Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Штаммовая дифференциация изолятов вируса инфекционной бурсальной болезни, выделенных на территории России Щербакова, Лидия Олеговна

Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Щербакова, Лидия Олеговна. Штаммовая дифференциация изолятов вируса инфекционной бурсальной болезни, выделенных на территории России : автореферат дис. ... кандидата биологических наук : 03.00.06 / ВНИИ защиты животных.- Владимир, 1997.- 23 с.: ил. РГБ ОД, 9 98-5/17-4

Введение к работе

Актуальность темы

Инфекционная бурсальная болезнь (ИББ) - острое, высококонтагиозное заболевание, поражающее цыплят 2-15-недельного возраста, возбудителем которого является вирус, принадлежащий к роду Avibirnavirus. семейства Birnaviridae (Brown, 1986). Инфекционную бур-сальную болезнь (инфекционный бурсит, болезнь Гамборо) регистрируют в птицеводческих хозяйствах мясного и яичного направления, причем ИББ часто принимает характер энзоотии.

Высокая контагиозность, устойчивость вируса к действию факторов внешней среды и дезинфектантов, а'также экономический ущерб, наносимый птицеводческим хозяйствам, делают ИББ серьезной проблемой для птицеводства многих стран мира, включая Россию.

Согласно данным эпизоотологического обследования в течение 1975-1996 годов ИББ подтвердили серологически во всех обследованных птпцехозяйстиах России, а вирус выделили в 145, что указывает па широкое распространение инфекции.

До середины 80-х годов максимальный уровень смертности во время вспышек ИББ достигал 30%. В 1986 г. в Европе появились и начали быстро распространяться высоко вирулентные штаммы вируса, которые вызывали вспышки ИББ, характеризующиеся высоким уровнем смертности - до 70 % и выше. Наряду с прямыми потерями (гибель молодняка, снижение продуктивности, вынужденная выбраковка) заболевание представляет серьезную опасность вследствие развивающейся у инфицированных цыплят нммуносупрессии. Цыплята, перенесшие субклиническую форму ИББ. не способны полноценно реагировать на применение вакцин против болезни Марека, Ньюкасла, инфекционного бронхита и др.

Проявление ИББ маскируется другими болезнями и физиологическими нарушениями. Только при типичном течении ИББ сравни-

тельно легко диагносцируется по клиническим и патологоанатомиче-ским признакам. Внезапное появление болезни, сопровождающееся диареей, высокая заболеваемость, быстрое распространение, зубчатая кривая смертности дают основание предположить наличие ИББ в хозяйстве. Подтверждением диагноза может быть обнаружение характерных изменений в фабрициевой сумке. На ранней стадии или при субклиническом течении болезни необходимы лабораторные исследования.

В настоящее время лабораторная диагностика ИББ включает: выделение вируса на куриных эмбрионах или в культуре ФЭК, постановку биопробы на восприимчивых цыплятах, идентификацию выделенного вируса в РН и РДП, выявление антител в сыворотке крови в РН, РДП и ИФА, обнаружение гистологических изменений в органах и тканях.

Появление антигенных вариантов вируса ИББ, а также высоко вирулентных штаммов, охарактеризованных с использованием панели моноклональных антител (МАТ) как классические, но тем не менее способных вызывать заболевание у вакцинированных птиц, определяет необходимость совершенствования имеющихся и разработки новых более эффективных средств диагностики її профилактики ИББ.

Совершенствование методов диагностики ИББ предполагает прежде всего повышение их чувствительности, а также возможность не только выявлять, но и идентифицировать вирус.

Одним из перспективных направлений, способных решать эти задачи, является использование метода ПЦР, который основан на эн-зиматической амплификации части вирусного генома с использованием термостабильной ДНК-полимеразы и специфических праймеров. ПЦР обладает высокой специфичностью и чувствительностью, что позволяет выявлять не только инфекционный вирус, но и фрагменты вирусного генома. Определение и сравнительный анализ первичной структуры кДНК фрагмента генома, характеризующегося максималь-

з ной вариабельностью, позволяют наиболее точно установить штаммо-вую принадлежность вируса.

Возможность применения метода ПЦР и сравнительного генетического анализа для идентификации вируса ИББ определяется степенью изученности вируса. Накопленные данные о первичной структуре генома ВИББ позволяют выявить высоковариабельный фрагмент ге-' нома, оптимизировать нуклеотидные последовательности фланкирующих этот фрагмент праймеров и разработать тест-систему для индикации и штаммовой дифференциации ВИББ. Цель и задачи исследования

Основная цель данного исследования заключалась в разработке метода индикации и штаммовой дифференциации вируса ИББ и изучении методами молекулярной биологии генетических взаимоотношений штаммов вируса ИББ. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

разработать метод индикации вируса ИББ в различных вируссодер-жащих образцах па основе ПЦР;

на основе нуклеотидного секвенирования вариабельной области гена Vp2 разработать метод идентификации вируса ИББ, позволяющий определять штаммовую принадлежность вируса;

провести анализ нуклеотндной последовательности вариабельной области гена Vp2 полевых и вакцинных штаммов вируса ИББ;

сравнить первичные структуры антигенно-значнмой области Vp2 полевых и вакцинных штаммов вируса ИББ.

Научная новизна исследования

Впервые определена нуклеотидная последовательность вариабельной области гена Vp2 46 изолятов вируса ИББ, выделенных на территории России в течение 1993-1997 гг., и 14 отечественных и зарубежных вакцинных штаммов. Выявлены генетические группы штаммов вируса ИББ. Определены особенности первичной структуры антнген-но-значимой области Vp2 российских изолятов и вакцинных штаммов

вируса ИББ и создан банк данных нуклеотидных и соответствующих аминокислотных последовательностей. Практическая значимость исследования

Разработан метод выделения, очистки и концентрирования ВИББ и вирусной дцРНК, позволяющий получать из 100 г фабрішис-

вых сумок инфицированных птиц 5-7 мг вируса и соответственно около 0,5 мг вирусной дцРНК.

Разработан метод индикации ВИББ, позволяющий выявлять геном возбудителя в различных вируссодержащих образцах в течение 4-6 ч.

Разработан метод, позволяющий в течение 2-3 дней определять первичную структуру вариабельной области гена Vp2, и в результате сравнительного анализа с использованием созданного банка данных, проводить штаммовую дифференциацию вновь выделенных изолятов ВИББ.

С использованием разработанного метода проведена идентификация 46 изолятов ВИББ, выделенных на территории России в 1993-1997 г., а также 14 отечественных и зарубежных вакцинных штаммов.

Разработанные методы выделения вирусной дцРНК, выявления и штаммовой дифференциации вируса ИББ одобрены ученым советом и утверждены директором ВНИИЗЖ, и в настоящее время используются для индикации и идентификации вируса ИББ. Публикация научных исследований

По теме научных исследований опубликовано 11 научных работ. Апробация работы

Основные материалы диссертации доложены на научно-практической конференции "Вирусные болезни сельскохозяйственных животных" ВНИИЗЖ, г. Владимир (1995 г.), научной конференции "Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве и ветеринарии" г. Москва (1996 г.), всемирном ветеринарном конгрессе в г. Иокогама (Япония. 1995 г.).

Структура и объем работы