Введение к работе
Ахтуальиосгь темы. Ящур опасное заболевание пашхопыт-ных. животных, наносящее большой экономический ущерб, Начиная с 20: годов шшего столетия ведутся работы по создам-» инективирозенных протизоящурных вгкцин. Производимые в настоящее зремя инакти;ированные вакцмп являются эффективным средством борьбы о заболеванием. Однако практика изготовления и применения вы, шила ряд существ .'иных недостатков ин .ктисированнея протисоящурноп еакцины, Культивирование, кенцентрирование, зчиетка и илактивзция ' вируса представляют основные технолегические трудности. Производство иіпктивированной вакцины включает наработку большого количества вирусного материала и сопряжено с опасно лью вынос возбудителя за пределы предпрілтил, Длительгое культи-вихшние вируса может привести к изменению его антигенности по сравнению с исходным штаммом, балла зтные примеси, остаа-щиеся в вакцинном препарате, вызывают побочные реакции у привитых живопш. Для сохранения эффективности инашвиро-ванную вакцину необходимо перевозить а хранить а спеціальні к рефрижераторах. Наиболее серьезтм недостатком таких вакцин является остаточная инф( хционность, нередко приводящая к вег.ышхе ящура.
Q последние гош актизно ведутег исследования о созданию претнзеящурнея члпмт на основе антигене?, получена методам-/ химического синтеза или с применением технологии реком-бинантной ДНК. Производство и использование таких вакцин было .бы лишено некоторых недостатке», присущих лнактивиро-ваннои вакцине. Абсолютная неиііфекідаЬшость - главное достоинство вакцин, созданных на основе синтетических антигенов. Химически синтезированные антигены даю і возможность создавать большое разнообразие комплексов, стимулирующих имі-іуннйЛ ответ у прививаемых животных. Включение е един
комплекс антигенных детерминант вируса разных штаммов, подтипов и типов пэзволягт создать поливалентные пептидные противоящурнке вакцины. Актуальном такжо является создание диагностических препаратов на основ» химически синтезированных пептидных Фрагментов неструктурны:-: белков или бел-коз оболочки вируса ящура.
Цель и задачи исследований. Основной целью данной раооты являлся синтез пептидов, включающих антигенные детерминанты VP1 вируса ящура А22 № 550 и Азия 1 № 48 и создание на их основе препаратов, обеспечивающих защиту животных от ящура гои заоажении rov ологичным вирусом.
Для достижения указавши цели были поставлены следующие зшачи:
П} оьести компьютерный ячализ первичней сгрук уры беЛК(> VPI вируса ящура Атг № 550 и м?ия 1 N» 48 с целью локализации потенциальных антигенных детерминант,
синтезировать пептиды, содержащие аминокислотные лоследоват,:лькисти иммунодоминанткых участков №1 вируса ящура А22 К: 550 и Азия 1 № 43,
получить н? основе синтезированных пептидов иммуногеної и гзучить их . физико-зммические, антигенные, иммуногекше и протитив^е свойства.
провести _ сравнительный ' анализ иммунобиологических свойств пеп гидов VPI вируса ящура *%2 № 550 и Азия і №48.'
Ікі'зізяпОіЖїіШ. Впервые1 синтезированы лепгйхы, еклю-чнюпие Фраг^ентгі VP'i вируса ящура h& h'i 50 и Азия 1 N*'.4& сегдли;.: комплекси пепт-.'лсв с природными белками и небелко ьши соединениями. Изучены физико-химические, антигенное иммунсгенные и прогектнБнке свойства получашх пептидов t комплексов, показано, что некоторые' из них и.чдуцироєаяя об хсейэдие в^руснеятрализующ*,!). антител и обеспечивала сени ту лабораторных животных от заболевания лж заражении гемо \ .
логичным вирулентным вирусом яа-ура. Получены еовые данные о слиянии химического состава пептидных антигенов на индукцию, антипептидного ответа. В результате сравнения иммунобиологических свойств обнаружены различия в антигенной, иммуногекноя 'і npovei гквней актиеност!' фрагментов VP1 вируса ящура А>2 Hi 550 я Азия t № 48.
Пгакгическое значение раСоты. Разработаны, v реализованы exes ы синтеза и счистки индивидуальных пептидов. По результатам сравнительного изучения анп.ггнни>:, иммуногенн&х и протекв-вных свойств серии пептидов в свободной форме и 9 составе когплексов выбраны наиболее перспективные и технологичные для создания на их основе протиБОйшуркых вакцинных г репаратов. Методические подходы, испольоованные в данной работе, могу;- быть применены для изучения физико-химических свойств искусственных ачти-еноз. и контроля в процессе их синтеза. Предложенные спеезби по-г.ышенир шмуногенности пептидных фрагментов VP1 вируса ящура Л& № 550 и Азия 1 № 48 грименимы для других пептидных гнтигенов л могут быть полезны для созданы синтетической вакцины. Обнаружение антигеї кости пептидов показывав і возможность использования их в качестве безопасных агентов в иммунологических и диагностических исследованиях. Результаты исследований сшзча ы ее "Временную инструкцию по изготовлению и контролю экспериментальных образцов синтетичен ой лротивоящуряой вмщины А-г", утвержденную директором института.
Anpooaim (.езулътатее исспеновачий- Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены' на конференцию "Актуальнее проблема гетсринарноп вирусологии' (г. Владимир, 1987 и 13S3), Всесоюзном симпозиума но химии пептидов (г. Ю()мала, 1930), научно-теоретическое конференции молодых ученых "Актуальные вопросы ветеринарі-ой вирусологии'
(г.' Суздаль, 1990), международной конференции "К новой стратегии Осрьбы с ящуром* (г. Суздаль, 1991), Всесоюзной конференции "Использование физических и биологических (факторов в ветеринарии и животноводстве" (г. Витебск, 1991), научной конференции "Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии* (:. Покров, 1S92), ;іа заседаниях методической комиссии и Учгного совета ШШ (1S87-1992 г.г.).
Публикации результати исследований Основної положения диссертации огубликованы в 17 печати работах, в том числе 2 за чзках на изобретения.
Структура м объем работы. Диссертация изложена на 153 страница< машинописного текста, содержит разделы: введе-л112, оО'іор литературн, собственны? исследования, обсуждение результатов, вьходы, практические предложения, епчеок литературы и приложение. Список литературы вхлючает 160 цитированных источников. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 10 рисунками.
Положения, выносимые на защиту:
- схемы синтеза фрагментов иммунодоминантных участков
Оелка VP1 вируса ящура А22 № 550 и Азия 1 № 48, результаты
испытаний их физико-химических, антигенных, иммуногенных .
свойст'в, а также протективной активности, определенной в
опытах на лабораторных животных,
- результаты сравнения иммунобиологических свойств
фрагментов VP1 Еируса ящура h& № 550 и Азия 1 № 48,
- локализация иммунокомпетентных зпитопов в структуре
УР1-(140-153)-пептида вируса ящура Азия 1 № 18,
способы повышения иммуногенности VP1-{140-153)- ; пешида вируса ящура Азия 1 № 48 путеУ: создания спите- . шіесіях конструкций состава (Ac-14153-Giy3)t-Lys7-G!y и PaJm-Gry3-140-153-Gfy2-Lys(PaJm)-Leu.
\