Введение к работе
Актуальность проблеми. В этиологии острых кишечных инфек
ций (СКИ) значительный вес ииепт ротавкрусн. Ротавируснкэ гас
троэнтериты составляют около 50J5 ШИ и встречаются повсеместно
( м. Steinho« , IS80, С.Г.Дроздов и др., IS82, ». aodrig-
иез et зі. t 1934, А.Г.Букрияская и др., IS86, СД.Йржанов и др., 1986, У.А.Абенова и др.» 1988).
Ротавирусная инфекция с учетом широкого географического распространения, высокого уровня заболеваемости и смертности детей раннего возраста вклпчена в программу ВОЗ в числе приоритетные проблем. Перспектива решения данной проблеиы диктует необходимость совершенствования: методов выявления вирусспещ-фическюс структур в клиническом нагервале. Применение обычных вирусологических методов затруднено некоторыми особеннастяыа возбудителя - практически невозыакностьп культивирования рота-'вирусов й их высокой природной изиенчизостьо. 3 настоящее время все существуюцие коїіііерческие тест-систеын, основанные на юшунологических реакциях* способны обкаругить липь ротавиру-сы группы А из 5 известных.
В связи с вшеизлокеннш* нале внимание привлекли методам не требущие предварительного .культявігровшпся вируекке изаля-тов и представляющие возможность проследить за циркуляцией штаммов ротавирусов э природе.
Одним иэ таких перспективные методов индикации ротавирусов является электрофорез вкрЕоняой FEC в полиакрилаагдкоа голе.
В шаг/ уникальности структуры геяоаа ротавируса П фрзгл-ыентов, распределенные в 4 группнї» дйенб^ метод цзлессоіГргзна использовать как в качестве аосолзстно специфічного даагкостїг-
ческаго теста, так и для идентификации вноеь выделенньх штаммов. Электрофоретип, являясь постоянным признаком штамма, позволяет характеризовать этиологический агент и пути его распространения, также виявлять параротавирусы, не имеющие антиген -ного родства со иташами, на основе которых сконструировань; известные диагностические препараты.
Пошшо этого, элекгрофорэтипирование вирионной РНЧ позволяет определить новые варианты ротавирусов, приобретшие в результате генетических перестроек наиболее вирулентные свойства.
Метод электрофореза геномной РНК для изучения ыолекуляр -ной апидешологии ротавирусной инфекции и совершенствования идентификации ротавирусов нашел широкое применение в отдельных регионах европейской части бывшего СССР (А.Г.Букринская и др., 1936, К.А.Новикова и А..С.Анцупова, 1987, В.Й.Хаустов и др., 1989).
Цель и задавд исследований. Целью настоящей работы явилось совершенствование методов лабораторной диагностики рота-вкрусноЯ инфекции путеы определения злекїрофоретипов вирионной РНК.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
-
Определение электрофоретипов геномной РНК ротавирусов, вгделекнкх ст больных детей.
-
Провести анализ олектрофоретилов вновь выделенных атам-\'ов ротавирусов, циркулирующих на территории Казахстана и установись домидарущяе штаумы.
S. Определять диагностическую рначилость нового метода и кспсльзовг.ть его в качестве критерия достоверности различных
тестов диагностики ротавирусной инфекции.
4. Изучить возможные ассоциации между злектрсфорзтипсм ви-рионной РІК и особенностями клинического течения ротавируснкх гастроэнтеритов.
Научная новизна.
-
В Республике Казахстан впервые определены элзктрофоре-типы вирионной РЕК ротавирусов, вкделеннкх от больные детей. Совершенствование нового способа - обработка геля нитрате?» серебра (рац.предложение '? 419) позволяет выявить субвируенке структуры в клинической материале в очень малых концентраціях - в нанограммах. ' ' :-
-
Впервые была установлена-неоднородность пспуяяіззі выделенных от больных детей ідтаммов-ротавирусов: идентифицирова-но 19 вариантов электрофоретшов. В регионах республики доминирует короткий форетип ротавирусов.
-
Показана абсолютная- специфичность и вксская чувствительность нового метода определения электроферетгатоз геномной РНК ротавирусов.
.4. Установлена корреляция между тяжестьо ротавирусно?. инфекции и электрофоретипом возбудителя. Ротавирусы с коротким форетипоы визкваот более тяжелую клиническую жартику заболевания у детей.
Научно-практическая пеннссть. Результаты приведенных ис-слэдеваний могут быть использованы как в научно-исследовательской, так и в диагностической практике, С этсЯ пйльв прозе^екь: семинарн для вирусологов (г.Алма-Ата, 1969, IS90), издана методические рекомендации "Ускореш-зя методи лабораторное диагностики и клинические особенности течения регзвирусаего гз:г-рознтеркта" (г.Алма-Ата, 1369), ЕїфсрмзіЗїскніД листе-* *3*сп -
ресо-штоды выявления ротавирусного антигена" (г.Алма-Ата, 1S69) и информационное письмо "Анализ электрофоретипов геномной РНК ротавирусов человека" (г.Алыа-Ата, 1991), разработаны 2 рационализаторских предложения за № 419 "Усовершенствование ыетода виявлення геномной РНК ротавируса в подиакриламидном геле" и за № 423 "Способ применения коммерческого препарата антивирусных иммуноглобулинов для экспресс-диагностики рота -вирусной инфекции с использованием стафилококка Кован-1",принятые БРИЗ НИИЭМИБ.
Основные положения, вкносимыа на защиту.
-
Использование усовершенствованного метода электрофореза вирионной РНК ротавирусов позволяет обнаружить субвирусные структуры в пробах в очень малых концентрациях - нанограынах.
-
Установленная высокая вариабельность геномной РНК ротавирусов позволяет определить доминирущке форетипы и краевые особенности ротавирусных гастроэнтеритов. На территории Казахстана преобладает короткий форетип, в то время как в Таджикистане и Монголии, в основном, выявлен длинный форетип ротавирусов. '.-
-
Метод определения электрофоретипов может быть недоль -эован для оценки достоверности чувствительности и специфичности других лабораторных тестов диагностики ротавирусной инфея -ции.
-
Характер подвижности фрагментов геномной РНК изолятов позволяет определить клиническую картину течения ротавирусной инфекции: короткие форетипы вирионной РЖ вызывают более тяже-лув форму ротавирусных гастроэнтеритов у детей.
Личный вклад. Все основные разделы представленной работы выполнены автором самостоятельно. Электронномикроскопические
исследования и анализ истории болезни совместно с сотрудниками лаборатории кишечных вирусов НИИ ВЫЙБ и клиницистами 1-й инфекционной детской больницы г.Алматы (с.н.с. Р.Ф.Галимов и д.м.н., проф. А.БЛанатбаева).
. Апробация работы. Основные положения диссертации доложе-' ны на ХУЛ съезде Всесоюзного общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (г.Алма-Ата, 1939 г.), республиканских семинарах для вирусологов (г.Алма-Ата, 1939, 1990 гг.), У объединенном съезде гигиенистов, эпидемиологов и инфекционистов Казахстана (г.Алма-Ата, 1991 г.), объединенном заседании секции общества вирусологов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов (г.Алма-Ата, 1992 г.).
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано II научных работ, в том числе методические рекомендации - I, информационных листка - 2 и 2 рацпредложения.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на ІІ5" страницах машинописного текста.и состоит из введения» обзора данных литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, основных выводов и. указателя литературы» включающего 187 источников. Материалы диссертации иллюстрированы 10 таблица -
ыи, 13 рисунками.