЦП в системе «церулоплазмин - трансферрин». Мочевина и мочевая кислота обеспечивают снижение редокс потенциала пары Fe (III)/ Fe (II), тем самым, сокращая новые потенциальные очаги радикалообразования (Кричевская и др., 1979; Hicks et al., 1993; Камышников, 2000; Spitsin et al., 2002). Усиливая защитное действие АОС в плазме крови клинической группы уровень мочевой кислоты увеличивается относительно контроля на 31% (р 0,05; табл.4, рис. 2). Мочевина в плазме крови данной категории больных не реализует свои функциональные возможности, ее концентрация относительно доноров достоверно снижается (на 37%; табл.4, рис. 2). В связи с этим, можно предположить существование процессов, которые при данных обстоятельствах приводят к уменьшению ее концентрации или возможное увеличение содержания данного антиоксиданта при интенсификации СРО, например, в условиях обострения заболевания.
Таким образом, состояние "напряжения" АОС в плазме крови больных ЖКБ может быть обусловлено компенсаторными механизмами избыточного синтеза ферментативных антиоксидантов (Сазонтова, 2006) в клетках органов гепато-билиарной системы. При развитии ЖКБ возможно нарушение проницаемости гистогематических барьеров и выход тканевых антиоксидантов в кровяное русло, что может являться закономерной реакцией организма на периодически обостряющееся воспаление (Кочнев и др., 1992; Серов и др., 1995; Осадчук и др., 2002; Антонян, 2003; Титов, 2004), когда уровень АФК становится максимальным и наблюдается накопление МДА - "маркера" ускорения ПОЛ (Маце-гора и др., 2001). Увеличение уровня антиоксидантов в плазме крови клинической группы по сравнению с контролем в условиях угнетения генерации АФК и уменьшения содержания первичных и конечных молекулярных продуктов ПОЛ - первичных медиаторов окислительного стресса, может служить косвенным доказательством чередования процессов взаимного усиления и тушения СРО и АОЗ: воспаление — активизация СРО —» гипергенерация АКМ-индуцирующих агентов и АФК - интенсификация свободнорадикального ПОЛ — цитопато-генное действие свободнорадикальных продуктов на организм больного — активация антиоксидантов — снижение концентрации АФК, ингибирование ПОЛ и воспаления — снижение уровня АОЗ и устранение избытка антиоксидантов в течение нескольких дней при отсутствии новых сигналов пускового механизма гиперсекреции кислородных интермедиатов. Предполагаемые защитные процессы организма при "вялотекущем" ХКХ создают максимально оптимальные условия для медленного прогрессирования заболевания в течение длительного промежутка времени (в среднем 10 - 15 и более лет) и возможности сочетанно-го с ним развития других патологий (мочекаменная болезнь в 10% случаев (Неймарк и др., 2002), патологии щитовидной железы - 82,2% (Коссович, 2003), синдром нарушенного пищеварения (Петухов, 2003), дистрофии миокарда 12-79% (Панфилов и др., 2001; Пирузян, 2005), хронический гепатит 25% (Анто-нян, 2003), хронический панкреатит 25-92% (Стрижелецкий и др., 2004), сахарный диабет 20-50% (Цуканов и др., 2005) и пр.), усугубляющих течение основного заболевания.
