Введение к работе
Актуальность работы. Белково-аептиднне гормоны являются полифунк-циональныыи гормонами я обладают широким спектром биологической активности. В последние годы их рассматривает как.прогормонн, которые активируются после биосинтеза в результате поеттрансля-пионаого модифицирования и протеолиза с образованием множественных форм и фрагментов, ответственных за разнообразие биологических Эффектов ГОРМОНОВ ( Lewi» , 1984 І Mittra , 1384 ). ПОСТ-трансляционный процессинг, как процесс биоактивации гормона, начинается в аппарате Гольдди и секреторных гранулах эндокринной железы и продолжается в крови и на периферии при взаимодействии о рецепторами органов-мишеней.
Многочисленные работы посвящены посттрансляционному процес-сингу пептидных гормонов - липотрошша, адренокортикотропного гормона, меланоцитстимулирувдего гормона, вазопрессина, окситоцина
(Main» , 1983; Лсиоп, 198Э ; Steiner, I9ffl ).
Сравнительно мало изучены в этом отношении высокомолекулярные белковые гормоны, в том числе - пролактин (ЛТГ) . ЛГГ встречается в сыворотке крови и в экстрактах аденогицофиза человека и аивот-ных в виде различных форм и нескольких фрагментов. Однако до сих пор неясно, в каких клеточных ерганеллах происходит модифицирование и протеолиз гормона и какие ферменты участвуют в этом процессе. Кроме того, не идентифицированы пептидные связи, атакуемые ферментами.
Одним из подходов к решению этих вопросов является изучение форм, в виде которых пролактин запасается и хранится в секреторных гранулах, а таквд исследование протеолитическей активности гранулярной фракции. Кроме того, представляет интерес изучение структуры и биологический скрининг пептидов как содержащихся в интактных гранулах, так и образовавшихся в результате протеолиза при инкубировании содержимого гранул. Еьяоненпе ітих.вопросов
.-2-важно как в теоретическом плане, тай я с практической точка зрения, так как показано, что фрагменты гормонов, образующиеся в результате пронессинга, ыогут обладать измененным спектром биологической, активности, а часто и новыми свойствами, не свойственными исходной молекуле ( Mit«ra , І9Є0 }* В работе использовалась секреторные гранулы, полученные из аденогапофизов как йнтактных, так в эстрогенизированных животных. Введение эстрогенов проводилось для стимуляции протеолитической активности. Пель и задачи исследования: Целью работы являлось исследование возможности протекания в секреторных гранулах, содержащих ЛІТ, ограниченного протеолиза гормона.
В работе решались следующие основные задачи:
-
Выделение и характеристика ЛТГ-содержадих гранул ив аденоги-пофизов йнтактных и эстрогенизированных крыс.
-
Изучение форм пролактина в пептидов, содержащихся в секреторных гранулах.
3* Исследование протеолитической активности гранулярной фракций. 4. Изучение физико-химических и биологических свойств пептидов* образующихся в результате протеолиза в гранулах.
Научная новизна; С поысщко иымуноблоттинга впервые показано наличие в йнтактных секреторных гранулах фрагментов пролактина с молекулярной массой 17 и 12 кДа и высокомолекулярной формы 4) кДа. Сочетанием методов высокоэффективной жидкостной хроматографии в радиоиммунологического анализа в секреторных гранулах обнаружены вммунореактнвные формы гормона (Зв случае эстрогене» гированвых животных и 6 в случае йнтактных ) . С помсщьв синтетических субстратов в гранулярной фракции найдена в охарактеризована амянопептдцаэная активность. Методом электрофореза в поди-Бкриламидноц геле вшрвые показано присутствие в гранулярной фрагада пролактин-преврацаэдей протеолитической активности.
Активность максимальна при рН 3,9 и 6,2. С помощью ингибиторного анализа показано, что в ограничением протеодизе ЛІГ в гранулярной фракции при рН 3,9 участвует аспартальная нротеиназа. Выделен и охарактеризован низкомолекуляряый пептид, выцепляемнй этой протеиназой.
Научно-практическая ценность радеть*; Биолог-дчзскик скркшшг нового пептида обнаружил его способность увеличивать концентрацию про-лактина в сыворотке крови крыс при многократном его веєдєнші и сникать ее при однократном. Пептид 'увеличивал концентрацию прогестерона в крови при однократном введении и снижал при ьшогократ-ном. Зти сеойствз, а такае легкость синтеза пептида делают перспективным создание па его осяова нового лекарственного препарата, гормонального действия.
Апробация работы: Материалы диссертации были доложены на Всероссийской конференции "Олигопептиды, как регуляторы функций организма" Москва, 1987 г.
Публикации: По материалам диссертации опубликовано 2 печатные работы.
Объем и структура диссертации: Основной текст изложен на 148
страницах машинописи. Диссертация состоит из введения, обзора
литературы, главы "Материалы и иетодн", 4 глав, посвященных
экспериментальным исследованиям и их обсувдениэ, общего заключе
ния и выводов. Библиографический указатель содержит отечест
венных а зарубемшх источников. Диссертация аллюстрярована 21
таблицей а 3? рисунками.
