Введение к работе
Актуальность проблемы
Вирусы серогруппы калифорнийского энцефалита (КСГ) широко распространены в Северной и Южной Америке, Европе, Азии и Африке. В различных районах Российской Федерации установлена активная циркуляция вирусов Инко, Тягиня и зайца беляка, а также отличных от них антигенных вариантов. С 1986 по 1992 гг. в стране было диагностировано около 300 случаев заболеваний, вызванных вирусами Тягиня, Инко, зайца беляка и недифференцированными вирусами КСГ. Причем, значительная доля заболеваемости, особенно в лесной зоне страны, связана с вирусом Инко.
В классификации вирусов КСГ, предложенной Ч. Калишером в 1983 году, и основанной на данных серологических реакций, вирус Инко входит в комплекс (относится к типу) калифорнийского энцефалита. В течение последних лет были получены новые данные (М.С. Недялкова и С.Д. Лебедева) по антигенной характеристике типов, вариантов и штаммов, а американскими авторами Cinna, Shope и др. (1996) проведено секвенирование части сегментов вирусов КСГ. Результаты этих более поздних исследований указывают на близость вируса Инко к вирусам комплекса Мелао.
Значительный прогресс в изучении вирусов КСГ был обусловлен применением моноклональных антител (МКА) к вирусам Ла Кросс, Тягиня и Джеймстаун Каньон: установлено антигенное строение гликопротеина G1 вируса Ла Кросс, выяснена биологическая роль поверхностных гликопротеинов G1 и 62, показана антигенная неоднородность исследованных штаммов.
Актуальность темы диссертации определяется серьезным, но далеко не полностью изученным значением КСГ в патологии человека, их широким распространением, выраженной антигенной вари-
~ . -
абельностью и необходимостью совершенствования их классификации, методов дифференциации и специфической диагностики, вызываемых ими инфекций.
Цель и задачи исследования
Цель настоящей работы заключалась в получении гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к вирусу Инко, изучении свойств МКА и определении их способности дифференцировать вирусы КСГ.
Конкретные задачи исследования предусматривали:
получение гибридом продуцирующих МКА к вирусу Инко;
изучение свойств, полученных МКА, включая их активность в серологических реакциях;
изучение взаимодействия МКА с вирусами КСГ;
изучение взаимодействия МКА с Инко-подобными штаммами;
анализ полученных результатов и их интерпретация в сравнении в данными литературы.
Научная новизна работы
Впервые получена панель МКА к вирусу Инко. Все типы МКА охарактеризованы в отношении класса иммуноглобулинов, направленности к вирусным белкам, активности в серологических реакциях и эффективности использования для дифференциации вирусов КСГ и Инко-подобных штаммов.
На основании этих данных установлен критерий дифференциации вируса Инко от других вирусов КСГ и принадлежности идентифицируемых штаммов к вирусу Инко.
В результате использования МКА Инкі, 2, 3, 4 и 5 в реакциях иммуноферментного анализа (ИФА) и иммунофлюоресценции
(МФА) была установлена следующая последовательность, . отражающая антигенную близость изученных вирусов КСГ и вируса Инко: Джеймстаун Каньон, Лумбо, Калифорнийского энцефалита, Ла Кросс, Кейстон, Тягиня и зайца беляка.
При изучении в серологических реакциях с МКА 12-ти Ин-ко-подобных штаммов из различных регионов России, 8 из них были идентифицировании как штаммы вируса Инко, а 4 - как значительно отличающиеся штаммы. В первой из этих групп наблюдалась антигенная штаммовая вариабельность.
Практическая ценность работы
На основе полученных МКА к вирусу Инко созданы экспериментальные тест-системы для выявления специфического антигена и быстрой идентификации штаммов и вирусов КСГ методами МФА и ИФА.
Основные положения, выносимые на защиту
-
Впервые получена панель МКА к вирусу Инко.
-
Все типы МКА всесторонне охарактеризованы по следующим параметрам: класс секретируемых иммуноглобулинов, направленность к специфическим вирусным белкам, активность в серологических реакциях.
-
При помощи МКА Инкі, 2, 3, 4 и 5 в МФА возможна четкая дифференциация вирусов Калифорнийского энцефалита, Ла Кросс, зайца беляка, Тривиттатус, а при помощи МКА в ИФА удается дифференцировать вирусы зайца беляка, Тягиня, Лумбо, Кейстон и Тривиттатус. В реакции нейтрализации МКА Инк4 качественно дифференцируют вирус Инко от остальных представителей КСГ.
-
При серологической идентификации 12 Инко-подобных
- 4 -штаммов при помощи панели МКА к вирусу Инко установлено, что 8 из них являются штаммами вируса Инко. а 4 - своеобразными представителями КСГ.
5. Сравнительное изучение вирусов КСГ и Инко-подоОных штаммов с помощью МКА позволило предложить цифровые критерии, отражающие степень принадлежности исследуемых штаммов к вирусу Инко.
Апробация работы
Апробация работы состоялась на заседании Совета предварительной экспертизы диссертационных работ по медицинской вирусологии и эпидемиологии при Институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН 23 апреля 1998 г.
Публикации.
Материалы диссертации отражены в трех печатных работах.
Объем и структура диссертации.