Введение к работе
1.1, АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Несмотря на то, что интерферон был открыт более 35 дет тему нагад, интерес к этой проблеме не только не ослаб, но в последние годы значительно возрос.
Открытке явления интерференции и интепфоппиппЛр^гг^го:-:;^ ^
серьез с ккфекиденнши заболеваниями. Появилась перспектива поиска лечебно-профилактических средств,обеспечивающих усиление неспецифической резистентности путем включения эндогенного механизма защиты макроорганизма. К числу таких средств относятся интерферон и его индукторы.
Первые,представления об интерфероне как о монобелке, обладающем противовирусной активностью, в последние годы коренным образом пересмотрены. Сегодня понятием интерферона соединяются .комплекс биологически активных субстанций продуцируемых лейкоцитами в ответ нз воздействие индукторов различной природы. 5тот комплекс может включать десятки подвидов молекул интерферонсв,лпмфекинов ,монокнно2 и биологически активных белков 'Hence Н, et a!.,lSS5-( ЗаЬаіг. A. st aI.,19S5>. Б езею очередь подтипы интерферонсв, лкмфокинов .монокинон и Апологически активну:-: белков воздействует на клетки организма, вызывая в них синтез, .как минимум двенадцати новых белков (Bereslnl М.Н. et зі., 198S). Таким образом запускается вся цепь защитных механизмов для ликвидации патологического процесса б организме (Frle-Ітап R.U. et al., 196;Larrier A.O.et al.,1985 ).
В настоящее время интерфероны рассматривается как основные клеточные регуляторы жизнедеятельности клетки и иммуиой системы организма. Исходя из такого понимания об интерферо-нах объясним и поликорфизм таких его биологических свойств ( Кузнецов В.П. и др., 1989; Das U.N. et al., 1986; Staehell P. et al., 1985; Lin J.X., Vllcek J. 1987; Obert M.J. 1987:) как:
- противовирусная активность;
подавление роста внутриклеточных инфекционных агентов невирусной природы (хламидии,риккетсии,бактерии,простейшие);
антипролиферативная активность;
противоопухолевый эффект;
антитоксическое действие;
радиозашитный эффект;
иммунодепрессивный аффект;
стимуляция макрофагов;
усиление ЦИТОТОКСИЧ9СКОГО действия лимфоцитов на клетки мишени;
усиление формирования поверхностных антигенов;
усиление и подавление ряда клеточных ферментов;
усиление цитотоксического действия двунитиэвых РНК.
В процессе йН'Тэр1*1врокогенэза,кзк правило, образуй тс я набор-Шїтвр^єронсв, отличающихся биологическими и физико-химическими свойствами. В настоящее время известно более 30 интерферэнов, большая часть которых выделена в микроколичествах и применяется только в исследовательских целях. Наибольшее практическое значение имеют человеческие интерфероны,которые в соответствии с международной номенклатурой (Stewart W.E.198Q), принятой з 1980г.,делятся на три основных вида:
it-интерферон (лейкоцитарный, 1-типа);
0-интерферон (фибробластный, Др-типа);
Г-интерферон (иммуный, її-типа).
Такое разделение основано на различиях между ними по физико-химическим характеристикам и биологическим свойствам.
Первый тип интерферона продуцируется лейкоцитами и лим-фоблзстами человека при вирусной инфекции кли в ответ ка индукцию синтетическими полирибонуклеотидами.
По источнику получения препараты «-интерферона классифицируют как лейкоцитарный и лимфоблзстоидный интерфероны ( Cantell К. et al., 1981; Pinter N.,Fantes К. 1Q84 ).
За рубежом в основном выпускается генноинженерный сс-ЕА, «-2Е, й-2С интерфероны. Природный лимфоблаотойдный сс-кн-терферон выпускается в малом количестве ( Masgrave S.C. et
зі.,1зЗі;Соі1епг R. et al.,1998). а лейкоцитарный интерферон выпускается на основе Финляндской модифицированной лабораторной технологии(Сапсе11 К., Hirvcnen S.1978; Cancel1 К., et al.,198i). В России, з большем количестве. выпускается природный сс-интерферон в основном для интраназального применения
С Регламент прпиапґміп-гм Ы ar~2-? ) " Z :.:ЗЛЬ^ ^гуиыОиНЫНТ-
ннн ~-ул, T'OTop:."": ::с~с."^.57-*^а дли лечения различных ферм гепатитов (Косарева JI.H. и др. ,1994 ).
3-интерферон, получивший наименование фибробластного,образуется в культурах первичных фибробластах кожи эмбриона человека, в диплоидных или перевиваемых клетках человека при внесенім в культуру вируса или полирибонуклеотидного индуктора поли(И)-поли(Ц).Выпуск этого препарата , как природного,так и рекомбинантного производится з США,Англии,Японии(Edy V.G. 1964; Sartor V. et зі., 1993).
/істгіпю "гуч^кля пнтерфзрокез от открытия ло 5н*9др-н;" з медицинскую практику .можно разделить на ряд этапов.
Первый этап с 1957 по 19Є9 год. В конце 50-го начале 60-х годов одновременно несколькими группами исследователей был
зыблен й-интерфегон ('Селезнев і^.Л- .—ектимирОЕ Т. A. 1'dDD:Fai-oorT Е. et al.,196; Grander H.,Cancel! К.1966) и появились
Первые ССОбП1,ЄНИЯ О Т'КНТеофе^ОНе (WeelQCk Е. К. 1966). ОДН02ГЄ"
менно с поиском индукторов и разработкой лабораторных методов получения интерферона, учеными проврдилось изучение свойств интерферонов и путей их возможного использования (Фадеева Л. Л..Еалезина Т.И.1963;Ермольева 3.В.,Фадеева Л.Л., и др.,1965; Соловьев В.д. 1959;Оганесян P.Z., Фадеева Л.Л., к др.,1970).
На втором зтапе с 1359-1983г.разрабатывались и совершенствовались технологій получения интерферона, а также проводи-
лис-ь дальнейшие клинические его испытания.В налей стране с 19б9годз было организовано производство человеческого лейкоцитарного интерферона (ЧЛИ) для интраназального применения.В Финляндии, при поддержке ВОЗ, было организовано получение инъекционного препарата человеческого лейкоцитарного интерферона для клинических испытаний.
Важнейшим достижением этого периода стало создание специалистами фирмы "Bicgsn" (Швейцария) препарата интерферона методами генной инженерии.
На третьем этапе продолжающегося и в настоящее время,усилия ученых направлены на оптимизацию технологии производства рекомбинантных и .природных интерферонов,на создание новых лекарственных форм с целью расширения их возможного применения.
Интерес к проблеме интерферона, как в области фундаментальных исследований,так и в создании новых и совершенствовании существующих технологий получения интерферонов и его различных лекарственных форм подтверждается ежегодным обилием научных статей, патентов и монографий, выпуском специального журнала -J.Interferon Res, ежегодным проведением в разных странах конференций, симпозиумов.
По оценке фирмы "Fharmaprogrects" (США), в конце 80-годов на различных стадиях доклинических исследований, клинического изучения, регистрации и внедрения находилось около 130 препаратов «-, 3-, г-интерфероноЕ, разработанных более чем 100 фармакологическими и технологическими фирмами, не считая институтов и других исследовательских организаций всех стран мира.
При зтом интерес к препаратам интерферонов определяется в основном их противовкрускыми, аятипролиферативными, и иммуно-модешірущими свойствами, а также возможностью их кепальзава-ния для лечения артритов к СПИДа.
За рубежом с 1S83 года большое внимание уделяется реком-бкнзнтным а-, в-, г-інтерферонам. В этой области достигнуты значительные успехи. Однако как показала практика, не все разработанные рекомбинанткые интерферокы могут быть использоез-ны в медицинской практике в свази с низкой эффективностью или
взоры обратили на получение и ксполъгсваниз природных a-, з~, у-интерферонов, которые являются составной частью человеческого организма и физиологичны для него.В результате проведенных сравнительных исследований природного и рекомбинантного ое-интерфероноЕ, было выявлено большое различие между ними. Оказалось, что природные интерфероны по сравнению с рекомби-нзнтным содержат не только различные подтипы е-интерфзрснсЕ,
Ъ настоящее время препараты «-интерферона разрешены и кспольгуктея е 45 страна:-: для лечения 15 селезней, в том числе, волоскоЕоклеточной лейкемии, саркомы Калоши,карциномы клеток почечного эпителия,рзковидных инфекций,метастатической злокачественней мелакомы, множественной меланома, лимф различной этиологии, рака мечевого пугыря, рзка яичка, ювениль-
русами и ряда бактериальных инфекций (Кирлов А.В.и др., 1985; Покровский В. И. и др., 1986; Белоцкий С. М. и др., 1990; Kuznetsov V. P. et зі., 1991; Дворецкая С. А., Кузнецов В. П. 1993; Голбзн Т.Д., Чешик С.Г. и др., 1994; Lidman Cft. et al., 1993; Cunningham M. etal., 1993; Ml lei la M. et al., 1993: Mathlvor. F.1993).
Наряду с- использованием экзогенного интерферона б борьбе с вирусными инфекциями к другими заболеваниями развивается и другое направление - использование индукторов интерферона, как средств стимулирующих неспецифическую резистентность организма.
' В настоящее время наиболее перспективными для этих целей считаются природные и синтетические полинуклеотиды, декстран-сульфат, левамизол, госсипол и его аналоги,ларифан,ридостин (Ершов Ф.й., Жданов В.М.1982; Еаринский И.Ф. ,Льгаева И.А.1994;. Feldmane С. et al., 1992). Они также постепенно внедряются в клиническую практику после полного изучения специфических и токсикологических свойств препаратов. Однако, дальнейшего изучения требуют вопросы зависимости целевого эффекта от типа индуктора, способов его введения, особенностей динамики ин-терфероногенеза и спектра генерируемых типов интерферонов, характера побочных явлений.
Накапливающиеся знания об интерферонах, как о комплексе биологически активных белков и их эффектах открывает новые перспективы в области терапии вирусных, ' бактерийных и неоп-ластических заболеваний ( Далецкпй С.Я. и др. ,1985; Мальцева Н.М. и др. ,1985; Кузнецов В.П. и др., 1989; Еобкова Е. В. и др.,1994; Flnter М.В. 1987; Viloek J. 1987; Milella М., et al.,1993 ).
В нзш9її стране впервые з мире с 1869 года было оргзнкэо-зано производство человеческого лейкоцитарного интерферона (ЧЛИ) в качестве средства профилактики и лечения гриппа. Первый Регламент производства ЧЛИ для пнтраназзльного применения был разработан Соловьевым В.Д., БектшироЕым Т.А., Кузнецовым В.П., Марченко В.А. и другими.
В 1975 году в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи АМН СССР была завершена разработка способа получения высококонцентрированного препарата ЧЛИ для ішьекций и с 1978 года начато изучение его эффективности при различных тяжелых вирусных и онкологических заболеваниях.
Если до SD-x годов разрабатывали способы получения ЧЛИ
для инъекций с использованием методов глубокой очистки и получения высококонцэнтркроЕанногс, по противовирусной актив-нести, препарата, то после 80-х годов усилил были сосредоточены нз разработка новой стратегии очистки ЧЯИ, которая позволяла 5ы сохранить в лекарственной форме гесь спектр биологически активных белков. (Кузнецов В.П. и до. 19йя- к«-?а_ цо« «.ч.. Р-'сгнн:; А. Л. л л>>.. Ійй і ),
5 начале 80-х годов под руководством проф. Кузнецова В. П. создается препарат - лэйкинферсн для инъекций. Лейкинферон -частично очищенный интерферон от анлантоисных белков и вируса - индуктора с сохранением биологически активных белков.
С учетом знаний об интерферонах, на сегодняшний день при-емущество имеют лекарственные формы ЧШ которые содержат весь комплекс биологически активны:-: белков с молекулярной массой до 1С0 000 дальтен, а з будущем, по нашему мнению, целеоооб-тзёно сконструировать препарат содержащей определение подвиды интерфероноз, лимфокинов.мснокикоп и других биологически активных белков.
Е настоящее время производство и использование ЧЛИ все более четко разделяется на два направления. Первое - производство инъекционных лекарственных форм интерферона для лече-нп.1 острых и хронических фор»: гепатитов, ряда онкологических, генерализованных вирусных и бактериальных инфекций ( Еоузалее Э.Ш., Кузнецов В.П. и др. ,1591; Торрес Э. М. и др., 1991; Дворецкая С.А-., Кузнецов В.П. 1993;, Кокорева Л.Н. и др., 1994; Огег Н. 1990; Cclle М. et зі.,1993; MllellaM., et. зі. ..1993).
Второе - производство интерферона для наружного и внутреннего применения в виде капель, мазей, свечей, таблеток, капсул С Барсуков А.Е.. Шимченкс П. Я. 1ЭВ5; ФС 42 - 247 ЕС-91;Еобкова Е.В. и др.,1994; FlelsJraann W.R., et al.,1991).
В России наибольший объем производства составляет ЧЛИ для интраназального применения. Ежегодный объем выпуска такого интерферона составляет 40-50 млн. доз. Некоторые предпрпнтия выпускают в год более 10 млн. доз интерферона, что соответствует уже промышленным объемам производства.
Препарат выпускается по Регламенту производства человеческого лейкоцитарного интерферона N ЗОЕ-82 и ряда изменений к нему. В качестве клеток-продуцентов интерферона используются лейкоциты человека, выделенные из донорской крови, лейкоцитарной или эритроцктарной массы. Для индукции интерферона используется вирус болезни Ньюкасла, вакцинный штамм "Н", в виде неочищенной вируссодержащей аллантоиеной жидкости. Веоъ технологический процесс проводят в колбах, матрацах или бутылях. Регламентом не предусмотрена очистка интерферона от балластных белков. Как показывает практика работы объединений и предприятий с большими объемами выпуска'препарата, действующий Регламент более приемлем при производстве интерферона з малых объемах.
Именно предприятия, которым приходится в день перерабатывать от 30 до 100 литров донорской крови и работать с такими же объемами суспензии лейкоцитов на остальных этапах технологического процесса, первыми выявили отрицательные моменты получения интерферона в матрацах, колбах или бутылях. Эта очень большая трудоемкость, многостадийность технологии и ее много-зтапнссть, большой объем ручного труда, отсутствие возможности автоматизации отдельных технологических процессов.
При ведении в матрацах или бутылях стадии праймингз, индукции и биосинтеза интерферона , на фоне отсутствия возможности автоматического контроля' и поддержания температурных параметров суспензии, приводит к получению интерферона с различной противовирусной активностью, что е свою очередь отражается на показателях себестоимости и рентабельности препарата.
Другим недостатком технологии производства интерферона по Регламенту N 302-82 это отсутствие стадии очистки интерферона от чужеродных антигенов, ( вирусного индуктора, белков аллантоисной жидкости, в том числе и овальбумина) , Присутствие чужеродных антигенов в интерфероне для интраназального применения может вызвать сенсибилизацию организма к этим антигенам, особенно к оЕальбумину (Бобкова Е.В., и др.,1985; Николаева Е.И., Варданян Н.В., и др., 1991).
В начале 90-х годов требования к качеству ЧЛИ были гначп-тельно повышены. Согласно ФС 42-S47BC-91 ЧЛИ для интранззаль-ного применения должен содержать евальбумин не более 0.05 мкг 'мл..противовирусная активность интерферона долина быть не ниже 1000 ME в ампуле и препарат не дойкен содержать НВз-ан-
ТПГЙЯ Т> ОВ.ТГ" Z 3Tiu~. i_iSiin і/лпжпоо НСДу"-.ЭД.Ъ xiufe синий nw-
аГ--^ з u ДО 10-15 *, КЛеТОК-Продуцентов ПКТЄрфЄр:Ні, К ДСПСЛНЇЇТЄДДКСЙ гравматиэатш лейкоцитов. Открытие з 80-л года:-: лимеротропнн:: вирусов, 5 тек числе и вируса гммунсде;:щпіа Человека (ЕйЧ), вызывающего синдром приобретенного т-атиунол^фицпт.- человека '"'ЛїїіїІ) и вогмо^ностп еараленпл людей интицпрсБанной кровью пли препаратами, приготовленными из такой крови (Бюлл. ВОЗ, 1990, 1991). остро поставили вопрос о введении стадии очистки и дополнительных методов инактивации возможных вирусое-контамикактоЕ в нэтизном ЧЛИ для интранавального применения. Существующие методы счистки интерферона весьма трудоемки к мало пригодны для очистки сольлих обьемов пнтерферс-на.Так,например,в технологии изготовления инъекционных препаратов интерферона (Cantell К., Hirvonen S. 1981) используют многоэтапную процедуру осаждения белков роданистым калием с последующем их зтанолозым фракционированием под контролем рп. Метод при 1000-кратном концентрировании ЧЛИ позволяет в 100 раз его очищать с 60 -ным выходом конечного продукта. ' Другой известный метод очистки интерферона от примесных - 12 -белков -использование иммуноссрбции (Ogburn С.A. et al.,1973; Tontia Е. T.,Faucker К.1976). интерферон специфически адсорбировали из смеси белков на иммукосорбенте, с ишобшшзнраван-ным антикнтерферановыш иммуноглобулинами, е последующей его элюцией. Опксан способ очистки интерферона (Пивоваров A.M. и др.,1982)путем его осаждения сульфатом аммония с последующим растворением осадка в 2-8 М мочевине и далее гельфильтрацией на колонке с гелем Акрилекс П -60. Другие исследователи (Rubinstein М.,Pestka 5.1981) осаждали интерферон трихлоруксусной кислотой и проводили хроматографию растворенного осадка на колонке с сефадексом 0-100. Опксан метод" очистки интерферона на колонках с отечественными кремнеземными сорбентами (макропористое стекло ШС-200 и силохром 0-80) с последующей элюцией интерферона (Синева С. А. с ссавт.,1985). Однако,все выше перечисленные способы позволяли получать высокоочищенные препараты интерферона с достаточно высоким еыходом по противовирусной активности ,но с потерей других биологически активных белков,которые продуцируют лейкоциты на стадии биосинтеза интерферона. ' Другім недстатком этих и других методов является то , что достаточно сложно в производственных условиях проводить работы с хроматографическим оборудованием при больших объемах производства интерферона. В 1379 году Е.П.Кузнецов с'соавторами предложили удалять алланюискые белки и вирус—индуктор методом негативной имму-носорбции при получении инъекционного интерферона. Антитела против аллзнтоисных белков и вируса -индуктора иммобилизовали на BrCN -активированной сефзрозе фирмы "Pharmacia" (Швеция). Метод обеспечивает достаточно полное удаление посторонних антигенов при сохранении противовирусной активности интерферона и других биологически активных белков. Однако легкая сжимаемость сефаровы значительно ограничивает скорость ишуноаффинкой хроматографии и затрудняет применение болыгкх объемов колонок. В работе Гарппсвой к.К. с созвторами(199Э) предложено антитела против аллантоксных белков и зируса-инцуктсра ижс5н-лкзовать на матрице , полученной на основе поливинилового спирта. целом зто предложение несколько повышает устойчивость хроматографичесюгх vr.r.r-.^^.y ? «р-ц5^г^ 0„:-,ъгувт?лти:». ?д нзко. цлл йг-ах.«п='":7Г ~:~л ;;.^улОьф>ЬіШіьіл хроматографии, характерно загрязнение препаратов интерферона фрагментами кроличьи;-: иммуноглобулинов за счет действия на них разнообразных протеаз в полуфабрикате интерферона, выделяющихся при аутоли-зе клеток-продуцентов. Тагам образом, традиционный путь очистки интерферона от контамкнирующих примесей, в тем числе и аллантоиенкх белков, удаляемых на стадии готового препарата, представляется достаточно трудоемким, технически елслык , продолжительным к неприемлемым для крупномасштабного производства. ^едиатороЕ з препаратах интерферона и о важности их сохранения з процессе счистки.( Вахромеевз Н.С., Авдеева Ж.И., Кузнецов В. П. 1988; Кузнецов В.П. и др. .1988; Голбан Т.Я. ,Чешк С.Г..Кузнецов Е.П. и др.,1594;. В эти же годы показана возможность использования интерферона в медицинекоп практике в виде различных его лекарственных форм ; Барсуков А.Е., Очанко П.Я. 1965; Кузнецов В.ГГ.' к др.,1938; Бобкоза Е.В., и др.,1994; Голбзн Т.Д., и др.,1994). Все выше перечисленное - перспективы использования различных лекарственных форм интерферона в медицинской практике, возрастающие требования к качеству препарата и его безопасности, отсутствие промышленной технологии производства счищенного интерферона с сохранением клеточных медиаторов, обос- - 14 -повывают целесообразность активизации усилий по разработке технологии крупномасштабного производства человеческого лейкоцитарного интерферона для различных лекарственных форм. Эта технология, с учетом современных знаний о интерфероне, должна базироваться,по нашему мнению, на следующих принципах: 1.Получение интерферона одномоментно в больших объемах, должно проводиться в биореакторах ' управляемых компьютером. Для снижения трудоемкости и упрощения производства интерферона, технологический процесс стадии индукции и биосинтеза должен быть одностадийным' за счет соединения стадии индукции и биосинтеза в единый процесс. Для индукции интерферона в клетках-продуцентах необходило использовать очищенный Еирус- индуктор. С целью получения интерферона, содержащего максимальное количество биологически активных белков, суспензия лейкоцитов, должна содержать набор форменных элементов белого ростка крови близкий к физиологическому сочетанию в донорской крови. В технологических процессах для очистки интерферона и вируса-индуктора должны использоваться методы мккро и ультрафильтрации. 6 .Среда для культивирования лейкоцитоз должна содержать очищенные и простые составные компоненты. При разработке технологии крупномасштабного производства человеческого лейкоцитарного . интерферона мы использовали и предыдущие наши равработки, которые отражены в виде изменений к Регламентам производства человеческого лейкоцитарного интерферона N 134-69 , N 202-82 и в авторских свидетельствах на изобретения. 1.2. ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Цель - разработать компьютеризованную, автоматизированную технологию крупномасштабного производства человеческого лейкоцитарного интерферона, очищенного от балластных и аллергизирующих примесей. Для достижения этой цели намечено решение следующих задач: Разработка компьютер;»овэнной конструкции основных к еспєїлсгзїєдінье элементов биореактора , обеспечивающих оптимальны» условия для продукции интерферона лейкоцитами. в Сольших объмах; ИЗуЧЭННе Закономерностей бИОСИКТега Интерферона ^ f»; реакторе ПОИ ряв.я»;;.-^; уйЛИМнг « уоЛОіл.Ілл ^- — ТИГ^О^ЬпИгі, ь г.ч. "пп "осл5Й^;ьіі->.і праиминга; Разработка способа выделения чистых лейкоцитов из боль-! ших объемов и различных источников сырья с полны}.? сохранением .их 5!нтер$еронопродуцируюцей активности; Изучение закономерностей мембранного, разделения при -г. газработаны инженерные конструкции, обеспечивающие жизнеспособность лейкоцитов при культивировании их в суспензии большего объема, S. Впервые разработан двухэтапный режим праширования клеток-продуцентов з условиях биореактора с целью интенсификации продукции интерферона на стадии биосинтеза. 5. Впервые разработан способ очистки индуктора на микро-фпльтрационных и интерферона на улътрзфшштрационяых мембранах. 7.Впервые показана ноамежность оптимизации среды культ;;- вирования лейкоцитов путем добавления перекиси водорода, цитрата натрия, донорского альбумина. 7.Впервые изучено влияние радиационной обработки ка противовирусную активность интерферона и определены оптимальные параметры инактивации т -лучами вирусов - коятамкнантов в ЧЛИ. Основные положения научной новизны проведенных исследований подтверждены авторскими свидетельствами Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий. Разработан универсальный способ выделения чистых лейкоцитов ие различных объемов и источников сырья, обеспечивающий выход лейкоцитов до 90-951. Разработана конструкция перемешивающего устройства и вспомогательных элементов, позволяющих культивировать лейкоциты в суспензии больших объемов. Разработан температурный режим стадии прайминга в условиях биореактора, способствующий получению интерферона с высокой противовирусной активностью. Разработаны оптимальные режимы получения интерферона в биореакторе с управлением этого процесса по программе с помощью компьютера. Разработаны оптимальные режимы процессов микро- и ультра-фильтрации при очистке индуктора и интерферона. л На основе проведенных исследований разработана технология крупномасштабного производства человеческого лейкоцитарного интерферона для различных его лекарственных форм с элементами автоматизации и компьютерного управления. Разработан и утвержден 30.11.1990года Комитетом медицинских иммунобиологических препаратов новый Регламент производства ЧЛИ - Регламент производства N 81-90. Интерферон лейкоцитарный человеческий сухой . Авторы : Кулагин В.Ф., Юсупов Б.Г., Бобкова Е.В. , Загидуллин Н.В., Хафиаова Л.Г. Созданная технология позволяет получать интерферон з больших объемах, а метода очистки интерферона обеспечивают получение препарата высокой степені' чистоты при сохранении биологически активны:-: белков 2 диапазоне де iOOOQC даль тон. Технология освоена п зкедсена в ппоир.тшттптип 5 ?.?91г"'. БНЄЛ0«НИй МОИМИ '^унонгл-пим "Р'-'ТТГ'Т'ОД'^ТГ:" =Р^СР0»1и »iwri- волило значительно снизить трудоемкость ка всех этапах работы, уменьшить количество ручного труда, обеспечить стабильный процесс биосинтеза интерферона. Полученный интерферон по многим качественным показателям значительно превосходит препарат, получаемый по Регламенту производства N 302-82. - на пленуме отраслевого координационого Совета по мембранным технологиям (г. Уфа., 1957г.). Остальные разделы диссертации по которым не было запрета на публикацию Государственньш комитетом СССР по делам изобретений и не содержащих технологических сведений ноу-хау изложены в 12 печатных работах.