Введение к работе
Актуальность темы. В системе мероприятий, применяемых для борьбы с ящуром, важное значение имеют меры по специфической профилактике заболевания, экспрессной диагностике и достоверному определению типовой и штаммовой принадлежности возбудителя. В настоящее время используются вакцинные и диагностические препараты, полученные на основе целого вириона. Имеются многочисленные публикации, указывающие на то, что данные препараты не лишены недостатков Одним из перспективных направлений работы по созданию безопасных и эффективных препаратов является получение антигенов путем химического синтеза.
Антигены, созданные на основе синтетических пептидов, имеют ряд преимуществ: они неинфекционны, методы их синтеза позволяют получать препараты воспроизводимого качества, хранение пептидов при плюсовых температурах не приводит к потере специфической активности. Разработка вакцинных и диагностических препаратов на основе синтетических пептидов невозможна без предварительного изучения в тестах in vitro иммунобиологических свойств большого числа фрагментов, содержащих антигенные детерминанты полипептида VPj вируса
'ящура. Использование иммунохимических методов анализа позволяет проводить скрининг и выявлять пептиды, прнгодние для создания на их основе вакцинных препаратов и диагностических наборов.
Одним из таких методов является раднонммуноанализ (РИА), который характеризуется высокой специфичностью, методической простотой и точностью измерений. Указанные преимущества РИА способствовали выбору его в качестве метода исследования антигенов вируса ящура и антител к ним.
Цель и задачи исследований. Основной целью исследований являлись оценка качества и определение количественного содержания синтетических пептидов, вириона вируса ящура ц антител к ним с использованием радпоиммуноаналнза.
Для достижения поставленной цели необходимо было' решить следующие задачи:
подобрать оптимальные условия получения меченных 41 синтетических пептидов, вирионов вируса ящура, антител к ним и белка А;
разработать методику постановки радиоиммуноанализа с использованием поликлональньгх и моноклональных антител, 140S частіш и г.интетичестах псгггддііі - фрагментов VFj вируса
ящура разных типов;
изучить антигенные свойства синтетических пептидов-фрагментов VPj вируса ящура типов А, О и Азия 1;
выявить связь между антигенными свойствами пептидов, титрами антипептидных, в том числе вирусспецифич-ных антител с одной стороны - титрами вируснеитрализугощих антител и протективными свойствами пептидов с другой;
провести сравнительное изучение аффинности антител, полученных на внрнон и синтетические пептиды - фрагменты VP [ вируса ящура типа А;
на основе РИА разработать методики: выявления и количественного определения 140S частиц вируса ящура; определения специфичности антител в сыворотках крови животных с применением синтетических пептидов - фрагментов VPj вируса ящура типов А, О и Азия I.
Научная новизна. Впервые с применением РИА на
полиэтиленовой пленке изучены иммунобиологические свойства синтетических пептидов - фрагментов VPj отечественных
производственных штаммов вируса ящура типов А, О и Азия 1 и конструкций, созданных на основе пептидов. Проведена оценка их антигенності! п способности индуцировать антитела, реагирующие с пептидом и вирусом. На основе полученных результатов разработаны критерии отбора синтетических пептидов для проверки их иммуногепноп и протективнои активности на лабораторных и естественно-восприимчивых к ящуру животных с целью создания пептидных вакцин и
диагностических препаратов. Получены новые данные по выявлению антител в сыворотках крови переболевших ящуром или вакцинированных животных в РИА с применением синтетических пептидов - фрагментов VPj вируса ящура
А22№550, OjJsfel94 и Азия 1 №48. Выявлена закономерность, показывающая, что аффинность антипептидных антител, полученных от защищенных при контрольном заражении животных выше, чем от незащищенных.
Практическая значимость. В процессе выполнения исследований выбраны критерии и разработан метод оценки качества и определения количественного содержания антигенов вируса ящура и антител к ним. Полученные результаты исследований позволили предложить "Методику по применению радиоиммунологического анализа на полиэтиленовой пленке для определения ящурных антигенов и антител" и "Методику оценки специфической активности антител к вирусу ящура в сыворотках крови животных с применением РИА и синтетических пептидов", которые утверждены директором института. Подготовлен набор для дифференциации типов вируса ящура, отмеченный серебряной медалью ВДНХ СССР. Использованные методические подходы могут быть рекомендованы для проведения аналогичных работ как с вирусом ящура других типов, так и с другими вирусами.
Апробация и публикация результатов. Результаты
исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на
конференции "Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии"
(Владимир, 1988), одноименной конференции молодых ученых и
специалистов ВНИЯИ и ВНИИВВиМ (Владимир, 1987), на II-
симпозиуме специалистов стран - членов СЭВ по проблемам
"Профилактика и эффективная борьба с ящуром, а также
создание высокоэффективных противоящурных вакцин" (София,
1988), на научно-теоретической конференции молодых ученых
ВНИЯИ "Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии"
(Суздаль, 1990), на международном симпозиуме "К новой
стратегии борьбы с ящуром" (Владимир, 1991), на научной
конференции "Вопросы ветеринарной вирусологии,
4 микробиологии и эпизоотологии" (Покров, 1992), на Всероссийской научно-практической конференции "Вирусные болезни сельскохозяйственных животных" (Владимир, 1995), на заседаниях Ученого Совета ВНИЯИ (ВНИИЗЖ) 1987-95гт.
Публикации по работе. По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ.
Структура и объем работы. Диссертация содержит
следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и
методы, результаты а их обсуждение, выводы, список
литературы, включающий ссылок на источники литературы.