Введение к работе
Актуальность проблемы. Бешенство'представляет серьезную проблему для органов здравоохранения большинства стран мира, за исключением Австралии и ряда островных государств. Ежегодно в мире от гидрофобии погибает около 1000 человек и свыше I миллиона нуждается в лечебно-профилактической антирабической помощи ( WBD, 1991, 1992). Для Российской Федерации эти показатели в последние годы составляют 6-25 и 100000 человек соответственно (Черкасский БД., 1985; Ботвинкин А.Д., 1992). По данным экспертов ВОЗ бешенство входит в пятерку экономически наиболее значимых зоокозов. Это обстоятельство обусловлено повсеместным распространением природных очагов рабической инфекции, что оо-здает потенциальную угрозу для человека даже в относительно благополучных в отношении бешенства, зкономіїчвски развитых странах Западной Европы и США, где в последние годы не отмечалось случаев гидрофобии (Черкасский БД., 1985; «гш, 1991. 1992). Несмотря на значительные успехи, достигнутые в исследовании бешенства, многие отороны патогенеза этой инфекции остаются неизвестными. Парадоксально,' но именно роль иммунной системы к, особенно, ее отдельных компг':"щтов в патогенезе заболевания до конца не яона. Это относится на только к эффекторннм субпояуляцдям Г-, В-лимфоцитов, макрофагов, естественных киллеров, зависимого от антител.питотоксического действия клеточного иммунитета и вммуяорегуляторным клеткам, знания о которых ограничиваются D-помощяйками, но и к вируовейтрализущим антителам, о которы-т а^адициояно связывают обеспечение резистентности организма С инфекции (Koprowskl HV et ali, 1950? Turner G.S. et al., 1976; Joac J.H. et al., 1977i bagrange P.II. ot al., 197Й. Miller et al., I978; SzaradklewlCh. et al., 1988; Erte H.C.J, et al., 1989).
Противоречивость имеющихся данных касается как роли отдельных субдопуляций иммунокомпетентных клеток в элиминации вируса из организма, как, например, цитоголсические Т-дим$оциты, так и механизмов, реализация которых приводит к выздоровлению. Последнее касается фагоцитарной функции уакрофагов и нейтрализации вируса влрусспецифическими антителами, которые согласно мнению одних авторов являются одним из ведущих компонентов антирабического иммунитета, а с точки зрения других, не играю* кардинальной роли в становлении резистентности организма к инфекции (Баег, -1975; Turner G.S. et al., 1976; KlUet A. et al., 1978; Muflne K. et al., 1981; DietzBchold B. et al., 1987, 1989; Charlton K.M., 1988( Gonsalea C.A. et al., 1990; Kawano H. et al., 1990; Ertl H.C.J., ot el., 1991). Остаются недостаточно изученными условия проявле- . кия и роль реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), а также зависимого от антител защитного действия клеточного иммунитета (ЗАЗДКИ) в патогенезе бешенства, хотя феномен ГЗТ к вирусу бешенства описан ин виво, а способность неиммунных иммуноком-петоятных клэток оказывать цитотолоичеокое действие на зараженную ісультуру клеток в приоутств.аи противовирусных антител выявлена ин витро у вакцинированных мышей (tagrange Р.Н. et al., 1978; Taiang И. et al., 1930; Hozaki-Kenard J. et al., 1981). ИСХОДЯ из вышеизложенного и сформулированы представленные ниже цели и задачи настоящего исследования.
Цель и задачи исследования. Ооновной целью исследований было изучить в экспериментальных условиях некоторые, не известные ранее, механизмы развития иш%-нного ответа при экспериментальном бешенстве, определить наиболее эффективные механизмы, обеопечи-ваодие резистентность к вирусу и на основа патогенетических ис- " следований усовершенствовать диагностику бешенства. При этой
юставлеяы следующие задачи: "
-
Изучить закономерности активации вирусспецифических эф-ректоров ІЗТ и регулирующих их активность супрессоров.
-
Идентифицировать и изучить некоторые свойства эффекторов ^ЗТ и ограничивающих их активность клеток.
-
Определить роль различных эффекторов иммунного ответа з обеспечении резистентности мышей к вирусу бешенства.
-
Разработать метод ускоренной диагностики бешенства на юнове использования для биопробы мышей, обработанных цшслофос-заяом (ЦФН).
Научная новизна работы и положения, выносимые на защиту
Впервые идентифицированы вируоопецифические Т-эффекторы ЗТ при экспериментальном бешенстве у мшпей и показано, что их иктивность подчиняется правішу Н-2 рестрикции. Показано, что іктивность описанных эффекторов резко возрастает у животных, [редварительно за 48 часов до заражения обработанных ЦФН.
Впервые установлено, что относительно низкая активность лрусспецифических эффекторов ІЗТ у иммукокомлетэнтных мышей об-словлена активациой вирусопецифических Т-супрессоров. Взаимо-;ействие обоих типов Т-кл^ток Н-2 рестриктироваяо, не связано пролиферацией супрессоров и подавляется после обработки имму-орегуляторных клеток ингибитором белкового синтеза - циклогек-ямидом.
Впервые описано зависиглое от антител защитное действие кле-очного иммунитета (ЗАЗДКИ) при экспериментальном бешенстве ин иве Противовирусные антитела, макрофаги и специфически сенси-гиизированные спленоциты оказались значительно менее или не ффектизны в защите инфицированных животных.
Макрофаги являются основной популяцией иммунокомпетентных
-4 -клеток, оказывающих ЗАЗДКИ при экспериментальном бешенотве ин виво. Защитное действие самих по себе макрофагов связано скорее с их участием в кооперативних процессах, приводящих к продукции вирусспецифических антител, а не с фагоцитозом вирусов.
Впервые продемонстрировано, что одной из причик неэффективности проводимой при экспериментальном бешенстве серотерапии может явиться дефект макрофагов. Вторичный иммунный дефицит, связанный о дефектом Т- и В-димфсцитов, но оказывает существенного влияния на протоктивную активность противовирусных антител.
Показана принципиальная возможность ускорения диагностики бешенства путем использования при постановке биопробы мышей с подавленным ЦФН иммунным ответом, что позволяет ускорить поста-' новку диагноза животному на 2-5 суток по сравнению с традиционным и, соответственно, назначать в более короткие сроки более адекватний куро лечебно-профилактических мероприятий пациенту, имевшему контакт о этим животным.
Теоретическое значение результатов работы определяется экспериментально обоснованными оригинальными положениями, расшифро-зызагащими неизвестные ранее эффекторные и иммунорегуляторные механизмы развития иммунного ответа - вирусспецифических Т-эф-фекторов ІЗТ и угнетающих их активность Т-супресооров, взаимодействие противовирусных антител и макрофагов и роль отдельных компонентов иммунного ответа в обеспечении эффективной защиты организма от рабической инфекции. Практическая значимость
Показана принципиальная возможность использования для ускоренной диагностики бешенства мышей с подавленным при помощи цшс-лофосфана иммунным ответом.
Апробация работы. Материалы диссортации докладывались на
Международной конференции по проблемам инфекционных болезней (г. София, Болгария, I9S2 г.); на Международном симпозиума "Проблемы патологии и охраны здоровья диких животных, экологическое взаимодействие болезной диких и сельскохозяйственных животных" (г. Астрахань, 1992 г.); на заседании меялабораторного ученого совета Института пслиошелита и вирусных энцефалитов РАШ по проблемам "Общей вирусологии (июль 1993 г.).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы.
Объем и структура работы. Диссертация яэлояеяа на 175 страницах машинописного текста, иллюстрирована 9 рисунками и 16 таблицами. Работа состоит из введения, обзора литература (3 главы), описания материалов и методов, экспериментальной части (5 глав), обсуждения полученных результатов, выводов и списка цитированной литературы, содержащего 289 источников.