Введение к работе
Аістуальность проблемы.
Широкий спектр заболеваний, при которых показано лечение интерфероном, стимулирует рост производства этого препарата. Однако масштабы производства человеческого лейкоцитарного интерферона сдерживаются дефицитом сырья - донорской крови, а также высокой вирулентностью применяемого в качестве индуктора интерферона в лейкоцитах человека, вакцинного штамма «Н» вируса болезни Ньюкасла. В этих условиях проведение исследований, связанных с поиском решений и методігческих подходов, направленных на интенсификацию процесса биосинтеза интерферона, весьма актуально.
Цель работы.
Получение вариантов вакцинного штамма «Н» вируса болезни Ньюкасла со сниженной вирулентностью для клеток-продуцентов интерферона (лейкоцитов человека) и оценка их ігатерфероногенной активности.
Задачи исследования:
-
Селекция вариантов штамма «Н» ВБН с заданными свойствами при условии культивирования вируса в развивающихся кури-ішх эмбрионах, при сниженных пермиссивных температурах.
-
Оценка пригодности химических мутагенов для усиления интерфероногенной и снижения гемолитической активностей ВБН.
-
Подбор стабилизатора и контроль стабильности свойств полученных вариантов индуктора в процессе хранения.
-
Оптимизация условий культивирования варианта вируса в размножающихся куриных эмбрионах.
Научная новизна и теоретическая значимость работы.
Впервые получен высокоактивный и низковирулентный для клеток-продуцентов интерферона, холодоадаптированный вариант вируса болезни Ньюкасла, используемый в качестве индуктора интерферона, повышающего синтез интерферона при слабом повреждении интерферонсинтезирующих клеток. При использовании холо-доадаптироваиного штамма, урожай интерферона повышался в 4 раза и более по сравнению с исходным производственным вакцинным штаммом «Н» ВБН.
Впервые предложена ростовая добавка Д-изомер лактозы для получения высокого урожая вируса в куриных эмбрионах.
Впервые применена тест-система для стандартизации условий индукции интерферопогенеза.
Научная новизна подтверждена 2 патентами РФ. На третью заявку получена приоритетная справка. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского Российской Академии медицинских наук (ГКВ № 2348).
Практическая значимость работы.
Полученные результаты положены в основу Изменений к Регламенту производства человеческого лейкоцитарного интерферона № 281-90 и Инструкции по изготовлению и контролю РРИД для определения количества вносимого вируса-индуктора.
Штамм-индуктор и тест-система, а также ростовая добавка Д-изомер лактозы, внедрены в цехе интерферона ГУЛ «Иммунопрепарат».
Апробация работы.
Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета Уфимского научно-исследовательского института вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова (1999 г.). Основные материалы доложены на Всероссийской конференции, посвященной 95-летию Уфимского НИИВС им.И.И.Мечникова (2000 г.).
Положения. выносимые на защиту.
-
Использование двух методических подходов (селекция при пониженной температуре и химический мутагенез) для получения нового варианта индуктора - штамма «Н» ВБН со сниженной вирулентностью для лейкоцитов человека.
-
Селекционированный при 32 С холодоадаптированный вариант вирусного индуктора оказывает низкое повреждающее действие на интерферонсинтезирующие клетки, позволяя стабильно увеличить в них синтез интерферона не менее чем в 4 раза, по сравнению с исходным штаммом.
-
Мутантный вариант холодоадаптировашюго штамма «Н» ВБН сохраняя шикую повреждаюіцую активность по отношению к клеткам продуцентам интерферона, обладает сниженными гемолитическими свойствами.
-
Селекция вируса в развивающихся куриных эмбрионах в присутствии Д-изомера лактозы позволяет получить стабильный по свойствам вариант холодоадаптированного штамма с высокой ин-терфероиогенной и низкой гемолитической активностью, хорошо размножающийся в развивающихся куриных эмбрионах.
-
Разработанная тест-система для количестветгого измерения вносимого вируса-индуктора позволяет стандартизовать условия ин-терфероногенеза.
Публикация результатов исследований.
Материалы диссертации отражены в 2 патентах РФ, 1 Заявке на патентование и изменениях к НТД. Остальные разделы диссертации, на которые не распространяется запрет на публикацию Государственным комитетом СССР по делам изобретений не содержащие технологических сведений ноу-хау, изложены в 2 печатных работах.
Объем и структура диссертации.