Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. Полиморфизм белков у животных и его генетическая природа 11
1.2. Состав и физико-химические свойства молока коров 13
1.3. Современная номенклатура и биологические функции белков молока. Молекулярно-биохимический полиморфизм белков молока 16
1.3.1. Казеиновая фракция 17
1.3.2. Сывороточные белки 25
1.4. Хозяйственно-полезные признаки и технологические свойства молока в зависимости от полиморфных систем белков молока 29
1.5. Селекция с использованием генетических маркеров 33
1.6. Метод ПНР как основной метод анализа генетического полиморфизма белков молока 35
2. Материалы и методы исследований 38
2.1. Материалы 38
2.1.1. Животные 38
2.1.2. Оборудование 40
2.1.3. Реактивы 40
2.2. Методика исследований 41
3. Результаты исследований 43
3.1. Создание банка ДНК крупного рогатого скота различных пород. 43
3.2. Разработка и усовершенствование методик диагностики полиморфизма генов альфа-лактальбумина и бета-казеина крупного рогатого скота . 44
3.2.1. Определение вариантов гена альфа-лактальбумина
3.2.2. Определение вариантов гена бета-казеина 47
3.3. Популяционно-генетические исследования крупного рогатого скота различных пород по вариантам генов белков молока 54
3.3.1. Генотипирование животных по вариантам каппа-казеина 55
3.3.2. Генотипирование животных по вариантам бета-лактоглобулина 59
3.3.3. Генотипирование животных по вариантам альфа-лактальбумина 61
3.3.4. Генотипирование животных по вариантам бета-казеина 67
3.4. Исследование связи полиморфизма генов белков молока с молочной продуктивностью коров 73
3.4.1. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по каппа-казеину 73
3.4.2. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по бета-лактоглобулину 76
3.4.3. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по альфа-лактальбумину 77
3.4.4. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по бета-казеину 80
3.4.5. Комплексное влияние генотипов нескольких генов на молочную продуктивность 82
3.5. Качество, технологические свойства молока и молочных продуктов от коров черно-пестрой породы 88
3.5.1. Технологические свойства молока у коров разных генотипов по каппа-казеину и бета-лактоглобулину 88
3.5.2. Технологические свойства молока коров с разными генотипами по каппа-казеину и бета-казеину 93
4. Обсуждение 98
5. Выводы 107
6. Практические предложения 110
Список литературы 111
Приложения
- Хозяйственно-полезные признаки и технологические свойства молока в зависимости от полиморфных систем белков молока
- Разработка и усовершенствование методик диагностики полиморфизма генов альфа-лактальбумина и бета-казеина крупного рогатого скота
- Молочная продуктивность коров с различными генотипами по каппа-казеину
- Технологические свойства молока у коров разных генотипов по каппа-казеину и бета-лактоглобулину
Введение к работе
1. Актуальность темы.
Согласно современной концепции развития животноводства дальнейшее увеличение производства сельскохозяйственной продукции связано с использованием научных разработок. Это позволит сделать отрасль более рентабельной и конкурентоспособной, а также обеспечит снабжение населения качественными продуктами животноводства (Данкверт С А, Дунин И.М., 2002).
В селекционной работе с крупным рогатым скотом характеристика молока проводится в основном по удою, жиру и общему содержанию белка. Однако полиморфизму белка не уделяется должного внимания. Вместе с тем, эти показатели являются основными при производстве сыров и творога. Установлена тесная связь между технологическими свойствами и биохимическим полиморфизмом белков молока (Иолчиев Б.С. и др., 1996; Попов НА и др., 2003).
Возросшие требования к качеству молочной продукции привели к использованию в селекции генетических маркеров и поиску их связи с молочной продуктивностью. В сложившейся ситуации возникла необходимость изменения методов оценки признаков селекции животных, новых подходов, основанных на достижениях генетики и биотехнологии. Одним из методов определения полиморфизма систем белков молока является ПЦР-ПДРФ анализ, который отличает высокая чувствительность, быстрота и точность в исполнении.
Цель и задачи исследования.
Цель исследований заключалась в усовершенствовании методов молекулярной диагностики генетического полиморфизма основных молочных белков крупного рогатого скота и изучении его связи с признаками молочной продуктивности и технологическими свойствами молока.
Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи.
-
Разработать и усовершенствовать методики определения аллельного полиморфизма генов бета-казеина и альфа-лактальбумина.
-
Пополнить банк ДНК крупного рогатого скота различных пород и апробировать на нем модифицированные методики определения генетического полиморфизма белков альфа-лактальбумина и бета-казеина.
-
Определить частоты аллелей и генотипов крупного рогатого скота различных пород по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина и альфа-лактальбумина и дать по ним генетическую структуру популяций отдельных пород.
-
Изучить молочную продуктивность коров с различными вариантами исследуемых генов.
-
Изучить технологические свойства молока коров различных генотипов черно-пестрой породы по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина.
Практическая значимость работы.
В качестве возможных генетических маркеров, представляющих практический интерес для скотоводства, рассмотрены гены альфа-лактальбумина и бета-казеина, предложены усовершенствованные методики выявления их аллельных вариантов. Рассчитаны частоты встречаемости аллелей и генотипов бета-казеина, альфа-лактальбумина, каппа-казеина и бета-лак1огЩулипд^оупног»рогатого скота отдель-
БНБЛИОТЕКЛ Cfleicrfr
О. ^2^ У
ных популяций. Изучена молочная продуктивность и технологические свойства молока коров с различными генотипами исследуемых генов.
Научная новизна работы.
Модифицирован метод ПЦР-ПДРФ для выявления аллелей и генотипов крупного рогатого скота по генам альфа-лэктальбумина и бета-казеина. Проведена апробация метода при определении частот их встречаемости среди поголовья отдельных популяций черно-пестрой, ярославской, симментальской, красной горбатовской, бестужевской, сычевской, костромской, айрширской, голштинекой черно-пестрой и швицкой пород.
Апробация работы.
Материалы диссертационной работы были заслушаны и обсуждены:
на конференциях аспирантов и молодых ученых, ВИЖ, 2002 г., 2003 г.;
на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2003 г.;
на отчетах НИР отдела биотехнологии ВИЖ, 2002 г., 2003 г., 2004 г.
в школе-практикуме «Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2004г.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Усовершенствованные тест-системы анализа полиморфизма генов бета-казеина и альфа-лактальбумина.
-
Характеристика генетической структуры отдельных популяций крупного рогатого скота по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина и альфа-лактальбумина.
-
Связи вариантов исследуемых генов с молочной продуктивностью коров и технологическими качествами молока.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ.
Структура и объем работы.
Диссертационная работа написана на 127 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа включает 39 таблиц и 13 рисунков. Список литературы включает 172 источников, втом числе 90 источников на иностранных языках.
Хозяйственно-полезные признаки и технологические свойства молока в зависимости от полиморфных систем белков молока
Актуальность исследования биохимического полиморфизма белков молока обусловлена появившимися в последние годы сообщениями о влиянии генетических вариантов белков на технологические свойства молока и другие хозяйственно-полезные признаки.
Несмотря на относительное постоянство содержания в молоке общего белка, качество молока и, следовательно, его питательная ценность может быть неодинаковой за счет соотносительной изменчивости в содержании отдельных фракций. В этой связи большое значение будут иметь исследования химического строения, свойств и питательной ценности всех известных типов белков молока. Химический состав молока, так же зависит от генетической комбинации некоторых молочных белков. Так, например, варианты asiCnC и (ЗСпВ отличаются повышенным содержанием жира и казеина в молоке. Молоко с вариантом pLgA характеризуется повышенным содержанием общего белка и (3-лактоглобулина, но при этом, понижено содержание казеина и жира (Ng-Kwai-Hang K.F.et al, 1986; Ng-Kwai-Hang K.F., 1998).
Много исследований было посвящено изучению связи полиморфных систем белков молока с молочной продуктивностью. Однако эти исследования показали разнонаправленность, а иногда и противоречивость полученных результатов (Иолчиев Б.С., Сельцов В.И., 1999). Так, по данным Калашниковой Л.А. (2003), первотелки красно-пестрой и черно-пестрой породы с генотипом ВВ по каппа-казеину незначительно уступали по содержанию жира в молоке сверстницам с генотипами АА и АВ. А по итогам третьей лактации черно-пестрые коровы с генотипом ВВ в ПЗ «Таежный» превосходили по содержанию жира в молоке коров с генотипом АА. По данным Юхмановой и др. (2003) коровы-первотелки красно-пестрой породы с генотипом ВВ превосходили по количеству белка и казеина животных с АА и АВ генотипами на 0,1-0,32%. Тинаев А. и др. (2003) также отмечает превосходство по количеству белка у животных черно-пестрой породы, имеющих генотип ВВ по каппа-казеину над животными с генотипом АА на 0,09%.
Митюков А.С.(1974)в своих исследованиях установил, что содержание бета-казеина ВВ в молоке коров всех пород положительно коррелирует с содержанием жира в молоке, а бета-казеина АА -отрицательно. Коровы черно-пестрой породы имеют высокую положительную связь удоя с содержанием типа каппа-казеина АВ и бета-лактоглобулина АА и низкую, отрицательную и с содержанием типа каппа-казеина АА и бета-лактоглобулина АВ.
Жебровский (1973) отмечает, что самое высокое содержание белка в молоке черно-пестрых коров с фенотипом asiCnB, j3CnB, кСпВ, pLgB.no данным Bleck and Bremel (1993) носители генотипа АА (+15) гена альфа-лактальбумина достоверно передают обильномолочность и количество жира потомству в голштинской породе. По данным зарубежных авторов (Bleck G.T., Bremel R.D. 1993) различные аллельные варианты гена альфа-лактальбумина по-разному влияют на молочную продуктивность крупного рогатого скота. Было отмечено, что в молоке коров, несущих ВВ генотип альфа-лактальбумина более высокое процентное содержание жира и белка, но (по сравнению с генотипом АА и АВ) более низкий удой.
В.В.Митютько (1970), изучая молочную продуктивность животных черно-пестрой, голландской и айрширской пород, в связи с фенотипами бета-казеина, пришел к выводу, что гены бета-казеинового локуса не имеют однонаправленного действия во всех изучаемых группах животных. Им же проведено исследование по влиянию каппа-казеинового локуса на молочную продуктивность тех же пород. Оказалось, что животные черно-пестрой породы племзавода «Лесное» с фенотипами каппа-казеина АА и АВ достоверно превосходят гомозиготных коров типа ВВ по удою, содержанию жира и белка в молоке при статистически достоверной разнице. Автор указывает на положительное действие гена каппа-казеина А на молочную продуктивность коров черно-пестрой породы во всех изучаемых популяциях и на возможность применения каппа-казеинового локуса в качестве генетического маркера продуктивности. У коров айрширской породы он не обнаружил зависимости молочной продуктивности от генетически обусловленных типов каппа-казеина.
Образцы молока с различными генетическими вариантами белков различаются теплостойкостью, растворимостью, стабильностью, плотностью получаемого сгустка. Некоторые генетические варианты имеют преимущество перед другими при выработке молочных продуктов. Так, комбинация казеинов aSiCn ВВ, (ЗСп ВВ или АВ и кСп АВ предпочтительнее при производстве пастеризованного и стерилизованного молока, вследствие стойкости мицелл казеина, а комбинации фракций казеина (aSiBC)+(f3B)+(KB) и (aSiB)+(3B)+(KAB), целесообразно использовать в сыроделии, т.к. они позволяют получить более плотный сгусток при минимальной продолжительности свертывания белков (Алексеева Н.Ю. и др, 1986; Ng-Kwai-Hang K.F. et al, 1986; Ng-Kwai-Hang K.F. 1998; Geoffrey R.P. et al, 1999; Vegarud G.E. et al, 1999). Из публикаций о взаимосвязи генетических вариантов каппа-казеина с технологическими свойствами молока становится ясно, что генотипы ВВ и АВ ассоциируются с укорочением времени сычужного свертывания молока (Mariani P. et al, 1979; Schaar J., 1986; Суяркулов Ш.Р., 1987; Калашникова Л.А., 2003) ускорением процесса синерезиса, что обуславливает более плотный сгусток (Иолчиев Б.С., 1993; Morini D. et al, 1979), повышением выхдда сыра и творога (Mariani P. et al, 1979; Greham E.R.B. et al, 1984; Aleanpri R. et al, 1990; Иолчиев B.C., 1993). По утверждению этих авторов, сыр, изготовленный из молока животных с генотипом АВ и ВВ, обладает лучшими органолептическими качествами.
Попов Н.А. с соавторами (2003) выявили отличие сливочного масла и творога, приготовленных из молока коров-гомозигот с генотипами каппа-казеина, альфа-лактальбумина, бета-лактоглобулина соответственно ЕЕ/ВВ/АА и АА/ВВ/АА от одностадниц черно-пестрой породы лучшими технологическими, диетическими качествами и сохранностью по сравнению с генотипами ЕЕ/АВ/АВ, АЕ/АВ/АВ и АА/АА/АВ.
Разработка и усовершенствование методик диагностики полиморфизма генов альфа-лактальбумина и бета-казеина крупного рогатого скота
Одной из задач наших исследований явилась разработка методик анализа полиморфизма генов белков молока - альфа-лактальбумина (LALBA) и бета-казеина (CSN2). Предложенные нами методы (Гладырь Е.А., Костюнина О.В., Зиновьева Н.А., 2002; Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., 2002; Костюнина О.В., Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., 2003) диагностики полиморфизма генов LALBA и CSN2 на основе анализа ПЦР-ПДРФ просты в исполнении, достоверны и отличаются хорошей воспроизводимостью результатов. Они могут с успехом использоваться для тестирования крупного рогатого скота в рамках популяционно-генетических исследований, для сохранения генетического разнообразия, а также в качестве возможных маркеров локусов количественных признаков. Транскрипционная единица LALBA имеет размер 2 т.п.о. и содержит 4 экзона. В настоящее время известно 3 варианта данного гена- А, В и С. Для определения аллельного полиморфизма гена LALBA нами предложен метод ПЦР-ПДРФ анализа, позволяющий диагностировать два наиболее часто встречающихся его варианта - А и В. Вариант В отличается от варианта А аминокислотной заменой в позиции 263 (-1689) (генный банк М90645). Диагностика основана на определении точковой мутации в позиции 263 (-1689) 5 -фланкирующего региона. Исходя из наличия и локализации мутации, нами были выбраны два олигонуклеотидных праймера, амплифицирующие фрагмент гена длиной 440 и.о., включающий данную точковую мутацию (генный банк М90645): ALF-LAC1 AAG AGT TGG ATG GAA ТСА СС (позиции 149-168) ALF-LAC2 ТТС AAA TTG CTG GCA ТСА AGC (позиции 558-578) Реакции проводили в конечном объеме 15 мкл, используя стандартный состав реакционной смеси и 5 пмол каждого из праймеров (Гладырь Е.А., Костюнина О.В., Зиновьева Н.А., 2002; Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., 2002). Проводили 37 циклов ПЦР в стандартном температурно-временном режиме (температура отжига - 63 градуса). Для объективной оценки результатов при постановке каждой ПЦР нами были использованы два контроля - положительный, в качестве которого выступала ДНК крупного рогатого скота с известным генотипом по LALBA, и отрицательный, в качестве которого выступала реакционная смесь с добавлением вместо ДНК бидистилированной воды. По завершении ПЦР 5 мкл реакционной смеси наносили в агарозный гель с целью оценки амплификации, а также проверки контролен. В случае успешной амплификации проводили гидролиз оставшейся реакционной смеси (10 мкл) 1 Ед эндонуклеазы Mhll с последовательностью узнавания GDGCHjC (D=A, G, Т; а Н=А, С, Т). Гидролиз проводили в течение 12 часов при рекомендуемой производителем температуре. По окончании инкубации проводили электрофоретическое разделение фрагментов в 1,8-2% агарозном геле при 130 В в буфере ТАЕ с добавлением бромистого димидия до конечной концентрации 30 нг/мл и визуализировали фрагменты под ультрафиолетовым светом. После рестрикции в зависимости от генотипа животного образуются фрагменты длиной 328, 211,117 и 102 п.о., при этом фрагмент длиной 328 п.о. соответствует аллелю А, а фрагменты длиной 211 и 117 п.о. соответствуют аллелю В (рис. 2). Фрагмент длиной 102 п.о. является общим для обоих аллелей и не зависит от генотипа животных. Наличие данного фрагмента можно рассматривать в качестве контроля активности рестрикционного фермента и контроля степени рестрикции. Вследствие незначительных различий в длине фрагменты длиной 117 и 102 п.о. на электрофореграмме зачастую идентифицируются в виде одного общего фрагмента, На рисунке 3 представлены результаты ПЦР-анализа вариантов гена LALBA крупного рогатого скота по предложенной нами методике. Длины пар амплифицируемых фрагментов в парах оснований указаны справа от фотографии. Разработанный нами метод может успешно использоваться для тестирования крупного рогатого скота в рамках популяционно-генетических исследований, для сохранения генетического разнообразия, а также в качестве возможных маркеров локусов количественных признаков. Ген бета-казеина (CSN2) имеет размер 10338 п.о., состоит из 9 экзонов и 10 интронов и кодирует пропептид длиной 224 аминокислоты. Нами разработана тест-система диагностики полиморфизма гена CSN2 на основе ПЦР-ПДРФ, позволяющая идентифицировать варианты А и В данного гена, а также выявлять среди варианта А аллель A3. Аллель В отличается от других аллелей точковой мутацией С— G в позиции 8267 в экзоне 7 (генный банк М55158), приводящей к аминокислотной замене Ser— Arg в позиции 122 белковой последовательности. Поскольку данная нуклеотидная замена не приводит к образованию или, наоборот, исчезновению сайта рестрикции, при разработке системы нами был использован принцип искусственного введения в амплифицируемый фрагмент одного из аллелей рестрикционного сайта с помощью праймера. Для амплификации фрагмента экзона 7, содержащего данную мутацию, длиной 101 п.о. нами были подобраны олигонуклеотидные праймеры (генный банк М55158):
Молочная продуктивность коров с различными генотипами по каппа-казеину
Анализируя данные таблицы 39, можно отметить, что частота встречаемости аллеля В в породах отечественной селекции значительно выше, чем в зарубежных породах. Щ Следующим этапом работы явилось исследование молочной продуктивности животных с разными генотипами по каппа-казеину. Исследования показали, что коровы красной горбатовской породы с АВ генотипами по CNS3 статистически достоверно превосходят коров с 104 генотипами АА по содержанию жира, а коровы с ВВ генотипами достоверно превосходят животных с BE генотипами по выходу молочного жира. Mclean (1989) полагает, что эта система существенного влияния на содержание жира не оказывает. По данным В.В.Митютько (1970) и Жебровского Л.С. (1979) животные черно-пестрой породы с генотипами каппа-казеина АА и АВ достоверно превосходят гомозиготных коров типа ВВ по содержанию жира в т молоке при статистически достоверной разнице. У коров айрширской породы В.В.Митютько не обнаружил зависимости молочной продуктивности от генетически обусловленных типов каппа-казеина. По количеству белка коровы ярославской породы, имеющие генотип ВВ по CSN3, превосходят животных с генотипом АВ. Это подтверждается исследованиями других авторов: Калашниковой Л.А. (2003), Юхмановой и др. (2003), Тинаева А. и др. (2003). Исследования продуктивности коров черно-пестрой породы с различными генотипами по PLG, выявили превосходство животных с АВ генотипами по количеству белка над ВВ. В исследованиях других авторов наоборот указывается превосходство генотипа ВВ над АВ по количеству белка (Томме А.А., 1972; Скрипниченко Г.Г., 1975; Жебровский Л.С. и др., 1977). л По бета-казеину нами выявлено превосходство по количеству надоенного молока у животных швицкой породы немецкой селекции, имеющих генотип АА, над коровами с генотипом АВ. Изучая молочную продуктивность животных черно-пестрой, голландской и айрширской пород, в связи с генотипами бета-казеина, В.В. Митютько (1970) пришел к выводу, что гены бета-казеинового локуса не имеют однонаправленного действия во всех изучаемых группах животных. В исследованиях Жебровского Л.С. (1975) получены противоречивые данные по CNS2. В некоторых хозяйствах животные с АА генотипами превышали по удою животных с АВ генотипами, а в других хозяйствах наоборот. По количеству жира в молоке в наших исследованиях коровы с АВ генотипом превосходят АА генотип в швицкой породе немецкой селекции и сычевской породе. Митюков А.С. (1974) в своих исследованиях установил, что содержание бета-казеина ВВ в молоке коров всех пород положительно коррелирует с содержанием жира в молоке, а бета-казеина АА - отрицательно. По данным Бабукова А.В. (1984) высокое содержание жира обнаружено у коров с генотипом ВВ.
Исследования продуктивности животных с разными генотипами по CNS3, LALBA, CNS2 выявили превосходство по содержанию жира у коров ярославской породы, имеющих генотипы АА/АА/АА над животными с генотипами АА/АВ/АА. Это подтверждается исследованиями Павлюченко ТА. и др. (1982).
При исследовании продуктивности животных по LALBA и CNS2 у коров швицкой и сычевской пород выявлено превосходство по удою АВ АА АВ АВ (в первой позиции указан LALBA, во второй CNS2), но по содержанию жира и белка животные с генотипом АВ АВ превосходили животных с АВ АА генотипом, это подтверждается исследованиями Митюкова А.С. (1974).
При исследовании технологических свойств молока, полученного от коров с разными генотипами по каппа-казеину и бета-лактоглобулину, самое высокое содержание белка было выявлено у животных с АВ АВ генотипами по CSN3 и (3LG, соответственно, что в свою очередь подтверждается исследованиями Жебровского Л.С. (1973), Калашниковой Л.А. (2003). Органолептическая оценка выработанной продукции показала, что в качестве питьевого молока комиссия признала лучшим молоко от животных с генотипами АА АВ, а при дегустации остальных продуктов: сливок, творога и масла лучшими были признаны продукты выработанные из молока коров с генотипами - АА ВВ. Коэффициент извлечения жира и выход сливок был лучшим у коров с генотипами АВ ВВ. По выходу масла лучшей была группа животных с генотипами АА ВВ, по скорости сбивания, характеру масляного зерна коровы - с генотипами АВ ВВ. По количеству полученного творога лучшей была группа животных с генотипами АВ АВ. При исследовании технологических свойств молока, полученного от коров с разными генотипами по каппа-казеину и бета-казеину, было выявлено превосходство по содержанию жира у животных с генотипами АА ВВ. По белку отличия были несущественны. Органолептическая оценка показала лидерство по всем позициям продуктов, за исключением масла, из молока коров с генотипами АА АА. По степени извлечения жира и выходу сливок и масла лидирующее положение занимала также группа АА АА, но по времени сбивания и характеру масляного зерна предпочтительным было молоко группы АА ВВ. По выходу творога лучшей была группа коров с генотипами АА АА.
Найденные различия по органолептической оценке и технологическим свойствам молока и молочной продукции между группами требуют подтверждения на большем поголовье животных.
Технологические свойства молока у коров разных генотипов по каппа-казеину и бета-лактоглобулину
Исследования продуктивности коров черно-пестрой породы с различными генотипами по PLG, выявили превосходство животных с АВ генотипами по количеству белка над ВВ. В исследованиях других авторов наоборот указывается превосходство генотипа ВВ над АВ по количеству белка (Томме А.А., 1972; Скрипниченко Г.Г., 1975; Жебровский Л.С. и др., 1977).
По бета-казеину нами выявлено превосходство по количеству надоенного молока у животных швицкой породы немецкой селекции, имеющих генотип АА, над коровами с генотипом АВ. Изучая молочную продуктивность животных черно-пестрой, голландской и айрширской пород, в связи с генотипами бета-казеина, В.В. Митютько (1970) пришел к выводу, что гены бета-казеинового локуса не имеют однонаправленного действия во всех изучаемых группах животных. В исследованиях Жебровского Л.С. (1975) получены противоречивые данные по CNS2. В некоторых хозяйствах животные с АА генотипами превышали по удою животных с АВ генотипами, а в других хозяйствах наоборот. По количеству жира в молоке в наших исследованиях коровы с АВ генотипом превосходят АА генотип в швицкой породе немецкой селекции и сычевской породе. Митюков А.С. (1974) в своих исследованиях установил, что содержание бета-казеина ВВ в молоке коров всех пород положительно коррелирует с содержанием жира в молоке, а бета-казеина АА - отрицательно. По данным Бабукова А.В. (1984) высокое содержание жира обнаружено у коров с генотипом ВВ. Исследования продуктивности животных с разными генотипами по CNS3, LALBA, CNS2 выявили превосходство по содержанию жира у коров ярославской породы, имеющих генотипы АА/АА/АА над животными с генотипами АА/АВ/АА. Это подтверждается исследованиями Павлюченко ТА. и др. (1982). При исследовании продуктивности животных по LALBA и CNS2 у коров швицкой и сычевской пород выявлено превосходство по удою АВ АА АВ АВ (в первой позиции указан LALBA, во второй CNS2), но по содержанию жира и белка животные с генотипом АВ АВ превосходили животных с АВ АА генотипом, это подтверждается исследованиями Митюкова А.С. (1974). При исследовании технологических свойств молока, полученного от коров с разными генотипами по каппа-казеину и бета-лактоглобулину, самое высокое содержание белка было выявлено у животных с АВ АВ генотипами по CSN3 и (3LG, соответственно, что в свою очередь подтверждается исследованиями Жебровского Л.С. (1973), Калашниковой Л.А. (2003). Органолептическая оценка выработанной продукции показала, что в качестве питьевого молока комиссия признала лучшим молоко от животных с генотипами АА АВ, а при дегустации остальных продуктов: сливок, творога и масла лучшими были признаны продукты выработанные из молока коров с генотипами - АА ВВ. Коэффициент извлечения жира и выход сливок был лучшим у коров с генотипами АВ ВВ. По выходу масла лучшей была группа животных с генотипами АА ВВ, по скорости сбивания, характеру масляного зерна коровы - с генотипами АВ ВВ. По количеству полученного творога лучшей была группа животных с генотипами АВ АВ. При исследовании 106 технологических свойств молока, полученного от коров с разными генотипами по каппа-казеину и бета-казеину, было выявлено превосходство по содержанию жира у животных с генотипами АА ВВ. По белку отличия были несущественны. Органолептическая оценка показала лидерство по всем позициям продуктов, за исключением масла, из молока коров с генотипами АА АА. По степени извлечения жира и выходу сливок и масла лидирующее положение занимала также группа АА АА, но по времени сбивания и характеру масляного зерна предпочтительным было молоко группы АА ВВ. По выходу творога лучшей была группа коров с генотипами АА АА. Найденные различия по органолептической оценке и технологическим свойствам молока и молочной продукции между группами требуют подтверждения на большем поголовье животных. 1. Усовершенствована методика определения аллельного полиморфизма гена альфа-лактальбумина крупного рогатого скота, позволяющая диагностировать с помощью ПЦР-ПДРФ анализа наиболее часто встречающиеся варианты А и В. Усовершенствованная методика позволяет определять полиморфизм гена LALBA с использованием электрофореза в агарозном геле. Методика экспериментально апробирована на ДНК крупного рогатого скота \0 (Щ образца, отобранных от 16 популяций 10 пород. 2. Разработана методика определения аллельного полиморфизма гена бета-казеина крупного рогатого скота, позволяющая диагностировать с помощью ПЦР-ПДРФ анализа варианты А, В и A3. При разработке методики были использованы замены в праймерах, дающие возможность образовывать сайты рестрикции и использовать электрофорез в агарозном геле. Методика была апробирована на 10J образцах ДНК крупного рогатого скота 16 популяций 10 пород. 3. Определены генотипы крупного рогатого скота 5 пород по каппа-казеину. Наиболее полиморфными по гену CSN3 оказались популяции животных красной горбатовской, ярославской пород и Михайловского типа ярославской породы, в которых выявлено 5 из 6 диагностируемых аллелей и, соответственно, 9, 8 и 5 различных генотипов. Коровы красной горбатовской породы с генотипом АВ превышали по содержанию жира сверстниц с генотипом АА на 0,12% (Р 0,05), а по выходу молочного жира имели превосходство коровы с генотипом ВВ на 40 кг (Р 0,05) над генотипом BE. По содержанию белка коровы ярославской породы с ВВ превышали коров с АВ и АА соответственно на 0,16% и 0,12%» (Р 0,05).
