Введение к работе
Актуальность проблеми. ВирускнЯ гепатит Б (ВГВ) в:фоко р&е-
пространеиноэ заболозакие: по даяния экспертов ВОЗ ososo 5 на-сзлеиия аеиного шара поражены вирусом гепатита В, в СССР уровень носительстаа Н8&-анткгена - маркера вируса.гепатита 3 в среднем составляет 6%.
Степень распространения HBV в человеческой популяциивособенно в форнз бессикптошого вируеоносительетва.в гаядом случае обусловливает слоаквЕзеся неблагополучие эпидемиологической ситуацій.
В РСФСР наиболее неблагополучным в этом отношении является регион Восточной Сибири,где имеет место повышенное,по сравнэнкв с Европейской частью страны,носительство НВз-антигена, Тувинская АССР - 12-14. Бурятская АССР - 11,8 (по РОПГА) (З.А.Горкша с еоавт.,1982) (45).
Вирусный гепатит В наносит большой ущерб состоянию здоровья населения и экономике государства.Временная нетрудоспособность при этом заболевании продолжается более месяца.Нередко гепатит В приникает хроническое течение,которое может осложниться развитием церроза.а в некоторых случаях и первичного рака печени {3'xlnce ei.al. ,I98Q;ft&i^e<^
В большинстве случаев заражение вирусом ГВ обусловлено проведением различных лечебных диагностических манипуляций.гемо-транефузий,различного, рода инъекций,хирургических и других парентеральних вмешательств.Поэтому профилактика гепатита В должна проводиться путем принятия мер,предотвращающих парентеральную передачу вируса: это тщательная стерилизация шприцев и игл,переход на шприцы я иглы однократного пользования.стерилизация хирургического,диагностического, зубоврачебного инструментария п т.п. Эти мэры долгий быть дополнены выявлением носителей НВj-антигена вируса гепатита В чувствительным методами (РОПГЛ, РИА, ИФА).Современные методы позволял? выявлять несколько антигенов, которые являются специфическими иаркерами инфекции: НВ$А<Э , НВзАо .антитела к этим антигенай, антитела к сердцевинно:лу антигену (анти-НВс) и дельта вирусной пифзкцки (Ананьев В.А.,1983; . Вязов СО.,1986; Ворожбиева Т„Е„ е соаот.,1982 к др.).
Интенсивно седется работа по созданию игЕ^нодкагностияукоз и вакцин для профилактики НВТ-икфзкцип.одк&ко они до сяк пор
2 . не внедрятся позсенестно в практику, здравоохранения аэ-ва отсутствия их s дссгаточноы количества'.
Для практических органов здравоохранения наиболее достойным для определения ШзА^ является нв?од ГОНГА. Наряду с высокой чувствительностью он щюст в вшюянемш, не требует специального оборудования м кошт использоваться для экспресс-дкаг-ностшш (учет реакции производится через 30 минут).Этот метод отвечает многим требованиям практического здравоохранения.
Существующие шшунодиагностикумы иа HBj-йшигєн как Еошгэр-чаские.так и экспериментальные во многом различавшей мазду собой. Эти различия касаэтся ввдовой пркнадяеяностн эритроцитов (барана, кур, индеек), способов их фиксаций н сенсибилизация (глютвровый альдегид,хлорид хрома,амидол).различных источников иммунной сыворотки и способов ввдедення НВ^-аитител.
__ Следует отмтнть,что пассивная гемаггяютимацая как никакая другая реакция таит в себе возмояность неспецифяческих реакций.
В связи с вышеизложенным,в настоящее время актуальными являются исследования,направленные иа совершенствование технологии изготовления кммунодиагностикумов на НВз-антиген и внедрение в практику здравоохранения высокочувствительного метода РОПГА. В этом направлении и проведена настоящая работа.
Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилась отработка и дальнейшее совершенствование методов приготовления антительного эрктродитарного диагностикума для индикаций HBj-антигена и внедрение РОПГА в клинико-эпидемнологическую практику.В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи: 2. Отработать методы сенсибилизации различных эритроцитов.
-
Получить высокоактивные иммунные сыворотки для приготовления антительных диагностикумов.
-
Устранить неспецифические реакции,наблюдающиеся в РОПГА.
-
Апробировать новые варианты иммунодиагностикумов на НВ^-антиген в практическом здравоохранении.
-
Выявит» и изучить распространенность НВТГ вирусной инфекции в Восточной Сибири.
Научная новизна работы. Впервые для получения эритроцитар-ного икиуиодиагиостихуиа для индикации НВь-антигена в качестве конъвгирующего агента применен амидол (2,4-диаминфенолхлоргид-рат) для сшивкн НВ^-антител с поверхностью эритроцитов.Предложены
рациональные катоды етабилизацйп я сенсибилизации эритроцитов, позволяющие получить высокочувствнтелькый кщукодаатоеетккум па НВ%-еятаген.
Впервые в качестве адъшвакта для жшунизацкя животных пржие-кено иовое соединение на основе еиитетячееиях поянаняонов (еепо-яккер 5-кзощюпенялгетрвэола к ^вкиияпнрравидона), способное проявлять кмцуиоадьввантные свойства в смеси с НВз-антигеном.
Препарат защищен авторским свидетелъетвов 9 І578143.
Впервые показана принципиальная возможность получения гамма-фракции кз янц кныунизированных птиц к приготовление диагностического препарата на их основе для индртацдаг НВувятигена.
Изучена природа несттецифяческиж реакпий,наблвдавдихся в РШГА, связанная с использованием глвтаровоге альдегида и недостаточно очищенных НВ4-антитея,Для устранения иеспецифических реак-цнй.гдавным образом,понаэана необходимость проводить очистку специфических иммуноглобулинов от белковой принеси.
Ложнопояохителыше реакции,связанные с присутствием в исследуемых сыворотках гетерогеыагглвтккинов и ревматоидного фактора, должны контролироваться на специфичность реакцией нейтрализации
НВ5-вятнгвна*
Огиечэя высокий процент НВ^-аятягенокосительства среди здорового населения Восточной Сибиря, в среднем по їувинской ССР -12%, Бурятской ССР - 10,2$, в Иркутской области - 6,6%.
Практическая ценность работы. Модифицирован способ получения ерзтроцнт^рмого тифнодкагаостизука на НВз-датиген,что поззолкло сократить расход сенсяткна s 2»5 раза (по существующей методике І кгЛгл, в предложенном варианте 0Г4 иг/кл).
Внедрение высоночувегвягельного икмунодиагностикука в лечебно-профилактические учреадеиия Восточной Сибіфн дало возмокность улучшить лабораториун диагностику гепатпта В.
По результатам проведенной работы подготовлено информационное письмо по "Сравнительной характеристико катодов лабораторной диагностики'РШГА и ВИЭФ" (для инфекционистов,эпидемиологов,главных врачей ЦРБ, СПК Иркутской ооласти),приказ'Р 780 от . по отделу здравоохранения Иркутского облисполкома, информационное писыю используется 2 ;табксп процессе к научной работе кафедры' госф-нологка ш аллергохспзз КПИ о 1987 года.
4 На защиту выносятся следующие основные подокеиня.-
-
Иммунодиагиостпкуыы на HBs-антигои'для РОПГА во каогом стда-чаются между собой,Этн отяичня касавтся звдовой лргиаддогяостЕ эритроцитов, способе в фиксации и сенсиб'шгазацяи, различных источников специфической сыворотки в способов выделения алтятеД,
-
Подтверждается необходимость контроля полонлтедьяыж результатов реакцией нейтрализация.
-
Получение гиперкыыунных сывороток на основе новых синтетические адъюзантов.
-
Расшифрована вероятная природа неспецкфических результатов, наблюдавшихся в РОПГА.
ІЗ. Регион Восточной Сибири эндемичный по вирусному гепатиту В. Носительство Hflj-антигена (по РОПГА) ка изучаемой территории среди здорового населения составляет в среднем 9,6.
Апробация работы. Результаты работы доложены и обсуждены на конференции молодых ученых Института эпидемиологии и микробиологии совместно с медицинским институтом (Иркутск,1932),на обществе эпидемиологов и микробиологов (Иркутск,1984), на ІУ Всесоюзной конференции "Человек и природа на БАМе" (Новосибирск,1934), на научно-практической конференции "Здоровье населения Иркутской области" (Ангарск,1988),на IX Всесоюзном симпозиуме по целенаправленному изысканию лекарственных веществ (Рига,1991).
В завершенном виде диссертационная работа апробирована 13 декабря 1990г. на заседании Ученого Совета института эпидемиологии и микробиологии ВСФ СО АМН СССР г.Иркутска и II июня 1991г. на заседании межлабораторного совета Томского ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института вакцин и сывороток Министерства медицинской промышленности СССР.
Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения,обіора литературы,четырех глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов,выводов и указателя литературы (70 отечественных и ІИ иностранных автора).Диссертация изложена на 120 страницах мадшнопненого текста, иллюстрирована 22 таблицами и 4 рисунками.