Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Моноклональные антитела к структурным и неструктурным белкам вируса желтой лихорадки и их биологические свойства Турчинская, Анастасия Львовна

Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Турчинская, Анастасия Львовна. Моноклональные антитела к структурным и неструктурным белкам вируса желтой лихорадки и их биологические свойства : автореферат дис. ... кандидата биологических наук : 03.00.06 / Ин-т вирусологии.- Москва, 1991.- 22 с.: ил. РГБ ОД, 9 91-6/2981-x

Введение к работе

Актуальность работы. Вирус кептой лихорадки /Щ/ является-эндемичным в странах Африка и йгцой Америки и вызывает тяжелейшее заболевание, которое во многих случаях приводит к летальному исходу. В настоящее время эта инфекция приобрела глобаллчое значение ввиду быстрого и интрисивного передвижения людей в современном мире, Ключевым звечом в'программе борьбы с этим инфекционным заболеванием Яізляется изучение биологических свойств вируса М, молекулярно-<5иологических особенностей вирусной репродукции и структурно-функциональных свойств вирусных белков. Для проведения таких исследований особенно перспективным является применение моноклональных антител /МКА/. Получение и использование !ЖА к основным антигенам вируса Ж - белкам E.NS1, NS3, и SS5 позволит репить не только чисто теоретические задачи, но игеет и большое значение, в частности, для усовершенствования методов дифференциальной диагностики флавивирусных инфекций и выяснения вклада каждого конкретного белка в формирование противовирусного иммунитета.

В настоящее время .ЖА к белкам Е и НЯ1 вируса ЯЛ получены

Шлезингером и Голдом /Schlfsinger J.J.et al„,1983; Gould E.A. et

al.,1936 /. Клон гибридных клеток к этому вирусу создан также к в нашем институте /Новохатский А.С. и др.,1987/. Однако, ввл-ду того, что какцый-набор МКА по-своему уникален, каждый их вид обладает индивидуальными, неповторимыми свойствами, получение широкой панели МКА к вирусу ЗЛ имеет большое значение

для изучения антигенов флавивирусов и идентификации вирусных итамглов. Особенно интересным представляется получение МКА и цальнойгаее исследование с их помощью одного из наименее изученных антигенов - белка НЕ5, который, по-видимому, играет важную роль з репродукции в;шусов этого семейства, являясь РНК-

зависішой РНК-полимзразой.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось получить гибрвдомы к белкам Е и NS5 вируса ЗЯ, изучить биологические с ойства сенретируемых гибрадомами ЖА, применить 97л ?ЛКА для исследования ряда структурно-функциональных характеристик антигенов Е и NS5 и использовать эти ЫКА в качестве диагностических препаратові

Поставленная цель обусловила необходимость решения следующих задач:

получить и отобрать стабильные ктаммы гибридных клзток-продуцектоз моноклоналъкых антител к белкам Е hM

изучить серологические и биологические характеристики полученных МКА.

проанализировать внутриклеточную локализацию и динамику накопления белка ws5 с помощью МКА.

охарактеризовать антигенные связи в семействе FlaviviridM и провести эпптопное картирование белка NS5.

- определить возможность использования полученных Ї'ЛКА в
качестве диагностических препаратов.

іЧаушая новизна. Впервые получена панель /12 гибридом/ продуциру-^цих ЇЖА. к бейку NS5 зіфуса Ш. Используя эти МКА, изучены некоторые физико-химические к биологические свойства этого белка. Установлено, что максимальное накопление белка NS& в клетках наблюдается через 48 часов после заражения. При изучении внутриклеточной локализации этого белна методом непрямой иимунофлюореецэнции впервые было показано свечение ядер. Из полученной серии МКА только ДЕа /ГЗЛ-10 и ГЖЛ-12/ взаимодействовали, кроме вируса -11, еще я с вирусам Нтайя, остальные І.1КА э»ой Cteprai не давали перекрестных реакций с вирусам кле-

-5-щевого энцефалита, японского энцефалита,' Западного Нила, Уганда Нтайя и денге 4. С помощью панели МКА серии ГЗЛ выявлено три антигенных эпитопа на неструктурном белке HS5„ МКА к белку NB5 были неактивны при проведении теста пассивной защиты мышей.

Практическая ценность. Получены линии стабильных гибридом, продуцирующие МКА к белкам Е и NS5 вируса ЖЛ. Гибрвдомы, секре-тиругалие МКА, использованы для препаративного накопления иммуноглобулинов и приготовления на их основе высокоспецифичных иммунодиагностических реагентов.

Препараты МКА к вирусу И, обладающие видоспецифичеокой активностью, предназначены для экспресс-индикации вируса Ш непрямым методом игялунофлюоресценции в инфицированных клетках культуры ткани, органах и тканях животных и членистоногих. Разработана "Инструкция по применении моноклоналъной асцитной жидкости к вирусу HI для реакции непрямой иммунофлюоресценции, мышиной, сухой".

Препараты МКА к вирусу ЕЕ используются в лабораторних исследованиях для изучения свойств основных антигенов этого вируса в Институте вирусологии им.Д.И.Ивановского АМН СССР, а таккз в Институте вирусологии и микробиологии окружающей среди з Оксфорде.

Основные положнния выносимые на защиту:

  1. Получение моноклональннх антител к белкам Е и N3 5 вируса ІЛ позволяет проводить-дальнейшее изучение свойств этих ьл-гкгенов, а также особенностей вирусной репрг :гукции.

  2. 1ЛКА ГйЯ-16 к белку В являются видоспецифичными для вируса Ел. Эти ЫКА активны в реакциях торможения гемагглютинации а радиального гемолиза, но не нейтрализуют вирус 201. МКА к 5елку t's 5 вступают в реакции непрямой иммунофлюоресценции и

—о—

иммуноф^рментного анализа и не защищают мышей при проведении теста пассивной защиты.

3. С помощью ЖА к белку NS5 вируса Ш выявлено три анти
генних эпитопа а этом белке: перзый - тестируется ІЛКА Г2Л-10
и ГКЛ-І2 и присутствует, кроме вируса ІЛ, еще и на вирусе

іКтайя; второй - обнаруживается ЖА ГЗІ-1, ГИ-5, ГМ-17 и ГІЛ-19 и характерен для всех штаммов вируса ЗЛ; третий. - определяется ГЭ1-9 и ГЖ-14 и имеется на всех штаммах вируса НЕ, кроме штамма S02S77.

  1. Белок '^5 вируса Ж локализован как в цитоплазме, так к 2 ядрах инфицированных клеток млекопитающих. Максимальное накопление этого белка в клетках наблюдается через ^8 часов после заражения.

  2. Применение ;ЖА серии Г2Л позволяет получить высокоспе-цифичкые диагностические препараты для выявления вируса И.

Апробация диссертации состоялась- 27 февраля 1ЭЭ1 г. на заседании Совета предварительной экспертизы диссертационных работ при Институте вирусологии им.Д.И.Ивановского АШ СССР.

Материалы исследований по теме диссертации были представлены на мелдународном сі«;гозігуме "Арбовирусы и арбовіфуские инфекции", в Москве, октябрь 1989 г., на Американском обществе вирусологов 1591г., на всесоюзном симпозиуме по арбовирусам в Лнткино, март 1991 г., на конференциях молодых ученых Института вирусологии им.Д.И.Ивановского АІЛН СССР в 1937 и 199С1 гг.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 4 печатных работы.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных :ісследований, обсуждения полученных

-7-результгтов, еызодое, списка литературы. Последний включает 203 источников отечественной и зарубежной литературы. Диссертация вюшчает 21 таблицу и 11 рисунков.