Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. СПИД - это тяжелое инфекционное заболевание, юразнвшее практически есе страны мира и продолжающее распространяться по всей гланете. В настояшёе время болезнь приняла размеры пандемии и представляет не только медицинскую її общебнолсгнческую, но и социальную проблему.
В Белоруссии первый случай ВИЧ-іжфекшпі был выявлен в 1986 году у шостранного студента из Бурунди, а черен год обнаружен внрусоноснтель - житель республики. Первый больной СПИДом (зарегистрирован в 1990 году) через год скончался. На начало 1996 года в Республике Беларусь выявлено 113 ВИЧ-инфицированных, из них бб - местные жители и прибывшие из стран СНГ, 47 - иностранные граждане, 23 человека имели клиническую картину, 11 инфицированных и больных скончались.
Беларусь занимает особое географическое положение, и проведение исследовании по выявлению ВИЧ-ннфішированньгх, изучению структуры заболеваемости, определению основных групп риска является важньгм условием для проведения эффективных мероприятий по предупрежден^) распространения инфекции в республике.
С обнаружением первых ВИЧ-инфицнрованных лиц и больных СПИДом а Республике Беларусь возникла необходимость выделения и изучения штаммов ВИЧ, циркулирующих на территория страны. Получение и исследование изолятов вирусов требуется для решения как фундаментальных, так и прикладных задач. Согласно программе ВОЗ по " Всеобщей борьбе со СПИДом" планируется выделение и изучение биологических, молекулярно-бнологических свойств ВИЧ, изолированных в разных регионах мира. В этом плане важными представляются и молекулярио-эпидемнологические исследования, дающие возможность получить представление о подтипах вируса, циркулирующих на территории Республики Беларусь, закономерностях генетической изменчивостя ВИЧ.
Как известно, вирус в организме ВИЧ-инфиццроваїшьи обнаруживается практически во всех органах и клеточных системах. Однако патогенез СПИДа до настоящего времени изучен недостаточно. Принято считать, что ВИЧ является не только лимфотропным, но и неПротропным агентом. С помощью иммунощпохимическюс методов исследования гнстосрезов умерших от СПИДа вирус обнаруживали в нейронах, астроцитах и микроглин. В то же время, роль различных клеток в развитии неПродегенеративньгх процессов в ЦНС мало изучена.
Все эти вопросы явились предметом нации исследовании.
СВЯЗЬ РАБОТЫ С КРУПНЫМИ НАУЧНЫМИ ПРОГРАММАМИ, ТЕМАМ»
Настоящая работа выполнена в плане научно-исследовательских разработок Белорусского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь и является частью заданий, проведенных в рамках государственной научно-технической программы СССР " Борьба с наиболее распространенными болезнями " по проблеме СПИДа (темы К 96 и 175) , а также Государственного заказа Республики Беларусь по программе "Здоровье" (N гос. регистрации 01.91.0 051246).
ЦЕЛЬ РАБОТЫ Цель настоящей работы - анализ ситуации в отношении распространения ВИЧ-инфекшіи на территории Республики Беларусь, изолирование и изучение бнолопгческнх свойств штаммов вируса, выработка стратегии и тактики по контролю н предупреждешпо заноса ВЛЧ-инфекшш в Беларусь.
-
Определить структуру и выделить основные группы риска в отношении ВИЧ-инфекции в Республике Беларусь.
-
Провести исследования по серо- и гснотипнрованню вируса и определить подтипы ВИЧ. циркулирующие на территории Республики.
3. Исследовать биологические свойства выделенных штаммов в культурах
лимфоцитов периферической крови человека, перевиваемых лимфобластошных и
моноиитарных линиях клеток.
-
Изучить особенности взаимодействия ВИЧ с клетками нейроглмальной природы.
-
Определить чувствительность выделенных в республике штаммов ВІГЧ к химическим соединениям и большим дозам гамма излучения.
-
Разработать методическую стратегию и тактику исследований материалов от ВИЧ-инфицированных и лиц, подозрительных в отношении ВИЧ-инфицирования.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ При выполнении нестоящей работы были получены данные, и.меюшне как теоретическое, так и практическое значение.
1. Определена структура и выявлены основные группы риска по ВИЧ-инфекции на
территории Республики Беларусь. Чаше всего инфекция регистрируется среди мужчин (76 -
67,3 1-і), чем среди женщин (37 - 32,7 %).
2. Впервые установлено, что на территории Респ>-блнки Беларусь выявляются
генотнпически гетерогенные штаммы ВИЧ-1, относящиеся к подтипам А, В, С и Д.
Выявлено, что даже внутри подтипа наблюдается значительная гетерогенность ВИЧ, что
выражалось в различной реактивности в ИФА сывороток крови с синтетическими
пептидами V3 района белка gpl20 разных штаммов ВИЧ-1, относящихся к подтипу В.
-
Показано, что изоляты BJf4, выделенные в республике, отличаются по биологическим свойствам: способности нифшшровать чувствительные клетки, особенностям репродукции в нігх и цнтопатическому эффекту в разных линиях клеток. По репродуктивной способности в лимфоцитах периферической крови, лнмфобластондных и моноцитарных линиях клеток изоляты ВИЧ .можно разделить на низкоинфекционные и высокоинфекционные. К ннзконнфекционным относятся изоляты, обладающие ограниченной репликативной способностью, низким уровнем накопления вирусного антигена я низким инфекционным титром (2-4 !g ТЦДдо'мл. К высокоинфекционным нзолятам относятся вирусы, реплицирующиеся в большом спектре чувствительных клеток с высоким уровнем вирусных антигенов и высоким инфекционным титром ( 6-9 Ig ТЦЦл/мл ).
-
Впервые (из республик бывшего СССР) в Белоруссии выделены высокоинфекционные штаммы ВИЧ-lZmb и ВИЧ-lShml, которые по своим биолопгческнм свойствам и антигенной репрезентативности могут быть использованы для производства диагностических тест-систем и научных целей.
5. Доказано, что первичные диссоциированные культуры астроцитов человека
чувствительны к ВИЧ и инфекция в них протекает по латентной и/или продуктивной
формам. Обнаружена способность ВИЧ-1 инфицировать первичные диссоциированные
культуры астроцитов морской свинки, преодолевая тем самым межвидовой барьер.
-
Установлено, что от вирусоносителей с ранними сроками инфицирования (6-8 месяцев ) из лимфоцитов периферической крови можно изолировать высокорепликативные штаммы ВИЧ.
-
Обнаружены вещества среди оригинально синтезированных и природных соединений, которые оказывают влияние на биологические свойства ВИЧ, замедляя его репликацию в чл-вствнтельных линиях клеток. Показано, что большие дозы у-излучення
(3,0-3,6 Мрад) полностью ннглбнруют репликативную активность BIF4 в культурах чувствительных клеток.
8. Разработан комплексный подход для исследования клинического материала (кровь, сыворотка, плазма, гистосрезы ) от пациентов с отягощенным эпидемиологическим анамнезом и отрицательными или сомнительными результатами в ИФА и ІІБ с использованием серологических, вирусологических, молекулярно-бнологнческих и морфологических методов, позволяющий повысить качество диагностики ВІ ГЧ-ннфекции.
Проведенные исследования позволили определить ситуацию по ВИЧ-инфекции и СПИДу на территории Республики Беларусь, выявить основные группы риска и источники инфекции. Эксперименты по серо- и генотнпировааию ВИЧ дополняют результаты эпидемиологических расследований о путях заноса вируса на территории) республики н могут быть использованы при проведении профилактических мероприятий. В опытах на первичной диссоциированной культуре астроцитов получены приоритетные данные о патогенезе ВИЧ - инфекции. Они дополняют ранее описанные сведения по изучению ВИЧ-нейроннфекшш и дают возможность значительно расширить представления о роли этого типа нервных клеток в развитии патологического процесса в ЦНС. По материалам диссертации получены авторские свидетельства на изобретения:
-
А.С. ( СССР ) N 1703686 Штамм вируса иммунного дефицита человека для приготовления диагиостическ>« систем ( совместно с Рытиком П.Г., Коломнец Н.Д., Поповым С.А.) от 19.01.1990 г.
-
А.С. ( СССР )N 1797350 Способ обнаружения ВИЧ in vitto ( совместно с Рытиком П.Г., Полешуком Н.Н., Квачевой З.Б., Поповым С.А.) от 23.04.1990 г.
-
А.С. ( СССР ) N 1822152 9-{ Аллилоксиметил ) аденин, обладающий анта-ВИЧ активностью ( совместно с Новиковым М.С., Озеровым А.А., Брелем А.Н., Рытиком П.Г., БорекоЕ.И.,ВладыкоГ.В.,КоробченкоЛ.В., КучеровымИ.И. )от26.06.1991 г. (ДСП).
-
А.С (СССР ) N 1823443 1- ( Аллилоксиметил ) цитозин, обладающий анти-ВИЧ активностью (совместно с Новиковым М.С., Озеровым А. А., Рытиком П.Г., Бореко Е.И., Етддыко Г.В., Коробчеико Л.В., Кучеровым И.И.) от 26.06.1991 г. (ДСП).
Разработана схема культивирования ВИЧ в ч>т)ств1!тельных клетках для накопления вирусной массы, используемой в производстве диагностических систем для выявления антител и антигенов ВИЧ.
На производстве "Антиген" (г. Электрогорск, Россия )н в БелНІПІ ЭМ выпушены экспериментальные партии иммунофер.ментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ-1.
В коллекцию ЕЭС переданы 7 нзолятов ВІРЧ-І, выделенных в Белоруссии, для проведення молекулярно-эгшдемнологнческмх исследований, нзучення обшнх закономерностей изменчивости о V3 районе гена env ВІІЧ с целью создания в перспективе универсальной антн-ВИЧ вакцины.
В качестве коммерческого продукта могут быть использованы изолированные и депонированные высоконнфекцнонные штаммы ВИЧ-1, а также новый способ обнаружения вируса, защищенные авторскими свидетельствами.