Введение к работе
Актуальность проблеми. Среди шгфекциошьк вирусных болезней птиц грипп является одной из наиболее актуальных (Осидзе, 1980). Эпизоотическая оостаювка по гриппу птиц усугубилась в последние четыре года, в частности, в 10 странах Африки, 5 Азии и США (Макарович и др., 1985). В 1983-84 г.г. напряжеішая эпизоотическая ситуация возникла среди домашних птиц в США и среди индеек в Ирландии ( Ecroade et ai., 1984). В СССР выбраковка птицы за счет патогенності! вируса гриппа А шестого сероподтила составила 10-15 %, летальность 10-12 %, снижение яйценоскости - 45-50 % (Дьяконова и др., 1983).
Все сказанное свидетельствует об актуальности изучения гриппа птиц, и в частности особенностей его возбудителей.
Структура и-строение вирусов гриппа птиц подобны вирусам гриппа человека и других млекопитающих. Поверхность частиц покрнта двумя типами выступов, один из них гемагглютшшн (ГА), другой нейра-мшщпаза (НА ) ( Robert et alo„ 1984 ).
ГА является одним из самых крупных белков в вирионе, на его доли приходится 25-35 % белков» Он ответственен за прикрепление вирусной частицы к клетке хозяина и вовлекается в начальные стадии инфекции, ймешю против ГА направлены антитела, нейтрализующие ин-фехционность вируса гриппа ( Choppin et al.» 1978 ). В виду столь важной роли гем агглютинина в развитии инфекции» структура этого белка привлекала внимание многих исследователей, и к настоящему времени в структурном' отношении он наиболее изучен { ffebeter si el., 1986 ).
Второй поверхностный антиген вируса гриппа - нейраминидаза.
Этот фермент в составе вируса гриппа известен с 1942 года, однако
функциональная роль его в репродукции вируса до сих пор в полной
мера не выяснена. Предполагается, что главная функция нейрашшида-
зн - предотвраідєшіе агрегации вирусных частиц на поверхности клеток.
Такие известно, что нейраминидаза играет большую роль в иммунологии
и патогенезе заболевания ( КШюигпе et el., 1987 ). Опрєде-
лошіе антшкзйрамяшвдазных антител является ванным фактором в диагностике гриппозной инфекции у птиц, так как антинейраминидазные антитела сохраняются в течение длительного времени и титры этих антител возрастают при встрече с родственным антигеном. Поэтому вполне оправдано титрование их с цэльга ретроспективной диагностики
и определения иммунного статуса птицопоголовья. На сегодня такой диагностики в птицаводотве нот.
Цель .я задачи -работа. Целью настоящих исследований явилось разработка способа получения препаратов яойрадашвдаз вирусов грш птиц пригодных дая использования их в.реакции подавления ноііргші дазиой активности с цоль^индикации шгашойрадишодгопых шгептол.
В соответствии о целью работы поставлены слодувдю задачи:
-
Определить температуру шіактивацші іюйроишщдазного ко;,гас понта в различных вирусах CTHHgQ z-TMjqq) и сопоставить нолучеш; данные о итогами аналогичного исследования вирусов гриппа чолової",
-
Сравнительно охарактеризовать гемагглтоїишругациії и noilpaw нидазный компоненти по юс гермочувствителыюсти в различных штамм
-
Разработать иа-основе всех полученных данных способ получ ния нейрашнидазного компонента вирусов гриппа птиц, как антигена пригодного для постановки реакции подавления цеіїрашшидазіюіі акти, нооти о сиворотками, птиц.
-
Выявление антинейрамшщдазных антител в РШГА о использованием препаратов непрамшшдаз ві-фуса гриппа, в пшориммуїшііх и полевых сыворотках птиц.
Научная новизна. Установлено, что уровень нейршпшдазной активности разішх штаммов вирусов гриппа птиц колебался в весьма . широких пределах, и эти колебания по корродируют с уровнем гемаг-глгатииирующей и ипфекциоішой активпооти..
Впервые обнаружено, что нейршинвдаза 7 иослодолагшкх эталонных штаммов вируса гриппа птиц, в отличив от большинства вирусов человека, более термосгабильна, чем гемагглютишш тох :::о вирусов.
Впервые установлено, что прогревание впруссодораощсК аллап-тоисной жидкости при температуре инактпвацип гемагглютпилна при-. водат к получению препаратов нойрамшшдаз вирусов гриппа тпц, при годных для постановки реакции подавлешш непраашщдазпоп аістішпост
Установлено наличие шишопрошптдазшос антител п половых енворотзеах птиц, из неблагополучных .чо гриппу нтпцехоэяйств.
Практическая иенность. Разработан новин способ приготовления препаратов пойрампщаз вирусов гриппа птиц, прпгодтх дли постановки реакции подавления пойраыгащдазпоп активности с сыворотками больных гриппом птиц. Сущность опособа приготовления сс-отатала сод гаю зачла: па ггзобротешэ (Я 4483390/I5-I35G40 Положительное раясн
видачо авторского овидэтольствз от ЗІ.07.S? г.} и явится основой охнологичеохой документации на производство препаратов (йлюлнена і соавторстве с Голубевш Д.Б...который подготовил общие сведения ю способу получения нейрашшдаз л предложил использовать ангягепы і РПШ.
Составлены методические рекомендации по использованию препара-:ов пейрамшшдаз вирусов гриппа птиц в реакции подавления кейрами-шдазной активности (РПНА) о целью,выявления антикейраминадазншс , штитол, одобрению Ученым советом Бсесоюзного НИШ птицеводства СЗ апреля 1989 г.- Указанные рекомендации вошли в наставление по лабораторной диагностике гриппа.птиц, что даст возможность унифи-[щ>овать, повысить качество и ускорить диагностику гриппа птиц в промышленном птицеводстве.- (Выполнены в соавторстве с ІЬлубєвнм Ц.Б., который подготовил общие сведения об использовании антигенов в ША),
Апробация -работе. Материалы,диссертационной работы долокены па производственной конференции молодых ученых и специалистов БНИВИП "Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней птиц" (Ленинград, 1987 г.), па научном семинаре "Использование современ- . пцх методов в исследовании в биологии" (Ленинград, 1988 г.), на Методическом и Ученом советах Всесоюзного НИШ птицеводотва (Ленинград, 1987, 1988 г.г.).
Объем и структгоа т>аботц. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и включает в себя введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения. Диссертация иллюстрирована 7 рисунками и 24 таблицами. Віблиографический указатель включает 270 источников литературы, в том числе 204 шгастранных автора.
Оставите полог-екия вцносидае на заштт.
-
Нейрамшшдаза вирусов гриппа птиц обладает большей тормо-стабилыюстью, чем'гшагглютикші, в отличив от вирусов гриппа человека, где наблюдается обратное соотношение.
-
Приготовление вирусеодержащей аллаотоисной здкости при температуре инактивации гемагглютянина позволяет получить препараты исйргжпшдаз вирусов гриппа-птиц, пригодные для постановки реакции подавления іюйра\шидазной активности,с полевыми сыворотками.