Введение к работе
Актуальность проблемы. В конце 70-ых годов XX века впервые в истории медицины была достигнута полная ликвидация одного из самых тяжелых заболеваний человека -натуральной оспы. Объявлению об этом событии, сделанному в 1980 году на XXXIII Всемирной Ассамблее Здравоохранения (ВАЗ), предшествовала двухлетняя работа по выявлению и обследованию, в том числе и лабораторному, всех подозрительных на оспу случаев, подтвердившая отсутствие оспы на земле. Одним из важных последствий этого события явилась рекомендация ВАЗ о прекращении прививок против оспы во всех странах. Параллельно с этим XXXIII ВАЗ был принят ряд рекомендаций на постэрадикационный период, среди которых, в частности, была рекомендация по установлению эпиднадзора, в ходе которого должны были обследоваться все возникающие случаи подозрительных на оспу заболеваний. В соответствии с этой же резолюцией начал осуществляться специальный проект по изучению открытой к этому времени отечественными учеными (Маренникова С.С. и соавт.,1971; Ладный И.Д.И соавт.,1972) новой инфекции - оспы обезьян, клинические особенности которой сходны с таковыми
4 у натуральной оспы. Было рекомендовано также продолжение
эпидемиологического надзора за инфекциями, вызванными
другими поксвирусами, а также дальнейшее проведение
научных исследований в этой области.
Как было установлено (Маренникова С.С. и соавт.,1971, 1984, 1985, 1989; Ходакевич Л.Н.,1990; Шелухина Э.М.,1980), возбудители таких заболеваний, как оспа коров и оспа обезьян, имеют природные резервуары среди животных. С прерыванием трансмиссии оспы среди людей и постоянным увеличением числа неиммунных к оспе лиц в результате отмены оспопрививания вероятность возникновения этих инфекций потенциально возрастает. Что касается оспы обезьян, то для нашей страны угроза заражения этой инфекцией существует в связи с возможностью ее заноса от животных, привозимых из-за рубежа и находящихся в тесном контакте с человеком.
Все это обусловливает, с одной стороны, важность диагностических исследований, а с другой - необходимость совершенствования методов диагностики, которые позволили бы быстро расшифровать этиологию оспоподобного заболевания. Основные исследования по диагностике ортопоксвирусных инфекций при осуществлении программы сертификации ликвидации оспы, постэрадикационного эпиднадзора и проекта ВОЗ по изучению оспы обезьян у людей проводились двумя Сотрудничающими центрами ВОЗ в Атланте (Центр по борьбе с болезнями) и в Москве (НИИ вирусных препаратов РАМН); где эта работа выполнялась с
5 участием автора настоящего исследования. Попутно отметим,
что в 1981 году ВОЗ был направлен в национальные органы
здравоохранения документ ("Поведение при подозрительных
на оспу случаев в период после ее ликвидации"), в котором
подчеркивалась важность электронномикроскопических
исследований как метода экспресс-диагностики.
Цель и задачи работы. Цель работы заключалась в усовершенствовании метода электронной микроскопии при диагностике поксвирусных инфекций, оценке его эффективности.
Кроме того, было необходимо изучить особенности внутриклеточных включений, образуемых некоторыми изолятами ортопоксвирусов, выделенными от людей и животных на территории нашей страны.
Для выполнения поставленной цели решались следующие основные задачи.
-
Проведение электронномикроскопических исследований при массовых обследованиях подозрительных на оспу заболеваний людей в период сертификации ликвидации оспы, выполнения постэрадикационного эпиднадзора и проекта ВОЗ по изучению оспы обезьян у людей, а также при расшифровке спорадических оспоподобных заболеваний в нашей стране. .
-
Проведение исследований, направленных на повышение эффективности метода электронной микроскопии при экспресс-диагностике ортопоксвирусных инфекций за счет
6 применения специфических антител (иммуноэлектронная
микроскопия) и его внедрения в практику.
-
Изучение возможности выявления и одновременной идентификации вируса оспы обезьян с помощью иммуноэлектронной микроскопии на основе моноклональных антител (МАТ) к этому вирусу.
-
Характеристика некоторых выделенных отечественных изолятов ортопоксвирусов с помощью электронной микроскопии, в частности, по структуре внутриклеточных включений, являющихся одним из важных маркеров при идентификации изолята.
Научная новизна работы и теоретическая значимость
1. Впервые использован метод иммуноэлектронной
микроскопии для быстрого выявления ортопоксвирусов и
разработаны оптимальные условия его практического
применения.
-
Впервые показана возможность применения метода иммуноэлектронной микроскопии на основе МАТ к вирусу оспы обезьян для быстрого выявления и одновременной идентификации этого вируса и разработаны условия применения этого метода.
-
На основе проведенных исследований в комплексе с вирусологическими данными расшифрована природа оспоподобных заболеваний в нашей стране в период после ликвидации оспы и впервые установлено, что белые крысы могут быть источником заражения человека оспой коров.
7 Практическая ценность работы. Усовершенствован
метод экспресс-диагностики ортопоксвирусных инфекций на
основе иммуноэлектронной микроскопии, что позволило
повысить эффективность метода, в частности, проводить
диагностические исследования образцов с низкой
концентрацией вируса. Метод внедрен в практику работы
Московского Сотрудничающего центра ВОЗ по оспе и
родственным инфекциям, наряду с разработанным нами
способом быстрой видоспецифической диагностики оспы
обезьян на основе иммуноэлектронной микроскопии с
использованием МАТ к этому вирусу.
В дополнение к "Инструкции по лабораторной диагностике оспы" разработаны методические рекомендации по экспресс-диагностике ортопоксвирусных инфекций с помощью иммуноэлектронной микроскопии, которые утверждены Ученым советом НИИ вирусных препаратов РАМН 10 июня 1990 года.
Публикация результатов исследования и апробация работы. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ. Материалы доложены на международной конференции в Швейцарии (1994г.). Диссертация апробирована на Ученом совете НИИ вирусных препаратов РАМН 15 июня 1995 г.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста, включая иллюстрации ( 29 рисунков и 10 таблиц ). Работа состоит из