Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Открытие принципа активной иммунизации дало человечеству чрезвычайно сильное оружие борьбы с инфекционными болезнями, включая и болезни вирусной этиологии.
В течение многих десятилетий главной мерой профилактики ряда инфекций является специфическая вакцпнопрофплактика, поэтому число усовершенствованных препаратов постоянно растет.
До начала проведения массовой вакцинации корь и эпидемический паротит считались очень тяжелыми заболеваниями, они были распространены повсеместно, за исключением удаленных и островных популяций. Во всех странах мира крупные вспышки кори и эпидемического паротита происходили ежегодно, в сельских районах они возникали реже. В раннем возрасте этими парамиксовирусными инфекциями заражался почтп каждый ребенок.
После того как в бывшем СССР в 1967 г. началась проводиться массовая вакцинация против кори, заболеваемость ею сократилась в 8-16 раз. Массовая вакцинация против эпидемического паротита, начавшаяся в нашей стране в 1976 и 1977 гг. и возобновившаяся в 1981 г., снизила заболеваемость в 4-16 раз по сравнению с минимальными показателями довакцинального периода.
Успехи вакцпнопрофилактшш были неоспоримы. Однако, складывающуюся в последнее десятилетие эпидемиологическую ситуацию по кори и эпидемическому паротиту однозначно оценить было нельзя. С одной стороны наблюдалось снижение заболеваемости, с другой - рост серонегатпвных людей среди ранее привитых, отмечалось "повзросленде" кори и эпидемического паротита и, в ряде случаев, утяжеление клинических проявлений болезни, увеличивалось число серонегатив-ных лиц среди беременных женщин и, как следствие этого, рождались неиммунные к кори и эпидемическом}' паротиту дети, что, в свою очередь, сказывалось на проценте детской смертности в раннем возрасте. Тенденция роста заболеваемости корью в начале 80-х годов была так ярко выражена, что привела к введению во многих странах мира, в том числе и в бывшем СССР в 1986 г., повторных прививок. Заболеваемость корью снизилась, но не надолго. Практика последних лет показала, что рост заболеваемости корью ( 1993 г. ) и эпидемическим паротитом ( 1996, 1997 гг. ) нельзя объяснить только социальными переменами последних лет. Накопление значительной прослойки не-
вакцинирозанных людей происходило в течение всего последнего десятилетня. В настоящее время очевидно, что рост заболезаемостп этими инфекциями был связан ие только с низкой привптостыо населения, нарушениями в храненип, транспортировке вакдпн. Существовало и ряд других, не менее важных, причин, устранение которых следует вести в следующих направлениях. Во-первых, необходимо совершенствование существующих вакцин. Прслоде всего - применение термостабильных вариантов коревой и паротитной вакцин, улучшение качества вакцинного вируса - использование генетически однородного варианта. Во-вторых, внедрение в практику здравоохранения нового, более физиологичного пути введения коревой и паротитной вакцин и, в-третьих, их ассоциированного использования. В-четвертых, известно, что любая вакцинация, помимо развития специфического иммунного ответа, сопровождается достаточно глубокой перестройкой иммунной системы, такой, как появление повышенной чувствительности к заражению гетерологичными возбудителями бактериальной, вирусной и грибковой природы, и повышенной чувствительностью к отдаленной встрече с гомологичным инфекционным агентом, развитием аллергических и аутоиммунных состояний в период вакцинации и после нее.
В последние годы стало известно, что вакцинация живыми коревой и паротитной вакцинами приводит к количественным изменениям соотношений, функций и взаимодействий между иммунокомпетентными клетками. Эти изменения вызывают формирование временного имму-нодепрессивного состояния, модулируют иммунный ответ вакцинированных по отношению к другим инфекционным агентам и появлению аллергии.
Необходимость всестороннего изучения специфического и неспецифического клеточного реагирования на вакцинный препарат стала очевидна особенно сейчас, в условиях сниженной иммунореактивности детского организма на фоне ухудшения общей экологической обстановки как у нас в стране, так и во всем мире. Существующий в настоящее время набор иммунологических методов огромен, но его использование в России до сих пор не носит системного характера. Чаще всего испытания проходят на разных моделях, в разных условиях и полученные результаты оказываются мало сопоставимыми, а подчас 'и противоречивыми. В этой связи проведение исследований по адекватной оценке иммунной системы людей, вакцинируемых парамиксовирусными пре-
паратами, а также людей, находящихся в очагах этих инфекций имеет большое теоретическое и практическое значение. Полученные данные позволят не только по новому рассмотреть проблему формирования поствакцпнального иммунитета к кори и эпидемическому паротиту, понять причины невосприимчивости организма к этим инфекциям, но и по другому взглянуть на проблему совершенствования вакцинопро-филактики.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Основная цель настоящей работы состояла в поиске дальнейших путей совершенствования вакцин и методов важцпнопрофплактпкп кори и эпидемического паротита посредством разработки адекватных критериев оценки иммунологической эффективности и иммунологической безопасности существующих и усовершенствованных коревой и паротптной вакцин, новых способов их аппликации, а также в углубленном изучении ряда иммунологических реакций, индуцированных у привитых и ревакцпнированных этими препаратами.
В соответствии с поставленной целью в задачи работы входило:
-
Разработать систему иммунологического мониторинга при апробации живых коревой и паротитной вакцин и их усовершенствованных вариантов ( с новым термостабилизатором ЛС-18, с генетически однородным штаммом вируса кори МОСКВА-5, с ассоциированным вариантом паротитно-коревой вакцины).
-
Изучить характер, длительность и диапазон специфических клеточных и гуморальных ( общих и местных ) реакций при вакцинации и естественной циркуляции диких штаммов вирусов кори и эпидемического паротита.
-
Разработать микромодификацию метода реакции бластной трансформации лимфоцитов для определения функционального специфического и неспецифического состояния Т- и В-систем иммунитета людей, привитых парамиксовпрусными вакцинами и больных корью и эпидемическим паротитом.
-
Разработать простые, доступные для широкого круга практических вирусологических лабораторий методы ранней дифференциальной диагностики коревой и паротитной инфекций и оценки длительности и напряженности поствакцинального иммунитета.
-
Оценить реактогенность, антигенную активность, иммунологическую эффективность и безопасность живых коревой п наротитноп вакцин,введенных интраназально с целью ревакцинации.
-
Установить и дать иммунологическую оценку критериям защищенности от забо;іеванпя корью и эпидемическим паротитом отдельных лиц и отдельных коллективов в современных условиях.
-
На основании всестороннего п комплексного изучения особенностей коревой и паротптной инфекций в современных условиях выяснить пути возможного повышения эффективности вакщшацип против корн и эпидемического паротита.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Проведенное экспериментальное исследование впервые позволило оценить реактогенность, антигенную активность, эпидемиологическую эффективность, иммунологическую безопасность термостабильных вариантов живых коревой и паротит-ной вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 и ишгунологическую эффективность ревакцинации термостабильной живой коревой вакциной. Апробированы латая коревая вакцина с новым генетически однородным штаммом вируса кори МОСКВА-5 и ассоциированная паротитно-коревая вакцина (АПКВ ). Определена реактогенность, иммунологическая эффективность и иммунологическая безопасность интраназально введенной живой коревой вакцины ( ЖКВ ) из штамма ЛЕНИНГРАД-1G ( Л-16 ) на взрослых и детях при ревакцинации и живой паротитной вакцины ( ЖПВ ) из штамма ЛЕНИНГРАД-3 ( Л-3 ) на взрослых людях. Впервые была показана перспективность данного способа введения вакцины при крупномасштабной ревакцпнащш против кори.
Показано, что невосприимчивость к парамиксовирусным инфекциям - это многофакторное явление, зависящее как от состояния клеточного, гуморального и особенно местного звена специфического иммунитета. Впервые дана оценка роли и влияния диких штаммов вирусов кори и эпидемического паротита на адаптационные возможности иммунной системы организма привитых и переболевших в условиях прямого, постоянного воздействия на нее парамиксовирусов.
Впервые апробирована и научно обоснована система иммунологического мониторинга при испытании усовершенствованных коревой и паротитной вакцин, обеспечивающая на современном уровне оценку их иммунологической безопасности и иммунологической эффективности.
Отработаны условия постановки реакции бластнои трансформации лимфоцитов, реакции пнгибпрования нейраминидазной активности яротивопаротптньгх антител. Качественно модифицирован непрямой метод флюоресцирующих противокоревых антител. Использование данных методов позволило впервые получить адекватную характеристику иммунологического воздействия диких циркулирующих вирусов, а также коревой и паротитнои вакцин, на человека, выявить и охарактеризовать важный реабилитационный постпрпвивочный период.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. В строго контролируемых шифрованных эпидемиологических наблюдениях установлено, что живая коревая вакцина из генетически однородного штамма МОСКВА-5, отвечает требованиям предъявляемым к вакцинным препаратам. Результаты исследований легли в основу Фармакопейной статьи '' Вакцина коревая культуральная живая сухая" ( НТД на производство ), утвержденной 01.12.1994 г.
Испытания термостабильных вариантов живых коревой и паротитнои вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 показали, что изученные вакцины отвечают требованиям ВОЗ, предъявляемым к вакцинным препаратам. Полученные результаты легли в основу нормативно-технических документации на производство живой коревой и живой па-ротптной вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 и в Фармакопейные статьи - " Вакцина коревая культуральная живая сухая " и " Вакцина паротитная культуральная живая сухая ", утвержденная 20.02.1996 г.
Результаты работы нашли отражение в следующих документах:
методические рекомендации: " Использование модифицированного радиометрического мпкроварианта реакции бластнои трансформации лимфоцитов в исследованиях клеточного поствакцпнального иммунитета ", ГУКИ МЗ CCCP,No 28-6/3 от 28.11.1983 г.,
методические рекомендации: " Реакция ингибирования нейрамини-дазной активности для определения антител у переболевших и привитых паротитнои вакциной ", Ученый Совет НИИ ВП РАМН, 12.11.1987 г.,
авторское свидетельство: " Штамм культивируемых клеток человека для выявления антител к вирусу кори ", No 1428765 от 08.06.1988 г-,
авторское свидетельство: " Штамм культивируемых клеток челове-
ка, используемый для выявления антител к вирусу кори ", No 1433978 от 01.07.1988 г.
АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ. Основные положения и выводы диссертационной работы доложены на научных конференциях и заседаниях Ученого совета НИИ ВП РАМН ( 1989, 1991, 1993, 1995, 1996, 1997 гг.); заседаниях проблемной комиссии " Корь, паротит" ( 1989, 1991,1992, 1993, 1994 гг. ); 62 Сессии общ. собрания АМН СССР на секции " Фундаментальные Проблемы инфектологип" ( 1991 г. ); Всесоюзной конференции "Поствакцинальные осложнения: патогенез, профилактика, лечение" ( Ленинград, 1991 г. ); Всесоюзной конференции " Актуальные проблемы диагностики и профилактики кори, эпидемического паротита и краснухи" ( Москва, 1992 г.); Международном конгрессе Европ. общества против вирусных заболеваний ( Страсбург, 1992 г. ); IX межинстптутской научной конференции " Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" ( Челябинск, 1992 г. ); Всероссийской научной конференции " Актуальные проблемы инфекционной патологии" ( С.-Пет., 1993 г. ); международном конгрессе по клинической вирусологии ( Стокгольм, 1994 г. ); Европейском конгрессе "Прогресс в вирусологии 1995 г." ( Прага, 1995 г.); 1-й нац.конференции Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов ( Москва, 1997 г.).
ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. По теме диссертации опубликовано 57 печатных работ.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертационная работа изложена на 311 страницах машинописного текста, иллюстрирована 57 таблицами и 3 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы ( три главы ) и 5 глав собственных исследований, заключения, выводов и библиографического указателя, включающего 340 отечественных и зарубежных источников. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ