Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Большинство из патогенных для человека >едставнтелей семейства Arenavindae эндемичны для стран Африканского континента Латинской Америки [Gonzalez J.P. et al., 1986, Lehmann-Grube F., 1986]. Однако, они мо-т быть потенциально опасными для любой страны. Подтверждением этому служат свежи о завозе лихорадки Ласса в США, Канаду, Австралию, Англию, Израиль и Японию (роздов С.Г., Сергиев В.П., 1984, Krabayashi Y. et al. 1988,1989, Shlaefter F. et al., 1988]. ярус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ), являясь также патогенным для человека, спространен повсеместно, в том числе и в Беларуси [Воробьева З.Н. и др. 1975, 1979, імойлова Т.И. и др. 1994, СачекМ.М. и др. 1995].
Известно, что источником инфекции для человека и естественным резервуаром іруса ЛХМ в природе являются мышевидные грызуны. Уровень их зараженности внру-м - один из наиболее демонстративных показателей эпидемического неблагополучия рритории [Зуев В. А., 1988]. Его оценка в различных регионах республики имеет важное вдемиологическое и эплзоотологическое значение. В этой связи необходимость созда-[я высокочувствительных диагностических тест-систем, которые позволили бы выяв-ть вирус ЛХМ не только у природных хозяев, но и у больных людей, является актуальной дачей. Применяемые с этой целью в настоящее время общепринятые варианты прямого и прямого иммуноферментного метода основаны, как правило, на использовании в ка-стве иммуносорбента суммарных специфических иммуноглобулинов класса G (IgG).
Сведения по изучению роли отдельных подклассов IgG в диагностике аренави-сных инфекций до настоящего времени в литературе отсутствуют. Определенный инте-с в этом плане представляет работа Baldridje J.R. и Buchmeier M.J. (1992), в которой казано, что при острой инфекции ЛХМ у мышей превалируют IgG2a, тогда как при онической - IgGl. Исследований, связанных с изучением роли отдельных подклассов імуноглобулннов в индикации ант"генов аренавирусов не проводилось. В связи с этим визна проблемы, а также ее практическая значимость, определяются, с одной Сіороньх, сутствнем в литературе данных о диагностическом значении отдельных подклассов им-ноглобулинов G, используемых для выявления возбудителен инфекционных эаболем-й и, с другой, связаны с необходимостью постоянного совершенствования методов, «меняемых в лабораторной диагносгике.
Данная работа является составной частью тематики НИР в рамках социального заказа "Комплексный аналіз возбудителей природноочаговых вирусных инфекции, циркулирующих на территории Республики Беларусь, с целью своевременной разработки адек-ватных методов диагностики, профилактики и лечения" N госрегистрации .1993110, а также по Фонду фундаментальных исследований " Исследование механизма действия первого компонента комплемента Clq на специфический и неспецифический иммунные комплексы"
Дать характеристику к определить диагностическое значение отдельных подклассов иммуноглобулина G (Gl, G2a, G2b), полученных из сыворотки крови инфицированных аренавкрусами ЛХМ, Ласса, Мопейя мышей линий CDA и BALD/c.
1. Моделирование инфекции у мышей линий BALB/c и СВА вирусами ЛХМ, Лао
са, Мопейя.
2. Изучение дішамтаї накопления антивирусных иммуноглобулинов класса G к
изотопических атигел Gl, G2a, G2b у линейных мышей СВА и BALB/c.
-
Оптимігзаціїя условий получения отдельных изотипов антивирусных антитш класса G (Gl, G2a, G2b) и изучение их иммунобиологических свойств (степени чистоты г специфичности к структурным вирусным белкам).
-
Определение диагностического значения .(специфической активности, относительной авидности и перекрестной нммунореакгнвности) изотипов IgGl, IgG2a, IgG2b і аренавирусам ЛХМ, Ласса, Мопейя.
5. Определение перспективы разработки нового варианта нммунофермеїггної тест-системы для индикации антигенов изучаемых вренавпрусов на основе использована* подклассов иммуноглобулина G.
При выполнении настоящей работы были получены данные, имеющие как теоретическое, та* и практическое значение.
-
Выявлено, что при однократной интраназальной инокуляции аренавирусов ЛХМ, Мопейя, Ласса в дозе 1000 БОЕ/мышь взрослые мыши линий СВА и DALD/c являются одинаково чувствительными. Гибель животных варьирует от 15 до 36 процентов.
-
Показана зависимость динамики образования иммуноглобулинов класса G у линейных мышей СВА н BALB/c, инфицированных вирусами ЛХМ, Ласса, Мопейя, от вида возбудителя. При заражении мышей обеих линий вирусами ЛХМ н Ласса максимальное содержание антител в сыворотке крови отмечается на 15-23 сутки, а при заражении вирусом Мопейя - на 23-37 сутки.
-
АІгпггела G2t>, специфичные к аренавнрусам ЛХМ н Ласса, дают выраженные серологические перекресты с антигеном непатогенного для человека аренавируса Мопейя, что может служить основанием для применения данного антигена при создании диагностических тест-систем к аренавнрусам ЛХМ и Ласса.
-
Впервые установлено, что при однократной интраназальной инокуляции аренавирусов ЛХМ, Ласса, Мопейя у мышей линии СВА и BALB/c образуется высокоавид-ный иммуноглобулин подкласса G2b.
-
Показано, что все исследуемые подклассы антител (Gl, G2a, G2b) в реакции . радиоиммуиопреципитацин взаимодействуют с вирусным мажорным нуклеокапсидным белком NP.
ПРАКТИЧЕСКАЯ Н ТЕОРжТГШГЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ПОДУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Проведенные исследования позволили оптимизировать условия получения изотн-
пических антител G1 и G2a с поьошыомвгэда аффинной хроматографии н^плотеин-А
сефарозе. ' -
Выявлено, что использование в.ТфИФА антивирусных антител <32а и G2b подклассов на стадии нммуносорбента," в сочетании с комплементом, приводит к увеличению чувствительности и специфичности тест-системы в 4 < 16 раз.
На основе вирусспецифических изотшшческих антител G2b разработан лабора торный регламент на производство Тест-системы иммуноферментной моноизотипическоі диагностической для выявления антигена вируса лимфоціпарного хориомешшгит (ЛХМ)", утвержденный на Ученом Совете БелНИИЭМ, протокол N1 от 23 января 1998г.
В качестве коммерческого продукта может быть налажен выпуск разработанно на основе использования изотопических антител G2b тест-системы иммуноферментно моноизотнпической диагностической для виявленій антигена вируса лимфоцитарног хориомеиннппа.